Congelação de espermatozoides recuperados do epidídimo de cão (Canis familiares) / Spermatozoa freezing recovered from dog epididymis (Canis familiares)

O presente estudo tem como objetivo avaliar o espermatozoide recuperado do epidídimo congelado/descongelado em diferentes diluidores. O experimento foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal do Setor Palotina no período de julho de 2017 a julho de 2019. Um mínimo de 40 CTE (complexo testículo epidídimo) de cães foi obtido de animais orquiectomizados. A recuperação dos espermatozoides da cauda do epidídimo foi realizada pela técnica de flutuação e submetida ao teste de swin-up para remoção dos resíduos celulares e espermatozoides inviáveis. Após a avaliação da concentração e motilidade, os espermatozoides foram diluidos pelo método “One Step” em Tris gema e/ou citrato gema e logo envazados em palhetas de 0,25mL numa concentração de 25 x 106 de espermatozoides viáveis. Logo as mesmas permaneceram em estabilização por 2 horas a temperatura de 5°C. Após foram colocadas em vapor de nitrogênio por 15 minutos, e por fim, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas em botijão criobiológico. A descongelação foi realizada em banho maria a 37°C por um minuto, e após avaliou-se a motilidade e vigor em microscopia de Contraste de Fase 100x. Para avaliação da viabilidade espermática, foi utilizada a coloração vital Azul de Tripan/Giemsa. Na análise do sêmen descongelado, o diluente Tris-gema foi estatisticamente superior ao Citratogema nas variáveis motilidade, vigor e morfologia de espermatozoides epididimarios de cão. O presente estudo, mostra que é possível recuperar e preservar espermatozoides provenientes do epidídimo de canídeos utilizando meio crioprotetor a base de tris-gema.(AU)

The present study aims to evaluate sperm recovered from frozen / thawed epididymis in different extenders. The experiment was carried out in Animal Reproduction Laboratory at the Veterinary Hospital at the Palotina Sector from July 2017 to July 2019. A minimum of 40 ETC (epididymis testis complex) from dogs was obtained from orchiectomized animals. Epididymis tail sperm retrieval was performed by flotation technique and then submitted to the swin-up test to remove the unfeasible sperm and cellular waste. After evaluation of concentration and motility, the sperm were diluted by the “One Step” method in Tris yolk and / or citrate yolk and then packed in previously identified 0.25mL straws at a concentration of 25 x 106 viable sperm. Soon they remained in stabilization for 2 hours at 5 ° C. After that they were placed in nitrogen vapor for 15 minutes, and finally, dipped in liquid nitrogen and stored in cryogenic cylinder. The thawing was performed in a 37 ° C water bath for one minute, and then motility and vigor were evaluated by x100 magnification Phase Contrast microscopy. For sperm viability evaluation, the Tripan Blue/Giemsa vital stain was used. In the analysis of thawed semen, Tris-yolk extender was statistically superior to Yolk Citrate in the motility, vigor and morphology of dog epididymis sperm variables. The present study shows that it is possible to recovery and preserve sperm from the canid epididymis using tris-yolk cryoprotectant extender.(AU)

Congelação de espermatozoides recuperados do epidídimo de cão (Canis familiares) / Spermatozoa freezing recovered from dog epididymis (Canis familiares)

O presente estudo tem como objetivo avaliar o espermatozoide recuperado do epidídimo congelado/descongelado em diferentes diluidores. O experimento foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal do Setor Palotina no período de julho de 2017 a julho de 2019. Um mínimo de 40 CTE (complexo testículo epidídimo) de cães foi obtido de animais orquiectomizados. A recuperação dos espermatozoides da cauda do epidídimo foi realizada pela técnica de flutuação e submetida ao teste de swin-up para remoção dos resíduos celulares e espermatozoides inviáveis. Após a avaliação da concentração e motilidade, os espermatozoides foram diluidos pelo método “One Step” em Tris gema e/ou citrato gema e logo envazados em palhetas de 0,25mL numa concentração de 25 x 106 de espermatozoides viáveis. Logo as mesmas permaneceram em estabilização por 2 horas a temperatura de 5°C. Após foram colocadas em vapor de nitrogênio por 15 minutos, e por fim, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas em botijão criobiológico. A descongelação foi realizada em banho maria a 37°C por um minuto, e após avaliou-se a motilidade e vigor em microscopia de Contraste de Fase 100x. Para avaliação da viabilidade espermática, foi utilizada a coloração vital Azul de Tripan/Giemsa. Na análise do sêmen descongelado, o diluente Tris-gema foi estatisticamente superior ao Citratogema nas variáveis motilidade, vigor e morfologia de espermatozoides epididimarios de cão. O presente estudo, mostra que é possível recuperar e preservar espermatozoides provenientes do epidídimo de canídeos utilizando meio crioprotetor a base de tris-gema.

