Seroprevalence of antibodies against smooth Brucella in small ruminants in the states of Sergipe, Bahia, Ceará and Paraíba / Soroprevalência de anticorpos contra Brucella lisa em pequenos ruminantes dos estados de Sergipe, Bahia, Ceará e Paraíba

Brucellosis is a zoonotic disease widespread almost all over the world, representing a significant economic and public health problem. Brucella melitensis, B. suis and B. abortus are considered the most pathogenic species for humans. The most virulent species, B. melitensis is endemic in many parts of the world, particularly the biovar 3 in the Mediterranean and Eastern Europe. Some Latin American countries are seriously affected by biovar 1, especially Mexico, Peru and northern Argentina. Furthermore, while Brazil is considered free of this etiologic agent, one recurrent question is whether this infection really does not occur in Brazil or there is a lack of research/data on the subject. To answer this question, this study aims to investigate the occurrence of antibodies against smooth Brucella in goats and sheep in the states of Sergipe, Paraíba, Ceará and Paraíba. All samples were screened by the Rose Bengal test (RBT). The complement fixation (CFT) and the fluorescence polarization (FPT) tests were used as confirmatory tests. There were no positive samples in the confirmatory tests (both CFT and FPT). We, therefore, conclude that this result reinforces the previous knowledge regarding the exotic status of B. melitensis infection in Brazil.

A brucelose é uma das doenças de caráter zoonótico mais difundidas no mundo, representando um grande problema econômico e de saúde pública. A Brucella melitensis, a B. suis e a B. abortus são consideradas as mais patogênicas espécies para humanos. A espécie apontada como a mais virulenta é a B. melitensis, endêmica em várias partes do mundo, particularmente o biovar 3 na região do Mediterrâneo e na Europa Oriental. Alguns países da América Latina são seriamente afetados pelo biovar 1, especialmente México, Peru e norte da Argentina. O Brasil é considerado livre desse agente etiológico, porém sempre há o questionamento se a infecção não ocorre ou se falta pesquisa. Diante dessa questão, o objetivo deste trabalho foi investigar a ocorrência de anticorpos contra amostras lisas de Brucella em caprinos e ovinos dos estados de Sergipe, Bahia, Ceará e Paraíba. Todas as amostras foram submetidas triagem pelo teste do antígeno acidificado tamponado (AAT). Como testes confirmatórios, utilizou-se a reação de fixação de complemento (RFC) e também o teste de polarização fluorescente (TPF). Nenhuma amostra foi positiva nos testes confirmatórios (RFC e TPF). Esse resultado comprova que a infecção por B. melitensis é exótica no Brasil.

Bases para um programa de controle da artrite encefalite caprina em rebanho leiteiro / [Bases for a program of control of caprine arthritis encephalite in dairy flock]

Objetivou-se avaliar um programa de controle da artrite encefalite caprina (AEC), por meio de testes diagnósticos sensíveis, separação de mãe e cria após o parto e medidas de manejo, com o intuito de formar rebanho livre do vírus. Utilizou-se um total de 47 cabritos da raça Saanen, mantidos isoladamente até o resultado dos primeiros testes de reação em cadeia de polimerase nested (PCR nested) e Western Blotting (WB), com base na coleta de sangue no momento do nascimento (M0). No PCR nested, quatro animais foram positivos, no M0, e foram eutanasiados. Posteriormente, os demais 43 cabritos foram submetidos à coleta de sangue aos 60 (M60) e 270 (M270) dias de vida para realização de novos testes de WB e PCR nested, que não detectaram animais positivos. Pode-se afirmar que a metodologia adotada neste estudo foi efetiva no controle da doença, nas fases de aleitamento e pós-aleitamento, e que a combinação do sistema de manejo, a fim de propiciar diminuição de risco de transmissão horizontal, com técnicas de diagnóstico mais apuradas, como o WB e a PCR nested, é relevante para elaboração de plano estratégico de controle da enfermidade.(AU)

We aimed to evaluate a program to control Caprine Arthritis Encephalitis (CAE), using diagnostic tests, separation of the mother and postpartum and other management measures, in order to form a free flock of the virus. We used a total of 47 Saanengoats in isolation until the results of the first nested Polymerase Chain Reaction (nested PCR) and Western Blotting (WB) tests, based on blood collection at the time of birth (M0). In the nested PCR, 4 animals were positive, at M0, and were eliminated. Later, the other 43goats were submitted to blood collection at 60 (M60) and 270 (M270) days of life to perform new tests of WB and nested PCR, which did not detect positive animals. We can affirm that the methodology adopted in this study was effective in the control of the disease, in the phase of breastfeeding and post-breastfeeding, and that the combination of the management system, which allows a reduction of risk of horizontal transmission, with more accurate diagnostic techniques, such as WB and nested PCR, is relevant for the elaboration of a strategic plan for the disease control.(AU)

Avaliação de um controle estratégico da artrite encefalite caprina em rebanho caprino leiteiro / Evaluation of strategic control of caprine arthritis- encephalitis in dairy herd goats

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização periódica de testes de diagnóstico mais sensíveis aliados às práticas de manejo, visando ao controle eficaz da artrite encefalite caprina (CAE). Foram realizadas oito coletas de sangue em matrizes e reprodutores. Da primeira à sétima análise, as coletas foram quadrimestrais, utilizando-se os testes de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-i) e Western Blot (WB). A oitava coleta aconteceu seis meses após a sétima, utilizando-se o WB e a reação em cadeia de polimerase (PCR). A prevalência da CAE foi de 6,8%, 14,9% e 39,2% no IDGA, ELISA-i e WB, respectivamente. Na última análise, foram detectados 0,9% de animais positivos pelo WB e 10,8% pela PCR. Apesar de não erradicarem a CAE, as medidas adotadas, aliadas à utilização periódica dos testes sorológicos e à combinação com a PCR, foram importantes para reduzir significativamente os animais soropositivos no rebanho.(AU)

The aim of this study was to evaluate the periodic use of more sensitive diagnostic tests associated to management practices for the effective control of caprine arthritis-encephalitis (CAE). We carried out eight blood samples in does and bucks. From the first to the seventh analysis, the samples were quarterly, using Agarose Gel Immunodiffusion (AGID), Enzyme linked immunosorbent assay (i-ELISA) and Western Blot (WB) tests. The eighth collection was made six months after the seventh, using the WB and Polymerase Chain Reaction (PCR). The prevalence of CAE was 6.8%, 14.9% and 39.2% in the AGID, i-ELISA and WB respectively. The last analysis detected 0.9% of animals positive by WB and 10.8% by PCR. Although they do not eradicate CAE, steps taken together with the periodic use of serological tests and the combination with PCR were important to significantly reduce positive animals in the herd.(AU)

