Identificação de bactérias no sêmen de ovinos em diferentes sistemas de criação e o efeito do uso de Kilol-L® / Identification of bacteria in the semen in different breeding systems and the effect of Kilol-L®

O objetivo deste trabalho foi identificar e quantificar as bactérias do sêmen fresco de ovino, avaliar o uso do higienizante Kilol-L® antes da coleta do sêmen e testar a sensibilidade das cepas bacterianas frente ao antibiograma. Foram selecionados 24 ovinos machos, clinicamente sadios, com idade média de quatro anos, da raça Santa Inês, agrupados em dois sistemas de criação: a pasto (n=12) e confinamento (n=12). Dos 120 ejaculados coletados, 99 tiveram crescimento bacteriano correspondendo a 82,5% das amostras. Os gêneros bacterianos isolados com maior frequência foram Staphylococcus spp., Bacillus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Listeria spp.e Escherichia coli. Dos antibióticos testados, a amicacina e a gentamicina foram 100% eficazes para Bacillus spp. e E. coli. O ceftiofur foi efetivo para todas as bactérias isoladas, exceto Rodococcus equi. Streptococcus spp. foram sensíveis à ampicilina e eritromicina, Staphylococcus spp. foram sensíveis à gentamicina. O uso Kilol-L® reduziu o número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) do ejaculado sem prejudicar a sua qualidade. Dos antibióticos testados, ceftiofur e gentamicina foram os mais efetivos frente às cepas bacterianas isoladas. Dessa forma, a utilização desses antibióticos no meio diluidor do sêmen ovino é uma alternativa para controlar o crescimento bacteriano.(AU)

The objective of this study was to identify and quantify bacteria from fresh ram semen, evaluate the use of sanitizer Kilol-L® prior to semen collection, and test the sensitivity of bacterial strains against antibiotics. We selected 24 Santa Inês rams clinically healthy, at 4 years of aged, and grouped them into two systems: on pasture (n=12) and confined (n=12). The microbiological results indicated that of the total of 120 ejaculates, 99 had bacterial growth, representing 82.5% of the samples. The most frequently isolated bacteria were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Escherichia coli, Listeria spp., Staphylococcus spp., and Streptococcus spp. From the tested antibiotics, amicacin and gentamicin were 100% effective for Bacillus spp. and E. Coli. Ceftiofur was effective for all isolates except for Rodococcus equi. Streptococcus spp. were susceptible to ampicillin and erythromycin and Staphylococcus spp. were sensitive to gentamycin. The use of Kilol-L® reduced the number of Colony Forming Units (CFU/mL) from ejaculate without damaging semen quality. From the tested antibiotics, ceftiofur and gentamicin were more effective against the isolated bacterial strains; thus the use of these antibiotics in the ram semen extender is an alternative to control bacterial growth.(AU)

Identificação de bactérias no sêmen de ovinos em diferentes sistemas de criação e o efeito do uso de Kilol-L® / Identification of bacteria in the semen in different breeding systems and the effect of Kilol-L®

O objetivo deste trabalho foi identificar e quantificar as bactérias do sêmen fresco de ovino, avaliar o uso do higienizante Kilol-L® antes da coleta do sêmen e testar a sensibilidade das cepas bacterianas frente ao antibiograma. Foram selecionados 24 ovinos machos, clinicamente sadios, com idade média de quatro anos, da raça Santa Inês, agrupados em dois sistemas de criação: a pasto (n=12) e confinamento (n=12). Dos 120 ejaculados coletados, 99 tiveram crescimento bacteriano correspondendo a 82,5% das amostras. Os gêneros bacterianos isolados com maior frequência foram Staphylococcus spp., Bacillus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Listeria spp.e Escherichia coli. Dos antibióticos testados, a amicacina e a gentamicina foram 100% eficazes para Bacillus spp. e E. coli. O ceftiofur foi efetivo para todas as bactérias isoladas, exceto Rodococcus equi. Streptococcus spp. foram sensíveis à ampicilina e eritromicina, Staphylococcus spp. foram sensíveis à gentamicina. O uso Kilol-L® reduziu o número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) do ejaculado sem prejudicar a sua qualidade. Dos antibióticos testados, ceftiofur e gentamicina foram os mais efetivos frente às cepas bacterianas isoladas. Dessa forma, a utilização desses antibióticos no meio diluidor do sêmen ovino é uma alternativa para controlar o crescimento bacteriano.