The present study aims to evaluate sperm recovered from frozen / thawed epididymis in different extenders. The experiment was carried out in Animal Reproduction Laboratory at the Veterinary Hospital at the Palotina Sector from July 2017 to July 2019. A minimum of 40 ETC (epididymis testis complex) from dogs was obtained from orchiectomized animals. Epididymis tail sperm retrieval was performed by flotation technique and then submitted to the swin-up test to remove the unfeasible sperm and cellular waste. After evaluation of concentration and motility, the sperm were diluted by the “One Step” method in Tris yolk and / or citrate yolk and then packed in previously identified 0.25mL straws at a concentration of 25 x 106 viable sperm. Soon they remained in stabilization for 2 hours at 5 ° C. After that they were placed in nitrogen vapor for 15 minutes, and finally, dipped in liquid nitrogen and stored in cryogenic cylinder. The thawing was performed in a 37 ° C water bath for one minute, and then motility and vigor were evaluated by x100 magnification Phase Contrast microscopy. For sperm viability evaluation, the Tripan Blue/Giemsa vital stain was used. In the analysis of thawed semen, Tris-yolk extender was statistically superior to Yolk Citrate in the motility, vigor and morphology of dog epididymis sperm variables. The present study shows that it is possible to recovery and preserve sperm from the canid epididymis using tris-yolk cryoprotectant extender.

Adição de vitamina e selênio no sêmen refrigerado de cães da raça blue heeler

A utilização de sêmen refrigerado é comum na prática reprodutiva devido ao fácil manuseio e baixo custo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a vitamina E e selênio como antioxidantes para conservação. No controle foi visualizada alterações causadas pelo tempo desde a segunda avaliação, nas amostras com vitamina E houve preservação da viabilidade espermática por mais tempo. O acréscimo de selênio não demonstrou diferença estatística na preservação espermática. Desta forma, concluiu-se que o uso de vitamina e mostrou ser eficiente na conservação do sêmen, enquanto a adição de selênio à vitamina E não demonstrou diferença estatística.

The use of cooled semen is common in reproductive practice because of its easy handling and low cost. The objective of this work was to evaluate vitamin E and selenium as antioxidants for conservation. In the samples control was visualized changes caused by the time since the second evaluation, in the samples with vitamin E there was preservation of the sperm viability for longer. The addition of selenium did not show statistical difference in sperm preservation. Thus, it was concluded that the use of vitamin E showed to be efficient in the conservation of semen, while the addition of selenium to vitamin E did not show statistical difference.

Adição de vitamina e selênio no sêmen refrigerado de cães da raça blue heeler

A utilização de sêmen refrigerado é comum na prática reprodutiva devido ao fácil manuseio e baixo custo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a vitamina E e selênio como antioxidantes para conservação. No controle foi visualizada alterações causadas pelo tempo desde a segunda avaliação, nas amostras com vitamina E houve preservação da viabilidade espermática por mais tempo. O acréscimo de selênio não demonstrou diferença estatística na preservação espermática. Desta forma, concluiu-se que o uso de vitamina e mostrou ser eficiente na conservação do sêmen, enquanto a adição de selênio à vitamina E não demonstrou diferença estatística.(AU)

The use of cooled semen is common in reproductive practice because of its easy handling and low cost. The objective of this work was to evaluate vitamin E and selenium as antioxidants for conservation. In the samples control was visualized changes caused by the time since the second evaluation, in the samples with vitamin E there was preservation of the sperm viability for longer. The addition of selenium did not show statistical difference in sperm preservation. Thus, it was concluded that the use of vitamin E showed to be efficient in the conservation of semen, while the addition of selenium to vitamin E did not show statistical difference.(AU)

