[Phenotypic and genotypic methods for detecting multidrug resistance in Mycobacterium tuberculosis]. / Evaluación de métodos fenotípicos y genotípicos para la detección de farmacorresistencia de Mycobacterium tuberculosis.

BACKGROUND: Expeditious charactization of drug susceptibility in Mycobacterium tuberculosis is difficult and, calls for the design and evaluation of faster, cheaper and more effective new techniques. OBJECTIVE: The aim of the current study was to compare one genotypic and two phenotypic methods for rapid susceptibility detection of M. tuberculosis. MATERIAL AND METHODS: Twenty-one M. tuberculosis strains were evaluated by phenotypic methodologies of oxidation and reduction of Alamar blue and MTT in the presence of streptomycin, isoniazid, rifampin and ethambutol. In all tests, the proportion method was applied as the comparison standard. By means of receiver operative characteristic (ROC) analysis, the performance, predictive values and threshold values for all drugs were determined. In addition, the performance of PCR and reverse line blot hybridization in establishing predictive values for sensitivity and resistance were compared in contingency tables. RESULTS: The susceptibility patterns established by colorimetric techniques were obtained after seven days of incubation. The performances of these tests were excellent for all drugs-the areas under curves were >0.9, 100% of sensitivity (S) and specificity (E) >80%. The genotypic method of RFLP oligotyping detected multidrug resistance with S of 100% and E of 93%. Conclusion. The results indicated that Alamar blue, MTT and RFLP methodologies are rapid and useful tools for characterizing multidrug resistance in M. tuberculosis, particularly for those patients with high risk of developing multidrug resistant tuberculosis.

[Development of a multiantigenic serological test for tuberculosis diagnosis]. / Utilidad de una prueba serológica multiantigénica en el diagnóstico de tuberculosis.

OBJECTIVE: The present work evaluated a multi-antigen printing immunoassay (MAPIA) for the serological diagnosis of tuberculosis. MATERIALS AND METHODS: Sera were obtained from 66 patients with tuberculosis, verified clinically and bacteriologically and from 47 healthy individuals (control group). Sample sera were used for detection of antibodies against 3 enriched mixtures of proteins and 5 unique recombinant antigens. The antigens were presented in a solid matrix. Sensitivity, specificity and predictive values were evaluated and confirmed by a logistic regression analysis. A prevalence value was calculated and used for the selection of the best antigenic combination. RESULTS: The sensitivity and specificity values of individual antigens varied between 5-83% and 9-100%. The enriched mixtures values were more accurate than those obtained with the recombinant antigens. Combinations of several antigens improved the sensitivity values up to the 81% level. In most cases, specificity values of 57% or less were obtained. CONCLUSIONS: These results suggested that the multiantigenic test can be a useful screening tool, to be used in conjunction with the more definitive diagnostic tests.

Evaluación de métodos fenotípicos y genotípicos para la detección de farmacorresistencia de Mycobacterium tuberculosis / Evaluation of phenotypic and genotypic methods for detecting multidrug resistance in Mycobacterium tuberculosis

Introducción. La dificultad en el diagnóstico temprano y oportuno de la susceptibilidad a los medicamentos de Mycobacterium tuberculosis hace necesario el diseño y la evaluación de nuevas técnicas que superen la efectividad, reduzcan el costo y el tiempo que toman los métodos tradicionales. Objetivo. Evaluar y comparar dos metodologías fenotípicas y una genotípica, útiles en la determinación rápida de susceptibilidad de M. tuberculosis, teniendo el método de las proporciones múltiples como referencia. Materiales y métodos. Se incluyeron 21 cepas de M. tuberculosis para la evaluación de las metodologías fenotípicas de oxidación y reducción de Alamar azul (Maba) y el bromuro de 3-(4-5-dimetiletiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolio (MTT o Tema), frente a estreptomicina, isoniacida, rifampicina y etambutol. Mediante análisis ROC (receiver operative characteristic curves) se determinó el desempeño de las pruebas y se determinaron los valores pronósticos y el punto de corte para cada antibiótico. Además, mediante tablas de contingencia se determinó el desempeño y los valores predictivos de la metodología genotípica de PCR e hibridación reversa o rifoligotyping, versión 3, en la determinación de las cepas multirresistentes. Resultados. Los perfiles de susceptibilidad por las pruebas colorimétricas se obtuvieron a los 7 días, con valores de área bajo la curva menores de 0,9, sensibilidad de 100 por ciento y especificidad mayor de 80 por ciento. La metodología de rifoligotyping resultó eficaz en la detección de mutirresistencia, con sensibilidad de 100 por ciento y especificidad de 93 por ciento. Conclusión. Con los resultados obtenidos consideramos las pruebas Maba, Tema y rifoligotyping como alternativas rápidas y eficaces en la detección de farmacorresistencia de M. tuberculosis, aplicables a pacientes con alto riesgo de desarrollar tuberculosis multirresistente

