RESUMO
Salmonella enterica serovar Typhimurium is an animal welfare and public health concern due to its ability to parasite livestock and potentially contaminate pork products. To reduce Salmonella shedding and the risk of pork contamination, antibiotic therapy is used and can contribute to antimicrobial resistance. Here we hypothesized that immune system education by the microbiota can play a role in intestinal resilience to infection. We used amoxicillin (15mg/Kg) to modulate the intestinal microbiome of 10 piglets, paired with same age pigs that received a placebo (n = 10) from 0 to 14 days of age. Animals were euthanized at 4-weeks old. Each pig donated colon sections for ex vivo culture (n = 20 explants/pig). Explants were inoculated with S. Typhimurium, PBS or LPS (n = 6 explants/pig/group, plus technical controls). The gut bacteriome was characterized by sequencing of the 16S rRNA at 7, 21 days of age, and upon in vitro culture. Explants response to infection was profiled through high-throughput mRNA sequencing. In vivo antibiotic treatment led to ß-diversity differences between groups at all times (P<0.05), while α-diversity did not differ between amoxicillin and placebo groups on day 21 and at euthanasia (P<0.03 on day 7). Explant microbiomes were not different from in vivo. In vitro challenge with S. Typhimurium led to lower necrosis scores in explants from amoxicillin-treated pigs, when compared to explants placebo-treated pigs (P<0.05). This was coupled with the activation of immune-related pathways in explants from amoxicillin-treated pigs (IL-2 production, NO production, BCR activation), when compared to placebo-treated pigs. In addition, several DNA repair and intestinal wound healing pathways were also only activated in explants from amoxicillin-treated pigs. Taken together, these findings suggest that immune education by the amoxicillin-disturbed microbiota may have contributed to mitigate intestinal lesions following pathogen exposure.
Assuntos
Antibacterianos/farmacologia , Epigênese Genética/efeitos dos fármacos , Microbioma Gastrointestinal/efeitos dos fármacos , Salmonella typhimurium/patogenicidade , Amoxicilina/farmacologia , Animais , Animais Recém-Nascidos , Bactérias/genética , Bactérias/isolamento & purificação , Colo/citologia , Colo/microbiologia , Colo/patologia , Regulação para Baixo/efeitos dos fármacos , Fezes/microbiologia , Análise de Componente Principal , RNA Ribossômico 16S/química , RNA Ribossômico 16S/metabolismo , Salmonelose Animal/imunologia , Suínos , Doenças dos Suínos/imunologia , Regulação para Cima/efeitos dos fármacosRESUMO
Neste trabalho, nós relatamos evidencias de que a associação entre fosfofrutocinase e F-actina pode ser afetada por estímulos pela insulina em homogeneizados de músculo esquelético de coelho e que esta associação pode ser um mecanismo de regulação da fosfofrutocinase. Através de tecnicas de co-sedimentação, nós observamos que em tecidos estimulados pela insulina, aproximadamente 70% da atividade fosfofrutocinásica esta co-localizada a fração enriquecida com actina, contra 28% no controle. Este fenômeno é acompanhado por um aumento de 100% na atividade específica da fosfofrutocinase em homogeneizados estimulados. F-actina purificada causou um aumento de 230% na atividade da fosfofrutocinase e alterou seus parâmetros cinéticos. A presença de F-actina aumentou a afinidade da fosfofrutocinase pela frutose 6-fosfato, sem alterar, no entanto, a velocidade máxima (Vmax). Nós propomos que a modulação da distribuição celular da fosfofrutocinase pode ser um dos mecanismos de controle do fluxo glicolítico em músculos de mamíferos pela insulina.
Assuntos
Animais , Coelhos , Actinas , Insulina , Músculo Esquelético , Fosfofrutoquinases , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Peso MolecularRESUMO
In this work, we report evidences that the association of phosphofructokinase and F-actin can be affected by insulin stimulation in rabbit skeletal muscle homogenates and that this association can be a mechanism of phosphofructokinase regulation. Through co-sedimentation techniques, we observed that on insulin-stimulated tissues, approximately 70% of phosphofructokinase activity is co-located in an actin-enriched fraction, against 28% in control. This phenomenon is accompanied by a 100% increase in specific phosphofructokinase activity in stimulated homogenates. Purified F-actin causes an increase of 230% in phosphofructokinase activity and alters its kinetic parameters. The presence of F-actin increases the affinity of phosphofructokinase for fructose 6-phosphate nevertheless, with no changes in maximum velocity (Vmax). Here we propose that the modulation of cellular distribution of phosphofructokinase may be one of the mechanisms of control of glycolytic flux in mammalian muscle by insulin.
Assuntos
Actinas/farmacologia , Insulina/farmacologia , Músculo Esquelético/enzimologia , Fosfofrutoquinases/efeitos dos fármacos , Actinas/metabolismo , Animais , Eletroforese em Gel de Poliacrilamida , Ativação Enzimática/efeitos dos fármacos , Glucose/metabolismo , Glicólise , Peso Molecular , Músculo Esquelético/efeitos dos fármacos , Fosfofrutoquinases/fisiologia , CoelhosRESUMO
Objetivo: A Associaçäo entre criptosporidiose e diarréia persistente tem sido estudada em vários países. O presente estudo pretente verificar a incidência desta parasitose entre crianças com diarréia persistente e comparar clínica e laboratorialmente os parasitados e os näo parasitados. Métodos: Estudo retrospectivo realizado no Hospital Santo Antônio, um hospital pediátrico de referência de Porto Alegre, com 70 lactentes internados por diarréia persistente e acompanhado pelo serviço de Gastroenterologia Pediátrica, menores de 2 anos, com anti-HIV näo reagente, e sem outras causas de diarréia. Foram avaliados a duraçäo total da diarréia, a duraçäo da hospitalizaçäo, intercorrências clínicas, a história pregressa de diarréia, o estado nutricional, d-xilosemia e o manejo dietético. Resultados: Criptosporidium sp foi encontrado em 14 (20 por cento) lactentes e foi mais freqüente entre lactentes menores de um ano (23 por cento). A duraçäo da hospitalizaçäo e a duraçäo da diarréia foram similares nos dois grupos. Algum grau de desnutriçäo esteve presente em 91,5 por cento dos pacientes, 92,8 por cento dos parasitados e 91 por cento dos näo parasitados. O manejo dietético foi similar nos dois grupos. Houve tendência a menor xilosemia entre os parasitados, mais evidente no primeiro ano de vida (15,9 +/- 8,2 e 33,8 +/- 19,9 p=0,007)...