Avaliação de um controle estratégico da artrite encefalite caprina em rebanho caprino leiteiro / Evaluation of strategic control of caprine arthritis- encephalitis in dairy herd goats

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização periódica de testes de diagnóstico mais sensíveis aliados às práticas de manejo, visando ao controle eficaz da artrite encefalite caprina (CAE). Foram realizadas oito coletas de sangue em matrizes e reprodutores. Da primeira à sétima análise, as coletas foram quadrimestrais, utilizando-se os testes de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-i) e Western Blot (WB). A oitava coleta aconteceu seis meses após a sétima, utilizando-se o WB e a reação em cadeia de polimerase (PCR). A prevalência da CAE foi de 6,8%, 14,9% e 39,2% no IDGA, ELISA-i e WB, respectivamente. Na última análise, foram detectados 0,9% de animais positivos pelo WB e 10,8% pela PCR. Apesar de não erradicarem a CAE, as medidas adotadas, aliadas à utilização periódica dos testes sorológicos e à combinação com a PCR, foram importantes para reduzir significativamente os animais soropositivos no rebanho.(AU)

The aim of this study was to evaluate the periodic use of more sensitive diagnostic tests associated to management practices for the effective control of caprine arthritis-encephalitis (CAE). We carried out eight blood samples in does and bucks. From the first to the seventh analysis, the samples were quarterly, using Agarose Gel Immunodiffusion (AGID), Enzyme linked immunosorbent assay (i-ELISA) and Western Blot (WB) tests. The eighth collection was made six months after the seventh, using the WB and Polymerase Chain Reaction (PCR). The prevalence of CAE was 6.8%, 14.9% and 39.2% in the AGID, i-ELISA and WB respectively. The last analysis detected 0.9% of animals positive by WB and 10.8% by PCR. Although they do not eradicate CAE, steps taken together with the periodic use of serological tests and the combination with PCR were important to significantly reduce positive animals in the herd.(AU)

In vitro and in vivo evaluation of sodium dodecyl sulfate (SDS) as an inactivator of caprine lentivirus (CLV) in colostrum and milk / Avaliação in vitro e in vivo do dodecil sulfato de sódio (SDS) como inativador do lentivírus caprino (LVC) em colostro e leite

The aim of this study was to evaluate in vitro and in vivo the effect of sodium dodecyl sulfate (SDS) on the caprine lentivirus (CLV) in colostrum and milk. This was performed to develop a practical and efficient method of blocking the lactogenic transmission of the virus. In the in vitro experiment, colostrum and milk were treated with 0.25%; 0.50% and 1% SDS. Then, somatic cells of colostrum and milk were submitted to co-culture with caprine synovial membrane cells (CSM). In the in vivo test, goats were fed with colostrum and milk provided from CLV-positive goats treated with SDS in the same concentrations used in the in vitro experiment. Animals were tested by nested polymerase chain reaction (nPCR) and Western blot (WB) assays. In the in vitro experiment, inhibitory activity against CLV without inactivation occurred in colostrum with all SDS concentrations. However, concentrations of 0.25 and 0.5% SDS presented only inhibitory activity against CLV in milk cells, and 1% concentration provided inactivation of the virus. In the in vivo tests, none of the three concentrations of SDS was effective in inactivating LVC in colostrum or goat milk, which was confirmed by seroconversion and presence of proviral DNA in animals afterwards.(AU)

O objetivo da pesquisa foi avaliar in vitro e in vivo o efeito do dodecil sulfato de sódio (SDS) sobre o lentivírus caprino (LVC) no colostro e no leite, a fim de desenvolver um método prático e eficiente no bloqueio da via de transmissão lactogênica do vírus. No experimento in vitro, o colostro e o leite de cabras positivas foram tratados com SDS a 0,25%, 0,50% e 1,0%. Em seguida, as células somáticas do colostro e do leite foram obtidas e direcionadas ao cocultivo com células de membrana sinovial caprina (MSC). No teste in vivo, os cabritos foram alimentados com colostro e leite providos de cabras positivas para LVC, tratados com SDS nas mesmas concentrações usadas no teste in vitro. Os animais foram acompanhados pelos testes de reação em cadeia da polimerase nested (nPCR) e western blot (WB). Nos resultados in vitro, no colostro, observou-se que, em todas as concentrações de SDS, ocorreu uma atividade inibitória contra o LVC, sem a inativação. Em relação às células do leite, o SDS apresentou, nas concentrações de 0,25 e 0,5%, atividade inibitória contra o LVC, e na concentração de 1%, houve inativação viral. Nos testes in vivo, as três concentrações de SDS testadas não foram efetivas na inativação do LVC no colostro e no leite caprino, o que se comprovou pela soroconversão e pela presença de DNA proviral nos animais.(AU)

In vitro and in vivo evaluation of sodium dodecyl sulfate (SDS) as an inactivator of caprine lentivirus (CLV) in colostrum and milk / Avaliação in vitro e in vivo do dodecil sulfato de sódio (SDS) como inativador do lentivírus caprino (LVC) em colostro e leite

The aim of this study was to evaluate in vitro and in vivo the effect of sodium dodecyl sulfate (SDS) on the caprine lentivirus (CLV) in colostrum and milk. This was performed to develop a practical and efficient method of blocking the lactogenic transmission of the virus. In the in vitro experiment, colostrum and milk were treated with 0.25%; 0.50% and 1% SDS. Then, somatic cells of colostrum and milk were submitted to co-culture with caprine synovial membrane cells (CSM). In the in vivo test, goats were fed with colostrum and milk provided from CLV-positive goats treated with SDS in the same concentrations used in the in vitro experiment. Animals were tested by nested polymerase chain reaction (nPCR) and Western blot (WB) assays. In the in vitro experiment, inhibitory activity against CLV without inactivation occurred in colostrum with all SDS concentrations. However, concentrations of 0.25 and 0.5% SDS presented only inhibitory activity against CLV in milk cells, and 1% concentration provided inactivation of the virus. In the in vivo tests, none of the three concentrations of SDS was effective in inactivating LVC in colostrum or goat milk, which was confirmed by seroconversion and presence of proviral DNA in animals afterwards.(AU)

