Outbreak of type C botulism in chickens in Pancas city, Espírito Santo state, Brazil / Surto de botulismo tipo C em frangos na cidade de Pancas, Espírito Santo, Brasil

This work aims to describe an outbreak of botulism in poultry (Gallus gallus domesticus), in Pancas City, Espírito Santo State, Brazil. The birds were derived from a subsistence property with approximately 150 domestic fowls. The owner reported finding some birds lying on the floor and others exhibiting limited mobility. Ten animals in agony were euthanized, necropsied and had their blood serum collected. About 72 hours after the onset of clinical signs, 144 (96%) animals of the creation had already died. No postmortem changes were found at necropsies. Clostridium botulinum type C toxins were detected in the sera of euthanized chickens by mice neutralization tests. The observation of clinical signs, absence of post-mortem lesions and the result of mouse neutralization tests confirmed the diagnosis of botulism caused by C. botulinum type C. Unfortunately, the source of toxins was not found.

O presente trabalho tem como objetivo descrever um surto de botulismo em aves domésticas (Gallus gallus domesticus), ocorrido na cidade de Pancas, estado do Espírito Santo, Brasil. As aves eram oriundas de uma propriedade de subsistência com aproximadamente 150 frangos domésticos. O proprietário relatou encontrar algumas aves caídas no chão e outras apresentando dificuldade de locomoção. Dez animais em estado agônico foram eutanasiados, submetidos à necropsia e coleta de soro sanguíneo. Em 72 horas após o início dos sinais clínicos, 144 (96%) animais da criação já haviam vindo a óbito. Nenhuma alteração post-mortem foi encontrada durante a necropsia. Foi possível detectar a toxina botulínica tipo C por soroneutralização em camundongos no soro dos animais eutanasiados. A observação da sintomatologia clínica, ausência de lesões à necropsia e o resultado da soroneutralização permitem confirmar o diagnóstico de botulismo por Clostridium botulinum tipo C.

Clostridioses dos animais de produção

As bactérias do gênero Clostridium são bastonetes, gram-positivos e anaeróbios. Devido à alta capacidade de esporulação da maioria das bactérias patogênicas desse grupo, as infecções e intoxicações por bactérias do gênero Clostridium, conhecidas por clostridioses, são de erradicação impossível e estão entre as principais enfermidades dos animais domésticos em todo mundo, principalmente de ruminantes. Esta revisão tem como objetivo abordar as principais clostridioses que acometem os animais domésticos no Brasil, abordando os principais aspectos e ocorrência do botulismo, tétano, mionecroses (gangrena gasosa e carbúnculo sintomático), doenças causadas por C. perfringens e diarreias e colites causadas por C. difficile.

Clostridioses dos animais de produção

As bactérias do gênero Clostridium são bastonetes, gram-positivos e anaeróbios. Devido à alta capacidade de esporulação da maioria das bactérias patogênicas desse grupo, as infecções e intoxicações por bactérias do gênero Clostridium, conhecidas por clostridioses, são de erradicação impossível e estão entre as principais enfermidades dos animais domésticos em todo mundo, principalmente de ruminantes. Esta revisão tem como objetivo abordar as principais clostridioses que acometem os animais domésticos no Brasil, abordando os principais aspectos e ocorrência do botulismo, tétano, mionecroses (gangrena gasosa e carbúnculo sintomático), doenças causadas por C. perfringens e diarreias e colites causadas por C. difficile.

Malignant edema caused by Clostridium chauvoei in a Horse / Edema maligno em equino causado por Clostridium chauvoei

Background: Malignant edema occurs when a wound is contaminated by one or a combination of the following bacteria: Clostridium septicum, C. sordellii, C. chauvoei, C. novyi type A, and C. perfringens type A. Although malignant edema has been recognized as a disease of economic importance in domestic ruminants, it has rarely been reported in horses in Brazil. Immunohistochemistry is a method that combines histological, immunological and biochemical techniques which, with the use of specifi c antibodies, detects the agent in situ. This paper reports a case of malignant edema by Clostridium chauvoei in a horse in Bahia, Brazil.Case: A 4.5-year-old male horse was submitted for necropsy. The clinical history was obtained from the owner. Samples from the abdominal cavity, thoracic cavity, central nervous system and integumentary system were collected. The samples were fi xed in 10% formalin, processed routinely for histology, embedded in paraffi n, sectioned at fi ve microns, and stained with hematoxylin and eosin. Additionally, histological sections were subjected to immunohistochemistry anti-Clostridium perfringens type A, C. septicum, C. chauvoei, C. novyi type A, and C. sordellii. Positive and negative controls were included. The animal presented diffi culty in walking, swelling of the pelvic limbs two days after intramuscular anti-infl ammatory treatment, and died seven hours af

