Development and standardization of a western blotting test for detection of antibodies against B. abortus / Desenvolvimento e padronização do teste Western blotting para detecção de anticorpos contra B. abortus

Brucellosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Brucella spp. with diagnosis based on use of serological techniques. The present study aimed to develop and standardize a western blotting (WB) test for detection of antibodies against B. abortus. Samples from two groups of cattle were analyzed: group I: 60 serum samples from true positive and true negative vaccinated animals (30 positive samples from infected animals according to rose bengal test (RBT), 2-mercaptoethanol, serum agglutination test (SAT) and complement fixation test (CFT) and 30 RBT negatives samples); group II: 383 field samples (90 positive and 293 CFT negative sera). The most reactive band in the western blotting, which properly identified and separated infected from non - infected had a molecular weight of ≤ 20kDa. The sensitivity, specificity and accuracy of the WB compared to RBT was 93%, 99%, 98%, respectively and k= 0.938. When compared to CFT, the sensitivity, specificity and accuracy of the WB was 97%, 98% and 97%, respectively and k= 0.929. The WB developed and standardized in the present study is a serological test with potential use as a confirmatory test for the diagnosis of bovine brucellosis.(AU)

A brucelose é uma doença infectocontagiosa, causada por bactérias do gênero Brucella spp., com diagnóstico baseado no emprego de técnicas sorológicas. Objetivou-se neste estudo desenvolver e padronizar um teste Western blotting (WB) para detecção de anticorpos contra B. abortus. Foram analisados dois grupos de amostras bovinas: grupo I, com 60 amostras de animais verdadeiros positivos e verdadeiros negativos vacinados (30 amostras positivas de animais infectados e positivos nos testes de antígeno acidificado tamponado (AAT), 2 - mercaptoetanol (2 - ME), soroaglutinação lenta em tubos (SAT) e fixação do complemento e de 30 amostras negativas no AAT); grupo II, com 383 amostras de campo, sendo 90 soropositivas e 293 soronegativas no TFC. O resultado da análise do WB revelou peso molecular ≤20kDa como sendo a área mais reativa e característica para identificação e separação dos animais infectados dos não infectados. A sensibilidade, a especificidade e a acurácia do WB, quando este foi comparado com o AAT, foram, respectivamente, 93%, 99% e 98%, e k= 0,938. Quando comparadas com a TFC, a sensibilidade, a especificidade e a acurácia foram 97%, 98% e 97%, respectivamente, e k= 0,929. O WB padronizado neste estudo mostrou-se um teste sorológico com potencial uso como teste confirmatório no diagnóstico da brucelose bovina.(AU)

Miocardite crônica em um cão naturalmente infectado com Leishmania (Leishmania) infantum chagasi: aspectos clínicos e patológicos / Chronic myocarditis in a dog naturally infected by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi: clinical and pathological aspects

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa crônica frequentemente fatal causada pela Leishmania infantum chagasi nas Américas. A enfermidade pode acometer vários órgãos, determinando diferentes manifestações clínicas. Contudo o envolvimento do coração raramente tem sido reportado em cães infectados por Leishmania sp. Dessa forma, descreve-se um caso de miocardite crônica com repercussões clínicas e patológicas em um cão naturalmente infectado por Leishmania infantum chagasi. A positividade para Leishmaniose Visceral foi determinada pela presença de anticorpos antiLeishmania sp. nos testes sorológicos (RIFI, ELISA e DPP) e confirmada por visualização de formas amastigotas de Leishmania sp. em punção aspirativa do linfonodo poplíteo. O exame cardiovascular revelou alterações radiográficas, eletrocardiográficas, na pressão arterial e nos biomarcardores cardíacos. Após eutanásia, amostras de tecido cardíaco foram avaliadas histologicamente e submetidas à imunomarcação, onde foi observado infiltrado mononuclear (plasmo-histiolinfocitário), com presença de estruturas arredondadas de coloracão marrom-amareladas (imunomarcadas), indicando formas amastigotas de Leishmania infantum chagasi no miocárdio. Os aspectos etiopatogênicos da leishmaniose visceral sobre o miocárdio neste caso podem estar relacionados tanto à presença do parasita quanto à resposta "reacional inespecífica" do tecido à agressão do parasita no organismo. Todavia ainda não se sabem se as cepas de Leishmania infantum chagasi da região semiárida paraibana apresentam algum tropismo por tecido cardíaco ou se induzem a reação imunológica cruzada, com implicações clínicas.

