Impaired protamination and sperm DNA damage in a Nellore bull with high percentages of morphological sperm defects in comparison to normospermic bulls / Deficiências de protaminação e danos de DNA no sêmen de um touro Nelore com elevada porcentagem de patologias espermáticas em comparação a touros normospérmicos

The routine semen evaluation assessing sperm concentration, motility and morphology, does not identify subtle defects in sperm chromatin architecture. Bulls appear to have stable chromatin, with low levels of DNA fragmentation. However, the nature of fragmentation and its impact on fertility remain unclear and there are no detailed reports characterizing the DNA organization and damage in this species. The intensive genetic selection, the use of artificial insemination and in vitro embryo production associated to the cryopreservation process can contribute to the chromatin damage and highlights the importance of sperm DNA integrity for the success of these technologies. Frozen-thawed semen samples from three ejaculates from a Nellore bull showed high levels of morphological sperm abnormalities (55.8±5.1%), and were selected for complementary tests. Damage of acrosomal (76.9±8.9%) and plasma membranes (75.7±9.3%) as well as sperm DNA strand breaks (13.8±9.5%) and protamination deficiency (3.7±0.6%) were significantly higher compared to the values measured in the semen of five Nellore bulls with normospermia (24.3±3.3%; 24.5±6.1%; 0.6±0.5%; 0.4±0.6% for acrosome, plasma membrane, DNA breaks and protamine deficiency, respectively) (P<0.05). Motility and percentage of spermatozoa with low mitochondrial potential showed no differences between groups. This study shows how routine semen analyses (in this case morphology) may point to the length and complexity of sperm cell damage emphasizing the importance of sperm function testing.(AU)

O exame de rotina de sêmen, o qual avalia a concentração de espermatozoides, a motilidade e a morfologia, pode não identificar defeitos sutis na arquitetura da cromatina de espermatozoides. Os touros parecem ter cromatina estável com baixos níveis de fragmentação do DNA. No entanto, a natureza da fragmentação e o seu impacto sobre a fertilidade ainda não estão claros e não há relatos que caracterizam a organização do DNA e os danos nessa espécie com mais detalhes. A seleção genética intensiva e o uso da inseminação artificial e da produção in vitro de embriões, além do processo de criopreservação, podem contribuir para o dano da cromatina, e sabe-se a importância da integridade do DNA espermático para o sucesso dessas tecnologias. Amostras de sêmen de três ejaculados de um touro Nelore com altos níveis de alterações morfológicas (55,8±5,1%) foram selecionadas para realização de exames complementares. Os danos de acrossoma (76,9±8,9%) e das membranas plasmáticas (75,7±9,3%), bem como quebras de fita de DNA de espermatozoides (13,8±9,5) e deficiência de protamina (3,7±0,6) foram significativamente maiores em comparação aos valores avaliados no sêmen de cinco touros Nelore com normospermia (24,3±3,3%; 24,5±6,1%; 0,6±0,5%; 0,4±0,6% para acrossoma, membrana plasmática, quebras de DNA e deficiência de protamina, respectivamente) (p<0,05). Motilidade e porcentagem de espermatozoides com baixo potencial mitocondrial não diferiram estatisticamente. Essas avaliações mostram que análises de sêmen de rotina (neste caso, morfologia) podem apontar para a extensão e a complexidade dos danos na célula espermática, o que indica que a deficiência de protamina e os danos no DNA podem ocorrer simultaneamente a defeitos morfológicos. Tal ocorrência enfatiza a importância das análises de sêmen clássicas e dos testes complementares.(AU)

Impaired protamination and sperm DNA damage in a Nellore bull with high percentages of morphological sperm defects in comparison to normospermic bulls / Deficiências de protaminação e danos de DNA no sêmen de um touro Nelore com elevada porcentagem de patologias espermáticas em comparação a touros normospérmicos