O objetivo da pesquisa foi avaliar in vitro e in vivo o efeito do dodecil sulfato de sódio (SDS) sobre o lentivírus caprino (LVC) no colostro e no leite, a fim de desenvolver um método prático e eficiente no bloqueio da via de transmissão lactogênica do vírus. No experimento in vitro, o colostro e o leite de cabras positivas foram tratados com SDS a 0,25%, 0,50% e 1,0%. Em seguida, as células somáticas do colostro e do leite foram obtidas e direcionadas ao cocultivo com células de membrana sinovial caprina (MSC). No teste in vivo, os cabritos foram alimentados com colostro e leite providos de cabras positivas para LVC, tratados com SDS nas mesmas concentrações usadas no teste in vitro. Os animais foram acompanhados pelos testes de reação em cadeia da polimerase nested (nPCR) e western blot (WB). Nos resultados in vitro, no colostro, observou-se que, em todas as concentrações de SDS, ocorreu uma atividade inibitória contra o LVC, sem a inativação. Em relação às células do leite, o SDS apresentou, nas concentrações de 0,25 e 0,5%, atividade inibitória contra o LVC, e na concentração de 1%, houve inativação viral. Nos testes in vivo, as três concentrações de SDS testadas não foram efetivas na inativação do LVC no colostro e no leite caprino, o que se comprovou pela soroconversão e pela presença de DNA proviral nos animais.(AU)

Caprine lentivirus in sheep milk and semen / Lentivírus caprino em leite e sêmen de ovinos

With the objective of detecting the presence of caprine lentivirus (CLV) in ewe milk and in ram semen, ten matrixes and four reproducers experimentally infected with CLV were used. Samples of ewe milk were collected during the four months of lactation, five collections per animal, totaling 50 samples. Regarding the rams, eight semen collections were made per animal, during one year of experimentation, totaling 32 samples. The milk and semen samples were submitted to DNA extraction and the nested polymerase chain reaction test (nPCR) to detect CLV proviral DNA. Eight (16%) of the milk samples were positive in nPCR originating from two ewes. Only one (3.12%) semen sample was positive. The amplification products were sequenced, and were confirmed to be a CLV genomic sequence. Thus, the presence of CLV proviral DNA in sheep milk and semen was demonstrated, confirming the feasibility of infection between species, and alerting to the risk of spreading infections.(AU)

Com o objetivo de detectar a presença do lentivírus caprino (LVC) no leite de ovelhas e no sêmen de carneiros, utilizaram-se 10 matrizes e quatro reprodutores infectados experimentalmente com o LVC. Foram coletadas amostras de leite das ovelhas durante os quatro meses de lactação, ocorrendo cinco coletas por animal, totalizando 50 amostras. Quanto aos carneiros, realizaram-se oito coletas de sêmen por animal, durante um ano de experimentação, totalizando 32 amostras. As amostras de leite e de sêmen foram submetidas à extração de DNA e à prova de reação em cadeia da polimerase do tipo nested (nPCR) visando à detecção de DNA proviral do LVC. Oito (16%) amostras de leite foram positivas na nPCR oriundas de duas ovelhas. Apenas uma (3,12%) amostra de sêmen apresentou positividade. Produtos da amplificação foram sequenciados, confirmando-se tratar de sequência genômica do LVC. Dessa forma, demonstrou-se a presença do DNA proviral do LVC em leite e sêmen de ovinos, confirmando a viabilidade da infecção entre espécies e, assim, alertando sobre o risco de que a infecção seja disseminada.(AU)

Caprine lentivirus in sheep milk and semen / Lentivírus caprino em leite e sêmen de ovinos

With the objective of detecting the presence of caprine lentivirus (CLV) in ewe milk and in ram semen, ten matrixes and four reproducers experimentally infected with CLV were used. Samples of ewe milk were collected during the four months of lactation, five collections per animal, totaling 50 samples. Regarding the rams, eight semen collections were made per animal, during one year of experimentation, totaling 32 samples. The milk and semen samples were submitted to DNA extraction and the nested polymerase chain reaction test (nPCR) to detect CLV proviral DNA. Eight (16%) of the milk samples were positive in nPCR originating from two ewes. Only one (3.12%) semen sample was positive. The amplification products were sequenced, and were confirmed to be a CLV genomic sequence. Thus, the presence of CLV proviral DNA in sheep milk and semen was demonstrated, confirming the feasibility of infection between species, and alerting to the risk of spreading infections.(AU)

Com o objetivo de detectar a presença do lentivírus caprino (LVC) no leite de ovelhas e no sêmen de carneiros, utilizaram-se 10 matrizes e quatro reprodutores infectados experimentalmente com o LVC. Foram coletadas amostras de leite das ovelhas durante os quatro meses de lactação, ocorrendo cinco coletas por animal, totalizando 50 amostras. Quanto aos carneiros, realizaram-se oito coletas de sêmen por animal, durante um ano de experimentação, totalizando 32 amostras. As amostras de leite e de sêmen foram submetidas à extração de DNA e à prova de reação em cadeia da polimerase do tipo nested (nPCR) visando à detecção de DNA proviral do LVC. Oito (16%) amostras de leite foram positivas na nPCR oriundas de duas ovelhas. Apenas uma (3,12%) amostra de sêmen apresentou positividade. Produtos da amplificação foram sequenciados, confirmando-se tratar de sequência genômica do LVC. Dessa forma, demonstrou-se a presença do DNA proviral do LVC em leite e sêmen de ovinos, confirmando a viabilidade da infecção entre espécies e, assim, alertando sobre o risco de que a infecção seja disseminada.(AU)

Use of glucose or BTS™ combined with DMSO or methylglycol under two differentfreezing protocols for the cryopreservation of sperm from the common curimatã(Prochilodus brevis)

This study evaluated the effect of glucose orBeltsville Thawing Solution (BTS™) combined withdimethyl sulfoxide (DMSO) or methylglycol (MG)under two different freezing protocols on the kineticsand morphology of cryopreserved Prochilodus brevissperm. The semen samples were diluted using one of fourdifferent treatments (glucose+DMSO, glucose+MG,BTS™+DMSO, and BTS™+MG), loaded into 0.25-mlstraws and subjected to two different freezing processes(programmed freezing machine and dry shipper). After10 days, the semen samples were thawed, and the spermmorphology and kinetics were evaluated. Thephysicochemical parameters of the semen in naturawere similar to those observed in other studies ofCharaciformes, indicating the feasibility of semencryopreservation. Glucose, when used as a diluentwith the cryoprotectant MG (glucose+MG), yieldedhigher percentages of mobile spermatozoa afterfreezing in a dry shipper (76.88 ± 4.84%) and in aprogrammed freezing machine (70.95 ± 1.76%)compared with the combination of glucose and DMSO.Moreover, the glucose+MG treatment yielded a highersperm velocity (curvilinear velocity: 79.52 ± 2.88 µm s-1; straight-line velocity: 45.46 ± 3.01 µm s-1; averagepath velocity: 67.92 ± 3.08 µm s-1) than the otherstudied treatments, and a higher amount of normalsperm (74.56 ± 0.77%) was observed in the semensamples cryopreserved using a programmed freezingmachine. The sperm abnormalities observed included abent tail morphology. Therefore, the use ofglucose+MG in combination with either a dry shipper ora programmed freezing machine is recommended forthe cryopreservation of P. brevis sperm because thesemethods yielded high numbers of motile andmorphologically normal spermatozoa.(AU)

