Leishmania (Viannia) braziliensis isolated from the saliva of patients in a cutaneous leishmaniasis-endemic area of northeastern Brazil.

Several studies have described the use of non-invasive collection methods, mostly based on the detection of parasite DNA, for diagnosis. However, no Leishmania specimens have been isolated from saliva. Here, we report the first isolation of Leishmania braziliensis from the saliva of humans with cutaneous leishmaniasis but without lesions on their mucosa. The isolates were obtained from salivary fluid inoculated in hamsters and were tested by multilocus enzyme electrophoresis. Seven samples from 43 patients suspected of having the disease were identified for in vivo culture. These findings suggest that saliva is a clinical sample that allows the isolation of Leishmania sp.

Molecular detection of Leishmania in phlebotomine sand flies in a cutaneous and visceral leishmaniasis endemic area in northeastern Brazil.

Several phlebotomine sand fly species have been regarded as putative or proven vectors of parasites of the genus Leishmania in Brazil, but data for the northeastern region remains incipient. In this study, a total of 600 phlebotomine sand flies were grouped in pools of 10 specimens each and tested by a Leishmania genus-specific PCR and by a PCR targeting Leishmania (Leishmania) infantum. Fourteen out of 60 pools were positive by the genus-specific PCR, being five pools of L. migonei, seven of L. complexa, one of L. sordellii and one of L. naftalekatzi, which correspond to a minimal infection rate of 2.3% (14/600). Our results, associated with their known anthropophily and their abundance, suggest the participation of L. migonei and L. complexa as vectors of Leishmania in northeastern Brazil. Remarkably, this is the first time in this country that the detection of Leishmania DNA in L. sordellii and L. naftalekatzi has been reported, but future studies are necessary to better understand the significance of these findings.

The compositional landscape of minicircle sequences isolated from active lesions and scars of American cutaneous leishmaniasis.

BACKGROUND: American cutaneous leishmaniasis (ACL) is characterized by cutaneous lesions that heal spontaneously or after specific treatment. This paper reports on the analysis of kDNA minicircle sequences from clinical samples (typical lesions and scars) that were PCR-amplified with specific primers for Leishmania species of the subgenus Viannia. METHODS: From 56 clinical isolates we obtained a single amplified fragment (ca. 790 bp), which after cloning and sequencing resulted in 290 minicircle sequences from both active lesions and scars. We aimed to get a compositional profile of these sequences in clinical samples and evaluate the corresponding compositional changes. Sequences were analyzed with the compseq and wordcount (Emboss package) to get the composition of di-, tri-, tetra-, penta- and hexanucleotides. Additionally, we built a nucleotide dictionary with words of 7, 8, 9 and 10 nucleotides. RESULTS: This compositional analysis showed that minicircles amplified from active cutaneous lesions and scars have a distinct compositional profile as viewed by nucleotide composition of words up to 10mer. With regard to the most frequent nucleotide words above length 6, there is also a distinct pattern for 7, 8, 9 and 10mer. CONCLUSION: These results indicate that minicircle sequences can be monitored upon direct exposure to a selection/stressing environment (e.g. chemical action) by evaluating their nucleotide compositional profile. It might be useful as a molecular tool in research concerning the evolution of infecting Leishmania in both vector and vertebrate hosts.

Cutaneous leishmaniasis in northeastern Brazil: a critical appraisal of studies conducted in State of Pernambuco / Leishmaniose cutânea no nordeste do Brasil: uma avaliação crítica dos estudos realizados no Estado de Pernambuco

American cutaneous leishmaniasis (ACL) is a complex disease with clinical and epidemiological features that may vary from region to region. In fact, at least seven different Leishmania species, including Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) lainsoni, Leishmania (Viannia) naiffi, Leishmania (Viannia) shawi, Leishmania (Viannia) lindenbergi, and Leishmania (Leishmania) amazonensis, have been implicated in the etiology of ACL in Brazil, and numerous phlebotomine sandfly species of the genus Lutzomyia have been regarded as putative or proven vectors. Because ACL is a focal disease, understanding the disease dynamics at the local level is essential for the implementation of more effective control measures. The present paper is a narrative review about the ACL epidemiology in Pernambuco, northeastern Brazil. Furthermore, the need for more effective diagnosis, treatment, control and prevention strategies for the affected populations is highlighted. This paper will provide researchers with a critical appraisal of ACL in Pernambuco. Hopefully, it will also be helpful for public health authorities to improve current control strategies against ACL at the state and country levels.