Visceral leishmaniasis (VL) is a chronic, often fatal infectious disease caused by Leishmania infantum chagasi in the Americas. The disease can affect many organs and may express different clinical forms. However, the involvement of the heart has rarely been reported in dogs infected by Leishmania sp. Thus, we describe a case of chronic myocarditis with clinical and pathological effects in a dog naturally infected by Leishmania infantum chagasi. Positivity for Visceral Leishmaniasis was determined by the presence of anti-Leishmania sp. in serological tests (IFAT, ELISA and DPP) and confirmed by visualization of amastigote forms of the parasite in the popliteal lymph node aspiration samples. The cardiovascular clinical examination showed changes in the radiographic, ECG, blood pressure and heart biomarkers. After euthanasia, heart tissue samples were histologically examined and underwent our immunohistochemistry assessment, where mononuclear infiltrate was observed (plasma cells, lymphocytes and macrophages) with the presence of rounded brownish-yellow (immunomarked) cells, indicating amastigotes of Leishmania infantum chagasi within the myocardium. The etiopathogenic aspects of visceral leishmaniasis in the myocardium in this case may be related either to the presence of the parasite or the "nonspecific reactive" response of the tissue attributable to the aggression of the parasite in the body. However, it is not known if the strains of Leishmania infantum chagasi found in the semi-arid of Paraíba have some tropism for cardiac tissue or if they induce immunological cross-reaction with clinical implications.

Effect of incubation temperature on the diagnostic sensitivity of the glanders complement fixation test.

The complement fixation test (CFT) is the only serological test prescribed by the World Organisation for Animal Health (OIE) for the diagnosis of glanders in international trading of equids. However, false-positive reactions have caused financial losses to the animal owners in the past, and false-negative tests have resulted in the introduction of glanders into healthy equine populations in previously glanders-free areas. Both warm (incubation at 37°C for 1 h) and cold (overnight incubation at 4°C) procedures are recommended by the OIE for serodiagnosis of glanders. In a comparison of the sensitivity and specificity of the two techniques, using the United States Department of Agriculture antigen, warm CFT was found to be significantly less sensitive (56.8%; p < 0.0005) than the cold CFT (83.6%). Cold CFT thus increases the detection rate of glanders but a lower diagnostic specificity has to be accepted. The immunoblot was used as the gold standard.

Comparative evaluation of three commercially available complement fixation test antigens for the diagnosis of glanders.

The sensitivity and specificity of three commercially available complement fixation test (CFT) antigens from c.c.pro (c.c.pro), Central Veterinary Institute of Wageningen UR (CIDC) and the United States Department of Agriculture (USDA) were comparatively evaluated by testing 410 sera collected from glanders-endemic and non-endemic areas (200 true-negative randomly collected sera and 210 sera collected from experimentally immunised animals (12 rabbits, 19 horses), clinically positive (135) and culture-positive (44) horses, donkeys and mules). Immunoblotting (IB) was used as the gold standard test. Highest sensitivity was shown for the CIDC antigen (100 per cent) followed by the c.c.pro antigen (99.39 per cent). However, the USDA antigen showed substantially less (p<0.05) sensitivity (62.19 per cent). Highest specificity was found for the USDA antigen (100 per cent) followed by the CIDC (97.5 per cent) and c.c.pro antigen (96.5 per cent). Positive and negative predictive values (assumed glanders prevalence of <0.1 per cent) for each antigen were calculated to be 95.88 and 99.48 (c.c.pro), 97.04 and 100 (CIDC), 100 and 76.33 per cent (USDA), respectively. Almost perfect agreement (0.96) was found between CFT using either c.c.pro or CIDC and IB.

Anestesia epidural com associação medetomidina e lidocaína, em gatos pré-medicados com acepromazina e midazolam / Epidural anesthesia with lidocaine and association medetomidine in cats pre-medicated with acepromazine and midazolam