Alterações hematológicas e nas concentrações de glicose ocorridas nas diferentes fases do ciclo estral de cadelas / Hematological changes and glucose concentrations occurred in the different phases of the cycke of bitches

O ciclo estral de cadelas é influenciado por diversos hormônios que além das alterações uterinas, causamefeitos sistêmicos, como é o caso da progesterona, que leva à resistência a insulina, reduzindo sua ligaçãoaos receptores celulares e assim, o transporte de glicose nos tecidos. Com o objetivo de auxiliar os médicosveterinários da prática clínica, este estudo propôs relacionar as alterações hematológicas e concentração deglicose plasmática nas diferentes fases do ciclo estral de cadelas, identificando a fase do ciclo por citologiavaginal. Os resultados obtidos não tiveram significância estatística, porém demonstraram discreto aumentona glicose durante a fase progesterônica.

The estrous cycle of bitches is influenced by several hormones that, in addition to uterine changes, causesystemic effects, such as progesterone, which leads to insulin resistance, reducing its binding to cellularreceptors and thus, the transport of glucose into tissues. With the objective of assisting veterinarians inclinical practice, this study proposed to relate the hematological changes and plasma glucose concentrationin the different phases of the estral cycle of bitches, identifying the phase of the cycle by vaginal cytology.The results obtained were not statistically significant, but showed a slight increase in glucose during theprogesterone phase.

Crioprotetor para sêmen de carneiro a base de plasma de gema mantém membrana acrossomal intacta após a descongelação / Ram semen cryoprotector based on egg yolk plasma maintain the viability of acrosomal membrane

O presente estudo teve como objetivo avaliar a capacidade crioprotetora das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) presentes no plasma de gema de ovo, adicionado ao trihidroxiaminometano (TRIS) para congelar sêmen ovino. Trinta e seis ejaculados foram coletados para formar 12 "pool". Cada alíquota de sêmen foi diluída em TRIS-gema de ovo (TRISG) ou TRIS- plasma de gema de ovo (TRISP) antes de congelar o sêmen. Para a obtenção do plasma da gema de ovo, foi utilizado o método de ultracentrifugação. Após o descongelamento, não houve diferença entre os dois extensores em relação aos parâmetros seminais (motilidade, viabilidade, membrana acrossômica e plasma). No entanto, no Teste de Termo Resistência Lenta (TTRL - 4h/38°C), o sêmen congelado com TRISP resultou no aumento do número de espermatozoides com acrossoma intacto (P 0,032). Conclui-se que o diluente TRISP é uma alternativa para criopreservação do sêmen de carneiros, pois permite uma melhora da característica seminal em relação ao diluente TRIS gema, mas sem a necessidade do processo de purificação das LDL.(AU)

The present study aimed to evaluate the cryoprotectant low-density lipoprotein (LDL) present in the plasma of egg yolk added to the extender trihidroxiaminometano (TRIS) for freezing ram semen. Thirty-six ejaculates were collected to form 12 pool. Each aliquot of semen was diluted in TRIS-egg yolk (TRISG) or TRIS-egg yolk plasma (TRISP) before freezing the semen. The plasma of egg yolk was obtained by ultracentrifugation. After thawing, no difference was detected between the two extenders in relation to seminal parameters (motility, viability, plasma membrane and acrosome). However, in the thermal resistance slow test (4h in a water bath at 38°C), the semen frozen with TRISP resulted in higher number of sperm with intact acrosome than those with TRISG (P 0.032). It was concluded that the TRISP extender is an alternative for cryopreservation of ram semen, once it improves the semen characteristics in comparison to TRISG, avoiding the purification process of LDL.