A leishmaniose cutânea americana (LCA) é uma doença complexa com características clínicas e epidemiológicas que podem variar de região para região. De fato, pelo menos, sete diferentes espécies de Leishmania, incluindo Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) lainsoni, Leishmania (Viannia) naiffi, Leishmania (Viannia) shawi, Leishmania (Viannia) lindenbergi e Leishmania (Leishmania) amazonensis, têm sido incriminadas na etiologia da LCA no Brasil, e numerosas espécies de flebotomíneos do gênero Lutzomyia, foram considerados vetores suspeitos ou comprovados. Devido ao seu caráter focal, a compreensão da dinâmica da LCA a nível local é imprescindível para a implementação de medidas de controle eficazes. Este trabalho consiste de uma revisão narrativa sobre a epidemiologia da LCA em Pernambuco, nordeste do Brasil. Além disso, se enfatiza a necessidade de maior efetividade no diagnóstico, tratamento, controle e estratégias de prevenção para as populações afetadas. Este artigo fornecerá aos pesquisadores uma avaliação crítica da LCA em Pernambuco. Espera-se também contribuir com as autoridades de saúde pública no aprimoramento das estratégias atuais de controle da LCA nos níveis estaduais e nacional.

Cutaneous leishmaniasis in northeastern Brazil: a critical appraisal of studies conducted in State of Pernambuco.

American cutaneous leishmaniasis (ACL) is a complex disease with clinical and epidemiological features that may vary from region to region. In fact, at least seven different Leishmania species, including Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) lainsoni, Leishmania (Viannia) naiffi, Leishmania (Viannia) shawi, Leishmania (Viannia) lindenbergi, and Leishmania (Leishmania) amazonensis, have been implicated in the etiology of ACL in Brazil, and numerous phlebotomine sandfly species of the genus Lutzomyia have been regarded as putative or proven vectors. Because ACL is a focal disease, understanding the disease dynamics at the local level is essential for the implementation of more effective control measures. The present paper is a narrative review about the ACL epidemiology in Pernambuco, northeastern Brazil. Furthermore, the need for more effective diagnosis, treatment, control and prevention strategies for the affected populations is highlighted. This paper will provide researchers with a critical appraisal of ACL in Pernambuco. Hopefully, it will also be helpful for public health authorities to improve current control strategies against ACL at the state and country levels.

Phlebotomine sandflies (Diptera: Psychodidae) in São Vicente Férrer, a sympatric area to cutaneous and visceral leishmaniasis in the state of Pernambuco, Brazil.

INTRODUCTION: In the last decades, a considerable geographic expansion of the leishmaniases in all regions of Brazil has been observed. The present study was carried out to identify the composition of the phlebotomine sandfly fauna and verify the seasonal variation of the main species after environmental changes occurred in São Vicente Férrer Municipality, State of Pernambuco, Brazil. METHODS: Captures were carried out during four consecutive nights of each month using Centers for Disease Control and Prevention light traps from September 2009 to September 2010. The correlation between the number of phlebotomine sandflies captured and climatic factors (temperature and rainfall) was evaluated. RESULTS: A total of 13,872 specimens belonging to 20 species were captured, of which, 6,247 (45%) were females, and 7,625 (55%) were males. Lutzomyia migonei was the most abundant species with 9,964 (71.8%) specimens, being predominant in the intradomicile and peridomicile areas with 108 (86.4%) and 9,746 (97%), respectively. In the forest remnants, Lutzomyia complexa 2,395 (65%) and Lutzomyia sordellii 770 (20.8%) predominated. The correlation analysis between the total number of sandflies captured and climatic factors did not show a significant influence on population density. CONCLUSIONS: The high abundance of Lutzomyia migonei and Lutzomyia complexa indicates the possibility of new cases of cutaneous leishmaniasis (CL).