Avaliaram-se os efeitos anestésicos promovidos pela associação medetomidina e lidocaína por via epidural, em gatos pré-tratados com acepromazina e midazolam. Foram utilizados 10 gatos adultos, machos e fêmeas, hígidos e com média de peso de 2,5±0,6kg, distribuídos em dois grupos (GM e GL) de igual número (n=5). Administraram-se, como medicação pré-anestésica, acepromazina, 0,2mg/kg, e midazolam, 0,5mg/kg, via intramuscular, e 20 minutos depois, nos animais do GM, por via epidural, lidocaína, 4,4mg/kg, associada à medetomidina, 0,02mg/kg. Os gatos do GL receberam lidocaína, 4,4mg/kg, associada à solução de NaCl a 0,9 por cento. As avaliações ocorreram antes da pré-anestesia (MPA), 20 minutos após a MPA e antes da anestesia epidural, e aos 10, 20, 30 e 40 minutos após a anestesia epidural, respectivamente, T-20, T0, T10, T20, T30 e T40. Foram avaliados: frequência cardíaca (FC) e respiratória (FR), temperatura do corpo, saturação de oxiemoglobina, analgesia, miorrelaxamento e período de recuperação. No GM, a FC diminuiu em T20, T30 e T40 em relação ao T-20 e T10 e foi mais baixa que a FC do GL em T20, T30 e T40, respectivamente, 86, 91 e 88 bat/min e 194, 205 e 177 bat/min. A FR variou entre o T-20 e os outros momentos de avaliação nos animais do GL. Nas variáveis eletrocardiográficas, houve diferenças entre T20, T30 e T40 e T-20 e T0, valores de 235, 238 e 240ms e 156 e 161ms, respectivamente, somente no GM. Este grupo diferiu do GL nas avaliações em T20, T30 e T40, valores de 147, 132 e 150ms para os gatos do GL. Oitenta por cento dos gatos tiveram analgesia intensa, e em todos os animais ocorreu relaxamento da mandíbula e da língua. O tempo de recuperação foi de 40 e 15min no GM e no GL, respectivamente. Concluiu-se que a associação lidocaína com medetomidina promoveu plano anestésico estável com grau de anestesia e recuperação anestésica de boa qualidade.

The anesthetic effects due to the association of medetomidine and epidural lidocaine in cats pretreated with acepromazine and midazolam were evaluated. Ten adult cats were used, male and female, healthy and weighing 2.5±0.6kg. They were divided into two groups (GM and GL) of equal numbers (n=5). Premedication with acepromazine, 0.2mg/kg, and midazolam, 0.5mg/kg, intramuscular was administered. Twenty minutes later, GM animals were given epidural lidocaine, 4.4mg/kg, associated with medetomidine, 0.02mg/kg. GL cats received lidocaine, 4.4mg/kg, associated with NaCl 0.9 percent. Assessments occurred before the pre-anesthesia (MPA), 20 minutes after premedication and before the epidural block, and 10, 20, 30 and 40 minutes after epidural anesthesia, respectively, T-20, T0, T10, T20, T30 and T40. Heart rate, respiratory rate, body temperature, oxyhemoglobin saturation, analgesia, muscle relaxation and recovery period were evaluated. In GM cats the heart rate decreased at T20, T30 and T40 as compared to T-20 and T10 and was lower than the heart rate in the GL cats at T20, T30 and T40, values being, respectively, 86, 91 and 88 beats/min and 194, 205 and 177 beats/min. The respiratory rate ranged from T-20 and the other time points in GL animals. Concerning electrocardiographic variables, in GM cats significant differences between T20, T30 and T40 and T0 and T-20, were observed, values being 235, 238 and 156 and 161ms and 240ms, respectively. GM animals differed from GL in T20, T30 and T40, values being 147, 132 and 150ms for GL cats. Eighty percent of the cats had severe pain and in all animals there was a relaxation of the jaw and tongue. The recovery time was 40 and 15 min at GM and GL, respectively. It was concluded that the association promoted lidocaine with medetomidine anesthesia with a stable level of anesthesia and anesthetic recovery of good quality.

Avaliação da infecção por helmintos gastrintestinais em caprinos criados na região metropolitana do Recife - PE através de exame coproparasitológico e larva cultura / Avaluation of the infection for gastrointestinal helminths in goats from the metropolitan area of Recife - Pernambuo state - Brasil through the faecal egg count and larval culture

A caprinocultura é uma atividade de relevância social e econômica para o país, alcançando expansâo significativa em várias regiões brasileiras, principalmente na região Nordeste. Além dos problemas com manejo zootécnico e sanitário enfrentados pela caprinocultura brasileira, somam-se condições climáticas que favorecem o desenvolvimento de diferentes parasitoses,principalmente as helmintoses, sendo consideradas um entrave à expansão da caprinocultura no Brasil. Este trabalho tevecomo objetivo estudar as infecções por helmintos gastrintestinais em caprinos criados na região metropolitana do Recife através da contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e identificação de larvas de terceiro estágio obtidas em coproculturas. Foram utilizados em média 20 caprinos de uma propriedade localizada no municfpio de Paulista dos quais, mensalmente, em datas preestabelecidas, coletaram-se amostras de fezes individuais no período de agosto de 1998 a julho de 1999. Observou-se um percentual de positividade de 82