The routine semen evaluation assessing sperm concentration, motility and morphology, does not identify subtle defects in sperm chromatin architecture. Bulls appear to have stable chromatin, with low levels of DNA fragmentation. However, the nature of fragmentation and its impact on fertility remain unclear and there are no detailed reports characterizing the DNA organization and damage in this species. The intensive genetic selection, the use of artificial insemination and in vitro embryo production associated to the cryopreservation process can contribute to the chromatin damage and highlights the importance of sperm DNA integrity for the success of these technologies. Frozen-thawed semen samples from three ejaculates from a Nellore bull showed high levels of morphological sperm abnormalities (55.8±5.1%), and were selected for complementary tests. Damage of acrosomal (76.9±8.9%) and plasma membranes (75.7±9.3%) as well as sperm DNA strand breaks (13.8±9.5%) and protamination deficiency (3.7±0.6%) were significantly higher compared to the values measured in the semen of five Nellore bulls with normospermia (24.3±3.3%; 24.5±6.1%; 0.6±0.5%; 0.4±0.6% for acrosome, plasma membrane, DNA breaks and protamine deficiency, respectively) (P<0.05). Motility and percentage of spermatozoa with low mitochondrial potential showed no differences between groups. This study shows how routine semen analyses (in this case morphology) may point to the length and complexity of sperm cell damage emphasizing the importance of sperm function testing.(AU)

O exame de rotina de sêmen, o qual avalia a concentração de espermatozoides, a motilidade e a morfologia, pode não identificar defeitos sutis na arquitetura da cromatina de espermatozoides. Os touros parecem ter cromatina estável com baixos níveis de fragmentação do DNA. No entanto, a natureza da fragmentação e o seu impacto sobre a fertilidade ainda não estão claros e não há relatos que caracterizam a organização do DNA e os danos nessa espécie com mais detalhes. A seleção genética intensiva e o uso da inseminação artificial e da produção in vitro de embriões, além do processo de criopreservação, podem contribuir para o dano da cromatina, e sabe-se a importância da integridade do DNA espermático para o sucesso dessas tecnologias. Amostras de sêmen de três ejaculados de um touro Nelore com altos níveis de alterações morfológicas (55,8±5,1%) foram selecionadas para realização de exames complementares. Os danos de acrossoma (76,9±8,9%) e das membranas plasmáticas (75,7±9,3%), bem como quebras de fita de DNA de espermatozoides (13,8±9,5) e deficiência de protamina (3,7±0,6) foram significativamente maiores em comparação aos valores avaliados no sêmen de cinco touros Nelore com normospermia (24,3±3,3%; 24,5±6,1%; 0,6±0,5%; 0,4±0,6% para acrossoma, membrana plasmática, quebras de DNA e deficiência de protamina, respectivamente) (p<0,05). Motilidade e porcentagem de espermatozoides com baixo potencial mitocondrial não diferiram estatisticamente. Essas avaliações mostram que análises de sêmen de rotina (neste caso, morfologia) podem apontar para a extensão e a complexidade dos danos na célula espermática, o que indica que a deficiência de protamina e os danos no DNA podem ocorrer simultaneamente a defeitos morfológicos. Tal ocorrência enfatiza a importância das análises de sêmen clássicas e dos testes complementares.(AU)

Identificação de proteínas do plasma seminal de touros da raça Gir / Identification of seminal plasma proteins in Gir bulls

Estudou-se o perfil de proteínas totais (PLB) e proteínas ligadoras de heparina (PLH) do plasma seminal de touros da raça Gir e suas associações com parâmetros andrológicos e fertilidade in vitro. A concentração da PLB variou de 4,1 a 167,9 mg/mL e da PLH entre 0,02096 e 0,19025 (%). O perfil cromatográfico apresentou nove picos de afinidade para PLB e cinco picos para PLH. As associações significativas foram: PLB x taxa de blastocistos, PLH do pico 1 x taxa de blastocistos, PLH do pico 5 x taxa de clivagem e blastocistos. Nenhuma proteína estudada apresentou associação com parâmetros andrológicos. (AU)

