Incidência de Anaplasma marginale, Babesia bigemina e Babesia bovis em bezerros no semiárido paraibano / Incidence of Anaplasma marginale, Babesia bigemina and Babesia bovis among calves in the semiarid region of Paraiba, Brazil

Este estudo avaliou a incidência de infecções naturais pelos agentes da tristeza parasitária bovina (TPB), Anaplasma marginale, Babesia bovis e Babesia bigemina, em bezerros nascidos em cinco fazendas do semiárido paraibano. Em cada fazenda, foram coletadas amostras de sangue de 6 a 14 bezerros a cada 14 dias durante os primeiros 12 meses de vida de cada animal. As amostras de sangue foram processadas por microhematócrito e testadas por PCR para detecção de DNA de A. marginale, B. bovis e B. bigemina. Em paralelo, foram quantificadas as infestações por carrapatos nos bovinos nas cinco fazendas, assim como as populações de tabanídeos em três fazendas. De 41 bezerros monitorados durante o primeiro ano de vida, 25 (61,0%) apresentaram PCR positivo para A. marginale, 7 (17,1%) para B. bigemina e 3 (7,3%) para B. bovis. Os valores de incidência da infecção por A. marginale variaram de 83,3% a 100% em quatro fazendas. A infecção por B. bigemina ocorreu em bezerros de apenas duas fazendas (incidências de 12,5% e 85,7%) e a por B. bovis em apenas uma (incidência de 42,8%). Em uma fazenda os 14 bezerros permaneceram negativos para A. marginale, B. bigemina e B. bovis durante os 12 meses de acompanhamento. Os resultados de PCR foram confirmados por sequenciamento de DNA de produtos amplificados. A presença de carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus foi verificada somente em duas propriedades, nas quais houve infecção por A. marginale, B. bigemina e B. bovis (este último agente em apenas uma delas). Foram capturados 930 tabanídeos no estudo, a maioria durante os períodos de chuvas na região; 70,7% dos tabanídeos corresponderam a Tabanus claripennis. Houve associação significativa entre PCR positivo para A. marginale ou B. bigemina e menores valores de hematócrito... (AU)

This study evaluated the incidence of natural infection by agents of cattle tick fever (CTF), Anaplasma marginale, Babesia bovis and Babesia bigemina in calves born in five farms within the semiarid region of Paraíba state, Brazil. In each farm, blood samples were collected from 6 to 14 calves every 14 days during the first 12 months of life of each animal. Blood samples were processed by microhematocrit and tested by PCR for detection of DNA of A. marginale, B. bovis and B. bigemina. In parallel, the tick infestations on animals were quantified in the five farms, as well as populations in horseflies in three farms. From a total of 41 calves monitored during the first year of life, 25 (61.0%) had positive PCR for A. marginale, 7 (17.1%) for B. bigemina and 3 (7.3%) to B. bovis. Incidence values for A. marginale infection ranged from 83.3% to 100% in four farms. Infection with B. bigemina in calves was detected at only two farms (incidence of 12.5% and 85.7%) and by B. bovis in just one (42.8% incidence). On one farm 14 calves remained negative for A. marginale, B. bigemina and B. bovis during the 12 month follow-up. PCR results were confirmed by DNA sequencing of amplified products. The presence of Rhipicephalus (Boophilus) microplus was found only in two farms in which there was infection by A. marginale, B. bigemina and B. bovis (the latter agent in only one of them). A total of 930 horseflies were captured in the study, most during periods of rain in the region; 70.7% of horseflies corresponded to Tabanus claripennis. There was significant association between a positive PCR for A. marginale and B. bigemina and lower hematocrit values. This study demonstrates that even evaluating only five rural properties, the incidence of CTF occurred heterogeneously in the region, confirming the status of enzootic instability area for CTF, previously reported for the semiarid region of Paraiba.(AU)

Incidência de Anaplasma marginale, Babesia bigemina e Babesia bovis em bezerros no semiárido paraibano / Incidence of Anaplasma marginale, Babesia bigemina and Babesia bovis among calves in the semiarid region of Paraiba, Brazil