Background: Malignant edema occurs when a wound is contaminated by one or a combination of the following bacteria: Clostridium septicum, C. sordellii, C. chauvoei, C. novyi type A, and C. perfringens type A. Although malignant edema has been recognized as a disease of economic importance in domestic ruminants, it has rarely been reported in horses in Brazil. Immunohistochemistry is a method that combines histological, immunological and biochemical techniques which, with the use of specifi c antibodies, detects the agent in situ. This paper reports a case of malignant edema by Clostridium chauvoei in a horse in Bahia, Brazil.Case: A 4.5-year-old male horse was submitted for necropsy. The clinical history was obtained from the owner. Samples from the abdominal cavity, thoracic cavity, central nervous system and integumentary system were collected. The samples were fi xed in 10% formalin, processed routinely for histology, embedded in paraffi n, sectioned at fi ve microns, and stained with hematoxylin and eosin. Additionally, histological sections were subjected to immunohistochemistry anti-Clostridium perfringens type A, C. septicum, C. chauvoei, C. novyi type A, and C. sordellii. Positive and negative controls were included. The animal presented diffi culty in walking, swelling of the pelvic limbs two days after intramuscular anti-infl ammatory treatment, and died seven hours af

Malignant edema caused by Clostridium chauvoei in a Horse / Edema maligno em equino causado por Clostridium chauvoei

Background: Malignant edema occurs when a wound is contaminated by one or a combination of the following bacteria: Clostridium septicum, C. sordellii, C. chauvoei, C. novyi type A, and C. perfringens type A. Although malignant edema has been recognized as a disease of economic importance in domestic ruminants, it has rarely been reported in horses in Brazil. Immunohistochemistry is a method that combines histological, immunological and biochemical techniques which, with the use of specifi c antibodies, detects the agent in situ. This paper reports a case of malignant edema by Clostridium chauvoei in a horse in Bahia, Brazil.Case: A 4.5-year-old male horse was submitted for necropsy. The clinical history was obtained from the owner. Samples from the abdominal cavity, thoracic cavity, central nervous system and integumentary system were collected. The samples were fi xed in 10% formalin, processed routinely for histology, embedded in paraffi n, sectioned at fi ve microns, and stained with hematoxylin and eosin. Additionally, histological sections were subjected to immunohistochemistry anti-Clostridium perfringens type A, C. septicum, C. chauvoei, C. novyi type A, and C. sordellii. Positive and negative controls were included. The animal presented diffi culty in walking, swelling of the pelvic limbs two days after intramuscular anti-infl ammatory treatment, and died seven hours af

Background: Malignant edema occurs when a wound is contaminated by one or a combination of the following bacteria: Clostridium septicum, C. sordellii, C. chauvoei, C. novyi type A, and C. perfringens type A. Although malignant edema has been recognized as a disease of economic importance in domestic ruminants, it has rarely been reported in horses in Brazil. Immunohistochemistry is a method that combines histological, immunological and biochemical techniques which, with the use of specifi c antibodies, detects the agent in situ. This paper reports a case of malignant edema by Clostridium chauvoei in a horse in Bahia, Brazil.Case: A 4.5-year-old male horse was submitted for necropsy. The clinical history was obtained from the owner. Samples from the abdominal cavity, thoracic cavity, central nervous system and integumentary system were collected. The samples were fi xed in 10% formalin, processed routinely for histology, embedded in paraffi n, sectioned at fi ve microns, and stained with hematoxylin and eosin. Additionally, histological sections were subjected to immunohistochemistry anti-Clostridium perfringens type A, C. septicum, C. chauvoei, C. novyi type A, and C. sordellii. Positive and negative controls were included. The animal presented diffi culty in walking, swelling of the pelvic limbs two days after intramuscular anti-infl ammatory treatment, and died seven hours af

Outbreak of type C botulism in chickens in Pancas city, Espírito Santo state, Brazil / Surto de botulismo tipo C em frangos na cidade de Pancas, Espírito Santo, Brasil

This work aims to describe an outbreak of botulism in poultry (Gallus gallus domesticus), in Pancas City, Espírito Santo State, Brazil. The birds were derived from a subsistence property with approximately 150 domestic fowls. The owner reported finding some birds lying on the floor and others exhibiting limited mobility. Ten animals in agony were euthanized, necropsied and had their blood serum collected. About 72 hours after the onset of clinical signs, 144 (96%) animals of the creation had already died. No postmortem changes were found at necropsies. Clostridium botulinum type C toxins were detected in the sera of euthanized chickens by mice neutralization tests. The observation of clinical signs, absence of post-mortem lesions and the result of mouse neutralization tests confirmed the diagnosis of botulism caused by C. botulinum type C. Unfortunately, the source of toxins was not found.