It was studied the seminal plasma total protein (TP) and heparin binding protein (PLH) profiles of Gyr bulls and their associations with andrological parameters and in vitro fertility. Total protein concentration varied between 4,1 a 167,9 mg/ml and heparin binding protein 0,02096 to 0,19025 (%). Chromatographic profile of TP presented nine peaks. PLH presented five affinity peaks. Associations were for: total proteins x blastocysts rate, peak 1 heparin binding proteins x blastocysts rate, peak 5 heparin binding protein x cleavage rate and blastocysts rate. However no protein showed association with andrological parameters. (AU)

Identificação de proteínas do plasma seminal de touros da raça Gir / Identification of seminal plasma proteins in Gir bulls

Estudou-se o perfil de proteínas totais (PLB) e proteínas ligadoras de heparina (PLH) do plasma seminal de touros da raça Gir e suas associações com parâmetros andrológicos e fertilidade in vitro. A concentração da PLB variou de 4,1 a 167,9 mg/mL e da PLH entre 0,02096 e 0,19025 (%). O perfil cromatográfico apresentou nove picos de afinidade para PLB e cinco picos para PLH. As associações significativas foram: PLB x taxa de blastocistos, PLH do pico 1 x taxa de blastocistos, PLH do pico 5 x taxa de clivagem e blastocistos. Nenhuma proteína estudada apresentou associação com parâmetros andrológicos.

It was studied the seminal plasma total protein (TP) and heparin binding protein (PLH) profiles of Gyr bulls and their associations with andrological parameters and in vitro fertility. Total protein concentration varied between 4,1 a 167,9 mg/ml and heparin binding protein 0,02096 to 0,19025 (%). Chromatographic profile of TP presented nine peaks. PLH presented five affinity peaks. Associations were for: total proteins x blastocysts rate, peak 1 heparin binding proteins x blastocysts rate, peak 5 heparin binding protein x cleavage rate and blastocysts rate. However no protein showed association with andrological parameters.

Efeito da utilização de diferentes diluidores para a produção in vitro de embriões bovinos / Effect of different bovine semen extenders on in vitro development of bovine embryos

Objetivou-se avaliar as características morfológica e funcional do sêmen bovino congelado comparando-se a eficácia de dois diferentes diluidores. O ejaculado de quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma submetida ao diluidor Tris e gema de ovo (A) e outra ao diluidor à base de lecitina de soja (Andromed®) (B). No experimento I, cinco palhetas dos diluidores A e B de cada touro foram descongeladas e avaliadas quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia espermática e teste de termor-resistência lento. Foram feitas, ainda, avaliação da integridade de membranas, por meio da associação das sondas iodeto de propídio, isotiocionato de fluoresceína - Pisum sativum e carbocianina catiônica lipofílica, e avaliação funcional da membrana plasmática com teste hiposmótico. A avaliação da integridade da cromatina foi realizada pelo método de coloração com laranja de acridina. No experimento II, o sêmen com os diferentes diluidores foi utilizado na fecundação in vitro, sendo observadas taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário in vitro. Em relação aos resultados obtidos, apenas a porcentagem de espermatozoides no sêmen congelado foi discretamente maior com o diluidor A, concluindo-se que o diluidor composto por lecitina de soja pode substituir o composto por Tris e gema de ovo, respeitando-se as variações individuais de cada touro utilizado no presente experimento.

The goal of this study was to evaluate the protective effect of egg yolk compared with a soybean lecithin-based extender on morphologic and functional characteristics of frozen bovine semen. The ejaculate of four bulls was divided into two equal parts, one diluted with egg-yolk-Tris extender (A) and the other with a soy-lecithin based extender (Andromed®) (B). In experiment I, five straws of extender A and B from each bull were thawed and assessed regarding motility (subjective and computerized analysis), vigor, concentration, sperm morphology and slow thermoresistance (STR), evaluation of membrane integrity through association of propidium iodite probes (PI), fluorescein isotiocianate - Pisum sativum (FITC-PSA) and lipophilic cationic carbocyanine (JC-1) and functional evaluation of the plasmatic membrane through Hyposmotic Swelling Test (HOST). An evaluation of chromatin integrity was performed with the acridine orange staining procedure. In experiment II, the frozen semen with different extenders was used for in vitro fertilization (IVF), analyzing cleavage rates and in vitro embryo development. No statistical difference between extenders was identified, suggesting that the soy lecithin extender may substitute egg-yolk-Tris extender, considering the individual variations of each bull used in this experiment.

