An rK28-Based Immunoenzymatic Assay for the Diagnosis of Canine Visceral Leishmaniasis in Latin America.

Direct observation of Leishmania parasites in tissue aspirates has shown low sensitivity for the detection of canine visceral leishmaniasis (VL). Therefore in the last quarter century immunoenzymatic tests have been developed to improve diagnosis. The purpose of this study was to develop a fast recombinant K28 antigen, naked-eye qualitative enzyme-linked immunosorbent assay (VL Ql-ELISA) and a quantitative version (VL Qt-ELISA), and to display it in a kit format, whose cutoff value (0.156) was selected as the most adequate one to differentiate reactive from nonreactive samples. Considering 167 cases and 300 controls, sensitivity was 91% for both assays and specificity was 100% and 98.7% in Ql-ELISA and Qt-ELISA, respectively. Positive predictive values were 100% and 97.4% for Ql-ELISA and Qt-ELISA, respectively, and negative predictive values were 95.2% for both ELISAs. Reagent stability, reliability studies, including periodic repetitions and retest of samples, cutoff selection, and comparison of rK28 ELISAs with rK39 immunochromatographic test, were the international criteria that supported the quality in both kits. The performance of both ELISA kits in this work confirmed their validity and emphasized their usefulness for low-to-medium complexity laboratories.

Leishmaniasis visceral: contribución a su control mediante el fortalecimiento del diagnóstico del reservorio canino en Posadas, Misiones, Argentina / Visceral leishmaniasis: control contribution by strengthening the diagnosis of dog reservoir in the city of Posadas, Misiones, Argentina

INTRODUCCION: La leishmaniasis visceral (LV) es una enfermedad emergente en Argentina. En 2006 se describió el primer caso autóctono en Posadas (Misiones), ciudad que se convirtió en epicentro de la LV.OBJETIVO: Determinar la prevalencia de la LV canica (LVC) y fortalecer su diagnóstico en Posadas.METODOS: Con un criterio entomológico, la ciudad de Posadas se dividió en islas de alta densidad (IAD) e islas de baja densidad (IBD) de flebótomos. Se seleccionó, de forma arbitraria y mediante imágenes satelitales, la manzana situada más al norte y más al sur de cada IAD e IBD. Se realizó un diseño observacional prospectivo, y se estudió a todos los perros de las manzanas seleccionadas. Se consideró un N inicial de 400 animales para detectar una diferencia de al menos 7% con una potencia de 0,90 y un nivel de 0,05 respecto de la prevalencia global supuesta del 20%. Se tomaron muestras de sangre, punción de ganglios linfáticos y raspado de piel. El estudio incluyó además un test serológico rápido (rK39 canino) y frotis de las muestras para búsqueda parasitológica, que se procesaron y evaluaron en el Instituto Municipal de Salud Animal de Posadas y en el Instituto Nacional de Parasitología Fatala Chabén.RESULTADOS: De los 182 animales evaluados, 33 fueron positivos para LVC, con una prevalencia global del 18,1%. En IAD la prevalencia fue 22% y en IBD, 13,4%. Los estudios parasitológicos fueron positivos en el 10% de los caninos en IAD y 1,2% en IBD. La LVC fue asintomática u oligosintomática, con una presentación más frecuente en IAD. La rK39 tuvo una sensibilidad del 90,3% y una especificidad del 98,9%.CONCLUSIONES: El análisis serológico con antígeno rK39 fue siempre más sensible que la búsqueda parasitológica para el diagnóstico. La LVC parece tener menor prevalencia en relación con estudios previos, quizás debido a diferentes medidas de control realizadas en el Municipio de Posadas.

INTRODUCCION: Visceral leishmanisis (VL) is an emerging disease in Argentina. The first autochthonous case was described in 2006 in a chld from Posadas (Misiones), the city which turned out to be the focus of VL.OBJECTIVE: To determine the prevalence of canine VL (CVL) and improve its diagnosis in Posadas.METHODS: According to entomological criteria, Posadas was divided in high density islands (HDI) and low density islands (LDI) of sandfly. Randomly and with satellite images, the northernmost and southernmost blocks of each HDI and LDI were selected. A prospective, experimental design was performed, studying all the dogs in the selected blocks. There was an initial sample of 400 animals to detect a difference of at least 7%, with a power of 0.90 and a level of 0.05, compared to the supposed prevalence of 20%. Blood samples were taken, with puncture of lymph nodes and skin scraping. The study also included a (canine rK39) rapid test for serological assessment adn sample smears for parasitological search. Samples were processed and evaluated in the Posadas institute of animal health (I.MU.S.A) and the Fatala Chabén National Institute of Parasitology.RESULTS: CVL was assessed in 33/182 animals with an overall prevalence of 18.1%. In HDI, the prevalence was 22%; in LDI, it was 13.4%. Parasitological studies were positive in 10% (HDI) and 1.2% (LDI). The CVL had a nonspecific clinical presentation; canines were asimptomatic or oligosymptomatic, with a higher trend in HDI. The rK39 had a sensitivity of 90.3% and a specificity of 98.9%.CONCLUSIONS: The antigen rK39 was always more sensitive than the search for parasites for the diagnosis of CVL. The disease appears to be less prevalent comapring to previous studies, perhaps due to different control measures performed in the Municipality of Posadas.