O presente trabalho tem como objetivo descrever um surto de botulismo em aves domésticas (Gallus gallus domesticus), ocorrido na cidade de Pancas, estado do Espírito Santo, Brasil. As aves eram oriundas de uma propriedade de subsistência com aproximadamente 150 frangos domésticos. O proprietário relatou encontrar algumas aves caídas no chão e outras apresentando dificuldade de locomoção. Dez animais em estado agônico foram eutanasiados, submetidos à necropsia e coleta de soro sanguíneo. Em 72 horas após o início dos sinais clínicos, 144 (96%) animais da criação já haviam vindo a óbito. Nenhuma alteração post-mortem foi encontrada durante a necropsia. Foi possível detectar a toxina botulínica tipo C por soroneutralização em camundongos no soro dos animais eutanasiados. A observação da sintomatologia clínica, ausência de lesões à necropsia e o resultado da soroneutralização permitem confirmar o diagnóstico de botulismo por Clostridium botulinum tipo C.

CLOSTRIDIOSES DOS ANIMAIS DE PRODUÇÃO

As bactérias do gênero Clostridium são bastonetes, gram-positivos e anaeróbios. Devido à alta capacidade de esporulação da maioria das bactérias patogênicas desse grupo, as infecções e intoxicações por bactérias do gênero Clostridium, conhecidas por clostridioses, são de erradicação impossível e estão entre as principais enfermidades dos animais domésticos em todo mundo, principalmente de ruminantes. Esta revisão tem como objetivo abordar as principais clostridioses que acometem os animais domésticos no Brasil, abordando os principais aspectos e ocorrência do botulismo, tétano, mionecroses (gangrena gasosa e carbúnculo sintomático), doenças causadas por C. perfringens e diarreias e colites causadas por C. difficile.

CLOSTRIDIOSES DOS ANIMAIS DE PRODUÇÃO

As bactérias do gênero Clostridium são bastonetes, gram-positivos e anaeróbios. Devido à alta capacidade de esporulação da maioria das bactérias patogênicas desse grupo, as infecções e intoxicações por bactérias do gênero Clostridium, conhecidas por clostridioses, são de erradicação impossível e estão entre as principais enfermidades dos animais domésticos em todo mundo, principalmente de ruminantes. Esta revisão tem como objetivo abordar as principais clostridioses que acometem os animais domésticos no Brasil, abordando os principais aspectos e ocorrência do botulismo, tétano, mionecroses (gangrena gasosa e carbúnculo sintomático), doenças causadas por C. perfringens e diarreias e colites causadas por C. difficile.

In vitro potency test for evaluation of Clostridium perfringens type D epsilon toxoid

The control of enterotoxemia caused by the epsilon toxin, produced by Clostridium perfringenstype D, is based on vaccination with epsilon toxoid. The potency test for this immunogen is conducted using seroneutralization in mice. Here, an in vitro test for detection of neutralizing antibodies with Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells was standardized in order to study alternative methodologies for the potency test. Titers observed in the in vivo and in vitro seroneutralization tests had a correlation of 99.73%.

O controle da enterotoxemia causada pela toxina épsilon produzida por Clostridium perfringenstipo D é baseado na vacinação com toxoide. O teste de potência desse imunógeno é realizado utilizando-se a técnica de soroneutralização em camundongos. Objetivando-se estudar metodologias alternativas a essa técnica, padronizou-se um teste in vitropara detecção de anticorpos neutralizantes utilizando-se a linhagem celular Madin-Darby Canine Kidney (MDCK). Os títulos observados nas soroneutralizações in vivoe in vitro apresentaram correlação de 99,73%.

First confirmed case of Clostridium difficile-associated diarrhea in foals in Brazil

Despite of the substantial role of Clostridium difficile in causing diarrhea and colitis in foals, there have been no confirmed diagnoses of disease caused by this bacteria in Brazil. In this paper, we describe confirmed cases of colitis caused by C. difficile in two foals in Brazil. Two five-month-old foals with a five-day history of diarrhea after antibiotic treatment for a respiratory disease were treated at the Veterinary Hospital of the Universidade Federal de Minas Gerais. C. difficile A/B toxins were detected, and toxigenic strains of C. difficile were isolated from the foals' feces. The treatment was based on fluid therapy and antibiotics (metronidazole and ceftiofur), and the animals experienced a gradual recovery. The association between the medical history, clinical signs, laboratory exam results and therapeutic success confirmed the diagnosis of C. difficile-associated diarrhea. The present report raises the possibility that C. difficile is also a pathogen in equines in Brazil and highlights the need for up to date routine laboratory protocols for the diagnosis of this disease.