Efeito da utilização de diferentes diluidores para a produção in vitro de embriões bovinos / Effect of different bovine semen extenders on in vitro development of bovine embryos

Objetivou-se avaliar as características morfológica e funcional do sêmen bovino congelado comparando-se a eficácia de dois diferentes diluidores. O ejaculado de quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma submetida ao diluidor Tris e gema de ovo (A) e outra ao diluidor à base de lecitina de soja (Andromed®) (B). No experimento I, cinco palhetas dos diluidores A e B de cada touro foram descongeladas e avaliadas quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia espermática e teste de termor-resistência lento. Foram feitas, ainda, avaliação da integridade de membranas, por meio da associação das sondas iodeto de propídio, isotiocionato de fluoresceína - Pisum sativum e carbocianina catiônica lipofílica, e avaliação funcional da membrana plasmática com teste hiposmótico. A avaliação da integridade da cromatina foi realizada pelo método de coloração com laranja de acridina. No experimento II, o sêmen com os diferentes diluidores foi utilizado na fecundação in vitro, sendo observadas taxas de clivagem e desenvolvimento embrionário in vitro. Em relação aos resultados obtidos, apenas a porcentagem de espermatozoides no sêmen congelado foi discretamente maior com o diluidor A, concluindo-se que o diluidor composto por lecitina de soja pode substituir o composto por Tris e gema de ovo, respeitando-se as variações individuais de cada touro utilizado no presente experimento.(AU)

The goal of this study was to evaluate the protective effect of egg yolk compared with a soybean lecithin-based extender on morphologic and functional characteristics of frozen bovine semen. The ejaculate of four bulls was divided into two equal parts, one diluted with egg-yolk-Tris extender (A) and the other with a soy-lecithin based extender (Andromed®) (B). In experiment I, five straws of extender A and B from each bull were thawed and assessed regarding motility (subjective and computerized analysis), vigor, concentration, sperm morphology and slow thermoresistance (STR), evaluation of membrane integrity through association of propidium iodite probes (PI), fluorescein isotiocianate - Pisum sativum (FITC-PSA) and lipophilic cationic carbocyanine (JC-1) and functional evaluation of the plasmatic membrane through Hyposmotic Swelling Test (HOST). An evaluation of chromatin integrity was performed with the acridine orange staining procedure. In experiment II, the frozen semen with different extenders was used for in vitro fertilization (IVF), analyzing cleavage rates and in vitro embryo development. No statistical difference between extenders was identified, suggesting that the soy lecithin extender may substitute egg-yolk-Tris extender, considering the individual variations of each bull used in this experiment.(AU)

Uso de estreptomicina na eliminação da leptospirúria em touros (bos taurus indicus) naturalmente infectados pelo sorovar hardjo / Use of streptomycin in the end of leptospiruria in serologically reactive bulls (bos taurus indicus)