Este estudo avaliou a incidência de infecções naturais pelos agentes da tristeza parasitária bovina (TPB), Anaplasma marginale, Babesia bovis e Babesia bigemina, em bezerros nascidos em cinco fazendas do semiárido paraibano. Em cada fazenda, foram coletadas amostras de sangue de 6 a 14 bezerros a cada 14 dias durante os primeiros 12 meses de vida de cada animal. As amostras de sangue foram processadas por microhematócrito e testadas por PCR para detecção de DNA de A. marginale, B. bovis e B. bigemina. Em paralelo, foram quantificadas as infestações por carrapatos nos bovinos nas cinco fazendas, assim como as populações de tabanídeos em três fazendas. De 41 bezerros monitorados durante o primeiro ano de vida, 25 (61,0%) apresentaram PCR positivo para A. marginale, 7 (17,1%) para B. bigemina e 3 (7,3%) para B. bovis. Os valores de incidência da infecção por A. marginale variaram de 83,3% a 100% em quatro fazendas. A infecção por B. bigemina ocorreu em bezerros de apenas duas fazendas (incidências de 12,5% e 85,7%) e a por B. bovis em apenas uma (incidência de 42,8%). Em uma fazenda os 14 bezerros permaneceram negativos para A. marginale, B. bigemina e B. bovis durante os 12 meses de acompanhamento. Os resultados de PCR foram confirmados por sequenciamento de DNA de produtos amplificados. A presença de carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus foi verificada somente em duas propriedades, nas quais houve infecção por A. marginale, B. bigemina e B. bovis (este último agente em apenas uma delas). Foram capturados 930 tabanídeos no estudo, a maioria durante os períodos de chuvas na região; 70,7% dos tabanídeos corresponderam a Tabanus claripennis. Houve associação significativa entre PCR positivo para A. marginale ou B. bigemina e menores valores de hematócrito. Este estudo demonstra que, mesmo avaliando apenas cinco propriedades rurais, a incidência dos agentes da TPB ocorreu de forma heterogênea na região, corroborando o status de área de instabilidade enzoótica para TPB previamente relatado para o semiárido paraibano.(AU)

This study evaluated the incidence of natural infection by agents of cattle tick fever (CTF), Anaplasma marginale, Babesia bovis and Babesia bigemina in calves born in five farms within the semiarid region of Paraíba state, Brazil. In each farm, blood samples were collected from 6 to 14 calves every 14 days during the first 12 months of life of each animal. Blood samples were processed by microhematocrit and tested by PCR for detection of DNA of A. marginale, B. bovis and B. bigemina. In parallel, the tick infestations on animals were quantified in the five farms, as well as populations in horseflies in three farms. From a total of 41 calves monitored during the first year of life, 25 (61.0%) had positive PCR for A. marginale, 7 (17.1%) for B. bigemina and 3 (7.3%) to B. bovis. Incidence values for A. marginale infection ranged from 83.3% to 100% in four farms. Infection with B. bigemina in calves was detected at only two farms (incidence of 12.5% and 85.7%) and by B. bovis in just one (42.8% incidence). On one farm 14 calves remained negative for A. marginale, B. bigemina and B. bovis during the 12 month follow-up. PCR results were confirmed by DNA sequencing of amplified products. The presence of Rhipicephalus (Boophilus) microplus was found only in two farms in which there was infection by A. marginale, B. bigemina and B. bovis (the latter agent in only one of them). A total of 930 horseflies were captured in the study, most during periods of rain in the region; 70.7% of horseflies corresponded to Tabanus claripennis. There was significant association between a positive PCR for A. marginale and B. bigemina and lower hematocrit values. This study demonstrates that even evaluating only five rural properties, the incidence of CTF occurred heterogeneously in the region, confirming the status of enzootic instability area for CTF, previously reported for the semiarid region of Paraiba.(AU)

A hybrid protein containing MSP1a repeats and Omp7, Omp8 and Omp9 epitopes protect immunized BALB/c mice against anaplasmosis.