Apesar da importância de Clostridium difficile como agente causador de diarreia e colite em potros, inexistem relatos confirmados de tal doença no Brasil. O objetivo deste trabalho foi descrever dois casos confirmados de diarreia causados por C. difficile em potros, ocorridos em Minas Gerais, Brasil. Os animais, com cinco meses de idade, foram encaminhados ao Hospital Veterinário da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) com histórico de cinco dias de diarreia após antibioticoterapia com penicilina para uma possível pneumonia. Ambos os animais foram positivos para detecção das toxinas A/B de C. difficile e isolados toxigênicas de C. difficile foram isoladas de amostras de fezes. Os animais apresentaram melhora gradual com o tratamento baseado em metronidazol e fluidoterapia e receberam alta após sete dias. A associação do quadro clínico, exames laboratoriais e o sucesso terapêutico permitem confirmar o diagnóstico de colite por C. difficile. O presente trabalho chama a atenção para a possibilidade de diarreia causada por C. difficile em equinos no Brasil e reforça a necessidade do diagnóstico para tal infecção na rotina laboratorial.

Análise comparativa das lesões causadas por clostrídios histotóxicos em mionecrose induzida experimentalmente / Comparative analysis of lesions caused by histotoxic clostridia in experimentally induced myonecrosis

O estudo comparativo das lesões anatomo-histopatológicas causadas pelos diferentes clostrídios histotóxicos é considerado uma etapa importante no diagnóstico epidemiológico das mionecroses. Para reproduzir experimentalmente a gangrena gasosa causada por Clostridium septicum, C. chauvoei, C. novyi tipo A, C. perfringens tipo A e C. Sordellii foram utilizados cobaios (Cavia porcellus). Os sinais clínicos, lesões macroscópicas e histopatológicas foram comparadas entre os grupos inoculados e uma imuno-istoquímica (IHQ) foi padronizada para detecção dos agentes nos tecidos das cobaias experimentalmente infectadas. Na avaliação clínica os animais apresentaram aumento de volume no ponto de inoculação, desconforto e dificuldade de locomoção. A intensidade e extensão das lesões macroscópicas e microscópicas variaram com o agente inoculado. Na IHQ foi possível identificar cada um dos agentes inoculados, sem a detecção de reações cruzadas. Todos os resultados observados demonstram que este tipo de avaliação das lesões é de extrema importância para o diagnóstico etiológico conclusivo, possibilitando assim a adoção de medidas preventivas acertivas.

The comparative anatomical and histopathological lesions caused by different histotoxic clostridia are considered an important step in the diagnosis of epidemiological mionecrosis. In the present study, guinea pigs (Cavia porcellus) were used to reproduce gas gangrene caused by Clostridium septicum, C. chauvoei, C. novyi type A, C. perfringens type A and C. sordellii. The clinical signs, gross and histopathological lesions were compared between inoculated groups and an immunohistochemistry (IHC) was standardized for detection of agents in tissues. On clinical evaluation, animals showed swelling at the injection point, discomfort and limited mobility. The intensity and extent of gross and microscopic lesions varied with the inoculated agent. IHC was able to identify each agents inoculated without cross reactions. All observed results demonstrate that the evaluation of lesions could be usefull in the presumptive etiologic diagnosis.

Antimicrobial susceptibility of Clostridium perfringens isolated from piglets with or without diarrhea in Brazil

The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined for 13 antibiotics against Clostridium perfringens isolated from Brazilian piglets. The collection of isolates was performed in June to October 2010. All isolates were susceptible to amoxicillin and ceftiofur, whereas most were resistant to tetracycline and lincomycin. Avilamycin and narasin were more effective against isolates from non-diarrheic than from diarrheic piglets. The other antimicrobials were less active in need of high concentrations to inhibit the growth of the C. perfringens type A. These results suggest the need for further studies evaluating molecular factors related to the antimicrobial resistance of C. perfringens.

First confirmed case of Clostridium difficile-associated diarrhea in foals in Brazil

Despite of the substantial role of Clostridium difficile in causing diarrhea and colitis in foals, there have been no confirmed diagnoses of disease caused by this bacteria in Brazil. In this paper, we describe confirmed cases of colitis caused by C. difficile in two foals in Brazil. Two five-month-old foals with a five-day history of diarrhea after antibiotic treatment for a respiratory disease were treated at the Veterinary Hospital of the Universidade Federal de Minas Gerais. C. difficile A/B toxins were detected, and toxigenic strains of C. difficile were isolated from the foals' feces. The treatment was based on fluid therapy and antibiotics (metronidazole and ceftiofur), and the animals experienced a gradual recovery. The association between the medical history, clinical signs, laboratory exam results and therapeutic success confirmed the diagnosis of C. difficile-associated diarrhea. The present report raises the possibility that C. difficile is also a pathogen in equines in Brazil and highlights the need for up to date routine laboratory protocols for the diagnosis of this disease.

