RESUMO
Sticholysin I and Sticholysin II (StI and StII) are two potent hemolysins which form pores in natural and model membranes at nanomolar concentrations. These proteins were purified from the aqueous extract of the sea anemone Stichodactyla helianthus, Ellis 1768, by gel filtration and ionic exchange chromatography. This procedure rendered StI and StII with high purity (purification factors: 36 and 50, respectively) but a low yield of hemolytic activity, HA (<3%). Additionally, these toxins exhibited very low phospholipase activity (10(-3)U/mg of protein). In this work, a mixture StI-StII was obtained (yield >95%, with an increase in specific activity: 14 times) from the animal extract using an oxidized phospholipid-based affinity chromatographic matrix binding phospholipases. Cytolysin identification in the mixture was performed by immunoblotting and N-terminal sequence analyses. Phospholipase A2 (PLA2) activity of StI-StII was relatively high (1.85U/mg) and dependent of Ca(2+). The activity resulted optimum when was measured with the mostly unsaturated soybean phosphatidylcholine (PC), when compared to the less unsaturated egg PC or completely saturated dipalmitoyl PC, in the presence of 40mM Ca(2+) at pH 8.0. This Ca(2+) concentration did not exert any effect on binding of StI-StII with soybean PC monolayers. Then, PLA2 activity seems not be required to binding to membranes.
Assuntos
Venenos de Cnidários/metabolismo , Proteínas Hemolisinas/metabolismo , Fosfolipases A2/metabolismo , Anêmonas-do-Mar/química , Anêmonas-do-Mar/enzimologia , Sequência de Aminoácidos , Animais , Cálcio/metabolismo , Cromatografia de Afinidade , Venenos de Cnidários/química , Venenos de Cnidários/isolamento & purificação , Proteínas Hemolisinas/química , Proteínas Hemolisinas/isolamento & purificação , Dados de Sequência Molecular , Compostos Orgânicos/química , Compostos Orgânicos/isolamento & purificação , Compostos Orgânicos/metabolismo , Fosfolipases A2/química , Fosfolipases A2/isolamento & purificação , Alinhamento de SequênciaRESUMO
This work aimed at the isolation and structural/functional characterization of a phospholipase A(2) (CgPLA(2)) from the extract of the anemone Condylactis gigantea. CgPLA(2) was isolated with a high purity level through three chromatographic steps, showing pI 8.6 and molecular weights of 14,500 and 29,000 for the monomer and dimer, respectively. CgPLA(2) showed a high catalytic activity upon fluorescent phospholipids inducing no direct hemolytic activity. This enzyme, which is Ca(2+)-dependent, showed a lower stability against temperature and pH variations when compared with snake venom enzymes. The enzymatic activity was significantly reduced or completely abolished after chemical modification of CgPLA(2) with BPB. Its cDNA was then obtained, with 357 base pairs which codified for a mature protein of 119 amino acid residues. A comparative analysis of the primary structure of CgPLA(2) revealed 84%, 61%, 43% and 42% similarity to the PLA(2)s from Adamsia carciniopados, Nematostella vectensis, Vipera russelli russelli and Bothrops jararacussu, respectively.
Assuntos
Fosfolipases A2/química , Fosfolipases A2/metabolismo , Anêmonas-do-Mar/enzimologia , Sequência de Aminoácidos , Animais , Sequência de Bases , Cromatografia Líquida , DNA Complementar , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Hemólise , Concentração de Íons de Hidrogênio , Masculino , Camundongos , Modelos Moleculares , Dados de Sequência Molecular , Peso Molecular , Fosfolipases A2/genética , Filogenia , Homologia de Sequência de AminoácidosRESUMO
Se determinó la excreción proteica urinaria en 30 pacientes con síndrome nefrótico, en 31 con glomerulonefritis difusa aguda en sus estadios inciales, en 12 portadores de infección urinaria aguda y en 10 niños sanos. La excreción se expresó; en gramos por día, miligramos por metro cuadrado por día, miligramos por minutos y miligramos por kilogramos por día, así como la concentración, en gramos, por litro. Para las determinaciones cualitativas se utilizaron los métodos del papel indicador Comibistix y del ácido sulfosalicílico al 20 por ciento; se realizó un estudio comparativo entre ambos, y se llegó a la conclusión de que el segundo es superior. Para la determinación cuantitativa se utilizaron los métodos del biuret y de Shevky-Stafford, y se compararon ambos, sin hallar diferencia estadística significativa en esta serie; se recomienda el método del biuret por ser de uso generalizado y existir informes de que resulta más fiel, según lo revisado en la literatura médica. En esta serie las proteinurias del síndrome nefrótico, de la glomerulonefritis difusa aguda y de la infección urinaria, así como la de los niños sanos, se encontraron dentro de los límites dados por otros autores. Se destaca la importancia de esta determinación en el diagnóstico, pronóstico y evolución de las nefropatías en la infancia(AU)
Assuntos
Humanos , Glomerulonefrite/diagnóstico , Síndrome Nefrótica/diagnóstico , Infecções Urinárias/diagnóstico , Proteinúria/urinaRESUMO
Se realiza un estudio que comprendió el examen físico y exploración funcional del riñon, en 40 pacientes que han padecido de nefritis aguda desde hace 5 o más años. De ello sólo se encontró uno en fase de "latencia", cuya biopsia renal mostró histología normal; ninguno se pudo clasificar como de padecer nefritis crónica. En una pesquisa sobre la enfermedad se encontró que ésta produjo la muerte de 3 casos, entre 807 que ingresaron por ese motivo en 1973, lo que significa uan letalidad de 0,4 por ciento(AU)
