Determinação de polifenóis (taninos) em produtos alimentícios (chás) usando biossensor de Polifenol oxidase, obtida de extrato bruto da casca de banana nanica (Musa acuminata) e caracterização desse biossensor / Determination of polyphenols (tanines) in foods products (teas) using a biosensor of Polyphenol oxidase, obtained of crude extract of banana nanica peel (Musa acuminata) and characterization this biosensor

Introdução - Extrato bruto da casca de banana nanica (Musa acuminata); melhor fonte de enzima Polifenol oxidase (PFO) [EC.1.14.18.1] foi estudado como material biocatalítico para a oxidação aeróbica de substratos fenólicos. Materiais e Métodos - O extrato bruto de PFO foi obtido como em Perone et al.14 (2000). A atividade da enzima PFO e proteína total foram determinadas nesse extrato. Foi construído um biossensor desse extrato bruto da casca de banana nanica com 75 unidades de PFO, imobilizada com reagente glutaraldeído. Resultados - Esse biossensor, sensível a polifenóis, foi caracterizado e apresentou pH ótimo de imobilização da enzima igual a 6,5 e sensibilidade acentuada para o substrato catecol. Também foi utilizado no estudo da determinação da concentração de taninos em amostras de diversos tipos de chás. Conclusões - Foi verificado que a porcentagem de erro comparando com o método espectrofotométrico apresentou valores menores que 1,0% estando, portanto, de acordo com o procedimento padrão oficial. Comparando os resultados obtidos com esse biossensor e o de extrato bruto da polpa de banana nanica observamos, melhor tempo de armazenamento das membranas com a casca do que com a polpa, e uma diminuição significativa na quantidade de extrato imobilizado. Assim, conclui-se que o extrato de PFO da casca é melhor fonte de enzima do que a polpa e, portanto, será usado na construção dobiossensor. A vantagem do método amperométrico apresentado é possuir baixo custo, rapidez nas determinações e boa sensibilidade comparado com métodos cromatográficos.

Introduction - Crude extract of banana nanica (Musa acuminata); the best source of enzyme Poliphenol oxidase (PPO) [EC.1.14.18.1] was studied as biocatalytic material to the aerobic oxidation of phenolics substrates. Materials and Methods - The crude extract of I was done the same as at Perone et al.14 (2000). The activity from the enzyme PPO and total protein were determined in this extract. It has been built a biosensor of this crude extract from the peel of stunded banana with 75unities of PPO immobilized with glutaraldeyde reagent. Results - This biosensor, sensitive to poliphenol, was characterized and presented immobilizing optimium pH of the enzyme equal to 6.5and acute sensibility to its catechol substrate. It was also used at the study of the determination of tanines concentration in samples of many kinds of tea. Conclusions - It was verified that percentage of error comparing with the spectrophotometric method, has presented lower than 1,0% values according to the standard methods. Comparing the results obtained with this biosensor and the crude extract of the pulp of banana nanica, it was observed the better stock time of the membranes with the peel than with the pulp, and significative diminishing of the amount of immobilized extract. So, we conclude that the extract of PPO from the peel is better source of enzyme than the pulp and it will be used at the construction of the biosensor. The advantage of the amperometrics methods presented is to obtain low cost, fast determination and good sensibility compared to cromatographics methods.

Caracterização cinética da enzima polifenol oxidase, usando extrato bruto da casca de banana nanica (Musa acuminata) / Kinetic characterization of enzyme polyphenol oxidase, utilizing crude of extract of pell of stunded banana (Musa acuminata)

Introdução - Extrato bruto da casca de banana nanica (Musa acuminata); melhor fonte de enzima polifenol oxidase (PFO) [EC.1.14.18.1] foi estudado como material biocatalítico para a oxidação aeróbica de substratos fenólicos. Material e Métodos - Foi estudada a extração da PFO dessa fonte. A atividade da enzima PFO e proteína total foram determinadas nesse extrato. O estudo da quantidade e do tempo de contato do polímero SB-100 com esse extrato foi realizado. A caracterização cinética da PFO foi determinada com temperatura ótima, estabilidade ao calor, pH ótimo de atividade e de estabilidade. Os valores obtidos foram comparados com a PFO da polpa de banana nanica. Resultados - Os resultados mostraram que a quantidade de polímero SB-100 foi maior usando o extrato da casca de banana nanica do que para a polpa, mas o tempo de contato não houve alteração. O pH de atividade (pH 6,0), de estabilidade (pH 6,5) e a temperatura ótima (30°C), não apresentaram variações comparando os dois extratos utilizados. Conclusões - Verificou-se, portanto que o uso do extrato bruto da casca de banana nanica apresentou maior atividade enzimática de PFO do que para a polpa da fruta; enquanto a caracterização cinética praticamente não variou nos dois extratos. O que se pode concluir é que, para a construção do biossensor a casca da banana é melhor que a polpa por apresentar maior atividade da enzima. A seguir, um biossensor será construído, para detecção de fenólicos e os resultados serão comparados com os da polpa.

Introduction - Crude extract of the pell of stunded banana (Musa acuminata); the best source enzyme polyphenol oxidase (PPO) [EC.1.14.18.1] was studied as material biocatalitic for the aerobic phenolic substratum oxidation. Material and Methods - The extraction of the PPO of this source was studied. The activity of enzyme PPO and total protein had been determined in this extract. The study of the amount and the contact time of polymer SB-100 with this extract was done. The kinetic characterization of the PPO was determined with great temperature, stability to the heat, great pH of activity and stability. The gotten values had been compared with the PPO of the pulp of stunded banana. Results - The results had shown that the amount of polymer SB-100 was bigger used in the extract of the pell of stunded banana than the pulp, but the contact time did not have any alteration. The pH of activity (pH 6,0), of stability (pH 6,5) and the great temperature (30°C), had not presented variations comparing the two used extracts. Conclusions - It was verified, therefore that the use of the crude extract of the pell of stunded banana presented greater enzimatic activity of PPO than in the pulp of fruit; while the kinetic characterization practically did not vary in two extracts. We can conclude that for the construction of the biosensor the pell of the banana is better than the pulp for presenting greater activity of the enzyme. Next, a biosensor will be constructed, for detection of phenolics and the results will be compared with ones the pulp.