Crioprotetor para sêmen de carneiro a base de plasma de gema mantém membrana acrossomal intacta após a descongelação / Ram semen cryoprotector based on egg yolk plasma maintain the viability of acrosomal membrane

O presente estudo teve como objetivo avaliar a capacidade crioprotetora das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) presentes no plasma de gema de ovo, adicionado ao trihidroxiaminometano (TRIS) para congelar sêmen ovino. Trinta e seis ejaculados foram coletados para formar 12 "pool". Cada alíquota de sêmen foi diluída em TRIS-gema de ovo (TRISG) ou TRIS- plasma de gema de ovo (TRISP) antes de congelar o sêmen. Para a obtenção do plasma da gema de ovo, foi utilizado o método de ultracentrifugação. Após o descongelamento, não houve diferença entre os dois extensores em relação aos parâmetros seminais (motilidade, viabilidade, membrana acrossômica e plasma). No entanto, no Teste de Termo Resistência Lenta (TTRL - 4h/38°C), o sêmen congelado com TRISP resultou no aumento do número de espermatozoides com acrossoma intacto (P<0,032). Conclui-se que o diluente TRISP é uma alternativa para criopreservação do sêmen de carneiros, pois permite uma melhora da característica seminal em relação ao diluente TRIS gema, mas sem a necessidade do processo de purificação das LDL.

The present study aimed to evaluate the cryoprotectant low-density lipoprotein (LDL) present in the plasma of egg yolk added to the extender trihidroxiaminometano (TRIS) for freezing ram semen. Thirty-six ejaculates were collected to form 12 pool. Each aliquot of semen was diluted in TRIS-egg yolk (TRISG) or TRIS-egg yolk plasma (TRISP) before freezing the semen. The plasma of egg yolk was obtained by ultracentrifugation. After thawing, no difference was detected between the two extenders in relation to seminal parameters (motility, viability, plasma membrane and acrosome). However, in the thermal resistance slow test (4h in a water bath at 38°C), the semen frozen with TRISP resulted in higher number of sperm with intact acrosome than those with TRISG (P<0.032). It was concluded that the TRISP extender is an alternative for cryopreservation of ram semen, once it improves the semen characteristics in comparison to TRISG, avoiding the purification process of LDL.

Influencia do tempo da coleta à diluição sobre a viabilidade do sêmen ovino descongelado / Influence of time between the collection and dilution on the thawed sheep semen viability

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tempo após a coleta à diluição sobre o espermatozoide de carneiro, visando à integridade das membranas plasmática e acrossomal e da motilidade espermática após descongelamento. Foram utilizados sete Carneiros das raças Ille de France com idade média de três anos. As coletas de sêmen foram realizadas com uso de vagina artificial uma vez por semana, perfazendo 3 coletas por animal, totalizando 21 ejaculados. O diluidor usado foi Tris-gema. Imediatamente após a colheita o ejaculado foi dividido em quatro alíquotas iguais, sendo a primeira diluída em tempo 0 (T0), a segunda 5 minutos (T5), a terceira dez minutos (T10) e a quarta 15 minutos (T15) após a primeira respectivamente a 35ºC em banho maria numa concentração de aproximadamente 200x106 sptz/mL. Após a diluição empregando o método “OneStep”, o sêmen foi envasado em palhetas de 0,5mL previamente identificadas, na concentração de 100x106 sptz/palhetas. Mantidas por 2h a 5ºC, em seguida, foram expostas ao vapor de nitrogênio líquido por 15 min. Decorrido esse tempo, as palhetas foram armazenadas em botijão com nitrogênio líquido a -196 ºC. A viabilidade das membranas plasmática e acrossomal foram avaliadas pela coloração supravital tripan blue-giemsa hiposmótica (TBGH). Não houve variação significativa dos parâmetros seminais nos diferentes intervalos de tempo (P>0,05) na diluição. No sêmen descongelado houve diferença significativa na motilidade entre T0 e T15. (P<0,009) e na integridade da membrana plasmática entre T0 a 10 (P<0,02), e T15 (P<0,009), com redução significativa nos mesmos tempos para o acrossoma (P<0,01) e (P<0,006) respectivamente. Conclui-se que quanto mais breve a exposição do sêmen ovino ao meio diluidor, menor será o dano ao espermatozoide. (AU)