The objective of this study was to identify and quantify bacteria from fresh ram semen, evaluate the use of sanitizer Kilol-L® prior to semen collection, and test the sensitivity of bacterial strains against antibiotics. We selected 24 Santa Inês rams clinically healthy, at 4 years of aged, and grouped them into two systems: on pasture (n=12) and confined (n=12). The microbiological results indicated that of the total of 120 ejaculates, 99 had bacterial growth, representing 82.5% of the samples. The most frequently isolated bacteria were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Escherichia coli, Listeria spp., Staphylococcus spp., and Streptococcus spp. From the tested antibiotics, amicacin and gentamicin were 100% effective for Bacillus spp. and E. Coli. Ceftiofur was effective for all isolates except for Rodococcus equi. Streptococcus spp. were susceptible to ampicillin and erythromycin and Staphylococcus spp. were sensitive to gentamycin. The use of Kilol-L® reduced the number of Colony Forming Units (CFU/mL) from ejaculate without damaging semen quality. From the tested antibiotics, ceftiofur and gentamicin were more effective against the isolated bacterial strains; thus the use of these antibiotics in the ram semen extender is an alternative to control bacterial growth.

Sincronização de estro com prostaglandina F2 alfa versus progestágeno associado à gonadotrofina coriônica equina (ecg) em ovelhas santa inês no Distrito Federal, Brasil / Estrus synchronization with prostaglandin F2 alfa compared to progestogen treatment associated with equine chorionic gonadotropin (ecg) in santa inês breed ewes reared in Federal District, Brazil

Este estudo teve por objetivo comparar o uso de um análogo da PGF2alfa à associação de progestágeno (MAP) com gonadotrofina coriônica equina (eCG) na sincronização do estro em ovelhas da raça Santa Inês. Foram utilizadas 38 fêmeas ovinas submetidas a dois protocolos de sincronização de estro, com os seguintes protocolos: PGF2alfa (duas doses de 0,53 mg de D-cloprostenol com nove dias de intervalo) e protocolo MAP+eCG (pessário intravaginal com 50 mg de acetato de medroxiprogesterona por doze dias e no momento da remoção do dispositivo aplicação de 250 UI de eCG, IM). Submeteram-se as ovelhas aos diferentes protocolos, com intervalo de dois ciclos estrais. Procedeu-se a uma ultrassonografia transretal no último dia do protocolo, para avaliação do diâmetro do maior e do segundo maior folículo, e à coleta de sangue no dia sete do ciclo estral, para avaliação da concentração sérica de P4. Exame laparoscópico foi realizado no dia 11, após o fim dos protocolos, para contagem de corpos lúteos. Para os parâmetros taxa de sincronização, diâmetro do maior e do segundo maior folículo, período do final do protocolo ao estro e taxa de ovulação, não se observaram diferenças entre os mesmos. Foi observado que o protocolo MAP+eCG produziu concentrações séricas de P4 maiores do que o protocolo PGF2alfa (3,9 e 2,8 ng/ mL, respectivamente, P<0,05). Nas condições do presente estudo, embora o protocolo MAP+eCG tenha apresentado superioridade em relação à concentração sérica de P4, o protocolo PGF2alfa foi tão eficiente quanto aquele em sincronizar o estro.(AU)

The aim of this study was to compare two protocols of estrus synchronization in Santa Inês ewes. Thirty-eight ewes were randomly divided into two groups of estrus synchronization: protocol PGF2alpha (two doses of 0.530 mg of PGF2alpha, nine days apart) and protocol MAP+eCG (intravaginal sponge impregnated with medroxyprogesterone acetate, for 12 days, and then an injection of 250 IU of eCG). The experiment was in a cross-over design, two estrous cycles apart. On the final day of protocol, a transrectal ultrasound examination was carried out to measure the size of the largest and second largest ovarian follicles and on day 7 of estrous cycle blood was collected to measure serum P4 concentration. Laparoscopy was carried out on day 11 after the end of protocols to count corpora lutea. Synchronization rate, size of largest and second largest ovarian follicles, interval between the end of the protocol to estrus and ovulation rate did not differ between protocols. Ewes synchronized with MAP+eCG had greater serum P4 concentrations than ewes synchronized with PGF2alpha (3.9 and 2.8 ng/mL, respectively, P<0.05). Based on the results, it may be concluded that, although the protocol MAP+eCG was superior in inducing higher serum concentration of P4, the protocol PGF2alpha was equivalent regarding estrus synchronization.(AU)