Use of glucose or BTS™ combined with DMSO or methylglycol under two differentfreezing protocols for the cryopreservation of sperm from the common curimatã(Prochilodus brevis)

This study evaluated the effect of glucose orBeltsville Thawing Solution (BTS™) combined withdimethyl sulfoxide (DMSO) or methylglycol (MG)under two different freezing protocols on the kineticsand morphology of cryopreserved Prochilodus brevissperm. The semen samples were diluted using one of fourdifferent treatments (glucose+DMSO, glucose+MG,BTS™+DMSO, and BTS™+MG), loaded into 0.25-mlstraws and subjected to two different freezing processes(programmed freezing machine and dry shipper). After10 days, the semen samples were thawed, and the spermmorphology and kinetics were evaluated. Thephysicochemical parameters of the semen in naturawere similar to those observed in other studies ofCharaciformes, indicating the feasibility of semencryopreservation. Glucose, when used as a diluentwith the cryoprotectant MG (glucose+MG), yieldedhigher percentages of mobile spermatozoa afterfreezing in a dry shipper (76.88 ± 4.84%) and in aprogrammed freezing machine (70.95 ± 1.76%)compared with the combination of glucose and DMSO.Moreover, the glucose+MG treatment yielded a highersperm velocity (curvilinear velocity: 79.52 ± 2.88 µm s-1; straight-line velocity: 45.46 ± 3.01 µm s-1; averagepath velocity: 67.92 ± 3.08 µm s-1) than the otherstudied treatments, and a higher amount of normalsperm (74.56 ± 0.77%) was observed in the semensamples cryopreserved using a programmed freezingmachine. The sperm abnormalities observed included abent tail morphology. Therefore, the use ofglucose+MG in combination with either a dry shipper ora programmed freezing machine is recommended forthe cryopreservation of P. brevis sperm because thesemethods yielded high numbers of motile andmorphologically normal spermatozoa.

Wharton's jelly cells from sheep umbilical cord maintained with different culture media are permissive to in vitro infection by Small Ruminant Lentiviruses / Células da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino mantidas em diferentes meios de cultivo são permissivas à infecção in vitro por lentivírus de pequenos ruminantes

This study aimed to isolate cells from the Wharton's jelly of umbilical cord (WJUC) of sheep collected during natural parturition using different culture media, in addition to reporting for the first time the permissiveness of these cells to in vitro infection by small ruminant lentiviruses. Ten umbilical cords were collected from healthy sheep. Each cord explants were grown in different media consisting of MEM, low glucose DMEM, M199, and RPMI-1640. The permissiveness of infection of sheep cells from WJUC was tested with CAEV-Cork and MVV-K1514 strains, inoculating 0.1 MOI of each viral strain. Four supernatants from each strain were obtained from WJUC sheep cell cultures infected in different media. The results demonstrated the presence of cytopathic effect after the in vitro infection by CAEV-Cork and MVV-K1514 with all of the tested culture media. Nested-PCR detected proviral DNA in all supernatants. Supernatants containing CAEV-Cork viruses had TCID 50/ml titres of 10 5.5 in MEM, 10 4.0 in low glucose DMEM, 105.0 in M199, and 10 5.7 in RPMI-1640. Supernatants containing the MVV-K1514 virus had TCID 50/ml titres of 10 4.3 in MEM, 10 3.5 in low-glucose DMEM, 10 4.7 in M199, and 10 3.5 in RPMI-1640. Sheep cells from WJUC are permissive to in vitro infection by small ruminant lentivirus.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar células da geleia de Wharton do cordão umbilical (GWCU) ovino coletado por ocasião do parto natural, utilizando-se diferentes meios de cultivo, além de relatar, pela primeira vez, sua permissividade à infecção in vitro por lentivírus de pequenos ruminantes (LVPRs). Dez cordões umbilicais foram coletados de ovelhas hígidas e soronegativas para LVPRs pelo teste de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). De cada cordão, explantes foram cultivados em quatro meios distintos que consistiram em MEM, DMEM baixa glicose, meio 199 e RPMI-1640, todos acrescidos de 10% de soro fetal bovino em estufa com atmosfera úmida e 5% de CO2 a 37ºC. A permissividade de infecção das células GWCU ovino foi testada frente às cepas CAEV-Cork e MVV-K1514, inoculando-se 0,1 MOI de cada cepa viral e corando as monocamadas com May Grunwald Giemsa para visualização do efeito citopático. Foram obtidos quatro sobrenadantes CAEV-Cork e quatro MVV-K1514, provenientes do cultivo de células GWCU ovino infectadas por 21 dias em meios distintos, dos quais foram realizadas titulação em membrana sinovial caprina e extração do DNA pró-viral para realização de nested-PCR e eletroforese em gel de agarose a 2%. Os resultados demonstraram a presença de efeito citopático na infecção in vitro tanto por CAEV-Cork como por MVV-K1514 em todos os meios de cultivo, sendo visualizados sincícios e lise celular em microscópio invertido. A nested-PCR detectou o DNA pró-viral tanto do CAEV-Cork como do MVV-K1514 em todos os sobrenadantes. Os sobrenadantes contendo o vírus CAEV-Cork apresentaram títulos em TCID50/mL de 10 5,5 em MEM, 10 4,0 em DMEM baixa glicose, 10 5,0 em meio 199 e 10 5,7 em RPMI-1640. Os sobrenadantes contendo o vírus MVV-K1514 apresentaram título em TCID 50/mL de 10 4,3 em MEM, 10 3,5 em DMEM baixa glicose, 10 4,7 em meio 199 e 10 3,5 em RPMI-1640. Células GWCU ovino são permissivas à infecção in vitro pelos lentivírus de pequenos ruminantes CAEV-Cork e MVV-K1514.(AU)

Wharton's jelly cells from sheep umbilical cord maintained with different culture media are permissive to in vitro infection by Small Ruminant Lentiviruses / Células da geleia de Wharton do cordão umbilical ovino mantidas em diferentes meios de cultivo são permissivas à infecção in vitro por lentivírus de pequenos ruminantes