The aim of this study was to evaluate the effect of time after semen collection until dilution on sheep spermatozoa, aiming to the integrity of plasmatic and acrosome membranes and semen motility after thawing. Seven ram Ille de France breeds three years old were used. The semen collections were collected using an artificial vagina once a week, 3 ejaculates per animal. The extender used was Tris-yolk. Immediately after collection the ejaculate was divided into four equal aliquots, diluted in the first time 0 (T0), the second, 5 minutes (T5), the third, ten minutes (T10) and fourth, 15 minutes (T15) being respectively after the first at 35 º C in a water bath at a concentration of approximately 200x106 sperm / ml. After dilution, employing the "One Step" method, the semen was packaged in 0.5 mL straws, previously identified and the concentration of 100x106 sperm / straws. Maintained for 2 h at 5 ° C, then, were exposed to nitrogen vapor for 15 min. After this time, the straws were stored in liquid nitrogen cylinder at -196 °C. The viability of plasmatic and acrosome membranes were evaluated by hyposmotic trypan blue-Giemsa staining (HTBG). There was no significant variation of seminal parameters in different time intervals (P> 0.05) in dilution. In thawed semen was detected significant difference in motility between times T0 and T15 (P <0.009) and plasma membrane integrity between T0 to T10 (P <0.02), and T15 (P <0.009), with significant reductions at the same times for the acrosome (P <0.01) and (P<0.006) respectively. We conclude that the faster dilution of semen after collection, fewer injuries occur to the sperm. (AU)

Influencia do tempo da coleta à diluição sobre a viabilidade do sêmen ovino descongelado / Influence of time between the collection and dilution on the thawed sheep semen viability

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tempo após a coleta à diluição sobre o espermatozoide de carneiro, visando à integridade das membranas plasmática e acrossomal e da motilidade espermática após descongelamento. Foram utilizados sete Carneiros das raças Ille de France com idade média de três anos. As coletas de sêmen foram realizadas com uso de vagina artificial uma vez por semana, perfazendo 3 coletas por animal, totalizando 21 ejaculados. O diluidor usado foi Tris-gema. Imediatamente após a colheita o ejaculado foi dividido em quatro alíquotas iguais, sendo a primeira diluída em tempo 0 (T0), a segunda 5 minutos (T5), a terceira dez minutos (T10) e a quarta 15 minutos (T15) após a primeira respectivamente a 35ºC em banho maria numa concentração de aproximadamente 200x106 sptz/mL. Após a diluição empregando o método “OneStep”, o sêmen foi envasado em palhetas de 0,5mL previamente identificadas, na concentração de 100x106 sptz/palhetas. Mantidas por 2h a 5ºC, em seguida, foram expostas ao vapor de nitrogênio líquido por 15 min. Decorrido esse tempo, as palhetas foram armazenadas em botijão com nitrogênio líquido a -196 ºC. A viabilidade das membranas plasmática e acrossomal foram avaliadas pela coloração supravital tripan blue-giemsa hiposmótica (TBGH). Não houve variação significativa dos parâmetros seminais nos diferentes intervalos de tempo (P>0,05) na diluição. No sêmen descongelado houve diferença significativa na motilidade entre T0 e T15. (P<0,009) e na integridade da membrana plasmática entre T0 a 10 (P<0,02), e T15 (P<0,009), com redução significativa nos mesmos tempos para o acrossoma (P<0,01) e (P<0,006) respectivamente. Conclui-se que quanto mais breve a exposição do sêmen ovino ao meio diluidor, menor será o dano ao espermatozoide.

The aim of this study was to evaluate the effect of time after semen collection until dilution on sheep spermatozoa, aiming to the integrity of plasmatic and acrosome membranes and semen motility after thawing. Seven ram Ille de France breeds three years old were used. The semen collections were collected using an artificial vagina once a week, 3 ejaculates per animal. The extender used was Tris-yolk. Immediately after collection the ejaculate was divided into four equal aliquots, diluted in the first time 0 (T0), the second, 5 minutes (T5), the third, ten minutes (T10) and fourth, 15 minutes (T15) being respectively after the first at 35 º C in a water bath at a concentration of approximately 200x106 sperm / ml. After dilution, employing the "One Step" method, the semen was packaged in 0.5 mL straws, previously identified and the concentration of 100x106 sperm / straws. Maintained for 2 h at 5 ° C, then, were exposed to nitrogen vapor for 15 min. After this time, the straws were stored in liquid nitrogen cylinder at -196 °C. The viability of plasmatic and acrosome membranes were evaluated by hyposmotic trypan blue-Giemsa staining (HTBG). There was no significant variation of seminal parameters in different time intervals (P> 0.05) in dilution. In thawed semen was detected significant difference in motility between times T0 and T15 (P <0.009) and plasma membrane integrity between T0 to T10 (P <0.02), and T15 (P <0.009), with significant reductions at the same times for the acrosome (P <0.01) and (P<0.006) respectively. We conclude that the faster dilution of semen after collection, fewer injuries occur to the sperm.