RESUMO O objetivo desse trabalho foi verificar a ação de marcas diferentes de estreptomicinas polivalentes para o tratamento da leptospirose bovina em dose única (25 mg de estreptomicina por kg de peso corpóreo). O trabalho foi realizado com 14 touros adultos sorologicamente reagentes para Leptospira interrogans sorovar Hardjo, com título mínimo de 800 e com cultivo positivo. Os animais foram separados em 2 grupos de acordo com a marca da estreptomicina utilizada no tratamento, grupo 1: estreptomicina A e grupo 2: estreptomicina B. Os bovinos controles não receberam nenhum tratamento. Foram obtidas amostras de sangue e urina dos animais tratados e controles nos dias -1, 0, 1, 2, 3, 5, 10, 15 e 25; considerando-se o dia do tratamento como dia 0. Na urina dos bovinos tratados e controle foi realizada a reação em cadeia da polimerase (PCR) e isolamento com inoculação em hamsters. Observou-se que a estreptomicina da marca A, em dose única de 25 mg/kg de peso corpóreo, conseguiu eliminar a leptospirúria no grupo de touros após 24h do tratamento. Já no grupo de touros tratados com a estreptomicina da marca B, foi constatado a leptospirúria entre 48h e 72h, após o tratamento. Em ambos os grupos tratados, a resposta sorológica apresentou uma variação da queda dos níveis dos títulos de anticorpos aglutinantes, sendo que embora a estreptomicina A tenha aparentemente apresentado um melhor desempenho quando comparada com as médias geométricas dos títulos do grupo tratado com a estreptomicina B as médias não diferiram entre si pelo Teste de Tukey (P > 0,05). Nos bovinos tratados a leptospirúria foi intermitente e a média geométrica dos títulos foi menor que a média geométrica dos títulos dos bovinos controles. A diferença do efeito da ação das diferentes marcas de estreptomicina está possivelmente na qualidade da matéria prima produzida pelos laboratórios.

ABSTRACT The objective of this work was evaluated different marks of streptomycin for the treatment of bovine leptospirosis, in an only one dose of 25 mg for kg of corporeal weight. Thirty serologically reactive bulls for Leptospira interrogans serovar Hardjo were utilized. The bulls had a minimum antibody titer of 800 and were positive in the isolation from urine samples. The animals had been separated in 2 groups according with the streptomycin mark used in the treatment, group 1: streptomycin A and group 2: streptomycin B. The bovine controls had received any application from streptomycin. Samples of blood and urine of treated and controls bulls were collected in days -1, 0, 1, 2, 3, 5, 10, 15 and 25; considering the day of the treatment as day 0. A research for the detection of leptospira genetic material was realized in the urine of all bulls by PCR. It was observed that the streptomycin A ended leptospiruria in 24h after of the treatment. In the group of bulls treated with the streptomycin B, the end of leptospiruria was evidenced in 48h and 72h, after the treatment. In both treated groups, the serological reply presented a variation in the fall of antibodies titers, and streptomycin A was better in comparative performance with geométric means of the antibodies titers of the group that received streptomycin B, although by the Tukey Test the difference was no significant (P > 0.05). In the bovine controls the leptospiruria was intermittent and the average of the antibody titers of the treated bovines was lower than the average of the bovine controls, during all the experiments. The difference in the effect of different brands of streptomycin is possibly due to the quality of the substances produced in the laboratories.

Effect of age and genetic group on characteristics of the scrotum, testes and testicular vascular cones, and on sperm production and semen quality in AI bulls in Brazil.

The objectives were to determine the effects of age and genetic group on characteristics of the scrotum, testes and testicular vascular cones (TVC), and on sperm production and semen quality in 107 Bos indicus, B. taurus and cross-bred bulls at three artificial insemination (AI) centers in Brazil. In addition, predictors of sperm production and semen quality were identified. In general, scrotal circumference (SC), scrotal shape score, scrotal neck perimeter, and testicular size (length, width and volume) increased (P < 0.05) with age. Although there were no significant differences among genetic groups for SC or testicular size, B. indicus bulls had the least pendulous scrotal shape, the shortest scrotal neck length, and the greatest scrotal neck perimeter (P < 0.05). Fat covering the TVC was thinner (P < 0.05) in bulls < or = 36 months of age and in B. taurus bulls than in older bulls and B. indicus bulls, respectively. Age and genetic group did not affect testicular ultrasonic echotexture. B. indicus bulls tended (P < 0.1) to have the lowest average scrotal surface temperature (SST). In general, ejaculate volume, total number of spermatozoa and number of viable spermatozoa increased (P < 0.05) with age. However, there was no significant effect of age on sperm concentration, motility, major and total defects. The proportion of spermatozoa with minor defects was highest (P < 0.05) in bulls 37-60 months of age. B. indicus bulls had higher (P < 0.01) sperm concentration, total number of spermatozoa and number of viable spermatozoa than B. taurus bulls, with intermediate values for cross-bred bulls. Increased sperm production was associated with increased testicular volume, SC, TVC fat cover, and SST top-to-bottom gradient. Decreased semen quality was associated with increased SC and bottom SST, and decreased scrotal shape, scrotal neck perimeter and vascular cone diameter. In summary, age and genetic group affected the characteristics of the scrotum, testes, and TVC, sperm production and semen quality. In addition, characteristics of the scrotum, testes and TVC were associated with sperm production and semen quality in bulls and could be assessed for breeding soundness evaluation.