Utilidad de una prueba serológica multiantigénica en el diagnóstico de tuberculosis / Development of a multiantigenic serological test for tuberculosis diagnosis

Introducción. La heterogeneidad en el patrón de reconocimiento antigénico observado en los enfermos infectados con Mycobacterium tuberculosis hace evidente la necesidad de contar con una técnica rápida y accesible para el diagnóstico de la enfermedad. La disponibilidad de pruebas que empleen diferentes antígenos podría ser de utilidad para aumentar la sensibilidad de la detección.Objetivo. Evaluar el uso de una prueba multiantigénica (Mapia) de fácil manejo y evaluación visual en el diagnóstico serológico de la tuberculosis. Metodología. Se estudiaron 66 sueros de pacientes con enfermedad tuberculosa comprobada y 47 sueros de individuos no tuberculosos, y se detectó la presencia de anticuerpos para 8 antígenos: 3 mezclas enriquecidas en antígenos y 5 antígenos recombinantes, incluidos en una matriz sólida cuya lectura se realizó cualitativamente. Los antígenos fueron evaluados por sus características de sensibilidad, especificidad y valores predictivos, confirmados mediante análisis de regresión logística del cual se obtuvo la razón de prevalencia utilizada para la selección de la combinación antigénica mas adecuada. Resultados. Los valores de sensibilidad y especificidad de los antígenos individuales variaron entre 5 por ciento y 83 por ciento y 9 por ciento y 100 por ciento, respectivamente; los valores de las mezclas enriquecidas fueron mejores que los valores presentados por los antígenos recombinantes. La combinación de varios antígenos mejoró notablemente los valores de sensibilidad hasta 81 por ciento, pero en la mayoría de los casos se obtuvieron valores de especificidad menores al 57 por ciento

Multicenter evaluation of mycobacteria identification by PCR restriction enzyme analysis in laboratories from Latin America and the Caribbean.

The identification of mycobacterial species in clinical isolates is essential for making patient care decisions. Polymerase chain reaction (PCR) restriction enzyme analysis (PRA) is a simple and rapid identification method, based on amplification of 441 bp of the hsp65 gene and restriction with BstEII and HaeIII. As a contribution to the validation of PRA, a multicenter study was performed in eight laboratories located in Argentina, Brazil, Colombia, Chile, and Guadeloupe. Each laboratory received 18 coded isolates from the collection of the Institute of Tropical Medicine (Antwerp, Belgium), representing duplicates of nine laboratory strains: Mycobacterium terrae CIPT 140320001, Mycobacterium scrofulaceum CIPT 140220031, Mycobacterium flavescens ATCC 14474, Mycobacterium triviale ATCC 23292, Mycobacterium nonchromogenicum ATCC 19530, Mycobacterium chitae ATCC 19627, Mycobacterium abscessus ATCC 19977, Mycobacterium kansasii ATCC 12478, and Mycobacterium peregrinum ATCC 14467. A detailed protocol including amplification, enzymatic digestion, and gel preparation was provided to each laboratory. Two laboratories identified correctly all 18 (100%) isolates, one identified correctly 17 (94.5%), two identified 14 (77.7%), one identified 11 (61%), and two identified 8 (44.4%) isolates. Errors detected in laboratories with more than 77% accuracy were associated with electrophoresis running conditions and an unspecific amplicon produced by a single strain. Lower accuracy was mainly related to inappropriate use of DNA markers and insufficient training in interpretation of patterns. In conclusion, the PRA method was readily implemented in some Latin American and Caribbean laboratories of mycobacteria, but improvements in critical points, as gel running conditions and training in interpretiation of patterns, are needed in order to improve accuracy. In others, improvement in critical points is still necessary.