Phlebotomine sandflies (Diptera: Psychodidae) in São Vicente Férrer, a sympatric area to cutaneous and visceral leishmaniasis in the state of Pernambuco, Brazil / Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) em São Vicente Férrer, uma área simpátrica para leishmaniose tegumentar e visceral, no estado de Pernambuco, Brasil

INTRODUCTION: In the last decades, a considerable geographic expansion of the leishmaniases in all regions of Brazil has been observed. The present study was carried out to identify the composition of the phlebotomine sandfly fauna and verify the seasonal variation of the main species after environmental changes occurred in São Vicente Férrer Municipality, State of Pernambuco, Brazil. METHODS: Captures were carried out during four consecutive nights of each month using Centers for Disease Control and Prevention light traps from September 2009 to September 2010. The correlation between the number of phlebotomine sandflies captured and climatic factors (temperature and rainfall) was evaluated. RESULTS: A total of 13,872 specimens belonging to 20 species were captured, of which, 6,247 (45 percent) were females, and 7,625 (55 percent) were males. Lutzomyia migonei was the most abundant species with 9,964 (71.8 percent) specimens, being predominant in the intradomicile and peridomicile areas with 108 (86.4 percent) and 9,746 (97 percent), respectively. In the forest remnants, Lutzomyia complexa 2,395 (65 percent) and Lutzomyia sordellii 770 (20.8 percent) predominated. The correlation analysis between the total number of sandflies captured and climatic factors did not show a significant influence on population density. CONCLUSIONS: The high abundance of Lutzomyia migonei and Lutzomyia complexa indicates the possibility of new cases of cutaneous leishmaniasis (CL).

INTRODUÇÃO: Nas últimas décadas tem se observado uma considerável expansão geográfica das leishmanioses em todas as regiões do Brasil. O presente estudo foi realizado para identificar a fauna de flebotomíneos e verificar a sazonalidade das principais espécies após mudanças ambientais ocorridas no município de São Vicente Férrer, Estado de Pernambuco, Brasil. MÉTODOS: As capturas foram realizadas durante quatro noites consecutivas por mês usando armadilhas luminosas CDC, no período de setembro de 2009 a setembro de 2010. A correlação entre o número de flebotomíneos capturados e fatores climáticos (temperatura e umidade) foi avaliada. RESULTADOS: Foi capturado um total de 13.872 espécimes pertencentes a 20 espécies, sendo 6.247 (45 por cento) fêmeas e 7.625 (55 por cento) machos. Lutzomyia migonei foi a espécie mais abundante com 9.964 (71,8 por cento) espécimes, sendo predominante no intradomicílio 108 (86,4 por cento) e peridomicílio 9.746 (97 por cento). Nos resquícios de mata primária, predominaram Lutzomyia complexa 2.395 (65 por cento) e Lutzomyia sordellii 770 (20,8 por cento). A análise de correlação entre o número total de flebotomíneos capturados e os fatores climáticos não mostrou uma influência significativa na densidade da população. CONCLUSÕES: A elevada abundância de Lutzomyia migonei e Lutzomyia complexa indica a possibilidade de novos casos de leishmaniose cutânea (LC).

Identificação molecular de Leishmania pela PCR em amostras do município de Ilhéus, Zona da Mata da Bahia, Brasil / Molecular identification of Leishmania by the PCR on samples from the municipality of Ilheus, Zona da Mata of Bahia, Brazil

A leishmaniose tegumentar é uma doença endêmica que apresenta distribuição em todo o Brasil. Na Bahia, verifica-se a ocorrência em todas as mesoregiões com maior incidência dos casos nos municípios de Ilhéus. Esse estudo teve como objetivo identificar Leishmania spp circulante na região. Foram coletadas 84 amostras de aspirado de borda de lesão de pacientes suspeitos de leishmaniose tegumentar, e inoculados em hamsters (Mesocricetus auratus). Os animais foram observados durante 3 meses e, após este período, foram eutanasiados e fragmentos do baço foram coletados para a visualização de amastigotas para o isolamento em cultura, extração de DNA e caracterização por reação em cadeia da polimerase (PCR). Duas amostras foram positivas para o alvo de 750 pb que corresponde ao minicírculo do kDNA, específico para o subgênero Viannia. Esses resultados e o fato de a Leishmania (Viannia) braziliensis ser uma espécie mais prevalente em área de Mata Atlântica indicam que a doença está associada a ess espécie do parasito no município de Ilhéus.