This study aimed to isolate cells from the Wharton's jelly of umbilical cord (WJUC) of sheep collected during natural parturition using different culture media, in addition to reporting for the first time the permissiveness of these cells to in vitro infection by small ruminant lentiviruses. Ten umbilical cords were collected from healthy sheep. Each cord explants were grown in different media consisting of MEM, low glucose DMEM, M199, and RPMI-1640. The permissiveness of infection of sheep cells from WJUC was tested with CAEV-Cork and MVV-K1514 strains, inoculating 0.1 MOI of each viral strain. Four supernatants from each strain were obtained from WJUC sheep cell cultures infected in different media. The results demonstrated the presence of cytopathic effect after the in vitro infection by CAEV-Cork and MVV-K1514 with all of the tested culture media. Nested-PCR detected proviral DNA in all supernatants. Supernatants containing CAEV-Cork viruses had TCID 50/ml titres of 10 5.5 in MEM, 10 4.0 in low glucose DMEM, 105.0 in M199, and 10 5.7 in RPMI-1640. Supernatants containing the MVV-K1514 virus had TCID 50/ml titres of 10 4.3 in MEM, 10 3.5 in low-glucose DMEM, 10 4.7 in M199, and 10 3.5 in RPMI-1640. Sheep cells from WJUC are permissive to in vitro infection by small ruminant lentivirus.(AU)

O objetivo deste estudo foi isolar células da geleia de Wharton do cordão umbilical (GWCU) ovino coletado por ocasião do parto natural, utilizando-se diferentes meios de cultivo, além de relatar, pela primeira vez, sua permissividade à infecção in vitro por lentivírus de pequenos ruminantes (LVPRs). Dez cordões umbilicais foram coletados de ovelhas hígidas e soronegativas para LVPRs pelo teste de imunodifusão em gel de agarose (IDGA). De cada cordão, explantes foram cultivados em quatro meios distintos que consistiram em MEM, DMEM baixa glicose, meio 199 e RPMI-1640, todos acrescidos de 10% de soro fetal bovino em estufa com atmosfera úmida e 5% de CO2 a 37ºC. A permissividade de infecção das células GWCU ovino foi testada frente às cepas CAEV-Cork e MVV-K1514, inoculando-se 0,1 MOI de cada cepa viral e corando as monocamadas com May Grunwald Giemsa para visualização do efeito citopático. Foram obtidos quatro sobrenadantes CAEV-Cork e quatro MVV-K1514, provenientes do cultivo de células GWCU ovino infectadas por 21 dias em meios distintos, dos quais foram realizadas titulação em membrana sinovial caprina e extração do DNA pró-viral para realização de nested-PCR e eletroforese em gel de agarose a 2%. Os resultados demonstraram a presença de efeito citopático na infecção in vitro tanto por CAEV-Cork como por MVV-K1514 em todos os meios de cultivo, sendo visualizados sincícios e lise celular em microscópio invertido. A nested-PCR detectou o DNA pró-viral tanto do CAEV-Cork como do MVV-K1514 em todos os sobrenadantes. Os sobrenadantes contendo o vírus CAEV-Cork apresentaram títulos em TCID50/mL de 10 5,5 em MEM, 10 4,0 em DMEM baixa glicose, 10 5,0 em meio 199 e 10 5,7 em RPMI-1640. Os sobrenadantes contendo o vírus MVV-K1514 apresentaram título em TCID 50/mL de 10 4,3 em MEM, 10 3,5 em DMEM baixa glicose, 10 4,7 em meio 199 e 10 3,5 em RPMI-1640. Células GWCU ovino são permissivas à infecção in vitro pelos lentivírus de pequenos ruminantes CAEV-Cork e MVV-K1514.(AU)

Cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum criopreservados em água de coco em pó acp-104 / Kinetics and morphology of common carp sperm cryopreserved in powdered coconut water acp-104

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes taxas de diluição seminal sobre a motilidade, velocidade e presença de anormalidades espermáticas no sêmen descongelado de carpa comum (Cyprinus carpio). Utilizaram-se 20 machos sexualmente maduros, pertencentes ao Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS). A partir do sêmen coletado, foi formado um total de nove pools. O sêmen de cada pool foi avaliado quanto à motilidade, velocidade e morfologia espermática antes e depois da criopreservação. A criopreservação seminal foi realizada em meio ACP-104 + DMSO 10% diluído em 1:1 ou 1:3 (sêmen:diluidor). As amostras foram envasadas em palhetas de 0,25mL, congeladas em vapor de nitrogênio líquido (caixa de poliestireno) e estocadas em nitrogênio líquido (-196 °C). Não houve diferença significativa (P>0,05) entre as taxas de diluições sobre os parâmetros cinéticos e morfológicos de sêmen descongelado de carpa comum. Entretanto, esses parâmetros apresentaram diferença significativa (P<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle). Baixos valores de velocidade foram registrados no sêmen descongelado (VCL 42,6-46,5μm/s; VSL 33,2-37,1μm/s; VAP 38,9-43,2μm/s); contudo, observaram-se motilidades acima de 59% (59,8-67,8%) e baixos índices de anormalidades espermáticas (19,3-19,5%), sugerindo que o ACP pode ser usado como um meio favorável à criopreservação do sêmen de carpa comum em qualquer uma das taxas de diluição testadas.

The aim of this study was to determine the effects of various dilution ratios on thaw sperm motility, velocity and presence of spermatic abnormalities in the common carp. 20 males with three years of age, raised at the Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS) were used. From the collected semen a total of nine pools were formed. The semen from each pool was evaluated for motility, velocity and spermatic morphology before and after cryopreservation. The sperm cryopreservation was performed in medium ACP-104 + DMSO 10% diluted in 1:1 or 1:3 (sperm:extender). The samples were loaded into 0.25mL straws, frozen in liquid nitrogen vapor (Styrofoam) and stored in liquid nitrogen (-196 °C). There was no significant difference (P>0.05) between the ratios of dilution on the kinetic and morphological parameters of thawed semen from common carp. However, these parameters were significantly different (P<0.05) compared to fresh semen (control). Low velocity values were recorded in thawed semen (VCL 42.6-46.5μm/s; VSL 33.2-37.1μm/s; VAP 38.9-43.2μm/s), however, observed motility above 59% (59.8-67.8%), and low levels of spermatic abnormalities (19.3-19.5%) suggested that the ACP-104 can be used as a suitable medium for cryopreservation of common carp semen in any of the tested dilution ratios.