Sincronização de estro com prostaglandina F2 alfa versus progestágeno associado à gonadotrofina coriônica equina (ecg) em ovelhas santa inês no Distrito Federal, Brasil / Estrus synchronization with prostaglandin F2 alfa compared to progestogen treatment associated with equine chorionic gonadotropin (ecg) in santa inês breed ewes reared in Federal District, Brazil

Este estudo teve por objetivo comparar o uso de um análogo da PGF2alfa à associação de progestágeno (MAP) com gonadotrofina coriônica equina (eCG) na sincronização do estro em ovelhas da raça Santa Inês. Foram utilizadas 38 fêmeas ovinas submetidas a dois protocolos de sincronização de estro, com os seguintes protocolos: PGF2alfa (duas doses de 0,53 mg de D-cloprostenol com nove dias de intervalo) e protocolo MAP+eCG (pessário intravaginal com 50 mg de acetato de medroxiprogesterona por doze dias e no momento da remoção do dispositivo aplicação de 250 UI de eCG, IM). Submeteram-se as ovelhas aos diferentes protocolos, com intervalo de dois ciclos estrais. Procedeu-se a uma ultrassonografia transretal no último dia do protocolo, para avaliação do diâmetro do maior e do segundo maior folículo, e à coleta de sangue no dia sete do ciclo estral, para avaliação da concentração sérica de P4. Exame laparoscópico foi realizado no dia 11, após o fim dos protocolos, para contagem de corpos lúteos. Para os parâmetros taxa de sincronização, diâmetro do maior e do segundo maior folículo, período do final do protocolo ao estro e taxa de ovulação, não se observaram diferenças entre os mesmos. Foi observado que o protocolo MAP+eCG produziu concentrações séricas de P4 maiores do que o protocolo PGF2alfa (3,9 e 2,8 ng/ mL, respectivamente, P<0,05). Nas condições do presente estudo, embora o protocolo MAP+eCG tenha apresentado superioridade em relação à concentração sérica de P4, o protocolo PGF2alfa foi tão eficiente quanto aquele em sincronizar o estro.

The aim of this study was to compare two protocols of estrus synchronization in Santa Inês ewes. Thirty-eight ewes were randomly divided into two groups of estrus synchronization: protocol PGF2alpha (two doses of 0.530 mg of PGF2alpha, nine days apart) and protocol MAP+eCG (intravaginal sponge impregnated with medroxyprogesterone acetate, for 12 days, and then an injection of 250 IU of eCG). The experiment was in a cross-over design, two estrous cycles apart. On the final day of protocol, a transrectal ultrasound examination was carried out to measure the size of the largest and second largest ovarian follicles and on day 7 of estrous cycle blood was collected to measure serum P4 concentration. Laparoscopy was carried out on day 11 after the end of protocols to count corpora lutea. Synchronization rate, size of largest and second largest ovarian follicles, interval between the end of the protocol to estrus and ovulation rate did not differ between protocols. Ewes synchronized with MAP+eCG had greater serum P4 concentrations than ewes synchronized with PGF2alpha (3.9 and 2.8 ng/mL, respectively, P<0.05). Based on the results, it may be concluded that, although the protocol MAP+eCG was superior in inducing higher serum concentration of P4, the protocol PGF2alpha was equivalent regarding estrus synchronization.

Coleta de sêmen ovino em estação ou decúbito lateral utilizando diferentes eletroejaculadores / Semen collection in rams standing up or in lateral recumbency using different electroejaculators

O experimento teve como objetivo avaliar e comparar dois eletroejaculadores (EEr): um automático (A – Biocom Ltda., Uberaba, MG) e outro manual (M – Duboi, Campo Grande, MS), utilizando dois métodos de contenção: estação (E) e decúbito lateral (D). Foram utilizados doze carneiros: Santa-Inês (n=9), Ile-de-France (n=2) e Texel (n=1). O sêmen foi coletado duas vezes por semana e as coletas realizadas três vezes em cada grupo (AD – automático em decúbito; AE – automático em estação; MD – manual em decúbito e ME – manual em estação) resultando em doze coletas. Antes e depois das coletas de sêmen, amostras de sangue foram coletadas para análise dos níveis plasmáticos de cortisol com objetivo de verificação do estresse entre os grupos e indivíduos. Procedeu-se à avaliação das coletas pelo tempo em segundos para obtenção da fração seminal, tempo de duração da fração seminal e porcentagem de carneiros que expuseram o pênis. Os parâmetros avaliados referentes ao sêmen foram: volume, aspecto, motilidade espermática progressiva, turbilhonamento, vigor espermático, número total de espermatozoides no ejaculado e morfologia espermática. Em 7,1% de todas as coletas não houve ejaculação, sendo que o grupo submetido ao tratamento AD (20%) foi responsável pela maior fração das coletas sem ejaculação (P0,05). No entanto, houve diferença entre indivíduos (P<0,05). As coletas de sêmen nos animais em decúbito demandaram menor tempo para atingir a fração seminal e também proporcionaram maior duração da fração seminal (P<0,05). O grupo MD obteve menor tempo em atingir a fração seminal e produziu um maior volume de sêmen quando comparado ao grupo AE (P<0,05). Os dados do experimento permitem concluir que o EEr automático e manual apresentaram resultados semelhantes, assim como as posições de coleta, decúbito ou estação.