Effects of environmental factors, age and genotype on sperm production and semen quality in Bos indicus and Bos taurus AI bulls in Brazil.

The effects of ambient temperature and humidity, month, age and genotype on sperm production and semen quality in AI bulls in Brazil were evaluated. Data from two consecutive years were analyzed separately. Seven Bos indicus and 11 Bos taurus bulls from one artificial insemination (AI) center were evaluated in Year 1 and 24 B. indicus and 16 B. taurus bulls from three AI centers were evaluated in Year 2. Ambient temperature and humidity did not significantly affect sperm production and semen quality, probably because there was little variation in these variables. Month accounted for less than 2% of the variation in sperm production and semen quality. Increased bull age was associated with decreased sperm motility (P<0.10) and increased minor sperm defects (P<0.001) in Year 1. B. indicus bulls had greater (P<0.005) sperm concentration than B. taurus bulls in both years (1.7 x 10(9)/ml versus 1.2 x 10(9)/ml in Year 1 and 1.6 x 10(9)/ml versus 1.2 x 10(9)/ml in Year 2, respectively). Ejaculate volume was not significantly affected by genotype in Year 1 (6.6 ml versus 6.9 ml in B. indicus and B. taurus bulls, respectively), but B. indicus bulls had greater (P<0.05) total (11.4x10(9) versus 8.2 x 10(9)) and viable (6.7 x 10(9) versus 4.9 x 10(9)) numbers of spermatozoa in the ejaculate than B. taurus bulls. In Year 2, B. taurus bulls had greater (P<0.05) ejaculate volume than B. indicus bulls (8.2ml versus 6.7 ml, respectively) and total and viable number of spermatozoa in the ejaculate were not significantly different between genotypes (10.3 x 10(9) versus 9.1 x 10(9) and 6.1 x 10(9) versus 5.4 x 10(9) in B. indicus and B. taurus bulls, respectively). Sperm motility was not significantly affected by genotype (mean, 59%). In Year 1, B. indicus bulls tended (P<0.10) to have more major sperm defects and had more (P<0.05) total sperm defects than B. taurus bulls (11.8% versus 8.7% and 13.6% versus 10.0%, respectively). In Year 2, B. indicus bulls tended (P<0.10) to have more total sperm defects than B. taurus bulls (16.2% versus 13.3%, respectively). In conclusion, neither ambient temperature and humidity nor month (season) significantly affected sperm production and semen quality. B. indicus bulls had significantly greater sperm concentration and B. taurus bulls had significantly fewer morphologically defective spermatozoa.