Uso da técnica de swim-up para a remoção do Vírus da Artrite Encefalite Caprina do sêmen de reprodutores infectados / Use of swim-up technique for removal of the Caprine Arthritis Encephalitis Virus in the semen of infect bucks

Neste estudo, 67 ejaculados foram avaliados, antes e depois da técnica de swim-up, em relação à qualidade seminal e à presença do CAEV. Das 67 amostras testadas por PCRn, antes do swim-up, 47 (70,15%) foram positivas para o DNA pró-viral. No entanto, quatro amostras adicionais foram positivas ao RT-nested PCR após o swim-up, o que permite dizer que, pelo menos, 76,12% (51/67) delas estavam infectadas antes da lavagem. Todavia, em 23,88% (16/67) das amostras não foi detectada a presença do CAEV. Após a aplicação da técnica de swim-up, constatou-se, pela PCRn e RT-nested PCR, que houve uma redução significativa (χ²= 9,078; p<0,001) da presença do CAEV nas amostras seminais, pois 28 de 51 amostras positivas resultaram livres do vírus (54,90%), tanto para DNA pró-viral quanto para o vírus livre. Em relação à motilidade individual progressiva (MIP) e vigor espermático obtidos antes e depois da técnica de swim-up, observou-se uma diminuição significativa em suas médias, sendo o MIP de 86,42% para 71,49%, já o vigor espermático de 4,16 para 3,93. Conclui-se que a eliminação do CAEV no sêmen é de caráter intermitente, e que a associação da PCRn e RT-nested PCR é uma opção segura para a certificação sanitária individual das amostras seminais quanto à presença ou ausência do CAEV. Finalmente, a técnica de swim-up promove uma redução na infectividade de amostras de sêmen contaminadas, e, além disso, é possível promover a recuperação de espermatozoides viáveis.

In this study, 67 ejaculates were assessed before and after the swim-up technique in relation to semen quality and presence of CAEV. Of the 67 samples tested by Nested PCR, before swim-up 47 (70.15%) were positive for viral DNA. Furthermore, four additional samples were positive for RT-nested PCR after swim-up, which allows us to affirm that at least 76.12% (51/67) were infected before washing. However, 23.88% (16/67) of the samples did not detect the presence of CAEV. After application of the swim-up technique it was found, by Nested PCR and RT-nested PCR, that there was a significant decrease (χ² = 9.078, p <0.001) in the presence of CAEV in semen samples, once 28 of 51 positive samples were free from the virus (54.90%) for both proviral DNA and the free form of the virus. Regarding individual progressive motility (IPM) and spermatic vigor obtained before and after the swim-up technique, a significant decrease was observed in the average, being 86.42% of the IPM to 71.49% and the spermatic vigor from 4.16 for the 3.93. It is concluded that the removal of CAEV in semen has an intermittent character, and the combination of PCR and RT-nested PCR is a safe option for health certification of individual semen samples for the presence or absence of CAEV. Finally, the swim-up technique promotes a reduction in the infectivity of contaminated semen samples, and it is possible to promote the recovery of high individual progressive motility sperm and sperm vigor.

Uso da técnica de swim-up para a remoção do Vírus da Artrite Encefalite Caprina do sêmen de reprodutores infectados / Use of swim-up technique for removal of the Caprine Arthritis Encephalitis Virus in the semen of infect bucks

Neste estudo, 67 ejaculados foram avaliados, antes e depois da técnica de swim-up, em relação à qualidade seminal e à presença do CAEV. Das 67 amostras testadas por PCRn, antes do swim-up, 47 (70,15%) foram positivas para o DNA pró-viral. No entanto, quatro amostras adicionais foram positivas ao RT-nested PCR após o swim-up, o que permite dizer que, pelo menos, 76,12% (51/67) delas estavam infectadas antes da lavagem. Todavia, em 23,88% (16/67) das amostras não foi detectada a presença do CAEV. Após a aplicação da técnica de swim-up, constatou-se, pela PCRn e RT-nested PCR, que houve uma redução significativa (²= 9,078, p<0,001) da presença do CAEV nas amostras seminais, pois 28 de 51 amostras positivas resultaram livres do vírus (54,90%), tanto para DNA pró-viral quanto para o vírus livre. Em relação à motilidade individual progressiva (MIP) e vigor espermático obtidos antes e depois da técnica de swim-up, observou-se uma diminuição significativa em suas médias, sendo o MIP de 86,42% para 71,49%, já o vigor espermático de 4,16 para 3,93. Conclui-se que a eliminação do CAEV no sêmen é de caráter intermitente, e que a associação da PCRn e RT-nested PCR é uma opção segura para a certificação sanitária individual das amostras seminais quanto à presença ou ausência do CAEV. Finalmente, a técnica de swim-up promove uma redução na infectividade de amostras de sêmen contaminadas, e, além disso, é possível promover a recuperação de espermatozoides viáveis.(AU)

In this study, 67 ejaculates were assessed before and after the swim-up technique in relation to semen quality and presence of CAEV. Of the 67 samples tested by Nested PCR, before swim-up 47 (70.15%) were positive for viral DNA. Furthermore, four additional samples were positive for RT-nested PCR after swim-up, which allows us to affirm that at least 76.12% (51/67) were infected before washing. However, 23.88% (16/67) of the samples did not detect the presence of CAEV. After application of the swim-up technique it was found, by Nested PCR and RT-nested PCR, that there was a significant decrease (² = 9.078, p <0.001) in the presence of CAEV in semen samples, once 28 of 51 positive samples were free from the virus (54.90%) for both proviral DNA and the free form of the virus. Regarding individual progressive motility (IPM) and spermatic vigor obtained before and after the swim-up technique, a significant decrease was observed in the average, being 86.42% of the IPM to 71.49% and the spermatic vigor from 4.16 for the 3.93. It is concluded that the removal of CAEV in semen has an intermittent character, and the combination of PCR and RT-nested PCR is a safe option for health certification of individual semen samples for the presence or absence of CAEV. Finally, the swim-up technique promotes a reduction in the infectivity of contaminated semen samples, and it is possible to promote the recovery of high individual progressive motility sperm and sperm vigor.(AU)

Cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum criopreservados em água de coco em pó ACP-104 / Kinetics and morphology of common carp sperm cryopreserved in powdered coconut water ACP-104