Estrus synchronization and Fixed Time Artificial Insemination (FTAI) in dairy buffaloes during seasonal anestrus

The aim of this work was to study estrus synchronization and fixed time artificial insemination (FTAI) in dairy buffaloes during season anestrus. One hundred thirty-nine dairy buffaloes in seasonal anestrus were divided in two groups as G1(n=66) and G2(n=73). The protocols for both the groups were the same until day (D)14:D0 administration of 2.0 mg estradiol benzoate and implantation of progesterone device (P4) for 14 days; D14 removal of P4 plus 150 mg of cloprostenol and 400 IU of equine chorionic gonadotropin. On D16, G1 received 10 mg of buserelin and G2 100 mg deslorelin acetate. On D17, both the groups were submitted to FTAI. Ultrasonographic examinations of ovaries were performed on D0, D14, D16 and D17. Results showed that pregnancy rates in G1 and G2 were 20 and 41% (p<0.05) and the ovulation rates were 16.6 and 37%, respectively (p<0.05). The dominant follicle (DF) diameter on D16 was 7.9 mm in G1 and 8.9 mm in G2 (p>0.05). Thirty-five percent of the animals in G1 and 54.1% in G2 showed a diameter DF greater than 8.0 mm on D16 (p>0.05). Thus, it could be concluded that the protocols synchronized the estrus, leading the concentration of the parturitions in the period of low milk production. Deslorelin was more efficient than buserelin due the higher percentage of DF ovulation and higher pregnancy rates.

Comparison between deep intracornual artificial insemination (dIAI) and conventional artificial insemination (AI) using low concentration of spermatozoa in beef cattle

This study aimed to compare the pregnancy rate using the conventional artificial insemination (AI) or deep intracornual artificial insemination (DIAI), with low number of spermatozoa (4.0 million sperm) in 270 Nelore cows. The animals were divided in two groups (G: G1 (135 cows) conventional AI was performed (=semen deposition in the uterine body) and in G2 (135 cows) to DIAI, in ipsilateral horn where the dominant follicle in the ovary had previously been detected, by ultrasound examinations. For both the methods, a single artificial insemination was carried out after visual estrus observation, checked three times a day (morning, afternoon and evening). The pregnancy diagnosis after 45 days was conducted by ultrasound. Results showed a better pregnancy rate in the DIAI group (67.4% - p<0.01), when compared to conventional AI (48.8%) with low spermatozoa concentration.

Induction of ovulation in quarter horse mares through the use of deslorelin acetate and human chorionic gonadotrophin (hCG)

The aim this study was to compare two protocols of induction for ovulation by desloreline acetate and hCG in Quarter Horse mares. The choice of the animals was based on the observations by the estrus, by rectal palpation of the ovaries and by ultrassonography of the follicular dynamics. After estrus detection and follicle control, the measurement of the follicles and the classification of uterus were carried out. The animals that had dominant follicle (diameter more than 35 mm) and swollen uterus were used. In these conditions, the mares received hCG or desloreline acetate. Once ovulation occurred, the artificial insemination was carried. Two groups were performed: G1 (20 animals) received 1.5 mg desloreline acetate and G2 (20 animals) received 1700 IU of hCG. Following 6h intervals, the control follicular was performed by ultrasonography. The follicular average diameter was 42.6 cm for the groups and set up a score of 0 to 3 of uterine edema displayed by the device as well as the time of ovulation. In conclusion, the desloreline acetate showed better performance than hCG, because the ovulation was induced in less time (nine hours than hCG) (p<0.05).The pregnancy rate was 80 and 75 percent, respectively in G1 and G2.