Perfil em SDS-PAGE das proteínas do plasma seminal e sua relação com a congelabilidade do sêmen de touros doadores da raça gir / SDS-PAGE seminal plasma proteins pattern and its correlation with gir breed semen freezability

Foram utilizados dez animais doadores de sêmen em nível de Central de Inseminação Artificial, da raça Gir, divididos em dois grupos, de acordo com o grau de congelabilidade do sêmen de cada animal. Os animais com sêmen de alta congelabilidade foram aqueles cuja porcentagem de ejaculados viáveis pós-descongelação foi superior a 80 por cento. O grupo de baixa congelabilidade tinha animais com porcentagem menor que 50 por cento de ejaculados viáveis pós-descongelação. Os critérios de avaliação da viabilidade do sêmen e seleção dos animais foram definidos pelo controle de qualidade do Departamento de Produção da Central de Inseminação Artificial. Foram feitas quatro coletas semanais consecutivas, sendo que obtiveram-se as amostras de plasma seminal por centrifugação a 1.500 g por 15 a 20 minutos a 4ºC, momentos após a coleta do sêmen em vagina artificial. O plasma seminal foi dialisado em membrana de celulose, em tampão Tris-Glicina pH-7,4 por 24 horas a 4ºC, em agitação lenta e constante. As amostras foram padronizadas em 1,0 mg/ml de proteína total, por diluição em tampão Tris-HCl 62mM pH-6,2 mais 20 por cento de glicerol e 4 por cento de SDS. Através de eletroforese do tipo SDS-PAGE, foram feitas as corridas em gel a 13 por cento. A corrida foi feita com a constante de 25 mA, por um período de 5 horas. A coloração do gel foi feita por Coomassie Brilliant Blue. Pelos resultados obtidos, verificou-se que existe uma banda no grupo de alta congelabilidade, cujo fragmento polipeptídico desta proteína tem Mr (mobilidade relativa) 20,3 e PM (peso molecular) aproximado de 61.800 Da. Esta banda nao foi detectada nas amostras do grupo de baixa congelabilidade, o que sugere ser um possível marcador bioquímico quanto ao potencial de criopreservação do sêmen de bovinos.(AU)

Perfil em SDS-PAGE das proteínas do plasma seminal e sua relaçäo com a congelabilidade do sêmen de touros doadores da raça gir / SDS-PAGE seminal plasma proteins pattern and its correlation with gir breed semen freezability

Foram utilizados dez animais doadores de sêmen em nível de Central de Inseminaçäo Artificial, da raça Gir, divididos em dois grupos, de acordo com o grau de congelabilidade do sêmen de cada animal. Os animais com sêmen de alta congelabilidade foram aqueles cuja porcentagem de ejaculados viáveis pós-descongelaçäo foi superior a 80 por cento. O grupo de baixa congelabilidade tinha animais com porcentagem menor que 50 por cento de ejaculados viáveis pós-descongelaçäo. Os critérios de avaliaçäo da viabilidade do sêmen e seleçäo dos animais foram definidos pelo controle de qualidade do Departamento de Produçäo da Central de Inseminaçäo Artificial. Foram feitas quatro coletas semanais consecutivas, sendo que obtiveram-se as amostras de plasma seminal por centrifugaçäo a 1.500 g por 15 a 20 minutos a 4ºC, momentos após a coleta do sêmen em vagina artificial. O plasma seminal foi dialisado em membrana de celulose, em tampäo Tris-Glicina pH-7,4 por 24 horas a 4ºC, em agitaçäo lenta e constante. As amostras foram padronizadas em 1,0 mg/ml de proteína total, por diluiçäo em tampäo Tris-HCl 62mM pH-6,2 mais 20 por cento de glicerol e 4 por cento de SDS. Através de eletroforese do tipo SDS-PAGE, foram feitas as corridas em gel a 13 por cento. A corrida foi feita com a constante de 25 mA, por um período de 5 horas. A coloraçäo do gel foi feita por Coomassie Brilliant Blue. Pelos resultados obtidos, verificou-se que existe uma banda no grupo de alta congelabilidade, cujo fragmento polipeptídico desta proteína tem Mr (mobilidade relativa) 20,3 e PM (peso molecular) aproximado de 61.800 Da. Esta banda nao foi detectada nas amostras do grupo de baixa congelabilidade, o que sugere ser um possível marcador bioquímico quanto ao potencial de criopreservaçäo do sêmen de bovinos