Apesar da importância de Clostridium difficile como agente causador de diarreia e colite em potros, inexistem relatos confirmados de tal doença no Brasil. O objetivo deste trabalho foi descrever dois casos confirmados de diarreia causados por C. difficile em potros, ocorridos em Minas Gerais, Brasil. Os animais, com cinco meses de idade, foram encaminhados ao Hospital Veterinário da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) com histórico de cinco dias de diarreia após antibioticoterapia com penicilina para uma possível pneumonia. Ambos os animais foram positivos para detecção das toxinas A/B de C. difficile e isolados toxigênicas de C. difficile foram isoladas de amostras de fezes. Os animais apresentaram melhora gradual com o tratamento baseado em metronidazol e fluidoterapia e receberam alta após sete dias. A associação do quadro clínico, exames laboratoriais e o sucesso terapêutico permitem confirmar o diagnóstico de colite por C. difficile. O presente trabalho chama a atenção para a possibilidade de diarreia causada por C. difficile em equinos no Brasil e reforça a necessidade do diagnóstico para tal infecção na rotina laboratorial.

Análise comparativa das lesões causadas por clostrídios histotóxicos em mionecrose induzida experimentalmente / Comparative analysis of lesions caused by histotoxic clostridia in experimentally induced myonecrosis

O estudo comparativo das lesões anatomo-histopatológicas causadas pelos diferentes clostrídios histotóxicos é considerado uma etapa importante no diagnóstico epidemiológico das mionecroses. Para reproduzir experimentalmente a gangrena gasosa causada por Clostridium septicum, C. chauvoei, C. novyi tipo A, C. perfringens tipo A e C. Sordellii foram utilizados cobaios (Cavia porcellus). Os sinais clínicos, lesões macroscópicas e histopatológicas foram comparadas entre os grupos inoculados e uma imuno-istoquímica (IHQ) foi padronizada para detecção dos agentes nos tecidos das cobaias experimentalmente infectadas. Na avaliação clínica os animais apresentaram aumento de volume no ponto de inoculação, desconforto e dificuldade de locomoção. A intensidade e extensão das lesões macroscópicas e microscópicas variaram com o agente inoculado. Na IHQ foi possível identificar cada um dos agentes inoculados, sem a detecção de reações cruzadas. Todos os resultados observados demonstram que este tipo de avaliação das lesões é de extrema importância para o diagnóstico etiológico conclusivo, possibilitando assim a adoção de medidas preventivas acertivas.

The comparative anatomical and histopathological lesions caused by different histotoxic clostridia are considered an important step in the diagnosis of epidemiological mionecrosis. In the present study, guinea pigs (Cavia porcellus) were used to reproduce gas gangrene caused by Clostridium septicum, C. chauvoei, C. novyi type A, C. perfringens type A and C. sordellii. The clinical signs, gross and histopathological lesions were compared between inoculated groups and an immunohistochemistry (IHC) was standardized for detection of agents in tissues. On clinical evaluation, animals showed swelling at the injection point, discomfort and limited mobility. The intensity and extent of gross and microscopic lesions varied with the inoculated agent. IHC was able to identify each agents inoculated without cross reactions. All observed results demonstrate that the evaluation of lesions could be usefull in the presumptive etiologic diagnosis.

Detection of enterotoxin A and cytotoxin B, and isolation of Clostridium difficile in piglets in Minas Gerais, Brazil

Clostridium difficile has emerged as a major cause of neonatal colitis in piglets, displacing classic bacterial pathogens. However, there is no information regarding the distribution of this microorganism in pig farms in Brazil. In the present study, the presence of toxins A/B and of C. difficile strains in stool samples from 60 diarrheic or non-diarrheic newborn piglets (one to seven days old), from 15 different farms, was studied. The presence of toxins A/B was detected by ELISA and PCR was used to identify toxin A, toxin B and binary toxin gene in each isolated strain. C. difficile A/B toxins were detected in ten samples (16.7%). Of these, seven were from diarrheic and three were from non-diarrheic piglets. C. difficile was recovered from 12 out of 60 (20%) fecal samples. Of those, three strains were non-toxigenic (A-B-) and nine were toxigenic. Of the nine toxigenic strains, four were A+B+ strains and five were A-B+ strains. The presence of binary toxin observed in the present study was much higher (50%) than in previously reported studies. All three non-toxigenic strains were isolated from otherwise healthy piglets. The results suggest the occurrence of neonatal diarrhea by C. difficile in farms in Brazil.

