Producao e controle de qualidade do anticorpo monoclonal anti-CD3 para uso terapeutico / Production and quality control of the monoclonal antibody anti-CD3 for terapeutic use

Nos ultimos anos, tem sido cada vez maior o interesse por proteinas, peptideos e outras substancias de uso medicinal derivadas das tecnologias do ADN recombinante e dos hibridomas. No presente trabalho sao descritos tres processos de producao de anticorpo monoclonal (AcM) anti-CD3 para uso na reversao de rejeicao de transplante de orgaos, em biorreator do tipo airlift adaptado para funcionar como leito empacotado. Para isso, a dorna de 3L foi preenchida com cilindros de vidro, criando uma area de 10.000 centimetros cubicos para a deposicao das celulas. Para os dois primeiros cultivos de 30(I) e 21 dias (II) foi utilizado meio de cultura suplementado com soro fetal bovino (FCS). O terceiro cultivo foi dividido em duas etapas. Na primeira etapa, que durou 36 dias (III-1) foi utilizado meio livre de soro e na segunda etapa com duracao de 53 dias(III-2), meio suplementado com soro de potro. A concentracao dos sobrenadantes foi feita por ultrafiltracao tangencial ou cromatografia de troca-ionica seguida de purificacao por cromatografia de afinidade em coluna de proteina A-Sepharose, no caso dos processos em que o meio de cultura foi suplementado por soro. Os rendimentos de AcM total foram de 3,15g, 2,10g, 5,30g e 23,2g para os Processos I, II, III-1 e III-2, respectivamente. Os produtos obtidos cumpriram as exigencias para os testes preconizados para soros de origem animal, bem como para AcMs de origem murina para uso clinico, exceto no que refere ao teor de ADN residual/dose. O biorreator airlift configurado como leito empacotado mostrou ser uma boa alternativa para o cultivo de hibridomas de longa duracao, tendo sido alcancada alta densidade celular com a inclusao dos cilindros de vidro. O meio livre de soro foi a melhor opcao quando comparado ao meio suplementado com FCS ou soro de potro, por permitir a purificacao de sobrenadantes em uma unica etapa de cromatografia de troca-ionica, alem de evitar a eventual introducao de agentes adventicios de origem animal

Multiparametric analyses of hybridoma growth on glass cylinders in a packed-bed bioreactor system with internal aeration. Serum-supplemented and serum-free media comparison for MAb production

Monoclonal antibodies are one of the most important products of biotechnology and laboratories and companies all over the world are pursuing their large-scale production. Herein we report a protocol for hybridoma cell cultivation over small glass cylinders inside a 3 liter bioreactor vessel which leads to the production and purification - in order of grams - of one MAb intended for human therapeutic use. This protocol proved to be simple,reproducible and cost effective. Three trials are reported: the first two using conventionally serum-supplementedmedium culture and producing 3.15 and 2.1 g of purified MAb in 30 and 21 days respectively, and the third oneusing serum-free medium culture and producing 6 g of purified MAb in 36 days. We have ascertained the stability of the hybridoma by its cloning directly in serum-free medium. The downstream processing of the serum-free trial wasdone in a single step, concentrating large volumes of supernatant while simultaneously purifying the antibody.

Estabelecimento da concentracao antimicrobiana eficaz de tiomersal em toxoide tetanico / Determination of effective antimicrobial concentration of thimerosal in tetanus toxoid

Amostras de taxoide tetanico, contendo quatro concentracoes de tiomersal (0,005; 0,010; 0,015 e 0,020%) dentro dos limites recomendados oficialmente,foram submetidos ao teste de eficacia antimicrobiana do conservante. Com relacao as exigencias da Farmacopeia Americana XXII, apenas Staphylococcus aureus se mostrou resistente as quatro concentracoes, enquanto que para Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans e Aspergillus niger o sistema conservador atendeu as exigencias oficiais, mesmo na menor concentracao. O teor de tiomersal em toxoide tetanico podera ser de 0,005%

Avaliacao da eficacia antimicrobiana de tiomersal e fenol em alguns produtos imunobiologicos / Antimicrobial effectiveness of thimerosal and phenol in some biological products

A eficacia antimicrobiana dos conservantes agregados aos produtos acondicionados na forma de dose multipla deve ser avaliada. No caso dos produtos imunobiologicos o conservante tem a funcao de manter a esterilidade durante o processo produtivo pelo fato de nao ser passivel de esterilizacao em sua unidade final. Alem disso ha necessidade de reesterilizacao quimica do contaminante eventualmente introduzido no frasco-ampola por ocasiao da retirada sucessiva das doses. Neste trabalho foram avaliados 4 produtos - Toxoide Tetanico e Vacina Triplice contendo tiomersal, e Vacina Contra a Febre Tifoide e Soro Antitetanico contendo fenol - atraves da prova de desafio mediante inoculacao de 4 microorganismos padroes. De acordo com os criterios de interpretacao adotados pela Farmacopeia Americana 21ª edicao (USP XXI) e Federacao Farmaceutica Internacional (FIP), os produtos no geral atenderam as exigencias, com excecao de alguns itens referentes a reducao da carga viavel de bacterias em tempos determinados, embora tenha sido constatada a esterilizacao do inoculo dos 4 germes entre 14 e 70 dias