Control of Boophilus microplus populations in grazing cattle vaccinated with a recombinant Bm86 antigen preparation.

Current methods for the control of cattle tick Boophilus microplus infestations are not effective and the parasite remains a serious problem for the cattle industry in tropical and subtropical areas. Recently, we developed a vaccine against B. microplus employing a recombinant Bm86 (rBm86) antigen preparation (Gavac, Heber Biotec) and it was shown to induce a protective response in vaccinated animals under controlled conditions. Here we show that, under field conditions in grazing cattle, the vaccine is able to control B. microplus populations. Two parasite-free farms were employed for the study. In the first farm, animals were vaccinated with the recombinant vaccine, while, in the second, animals received a saline injection in adjuvant. After immunization, animals were artificially infected and the infestation rate was recorded. Over the 33 weeks of the experiment, the infestation rate was lower in the vaccinated group compared with the control group. At the end of the experiment it was necessary to use chemicals in the control farm after serious losses in production and animals.

Detection of Bm86 antigen in different strains of Boophilus microplus and effectiveness of immunization with recombinant Bm86.

The control of tick populations by using conventional strategies poses several problems, including the appearance of organophosphate resistant strains, among others. The possibility of using alternative strategies such as vaccination with tick antigens has been suggested by several authors. One particular antigen (Bm86) has been described and shown to be able to induce a protective immunity against the cattle tick Boophilus microplus. In this paper we demonstrate by means of immunohistochemical staining that this antigen is conserved among several strains of this species. These results correlate with those showing that animals vaccinated with a preparation of recombinant Bm86 were protected against challenge with the four different strains tested, including one resistant to organophosphates. These results favour the immunization with recombinant Bm86 for the control of the cattle tick B. microplus.

High level expression of the B. microplus Bm86 antigen in the yeast Pichia pastoris forming highly immunogenic particles for cattle.

Recently, a gene coding for the Bm86 tick gut glycoprotein was cloned, expressed in Escherichia coli and shown to induce an immunological response in cattle to damage ticks engorging on these animals (Rand et al., 1989). We report here the increased expression of the Bm86 antigen from the cattle tick Boophilus microplus in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. The recombinant protein was obtained with a purity higher than 95% by a procedure with a high yield. The conducted biochemical studies demonstrated the antigen to be glycosylated and found to form particles of around 17 to 45 nm in diameter with enhanced immunogenic properties. Ticks engorging on vaccinated cattle were significantly damaged as a result of the immune response against the recombinant antigen. This system permits the obtainment in a high yield of the tick Bm86 antigen, in a glycosylated and particulated form.

High level expression of streptokinase in Escherichia coli.

Streptokinase (SK), which activates human plasminogen by promoting its conversion to plasmin, is normally obtained from beta-hemolytic streptococci. Treatment with SK is an effective therapy for improving survival and preserving left ventricular function after coronary thrombosis. We report the cloning, expression in E. coli to levels of 25% of the total cell protein, and characterization of a novel SK (SKC-2) gene, the product of which is functionally equivalent to the naturally-derived protein. The availability of a recombinant streptokinase (rSK) in high yield and purity offers a potentially attractive alternative source of this important therapeutic agent.

Síntesis total del gen de la ertropoyetina humana / Total synthesis of the human erythropoietin gene

En el presente trabajo se reporta la síntesis total del gen que codifica para la eritropoyetina humana, hormona glicoproteica de 166 aminoácidos, que constituye la hormona principal para la regulación y el mantenimiento, a niveles fisiològicos, de la masa de eritrocitos circulantes el la sangre. El diseño del gen sitético 620 pb, incluye la secuencia que codifica para el péptido señal de 27 aminoácidos, la secuencia consenso CCACC,los sitios de restricción Bgl LL y EcoR l en los extremos 5' y 3' y los codones más frecuentes en eucariotas. Fueron sintetizados en fase sólida, por el método del ß-cianoetilfosforamidito, 54 oligonuleótidos. El gen sintetizado, uno d4 los mayores reportados sin el uso de subclonajes de fragmentos, fue insertado en un vector de expresión para células de mamíferos y secuenciado con el método Sanger (AU)

Síntesis total del gen de la ertropoyetina humana / Total synthesis of the human erythropoietin gene

En el presente trabajo se reporta la síntesis total del gen que codifica para la eritropoyetina humana, hormona glicoproteica de 166 aminoácidos, que constituye la hormona principal para la regulación y el mantenimiento, a niveles fisiològicos, de la masa de eritrocitos circulantes el la sangre. El diseño del gen sitético 620 pb, incluye la secuencia que codifica para el péptido señal de 27 aminoácidos, la secuencia consenso CCACC,los sitios de restricción Bgl LL y EcoR l en los extremos 5' y 3' y los codones más frecuentes en eucariotas. Fueron sintetizados en fase sólida, por el método del ß-cianoetilfosforamidito, 54 oligonuleótidos. El gen sintetizado, uno d4 los mayores reportados sin el uso de subclonajes de fragmentos, fue insertado en un vector de expresión para células de mamíferos y secuenciado con el método Sanger

Determinación de actividad estreptoquinasa utilizando un ensayo cuantitativo / Determination of streptokinase activity by quantitative assay

Para determinar la actividad estreptoquinasa (SK) presente en muestras de cultivo y purificación, se desarrolló un método cuantitativo a partir de la formación del complejo estequiométrico estreptoquinasa-plasminógeno (sk-plg). Las determinaciones fueron realizadas utilizando el método del sustrato cromogénico S-2251. La sk se obtuvo del cultivo de Streptococcus equisimilis beta hemolítico (grupo C). El plasminógeno empleado en el ensayo fue purificado a partir de plasma humano en nuestro laboratorio. El método permite la detección de hasta 7 UI de sk/ml. En el trabajo se describen los resultados obtenidos a diferentes concentraciones de sales presentes en las muestras, así como el efecto estimulador del fibrinógeno en la reacción (AU)

Determinación de actividad estreptoquinasa utilizando un ensayo cuantitativo / Determination of streptokinase activity by quantitative assay

Para determinar la actividad estreptoquinasa (SK) presente en muestras de cultivo y purificación, se desarrolló un método cuantitativo a partir de la formación del complejo estequiométrico estreptoquinasa-plasminógeno (sk-plg). Las determinaciones fueron realizadas utilizando el método del sustrato cromogénico S-2251. La sk se obtuvo del cultivo de Streptococcus equisimilis beta hemolítico (grupo C). El plasminógeno empleado en el ensayo fue purificado a partir de plasma humano en nuestro laboratorio. El método permite la detección de hasta 7 UI de sk/ml. En el trabajo se describen los resultados obtenidos a diferentes concentraciones de sales presentes en las muestras, así como el efecto estimulador del fibrinógeno en la reacción