Clostridium difficile tem sido relatado como o principal causador de colite neonatal em suínos. Apesar da crescente importância deste agente, não há dados sobre infecções causadas por C. difficile em suínos no Brasil. O objetivo do presente estudo foi detectar as toxinas A/B e isolar C. difficile a partir de 60 amostras de fezes de leitões diarreicos ou apararentemente saudáveis, com no máximo sete dias de vida, e oriundos de 15 granjas diferentes. As toxinas A/B foram detectadas por ELISA e uma PCR multiplex foi utilizada para detecção dos genes responsáveis pela codificação das toxinas A, B e toxina binária. As toxinas A/B de C. difficile foram detectadas em dez amostras de fezes (16.7%). Dessas, sete eram de animais diarreicos e três de leitões aparentemente saudáveis. Foi possível isolar C. difficile em 12 das 60 (20%) amostras trabalhadas. Dessas, três estirpes eram não-toxigênicas (A-B-) e nove eram toxigênicas, sendo quatro caracterizadas como A+B+ e cinco como A-B+. O gene responsável pela codificação da toxina binária foi encontrado em 50% das estirpes isoladas, proporção superior ao relatado em estudos anteriores. Todas as estirpes não toxigênicas foram isoladas de animais não diarreicos. Os resultados encontrados sugerem a ocorrência de diarreia por C. difficile em granjas no Brasil.

Detection of enterotoxin A and cytotoxin B, and isolation of Clostridium difficile in piglets in Minas Gerais, Brazil

Clostridium difficile has emerged as a major cause of neonatal colitis in piglets, displacing classic bacterial pathogens. However, there is no information regarding the distribution of this microorganism in pig farms in Brazil. In the present study, the presence of toxins A/B and of C. difficile strains in stool samples from 60 diarrheic or non-diarrheic newborn piglets (one to seven days old), from 15 different farms, was studied. The presence of toxins A/B was detected by ELISA and PCR was used to identify toxin A, toxin B and binary toxin gene in each isolated strain. C. difficile A/B toxins were detected in ten samples (16.7%). Of these, seven were from diarrheic and three were from non-diarrheic piglets. C. difficile was recovered from 12 out of 60 (20%) fecal samples. Of those, three strains were non-toxigenic (A-B-) and nine were toxigenic. Of the nine toxigenic strains, four were A+B+ strains and five were A-B+ strains. The presence of binary toxin observed in the present study was much higher (50%) than in previously reported studies. All three non-toxigenic strains were isolated from otherwise healthy piglets. The results suggest the occurrence of neonatal diarrhea by C. difficile in farms in Brazil.

Clostridium difficile tem sido relatado como o principal causador de colite neonatal em suínos. Apesar da crescente importância deste agente, não há dados sobre infecções causadas por C. difficile em suínos no Brasil. O objetivo do presente estudo foi detectar as toxinas A/B e isolar C. difficile a partir de 60 amostras de fezes de leitões diarreicos ou apararentemente saudáveis, com no máximo sete dias de vida, e oriundos de 15 granjas diferentes. As toxinas A/B foram detectadas por ELISA e uma PCR multiplex foi utilizada para detecção dos genes responsáveis pela codificação das toxinas A, B e toxina binária. As toxinas A/B de C. difficile foram detectadas em dez amostras de fezes (16.7%). Dessas, sete eram de animais diarreicos e três de leitões aparentemente saudáveis. Foi possível isolar C. difficile em 12 das 60 (20%) amostras trabalhadas. Dessas, três estirpes eram não-toxigênicas (A-B-) e nove eram toxigênicas, sendo quatro caracterizadas como A+B+ e cinco como A-B+. O gene responsável pela codificação da toxina binária foi encontrado em 50% das estirpes isoladas, proporção superior ao relatado em estudos anteriores. Todas as estirpes não toxigênicas foram isoladas de animais não diarreicos. Os resultados encontrados sugerem a ocorrência de diarreia por C. difficile em granjas no Brasil.