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes taxas de diluição seminal sobre a motilidade, velocidade e presença de anormalidades espermáticas no sêmen descongelado de carpa comum (Cyprinus carpio). Utilizaram-se 20 machos sexualmente maduros, pertencentes ao Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS). A partir do sêmen coletado, foi formado um total de nove pools. O sêmen de cada pool foi avaliado quanto à motilidade, velocidade e morfologia espermática antes e depois da criopreservação. A criopreservação seminal foi realizada em meio ACP-104 + DMSO 10% diluído em 1:1 ou 1:3 (sêmen:diluidor). As amostras foram envasadas em palhetas de 0,25mL, congeladas em vapor de nitrogênio líquido (caixa de poliestireno) e estocadas em nitrogênio líquido (-196 °C). Não houve diferença significativa (P>0,05) entre as taxas de diluições sobre os parâmetros cinéticos e morfológicos de sêmen descongelado de carpa comum. Entretanto, esses parâmetros apresentaram diferença significativa (P<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle). Baixos valores de velocidade foram registrados no sêmen descongelado (VCL 42,6-46,5μm/s; VSL 33,2-37,1μm/s; VAP 38,9-43,2μm/s); contudo, observaram-se motilidades acima de 59% (59,8-67,8%) e baixos índices de anormalidades espermáticas (19,3-19,5%), sugerindo que o ACP pode ser usado como um meio favorável à criopreservação do sêmen de carpa comum em qualquer uma das taxas de diluição testadas.(AU)

The aim of this study was to determine the effects of various dilution ratios on thaw sperm motility, velocity and presence of spermatic abnormalities in the common carp. 20 males with three years of age, raised at the Departamento Nacional de Obras Contra as Secas (DNOCS) were used. From the collected semen a total of nine pools were formed. The semen from each pool was evaluated for motility, velocity and spermatic morphology before and after cryopreservation. The sperm cryopreservation was performed in medium ACP-104 + DMSO 10% diluted in 1:1 or 1:3 (sperm:extender). The samples were loaded into 0.25mL straws, frozen in liquid nitrogen vapor (Styrofoam) and stored in liquid nitrogen (-196 °C). There was no significant difference (P>0.05) between the ratios of dilution on the kinetic and morphological parameters of thawed semen from common carp. However, these parameters were significantly different (P<0.05) compared to fresh semen (control). Low velocity values were recorded in thawed semen (VCL 42.6-46.5μm/s; VSL 33.2-37.1μm/s; VAP 38.9-43.2μm/s), however, observed motility above 59% (59.8-67.8%), and low levels of spermatic abnormalities (19.3-19.5%) suggested that the ACP-104 can be used as a suitable medium for cryopreservation of common carp semen in any of the tested dilution ratios.(AU)

Uso da técnica de swim-up para a remoção do Vírus da Artrite Encefalite Caprina do sêmen de reprodutores infectados / Use of swim-up technique for removal of the Caprine Arthritis Encephalitis Virus in the semen of infect bucks

Neste estudo, 67 ejaculados foram avaliados, antes e depois da técnica de swim-up, em relação à qualidade seminal e à presença do CAEV. Das 67 amostras testadas por PCRn, antes do swim-up, 47 (70,15%) foram positivas para o DNA pró-viral. No entanto, quatro amostras adicionais foram positivas ao RT-nested PCR após o swim-up, o que permite dizer que, pelo menos, 76,12% (51/67) delas estavam infectadas antes da lavagem. Todavia, em 23,88% (16/67) das amostras não foi detectada a presença do CAEV. Após a aplicação da técnica de swim-up, constatou-se, pela PCRn e RT-nested PCR, que houve uma redução significativa (²= 9,078, p<0,001) da presença do CAEV nas amostras seminais, pois 28 de 51 amostras positivas resultaram livres do vírus (54,90%), tanto para DNA pró-viral quanto para o vírus livre. Em relação à motilidade individual progressiva (MIP) e vigor espermático obtidos antes e depois da técnica de swim-up, observou-se uma diminuição significativa em suas médias, sendo o MIP de 86,42% para 71,49%, já o vigor espermático de 4,16 para 3,93. Conclui-se que a eliminação do CAEV no sêmen é de caráter intermitente, e que a associação da PCRn e RT-nested PCR é uma opção segura para a certificação sanitária individual das amostras seminais quanto à presença ou ausência do CAEV. Finalmente, a técnica de swim-up promove uma redução na infectividade de amostras de sêmen contaminadas, e, além disso, é possível promover a recuperação de espermatozoides viáveis.

In this study, 67 ejaculates were assessed before and after the swim-up technique in relation to semen quality and presence of CAEV. Of the 67 samples tested by Nested PCR, before swim-up 47 (70.15%) were positive for viral DNA. Furthermore, four additional samples were positive for RT-nested PCR after swim-up, which allows us to affirm that at least 76.12% (51/67) were infected before washing. However, 23.88% (16/67) of the samples did not detect the presence of CAEV. After application of the swim-up technique it was found, by Nested PCR and RT-nested PCR, that there was a significant decrease (² = 9.078, p <0.001) in the presence of CAEV in semen samples, once 28 of 51 positive samples were free from the virus (54.90%) for both proviral DNA and the free form of the virus. Regarding individual progressive motility (IPM) and spermatic vigor obtained before and after the swim-up technique, a significant decrease was observed in the average, being 86.42% of the IPM to 71.49% and the spermatic vigor from 4.16 for the 3.93. It is concluded that the removal of CAEV in semen has an intermittent character, and the combination of PCR and RT-nested PCR is a safe option for health certification of individual semen samples for the presence or absence of CAEV. Finally, the swim-up technique promotes a reduction in the infectivity of contaminated semen samples, and it is possible to promote the recovery of high individual progressive motility sperm and sperm vigor.

Avaliação de diferentes crioprotetores e taxas de diluição na criopreservação seminal de Prochilodus brevis / Evaluation of different crioprotectants and dilution ratios on Prochilodus brevis sperm cryopreservation

Este estudo objetivou caracterizar o sêmen de Prochilodus brevis e avaliar os efeitos de diferentescrioproterores e taxas de diluição sobre a cinética e a morfologia do sêmen criopreservado. Inicialmente,amostras seminais de P. brevis (n = 40) foram analisadas quanto ao volume, pH, osmolaridade, concentração,motilidade e morfologia espermáticas. Para a criopreservação, o material coletado foi distribuído em 10 pools desêmen (n = 10), submetidos a seis tratamentos compostos pela combinação de glicose 5%, dois crioprotetores(DMSO ou MG) e três taxas de diluição (1:3, 1:6 ou 1:9 sêmen:diluidor). As amostras, in natura e pósdescongeladas,foram analisadas quanto à sua morfologia e cinética espermática utilizando o CASA. O sêmen deP. brevis apresentou características semelhantes a demais espécies de Prochilodus. O sêmen congelado comglicose e MG apresentou resultados significativamente superiores (P < 0,05) comparado àquele congeladoutilizando DMSO. As diluições 1:3 e 1:6 apresentaram melhores resultados para glicose + MG, enquanto 1:9 foimelhor para glicose + DMSO. Portanto, a associação glicose + MG, numa taxa de diluição de 1:3 ou 1:6, é amais indicada para a criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis.(AU)