Análise de seqüências de minicírculos do kDNA obtidos de amostras clínicas (lesões ativas e cicatrizadas) de pacientes com leishmaniose tegumentar americana em Pernambuco, Brasil / Analysis of sequences of minicircles of kDNA gotten of clinical samples (active and healed injuries) of patients with american cutaneous leishmaniasis in Pernambuco, Brazil

Algumas espécies do gênero Leishmania sp.são agentes causadores das leishmanioses,que representam um grave problema de saúde pública no mundo.Entre estas,a leishmaniose tegumentar americana(LTA)causada por Leishmania (Viannia)braziliensis possui como apresentação clínica lesões cutâneas que cicatrizam espontaneamente ou após tratamento.No presente estudo,abordagens moleculares in vitro e in silico foram utilizadas para analisar o genoma mitocondrial,mais particularmente em 290 minicírculos inteiros do kDNA de Leishmania sp.obtidos de amostras clínicas(lesões ativas e cicatrizadas)de pacientes com LTA enfocando particularidades ainda desconhecidas.Demonstra que os minicírculos seqüenciados e devidamente alinhados apresentam polimorfismos de tamanho variando de 518pb a 797pb e de seqüência,caracterizando grande heterogeneidade de classes,particularmente no grupo portador de lesões ativas.As seqüências de minicírculos a partir de cicatrizes puderam ser agrupadas em“cluster”,indicando um certo grau de homogeneidade,possivelmente devido ao processo de seleção clonal.A análise composicional de todas as seqüências de minicírculos estudadas mostrou percentuais de A+T em cerca de 70por cento.Seqüências palindrômicas foram identificadas e mapeadas em 2 clones mostrando superioridade na combinação de bases formadas por A e T localizada na região variável de minicírculos. Motivos com repetições diretas alternadas formadas por TA,AT,TT e AA perfizeram 55por cento destas seqüências. Cinqüenta e cinco...Em conclusão,as abordagens moleculares empregadas permitiram descrever características moleculares nos minicírculos que parecem ser comuns a essa espécie molecular,e por outro lado,as classes de minicírculos amplificados de cicatrizes apresentam seqüências mais similares,a se julgar pelas análises com alinhamento múltiplo e cladograma,possivelmente devido à predominância de determinados motivos.Seria interessante, no futuro,identificar com clareza quais as regiões...

Evaluation of PCR for diagnosis of American cutaneous leishmaniasis in an area of endemicity in northeastern Brazil.

PCR-based approaches targeting kinetoplast DNA were evaluated for the diagnosis of American cutaneous leishmaniasis (ACL) in regions of endemicity in northeastern Brazil. A total of 119 cutaneous biopsy specimens from patients with ACL and nonleishmaniasis cutaneous lesions were studied. Two PCR-based systems were used; one was specific for the subgenus Viannia, and the other was specific for the genus Leishmania. The PCR specific for the subgenus Viannia had a sensitivity of 95.4%, whereas the genus-specific PCR detected the target DNA in 88.2% of the samples tested. The specificities of the assays, determined with samples from a group with nonleishmaniasis cutaneous lesions, was 100%. The results of the conventional tests indicate that the sensitivities of the PCR-based methods were significantly higher than those of smear examination, histological staining, and isolation by culture (P < 0.05). Antibodies specific for Leishmania braziliensis were detected by indirect immunofluorescence in 82.9% of the patients tested. Parasites were isolated from 40 of 86 patients (46.5%). Sixty-seven percent of dermal scrapings and 66.2% of stained tissue sections were positive by microscopy. Amplified products from the subgenus-specific PCR hybridized with the Leishmania panamensis minicircle, confirming infection consistent with L. braziliensis. The evidence available at present incriminates L. braziliensis as the only causative agent of ACL in the state of Pernambuco in Brazil.