Leishmaniasis visceral: contribución a su control mediante el fortalecimiento del diagnóstico del reservorio canino en Posadas, Misiones, Argentina / Visceral leishmaniasis: control contribution by strengthening the diagnosis of dog reservoir in the city of Posadas, Misiones, Argentina

INTRODUCCION: La leishmaniasis visceral (LV) es una enfermedad emergente en Argentina. En 2006 se describió el primer caso autóctono en Posadas (Misiones), ciudad que se convirtió en epicentro de la LV.OBJETIVO: Determinar la prevalencia de la LV canica (LVC) y fortalecer su diagnóstico en Posadas.METODOS: Con un criterio entomológico, la ciudad de Posadas se dividió en islas de alta densidad (IAD) e islas de baja densidad (IBD) de flebótomos. Se seleccionó, de forma arbitraria y mediante imágenes satelitales, la manzana situada más al norte y más al sur de cada IAD e IBD. Se realizó un diseño observacional prospectivo, y se estudió a todos los perros de las manzanas seleccionadas. Se consideró un N inicial de 400 animales para detectar una diferencia de al menos 7% con una potencia de 0,90 y un nivel de 0,05 respecto de la prevalencia global supuesta del 20%. Se tomaron muestras de sangre, punción de ganglios linfáticos y raspado de piel. El estudio incluyó además un test serológico rápido (rK39 canino) y frotis de las muestras para búsqueda parasitológica, que se procesaron y evaluaron en el Instituto Municipal de Salud Animal de Posadas y en el Instituto Nacional de Parasitología Fatala Chabén.RESULTADOS: De los 182 animales evaluados, 33 fueron positivos para LVC, con una prevalencia global del 18,1%. En IAD la prevalencia fue 22% y en IBD, 13,4%. Los estudios parasitológicos fueron positivos en el 10% de los caninos en IAD y 1,2% en IBD. La LVC fue asintomática u oligosintomática, con una presentación más frecuente en IAD. La rK39 tuvo una sensibilidad del 90,3% y una especificidad del 98,9%.CONCLUSIONES: El análisis serológico con antígeno rK39 fue siempre más sensible que la búsqueda parasitológica para el diagnóstico. La LVC parece tener menor prevalencia en relación con estudios previos, quizás debido a diferentes medidas de control realizadas en el Municipio de Posadas.

INTRODUCCION: Visceral leishmanisis (VL) is an emerging disease in Argentina. The first autochthonous case was described in 2006 in a chld from Posadas (Misiones), the city which turned out to be the focus of VL.OBJECTIVE: To determine the prevalence of canine VL (CVL) and improve its diagnosis in Posadas.METHODS: According to entomological criteria, Posadas was divided in high density islands (HDI) and low density islands (LDI) of sandfly. Randomly and with satellite images, the northernmost and southernmost blocks of each HDI and LDI were selected. A prospective, experimental design was performed, studying all the dogs in the selected blocks. There was an initial sample of 400 animals to detect a difference of at least 7%, with a power of 0.90 and a level of 0.05, compared to the supposed prevalence of 20%. Blood samples were taken, with puncture of lymph nodes and skin scraping. The study also included a (canine rK39) rapid test for serological assessment adn sample smears for parasitological search. Samples were processed and evaluated in the Posadas institute of animal health (I.MU.S.A) and the Fatala Chabén National Institute of Parasitology.RESULTS: CVL was assessed in 33/182 animals with an overall prevalence of 18.1%. In HDI, the prevalence was 22%; in LDI, it was 13.4%. Parasitological studies were positive in 10% (HDI) and 1.2% (LDI). The CVL had a nonspecific clinical presentation; canines were asimptomatic or oligosymptomatic, with a higher trend in HDI. The rK39 had a sensitivity of 90.3% and a specificity of 98.9%.CONCLUSIONS: The antigen rK39 was always more sensitive than the search for parasites for the diagnosis of CVL. The disease appears to be less prevalent comapring to previous studies, perhaps due to different control measures performed in the Municipality of Posadas.