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Nucleic Acids Res ; 40(22): e173, 2012 Dec.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-22904086

RESUMO

Gene downregulation by antisense morpholino oligonucleotides (MOs) is achieved by either hybridization around the translation initiation codon or by targeting the splice donor site. In the present study, an antisense MO method is introduced that uses a 25-mer MO against a region at least 40-nt upstream from a poly(A) tail junction in the 3'-untranslated region (UTR) of maternal mRNA. The MO removed the poly(A) tail and blocked zebrafish cdk9 (zcdk9) mRNA translation, showing functional mimicry between miRNA and MO. A PCR-based assay revealed MO-mediated specific poly(A) tail removal of zebrafish mRNAs, including those for cyclin B1, cyclin B2 and tbp. The MO activity targeting cyclins A and B mRNAs was validated in unfertilized starfish oocytes and eggs. The MO removed the elongated poly(A) tail from maternal matured mRNA. This antisense method introduces a new application for the targeted downregulation of maternal mRNAs in animal oocytes, eggs and early embryos.


Assuntos
Regulação da Expressão Gênica , Morfolinos/farmacologia , Oligonucleotídeos Antissenso/farmacologia , Poli A/metabolismo , Biossíntese de Proteínas/efeitos dos fármacos , RNA Mensageiro Estocado/metabolismo , Regiões 3' não Traduzidas , Animais , Asterina/genética , Asterina/metabolismo , Ciclina B/genética , Ciclina B/metabolismo , Quinase 9 Dependente de Ciclina/antagonistas & inibidores , Quinase 9 Dependente de Ciclina/genética , Regulação para Baixo , Técnicas de Silenciamento de Genes , Injeções , Morfolinos/administração & dosagem , Oligonucleotídeos Antissenso/administração & dosagem , Oócitos/efeitos dos fármacos , Oócitos/metabolismo , Poliadenilação/efeitos dos fármacos , RNA Mensageiro Estocado/química , Peixe-Zebra/embriologia , Peixe-Zebra/genética , Peixe-Zebra/metabolismo , Proteínas de Peixe-Zebra/antagonistas & inibidores , Proteínas de Peixe-Zebra/genética
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