Polimorfismo da transferrina e albumina e as associaçöes com precocidade sexual em bovinos da raça Nelore doadores de sêmen / Transferrin and albumin polimorphism and its correlation with sexual maturity in bulls

O presente estudo utilizou 16 animais Bos taurus indicus da raça Nelore doadores de sêmen. Estes animais foram divididos em grupos de acordo com a idade em que o sêmen congelou pela primeira vez. O grupo I, considerado precoce, apresentou animais com sêmen passível de congelaçäo com idade inferior a 20 meses. O grupo II, composto por animais que tiveram o sêmen congelado com idade entre 21 e 26 meses. E o grupo III, tido como tardio, composto por animais com sêmen congelável com idade superior a 27 meses. Para análise dos padröes eletroforéticos da transferrina e albumina, amostras de sangue foram colhidas em tubos heparinizados e submetidos a centrifugaçäo de 2.500 G por 15 minutos para separaçäo do plasma sangüíneo. As amostras de plasma sangüíneo foram processadas para que a corrida eletroforética em gel de poliacrilamida pudesse ser realizada. Para a coloraçäo do gel, usou-se Coomasie Brilliant Blue. Após análise dos padröes eletroforéticos da transferrina e albumina, observou-se que näo houve relaçäo detectável entre os fenótipos da albumina e precocidade sexual de touros doadores. Entretanto, em relaçäo à transferrina, foi possível sugerir uma associaçäo entre o alelo Tf elevado a D com touros portadores de sêmen congelável precocemente ou medianamente em termos de idade à congelaçäo

[Percutaneous valvuloplasty in congenital aortic valve stenosis]. / Valvuloplastia percutânea em estenose valvular aórtica congênita.

PURPOSE: To show the initial experience of Institute of Cardiology of Rio Grande do Sul in the treatment of congenital valvular aortic stenosis with percutaneous balloon aortic valvuloplasty. METHODS: Twenty four patients were submitted to the procedure, 14 males and 10 females. The mean age 7 years (4 days-17 years). Four patients were aged below 30 days and three patients had previous surgical valvuloplasty. The percutaneous balloon aortic valvuloplasty were made the retrograde approach in all patients. RESULTS: The peak systolic pressure gradient was reduced from 65.96 +/- 22.68 to 27.08 +/- 18.74 mmHg. The procedure resulted in aortic regurgitation in seven patients and worsened aortic regurgitation in two patients. One patient had cardiac arrest that was reverted by cardiopulmonary resuscitation, this patient had hospital discharge without sequel. Five patients had acute femoral artery thrombosis, and hemorrhage in the site of puncture happened in one patient. CONCLUSION: The percutaneous balloon aortic valvuloplasty results in effective reduction of the peak systolic pressure gradient, it is a save and effective therapy in patients with congenital valvular aortic stenosis. Further evaluation of the long term results are necessary for definitive conclusions.

[Left coronary vessel anomaly and myocardial infarction]. / Anomalia da coronária esquerda e infarto do miocárdio.

Anomalous origin of the left main coronary artery from the right anterior aortic sinus is a rare condition (0.02 to 0.07%) and its clinical significance is sometimes controversial. The authors present the case of a 44-year-old female with this anomaly and septal course with clinical, electrocardiographic, scintigraphic and cineangiographic evidences of myocardial infarction without coronary lesions. Literature is reviewed regarding diagnosis, clinical significance, pathophysiology and management. It is probably the first evidence of the potential danger of this anomaly with septal course.

[Left main coronary artery angioplasty with circulatory support]. / Angioplastia do tronco da coronária esquerda com suporte circulatório.

A 60-year-old female with unstable angina was submitted to coronary arteriography. A 90% obstruction of the left main coronary artery ostium was detected, and the patient developed ventricular fibrillation. Circulatory support was instituted with cardiopulmonary bypass. Percutaneous transluminal coronary angioplasty was then successfully carried on. Ventricular fibrillation could be controlled and the patient was submitted to coronary artery bypass graft surgery 14 days later.