Detection of enterotoxin A and cytotoxin B, and isolation of Clostridium difficile in piglets in Minas Gerais, Brazil

Clostridium difficile has emerged as a major cause of neonatal colitis in piglets, displacing classic bacterial pathogens. However, there is no information regarding the distribution of this microorganism in pig farms in Brazil. In the present study, the presence of toxins A/B and of C. difficile strains in stool samples from 60 diarrheic or non-diarrheic newborn piglets (one to seven days old), from 15 different farms, was studied. The presence of toxins A/B was detected by ELISA and PCR was used to identify toxin A, toxin B and binary toxin gene in each isolated strain. C. difficile A/B toxins were detected in ten samples (16.7%). Of these, seven were from diarrheic and three were from non-diarrheic piglets. C. difficile was recovered from 12 out of 60 (20%) fecal samples. Of those, three strains were non-toxigenic (A-B-) and nine were toxigenic. Of the nine toxigenic strains, four were A+B+ strains and five were A-B+ strains. The presence of binary toxin observed in the present study was much higher (50%) than in previously reported studies. All three non-toxigenic strains were isolated from otherwise healthy piglets. The results suggest the occurrence of neonatal diarrhea by C. difficile in farms in Brazil.

Clostridium difficile tem sido relatado como o principal causador de colite neonatal em suínos. Apesar da crescente importância deste agente, não há dados sobre infecções causadas por C. difficile em suínos no Brasil. O objetivo do presente estudo foi detectar as toxinas A/B e isolar C. difficile a partir de 60 amostras de fezes de leitões diarreicos ou apararentemente saudáveis, com no máximo sete dias de vida, e oriundos de 15 granjas diferentes. As toxinas A/B foram detectadas por ELISA e uma PCR multiplex foi utilizada para detecção dos genes responsáveis pela codificação das toxinas A, B e toxina binária. As toxinas A/B de C. difficile foram detectadas em dez amostras de fezes (16.7%). Dessas, sete eram de animais diarreicos e três de leitões aparentemente saudáveis. Foi possível isolar C. difficile em 12 das 60 (20%) amostras trabalhadas. Dessas, três estirpes eram não-toxigênicas (A-B-) e nove eram toxigênicas, sendo quatro caracterizadas como A+B+ e cinco como A-B+. O gene responsável pela codificação da toxina binária foi encontrado em 50% das estirpes isoladas, proporção superior ao relatado em estudos anteriores. Todas as estirpes não toxigênicas foram isoladas de animais não diarreicos. Os resultados encontrados sugerem a ocorrência de diarreia por C. difficile em granjas no Brasil.

Padronização da titulação da toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D em linhagem contínua de células como alternativa ao bioensaio animal

Enterotoxemia (also called pulpy kidney disease) is an enteric disease, that affect ruminants, produced by epsilon toxin from Clostridium perfringens type D, an anaerobic commonly isolated from soil and feces of healthy animals. The diagnostic is based on detection of this exotoxin in the intestinal content by soroneutralization in mice. Therefore, this study aimed to standardize a test for detection and titration of the toxin in vitro, and compare it with the phenomenon in vivo. A volume of epsilon toxin was titrated in mice and in some cell lines. After concluding the most sensitive cell line, were held in vitro titrations of dilutions from a toxin wich one had in vivo titer known. The results were grouped and a mathematical equation was developed. MDCK cell line showed that the phenomenon observed in vitro can be expressed by a mathematical equation wich shows a correlation of 98.33% with a minimum lethal dose determined in vivo. Therefore, the soroneutralization using MDCK allows a specific, sensitive, practical, fast, and doesn't requere use of animal titration of epsilon toxin.

Enterotoxemia, também chamada de doença do rim pulposo, doença que acomete os ruminantes domésticos, é causada pela ação da toxina épsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D, um anaeróbio comumente isolado do solo e das fezes de animais sadios. O método tradicional de diagnóstico baseia-se na detecção e classificação dessa exotoxina no conteúdo intestinal por meio da soroneutralização em camundongos. Com isso, o objetivo deste estudo foi padronizar um teste para detecção e titulação dessa toxina in vitro e compará-lo ao fenômeno in vivo. Para isso, uma partida de toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D foi titulada em camundongos e em várias linhagens contínuas de células. Após a determinação da linhagem celular mais sensível, realizaram-se ensaios de titulação in vitro de diluições de uma partida de toxina, comparando-os com os títulos in vivo conhecidos. Os resultados foram agrupados, e foi desenvolvida a equação matemática que melhor adaptou-se aos intervalos trabalhados. A linhagem MDCK, além de mais sensível, demonstrou que o fenômeno observado in vitro pode ser expresso por meio da equação matemática que apresenta uma correlação de 98,33%, com a dose mínima mortal determinada in vivo. Portanto, a linhagem MDCK permite titular a toxina épsilon de C. perfringens tipo D de forma específica e sensível, além de ser uma técnica prática, rápida e que dispensa o uso de animais.