Doenças sexualmente transmissíveis em pacientes infectados com HIV/AIDS no Estado de Pernambuco, Brasil / Sexually transmitted diseases in patients infected with HIV/AIDS in the State of Pernambuco, Brazil

Foram estudados retrospectivamente 399 pacientes diagnosticados como infecçäo por HIV. Os pacientes infectados predominavam na faixa etária de 20 a 40 anos (73,4 por cento), sendo 75 por cento do sexo masculino. A razäo entre pacientes do sexo masculino e feminino näo diferiu quando foram consideradas infecçäo pelo HIV (assintomática) e AIDS. Os casos de infecçäo pelo HIV sem AIDS se concentram no grupo etário de 20-29 anos enquanto que a AIDS predomina na faixa de 30-39 anos. Dentre os pacientes infectados com HIV, apenas 0,8 por cento eram hemofílicos, 3,5 por cento usavam drogas injetáveis e 4,8 por cento foram hemotransfundidos nos últimos 5 anos. 33 por cento eram heterossexuais, 11 por cento bissexuais, 23 por cento homossexuais e 33 por cento näo declararam a inclinaçäo sexual. Sífilis foi a associaçäo mais freqüente (8,8 por cento), seguido de herpes (5,8 por cento) e candidíase genital (4,3 por cento). Nossos resultados sugerem que existe uma associaçäo entre candidíase genital e AIDS, embora isso näo tenha sido observado para as outras DSTs estudadas

Validaçäo de abordagens moleculares para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana em Pernambuco / Validation of molecular for the diagnosis of the leishmaniasis diffuse cutaneous in Pernambuco

O controle da leishmaniose depende da disponibilidade de métodos acurados e sensíveis para detecçäo das espécies de Leishmania. Duas abordagens moleculares foram avaliadas para o diagnóstico de leishmaniose tegumentar americana (LTA) em pacientes provenientes de zonas endêmicas de Pernambuco. Uma delas era gênero específica, enquanto que a outra era específica para o subgênero Viannia. Os limiares de detecçäo de DNA foram determinados e a sensibilidade e especificidade calculadas, sendo subsequentemente comparadas com outros testes diagnósticos mais convencionais. O limiar de detecçäo de DNA da PCR específica para o subgênero Viannia foi de 10 fg de DNA total, enquanto que o limiar de detecçäo para a PCR gênero específica foi de 1 pg de DNA total. Para a definiçäo de caso de LTA adotou-se a presença de critérios clínico-epidemiológicos, associados à positividade em pelo menos um dos seguintes testes: pesquisa direta, exame histopatológico e isolamento por cultura. Dessa forma dos 98 pacientes inicialmente diagnosticados com base puramente clínico-epidemiológica, 87 foram considerados casos de LTA, e utilizados para o cálculo da sensibilidade. Trinta e um pacientes com lesöes cutâneas de outras etiologias foram incluídos como controles para o cálculo da especificidade. A PCR gênero específica foi positiva em 60/67 das biópsias de LTA, resultando em uma sensibilidade de 89,6 por cento, enquanto que a PCR específica para o subgênero Viannia foi positiva em biópsias de 82/87 casos de LTA, resultando em uma sensibilidade de 94,3 por cento. Contudo, essas diferenças näo foram significantes. Esse dado associado a outros, sugere que apenas o subgênero Viannia tem participaçäo como agente etiológico de LTA em Pernambuco. Ambas as PCRs demonstraram 100 por cento de especificidade. O diagnóstico através da pesquisa direta apresentou um percentual de positividade dentre os casos de LTA de 68,2 por cento, o exame histopatológico 89,9 porcento, o isolamento através de cultura 44,0 por cento e a imunofluorescência indireta 81,3 por cento. Visando a utilizaçäo em regiöes endêmicas com poucos recursos foram realizados alguns experimentos preliminares bem sucedidos com PCR/hibridizaçäo com sondas näo radioativas. Em conclusäo, as abordagens moleculares avaliadas mostraram alta sensibilidade e especificidade, permitindo uma delas o diagnóstico ao nível do subgênero Vianna.