The objective of the experiment was to evaluate and compare two electroejaculators: an automatic one (A – Biocom Ltda., Uberaba, MG) and a manual one (M – Duboi, Campo Grande, MS), using two methods of physical restrain: standing (E) or lateral recumbency (D). Twelve rams were used: Santa Inês (n=9), Ile-de-France (n=2) and Texel (n=1). Semen were collected twice a week and each animal had the semen collected three times in each group (AD – automatic in recumbency, AE – automatic in station, MD – manual in recumbency, and ME – manual in station) resulting in 12 collections. Blood samples were obtained before and after the semen collections to measure changes in circulating cortisol in order to measure stress among groups and individuals. The collections were evaluated per the time in seconds to obtain seminal fraction, time of seminal fraction and percentage of rams that exposed the penis. The collected semen parameters evaluated were: volume, aspect, progressive motility, wave motion, sperm vigor, total number of spermatozoa and sperm morphology. In 7.1% of the collections, there was no ejaculation, moreover, group AD was responsible for most of the collections without ejaculation (20%)(P0.05) relating to cortisol level after collections. However, there was difference among individuals (P<0.05). The collections in lateral recumbency were faster regarding achievement of seminal fraction and provided more time length for seminal fraction. The MD group required a shorter time length to achieve the seminal fraction and produced a greater volume of ejaculate in comparison to the AS group. It can be concluded by these results that both eletroejaculators (automatic and manual) had similar results as well as both methods of physical restrain (standing and lateral recumbency).

Caracterização de proteínas do plasma seminal e sua relação com parâmetros de qualidade do sêmen criopreservado em ovinos / Characterization of seminal plasma proteins and its relationship with quality parameters of frozen semen in ram

Os objetivos deste trabalho foram analisar o perfil proteico do plasma seminal ovino e identificar proteínas relacionadas com a congelabilidade do sêmen que possam ser utilizadas como marcadores para essa característica. Foram utilizados os ejaculados de cinco reprodutores, nos quais foram realizadas avaliações espermáticas e dos quais os plasmas seminais obtidos por centrifugação foram submetidos à eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Foram identificados 92 spots, considerando todos os animais analisados. A avaliação dos dados obtidos evidenciou variações significativas nos resultados das análises do sêmen dos animais e uma variabilidade no perfil proteico no plasma seminal dos carneiros. As proteínas 03 (7,9kDa; pI 6,35), 23 (13,6kDa; pI 5,01) e 31 (21,4kDa; pI 4,75) se destacaram, por apresentarem maior expressão e relações com as características espermáticas. Sugere-se que mais estudos sejam realizados para verificar se as proteínas 03, 23 e 31 podem ser utilizadas como marcadores da capacidade criopreservadora do sêmen.

The objective of this study was to analyze the protein profile of ram seminal plasma and to identify proteins associated with semen freezability, which could be used as marker for predicting this feature. Semen from five rams was used. The sperm analysis was held and the seminal plasma obtained by centrifugation was submitted to two-dimensional electrophoresis using acrylamide gel. Ninety two spots were identified considering the analyzed animals. The results showed a significant variation among sperm analysis of the animals and variability in the protein profile of the seminal plasma of the rams. The proteins 03 (7.9kDa; pI 6.35), 23 (13.6kDa; pI 5.01) e 31 (21.4kDa; pI 4.75) stood out because they showed higher expression and because of its relationship with the sperm characteristics. It is suggested more studies to verify if proteins 03, 23 and 31 could be used as markers of semen freezability.