Padronização da titulação da toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D em linhagem contínua de células como alternativa ao bioensaio animal

Enterotoxemia (also called pulpy kidney disease) is an enteric disease, that affect ruminants, produced by epsilon toxin from Clostridium perfringens type D, an anaerobic commonly isolated from soil and feces of healthy animals. The diagnostic is based on detection of this exotoxin in the intestinal content by soroneutralization in mice. Therefore, this study aimed to standardize a test for detection and titration of the toxin in vitro, and compare it with the phenomenon in vivo. A volume of epsilon toxin was titrated in mice and in some cell lines. After concluding the most sensitive cell line, were held in vitro titrations of dilutions from a toxin wich one had in vivo titer known. The results were grouped and a mathematical equation was developed. MDCK cell line showed that the phenomenon observed in vitro can be expressed by a mathematical equation wich shows a correlation of 98.33% with a minimum lethal dose determined in vivo. Therefore, the soroneutralization using MDCK allows a specific, sensitive, practical, fast, and doesn't requere use of animal titration of epsilon toxin.

Enterotoxemia, também chamada de doença do rim pulposo, doença que acomete os ruminantes domésticos, é causada pela ação da toxina épsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D, um anaeróbio comumente isolado do solo e das fezes de animais sadios. O método tradicional de diagnóstico baseia-se na detecção e classificação dessa exotoxina no conteúdo intestinal por meio da soroneutralização em camundongos. Com isso, o objetivo deste estudo foi padronizar um teste para detecção e titulação dessa toxina in vitro e compará-lo ao fenômeno in vivo. Para isso, uma partida de toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D foi titulada em camundongos e em várias linhagens contínuas de células. Após a determinação da linhagem celular mais sensível, realizaram-se ensaios de titulação in vitro de diluições de uma partida de toxina, comparando-os com os títulos in vivo conhecidos. Os resultados foram agrupados, e foi desenvolvida a equação matemática que melhor adaptou-se aos intervalos trabalhados. A linhagem MDCK, além de mais sensível, demonstrou que o fenômeno observado in vitro pode ser expresso por meio da equação matemática que apresenta uma correlação de 98,33%, com a dose mínima mortal determinada in vivo. Portanto, a linhagem MDCK permite titular a toxina épsilon de C. perfringens tipo D de forma específica e sensível, além de ser uma técnica prática, rápida e que dispensa o uso de animais.

Padronização da titulação da toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D em linhagem contínua de células como alternativa ao bioensaio animal

Enterotoxemia (also called pulpy kidney disease) is an enteric disease, that affect ruminants, produced by epsilon toxin from Clostridium perfringens type D, an anaerobic commonly isolated from soil and feces of healthy animals. The diagnostic is based on detection of this exotoxin in the intestinal content by soroneutralization in mice. Therefore, this study aimed to standardize a test for detection and titration of the toxin in vitro, and compare it with the phenomenon in vivo. A volume of epsilon toxin was titrated in mice and in some cell lines. After concluding the most sensitive cell line, were held in vitro titrations of dilutions from a toxin wich one had in vivo titer known. The results were grouped and a mathematical equation was developed. MDCK cell line showed that the phenomenon observed in vitro can be expressed by a mathematical equation wich shows a correlation of 98.33% with a minimum lethal dose determined in vivo. Therefore, the soroneutralization using MDCK allows a specific, sensitive, practical, fast, and doesn't requere use of animal titration of epsilon toxin.

Enterotoxemia, também chamada de doença do rim pulposo, doença que acomete os ruminantes domésticos, é causada pela ação da toxina épsilon produzida pelo Clostridium perfringens tipo D, um anaeróbio comumente isolado do solo e das fezes de animais sadios. O método tradicional de diagnóstico baseia-se na detecção e classificação dessa exotoxina no conteúdo intestinal por meio da soroneutralização em camundongos. Com isso, o objetivo deste estudo foi padronizar um teste para detecção e titulação dessa toxina in vitro e compará-lo ao fenômeno in vivo. Para isso, uma partida de toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D foi titulada em camundongos e em várias linhagens contínuas de células. Após a determinação da linhagem celular mais sensível, realizaram-se ensaios de titulação in vitro de diluições de uma partida de toxina, comparando-os com os títulos in vivo conhecidos. Os resultados foram agrupados, e foi desenvolvida a equação matemática que melhor adaptou-se aos intervalos trabalhados. A linhagem MDCK, além de mais sensível, demonstrou que o fenômeno observado in vitro pode ser expresso por meio da equação matemática que apresenta uma correlação de 98,33%, com a dose mínima mortal determinada in vivo. Portanto, a linhagem MDCK permite titular a toxina épsilon de C. perfringens tipo D de forma específica e sensível, além de ser uma técnica prática, rápida e que dispensa o uso de animais.