This study aimed to characterize Prochilodus brevis sperm and evaluate the effects of different diluentsand dilution ratios on kinetics and morphology of cryopreserved sperm. Initially, sperm samples of P. brevis(n = 40) were assessed for volume, pH, osmolality, spermatic concentration, motility and morphology. Forcryopreservation, the collected material was distributed in ten pools of semen (n = 10), submitted to sixtreatments composed by a combination of glucose 5% with two cryoprotectants (DMSO or MG) and threedilution ratios (1:3, 1:6 or 1:9 - sperm:diluent). In natura and post-thawed samples were assessed for spermaticmorphology and kinetics using CASA. The sperm of P. brevis showed similar characteristics to otherProchilodus species. Sperm cryopreserved in glucose plus MG presented significantly higher results (P < 0.05)compared to sperm frozen in DMSO. The dilution ratios of 1:3 and 1:6 yielded better results for glucose + MG,while 1:9 was the best dilution for glucose + DMSO. In conclusion, the association of glucose + MG, in adilution ratio of 1:3 or 1:6, is the most indicated for Prochilodus brevis sperm cryopreservation.(AU)

Avaliação de diferentes crioprotetores e taxas de diluição na criopreservação seminal de Prochilodus brevis / Evaluation of different crioprotectants and dilution ratios on Prochilodus brevis sperm cryopreservation

Este estudo objetivou caracterizar o sêmen de Prochilodus brevis e avaliar os efeitos de diferentescrioproterores e taxas de diluição sobre a cinética e a morfologia do sêmen criopreservado. Inicialmente,amostras seminais de P. brevis (n = 40) foram analisadas quanto ao volume, pH, osmolaridade, concentração,motilidade e morfologia espermáticas. Para a criopreservação, o material coletado foi distribuído em 10 pools desêmen (n = 10), submetidos a seis tratamentos compostos pela combinação de glicose 5%, dois crioprotetores(DMSO ou MG) e três taxas de diluição (1:3, 1:6 ou 1:9 – sêmen:diluidor). As amostras, in natura e pósdescongeladas,foram analisadas quanto à sua morfologia e cinética espermática utilizando o CASA. O sêmen deP. brevis apresentou características semelhantes a demais espécies de Prochilodus. O sêmen congelado comglicose e MG apresentou resultados significativamente superiores (P < 0,05) comparado àquele congeladoutilizando DMSO. As diluições 1:3 e 1:6 apresentaram melhores resultados para glicose + MG, enquanto 1:9 foimelhor para glicose + DMSO. Portanto, a associação glicose + MG, numa taxa de diluição de 1:3 ou 1:6, é amais indicada para a criopreservação do sêmen de Prochilodus brevis.

This study aimed to characterize Prochilodus brevis sperm and evaluate the effects of different diluentsand dilution ratios on kinetics and morphology of cryopreserved sperm. Initially, sperm samples of P. brevis(n = 40) were assessed for volume, pH, osmolality, spermatic concentration, motility and morphology. Forcryopreservation, the collected material was distributed in ten pools of semen (n = 10), submitted to sixtreatments composed by a combination of glucose 5% with two cryoprotectants (DMSO or MG) and threedilution ratios (1:3, 1:6 or 1:9 - sperm:diluent). In natura and post-thawed samples were assessed for spermaticmorphology and kinetics using CASA. The sperm of P. brevis showed similar characteristics to otherProchilodus species. Sperm cryopreserved in glucose plus MG presented significantly higher results (P < 0.05)compared to sperm frozen in DMSO. The dilution ratios of 1:3 and 1:6 yielded better results for glucose + MG,while 1:9 was the best dilution for glucose + DMSO. In conclusion, the association of glucose + MG, in adilution ratio of 1:3 or 1:6, is the most indicated for Prochilodus brevis sperm cryopreservation.

Padronização do Elisa indireto e Western Blot para diagnóstico da artrite-encefalite caprina / Standardization of indirect Elisa and Western Blot for diagnosis of Caprine Arthritis-Encephalitis

A artrite-encefalite caprina (CAE) é diagnosticada rotineiramente pela técnica de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), que é considerada pouco sensível. Objetivou-se com este estudo padronizar testes de Elisa-i e Western Blot (WB) para diagnóstico precoce de anticorpos em caprinos contra CAEV e comparar os resultados obtidos nesses testes com a prova de IDGA. Para a padronização dos testes Elisa-i e WB, utilizaram-se diferentes concentrações e diluições de antígeno, soros e conjugado. No Elisa-i, adotaram-se microplacas rígidas com 96 poços, sendo a combinação de concentração de 0,5µg/poço de antígeno e diluições de 1:100 de soro e 1:1500 de conjugado a que apresentou melhor resultado. No WB foram utilizadas membranas de nitrocelulose, definindo-se as diluições de 1:50 de soro e 1:15000 de conjugado. Para avaliar o desempenho das técnicas, 222 amostras de soro caprino foram testadas e os dados obtidos foram comparados com o IDGA. A sensibilidade e a especificidade do Elisa-i/IDGA, WB/IDGA e WB/Elisa-i foram de 70% e 91%, 100% e 72,6%, 84,6% e 76,5%, concomitantemente. O índice Kappa desses testes foi de 0,35, 0,2 e 0,36, respectivamente. As técnicas de Elisa-i e WB apresentaram-se mais sensíveis que a IDGA, podendo ser utilizadas como ferramentas para o diagnóstico precoce da CAE.(AU)

Caprine arthritis-encephalitis (CAE) is routinely diagnosed with the Agarose Gel Immunodiffusion (AGID) technique, which is considered to have low sensitivity. The objective of this study was to standardize testing i-Elisa and Western Blot for early detection of antibodies against CAEV in goats and compare the results obtained in these tests with proof of AGID. For standardization of i-Elisa and WB, different concentrations and dilutions of antigen, sera and conjugate were used. In the i-Elisa, rigid microplate with 96 wells was adopted, and the combination that showed the best result was a concentration of 0.5µg/ well of antigen and dilutions of the serum of 1:100 and conjugate of 1:1500. In the WB nitrocellulose membranes were used, and the dilutions of the serum were defined at 1:50 and conjugate at 1:15000. To evaluate the performance of the techniques, 222 goat serum samples were tested and the data were compared with the AGID. The sensitivity and specificity of Elisa-i/IDGA, WB/AGID and WB/Elisa-i were 70% and 91%, 100% and 72.6%, 84.6% and 76.5%, concomitantly. The Kappa index of these tests was 0.35, 0.2 and 0.36, respectively. The i-Elisa and WB techniques were more sensitive than the AGID and can be used as tools for early diagnosis of CAE.(AU)