Anaplasma marginale (A. marginale) has a remarkable impact on livestock production, and an effective vaccine is not currently available due to the inexistence of a small animal model. Recently, BALB/c mice were successfully infected with A. marginale, resulting in an acute and persistent anaplasmosis infection. Here, we designed a hybrid protein containing repeats of polypeptide 1a from major surface protein-1 complex (MSP1a) repeats and common epitopes of outer membrane proteins (OMPs) OMP7, OMP8 and OMP9 expressed in Escherichia coli. Our proof-of-concept assessed vaccinal effectiveness against a challenge with live bacteria. The MSP1a/OMP7/8/9 immunized BALB/C mice exhibited a strong reduction in rickettsemia and had no signs of anaplasmosis or hepatic lesions. In contrast, the non-immunized mice exhibited signs of anaplasmosis and a body weight loss associated with increases in monocyte and neutrophil counts. Furthermore, the non-immunized mice displayed atrophies with chronic inflammatory infiltrates in the spleen and increased binucleation and hydropic degeneration in the hepatocytes. Our findings demonstrated that immunization with our hybrid protein induced a strong reduction in rickettsemia and conferred protection against anaplasmosis. Therefore, given the strong evidence of the protective effect against anaplasmosis, hybrid protein designs are potential candidates for the rational design of vaccinal subunits.

Incidência de Anaplasma marginale, Babesia bigemina e Babesia bovis em bezerros no semiárido paraibano

ABSTRACT: This study evaluated the incidence of natural infection by agents of cattle tick fever (CTF), Anaplasma marginale, Babesia bovis and Babesia bigemina in calves born in five farms within the semiarid region of Paraíba state, Brazil. In each farm, blood samples were collected from 6 to 14 calves every 14 days during the first 12 months of life of each animal. Blood samples were processed by microhematocrit and tested by PCR for detection of DNA of A. marginale, B. bovis and B. bigemina. In parallel, the tick infestations on animals were quantified in the five farms, as well as populations in horseflies in three farms. From a total of 41 calves monitored during the first year of life, 25 (61.0%) had positive PCR for A. marginale, 7 (17.1%) for B. bigemina and 3 (7.3%) to B. bovis. Incidence values for A. marginale infection ranged from 83.3% to 100% in four farms. Infection with B. bigemina in calves was detected at only two farms (incidence of 12.5% and 85.7%) and by B. bovis in just one (42.8% incidence). On one farm 14 calves remained negative for A. marginale, B. bigemina and B. bovis during the 12 month follow-up. PCR results were confirmed by DNA sequencing of amplified products. The presence of Rhipicephalus (Boophilus) microplus was found only in two farms in which there was infection by A. marginale, B. bigemina and B. bovis (the latter agent in only one of them). A total of 930 horseflies were captured in the study, most during periods of rain in the region; 70.7% of horseflies corresponded to Tabanus claripennis. There was significant association between a positive PCR for A. marginale and B. bigemina and lower hematocrit values. This study demonstrates that even evaluating only five rural properties, the incidence of CTF occurred heterogeneously in the region, confirming the status of enzootic instability area for CTF, previously reported for the semiarid region of Paraiba.

RESUMO: Este estudo avaliou a incidência de infecções naturais pelos agentes da tristeza parasitária bovina (TPB), Anaplasma marginale, Babesia bovis e Babesia bigemina, em bezerros nascidos em cinco fazendas do semiárido paraibano. Em cada fazenda, foram coletadas amostras de sangue de 6 a 14 bezerros a cada 14 dias durante os primeiros 12 meses de vida de cada animal. As amostras de sangue foram processadas por microhematócrito e testadas por PCR para detecção de DNA de A. marginale, B. bovis e B. bigemina. Em paralelo, foram quantificadas as infestações por carrapatos nos bovinos nas cinco fazendas, assim como as populações de tabanídeos em três fazendas. De 41 bezerros monitorados durante o primeiro ano de vida, 25 (61,0%) apresentaram PCR positivo para A. marginale, 7 (17,1%) para B. bigemina e 3 (7,3%) para B. bovis. Os valores de incidência da infecção por A. marginale variaram de 83,3% a 100% em quatro fazendas. A infecção por B. bigemina ocorreu em bezerros de apenas duas fazendas (incidências de 12,5% e 85,7%) e a por B. bovis em apenas uma (incidência de 42,8%). Em uma fazenda os 14 bezerros permaneceram negativos para A. marginale, B. bigemina e B. bovis durante os 12 meses de acompanhamento. Os resultados de PCR foram confirmados por sequenciamento de DNA de produtos amplificados. A presença de carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus foi verificada somente em duas propriedades, nas quais houve infecção por A. marginale, B. bigemina e B. bovis (este último agente em apenas uma delas). Foram capturados 930 tabanídeos no estudo, a maioria durante os períodos de chuvas na região; 70,7% dos tabanídeos corresponderam a Tabanus claripennis. Houve associação significativa entre PCR positivo para A. marginale ou B. bigemina e menores valores de hematócrito. Este estudo demonstra que, mesmo avaliando apenas cinco propriedades rurais, a incidência dos agentes da TPB ocorreu de forma heterogênea na região, corroborando o status de área de instabilidade enzoótica para TPB previamente relatado para o semiárido paraibano.

Natural infection by Eimeria spp. in a cohort of lambs raised extensively in Northeast Brazil / Infecção natural por Eimeria spp. em uma criação de cordeiros criados extensivamente no Nordeste do Brasil

The aim of the study was to examine and describe the changes in the course of Eimeria infection in a cohort of lambs of the mixed breed Santa Inês raised extensively on a farm in the State of Rio Grande do Norte, northeastern Brazil. The study was carried out between April and August 2008, during which period fecal samples were collected on a weekly basis from each of the 27 male lambs starting from the day after birth until the age of 90 days. Samples were analyzed under optical microscope and those testing positive for Eimeria oocysts were submitted to a quantitative analysis. Oocysts were detected in 17% of the lambs by week 3, but by week 6 100% of the animals were infected. Eight species of Eimeria were identified in the fecal samples, namely, in decreasing order of prevalence, E. crandallis, E. parva, E. granulosa, E. ovinoidalis, E. ahsata, E. ovina, E. faurei and E. intricata. Of the 191 fecal samples that contained Eimeria oocysts, only 32 (16.8%) were infected with a single species whereas 23 (12.0%) were infected with at least two species and 136 (71.2%) harbored three or more species. Although Eimeria coccidiosis is a complex disease owing to the mixed nature of the infective agents, an ongoing prevention program should be implemented to reduce production losses.(AU)

O objetivo do estudo foi analisar e descrever as alterações no curso da infecção por Eimeria em uma criação de cordeiros mestiços da raça Santa Inês criados extensivamente em uma fazenda no Estado do Rio Grande do Norte, nordeste do Brasil. O estudo foi realizado entre abril e agosto de 2008, período durante o qual amostras fecais foram coletadas semanalmente de 27 cordeiros machos a partir do nascimento até a idade de 90 dias. As amostras foram analisadas em microscópio óptico e aquelas positivas para oocistos de Eimeria foram submetidos a uma análise quantitativa. Oocistos foram detectados em 17% dos cordeiros na terceira semana, mas na sexta semana 100% dos animais estavam infectados. Oito espécies de Eimeria foram identificadas nas amostras fecais, citadas em ordem decrescente de prevalência, E. crandallis, E. parva, E. granulosa, E.ovinoidalis, E. ahsata, E. ovina, E. faurei e E. intricata. Das 191 amostras de fezes que continham oocistos de Eimeria, apenas 32 (16,8%) estavam infectados com uma única espécie, enquanto 23 (12,0%) estavam infectados com pelo menos duas espécies e 136 (71,2%) abrigavam três ou mais espécies. Apesar de Eimeria ser uma doença complexa, devido à natureza mista dos agentes infecciosos, um programa de prevenção em curso deve ser implementada para reduzir as perdas de produção.(AU)

Use of refrigeration as a practical means to preserve viability of in vitro-cultured IDE8 tick cells.

In vitro cultivation of the IDE8 cell line, derived from embryonic Ixodes scapularis ticks, constitutes an important system for the study of tick-borne pathogens, as these cells support growth of rickettsial species which are not normally transmitted by this tick. However, since cryopreservation of IDE8 cells is not always successful, there is a need to develop alternative ways to preserve these cells. In the present study, a suspension of IDE8 cells in culture medium was kept under refrigeration at 4 degrees C for up to 60 days. Every 15 days, the suspension was mixed and aliquots were re-cultured in 2-ml tubes, under standardized conditions. In addition, three techniques for cryopreservation, using two different cryoprotectants (DMSO and glycerol), were evaluated. Medium changes were carried out every week and subculturing every 2 weeks. The development of cultures and their respective subcultures, after returning to standard culture temperature, was evaluated by percentage viability and by cellular morphology evaluated in Giemsa-stained cytocentrifuge smears. All cultures and subcultures appeared healthy, showing growth rates comparable to cultures that had not been kept under refrigeration. The results demonstrated that storage under refrigeration at 4 degrees C is an efficient method for preservation of IDE8 cells for up to 60 days and that refrigeration may be preferable to cryopreservation for short-term preservation of IDE8 cells.