RESUMO
This study evaluated the effect of glycerol (GLY), dimethyl sulfoxide (DMSO) and propylene glycol (PROH) in diameter of follicle, of oocyte and of granulosa cells number of preantral follicles cattle. Ovarian fragments were exposed to cryoprotectants at concentrations of 20 and 40% for 10 min. Then, the tissue was fixed in Carnoy and processed by traditional technique of histology. Slides were stained by hematoxylin and eosin and evaluated under optical microscope equipped with eyes wide with morphometric. Data were analyzed by ANOVA and Tukey test. Regarding diameter of the follicle, no difference was found among the control and the groups exposed to the cryoprotectants. However, in relation to the diameter of the oocyte, 40% concentration in all tested cryoprotectants the primary follicles showed reduction in diameter, including 20% of propylene glycol. For primary follicles, only 40% of glycerol presented difference from control group. For the granulosa cells 40% of DMSO and 20 and 40% of PROH showed significant reduction compared to control group, in primary follicles. In conclusion primary follicles were resistant to cryoprotectants effects. For the primary structures, glycerol, dimethyl sulfoxide and propylene glycol led to reduction of diameter of oocyte and number of granulosa cells but not of follicular diameter.
O objetivo, no presente estudo, foi avaliar o efeito do glicerol (GLI), dimetilsulfóxido (DMSO) e propilenoglicol (PROH) sobre o diâmetro do folículo, do ovócito e do número de células da granulosa de folículos pré-antrais bovinos. Fragmentos ovarianos foram imediatamente fixados em Carnoy (controle) ou expostos aos crioprotetores nas concentrações de 20 e 40%, por 10min. Após o período de exposição, o tecido ovariano também foi fixado em Carnoy e processado para inclusão em parafina. As secções (5) de tecido ovariano foram coradas em hematoxilina e eosina e analisadas ao microscópio de luz com ocular em escala micrométrica. Os dados foram analisados por ANOVA e teste Tukey. Em relação ao diâmetro do folículo primordial, nenhuma diferença foi encontrada entre o controle e os grupos expostos aos crioprotetores. Entretanto, em relação ao diâmetro do ovócito, na concentração de 40%, para todos os crioprotetores testados, os ovócitos primordiais apresentaram redução significativa do diâmetro, o que incluiu o PROH a 20%. Nas estruturas primárias, ocorreu redução dos ovócitos e folículos somente com o glicerol a 40%. Com relação ao número de células da granulosa das estruturas primordiais, o DMSO a 40% e o PROH a 20 e 40% levaram a redução significativa do diâmetro dos ovócitos e folículos em comparação ao grupo controle. Os folículos primários, para todos os crioprotetores testados,
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This study evaluated the effect of glycerol (GLY), dimethyl sulfoxide (DMSO) and propylene glycol (PROH) in diameter of follicle, of oocyte and of granulosa cells number of preantral follicles cattle. Ovarian fragments were exposed to cryoprotectants at concentrations of 20 and 40% for 10 min. Then, the tissue was fixed in Carnoy and processed by traditional technique of histology. Slides were stained by hematoxylin and eosin and evaluated under optical microscope equipped with eyes wide with morphometric. Data were analyzed by ANOVA and Tukey test. Regarding diameter of the follicle, no difference was found among the control and the groups exposed to the cryoprotectants. However, in relation to the diameter of the oocyte, 40% concentration in all tested cryoprotectants the primary follicles showed reduction in diameter, including 20% of propylene glycol. For primary follicles, only 40% of glycerol presented difference from control group. For the granulosa cells 40% of DMSO and 20 and 40% of PROH showed significant reduction compared to control group, in primary follicles. In conclusion primary follicles were resistant to cryoprotectants effects. For the primary structures, glycerol, dimethyl sulfoxide and propylene glycol led to reduction of diameter of oocyte and number of granulosa cells but not of follicular diameter.
O objetivo, no presente estudo, foi avaliar o efeito do glicerol (GLI), dimetilsulfóxido (DMSO) e propilenoglicol (PROH) sobre o diâmetro do folículo, do ovócito e do número de células da granulosa de folículos pré-antrais bovinos. Fragmentos ovarianos foram imediatamente fixados em Carnoy (controle) ou expostos aos crioprotetores nas concentrações de 20 e 40%, por 10min. Após o período de exposição, o tecido ovariano também foi fixado em Carnoy e processado para inclusão em parafina. As secções (5) de tecido ovariano foram coradas em hematoxilina e eosina e analisadas ao microscópio de luz com ocular em escala micrométrica. Os dados foram analisados por ANOVA e teste Tukey. Em relação ao diâmetro do folículo primordial, nenhuma diferença foi encontrada entre o controle e os grupos expostos aos crioprotetores. Entretanto, em relação ao diâmetro do ovócito, na concentração de 40%, para todos os crioprotetores testados, os ovócitos primordiais apresentaram redução significativa do diâmetro, o que incluiu o PROH a 20%. Nas estruturas primárias, ocorreu redução dos ovócitos e folículos somente com o glicerol a 40%. Com relação ao número de células da granulosa das estruturas primordiais, o DMSO a 40% e o PROH a 20 e 40% levaram a redução significativa do diâmetro dos ovócitos e folículos em comparação ao grupo controle. Os folículos primários, para todos os crioprotetores testados,
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The present study aimed to verify the incidence of bovine diploid oocytes when cooled at various maturation stages. Bovine cumulus-oocyte complexes were recovered from ovaries at a local slaughterhouse and divided into five groups: control group (uncooled oocytes), 0/4 h group (oocytes cooled at 4ºC before the onset of maturation), 0/29 (composed of oocytes cooled at 29ºC before the onset of maturation), 12/4 (cooled 12 h at 4ºC after the onset of maturation), and 12/29 h group (cooled 12 h at 29ºC after the onset of maturation). the oocytes remained cooled for 45 min. in all groups, the oocytes completed 24 h maturation. Subsequently, the cumulus cells were removed, and the denuded oocytes fixed on slides and stained with aceto-orcein. No differences (P > 0.05) in the incidence of diploid metaphase ii oocytes were observed between the control group (6.0%) and oocytes cooled at 4ºC and 29ºC before (8.9% and 8.0%) and after 12 h the onset of maturation (3.9% and 0.0%). These results suggest that the nuclear stage at which bovine oocytes are cooled does not affect the incidence of diploid oocytes after 24 h maturation. Key-Words: Bovine, cooling, diploid, in vitro maturation, oocytes.
O presente estudo objetivou verificar o efeito do resfriamento de ovócitos bovinos em diferentes estágios de maturação na ploidia. Ovócitos bovinos foram obtidos de ovários de abatedouro e divididos em cinco grupos: grupo-controle (ovócitos não resfriados); grupo 0/4 (ovócitos resfriados a 4ºC antes do inicio da maturação); grupo 0/29 (ovócitos resfriados a 29ºC antes do início da maturação); grupo 12/4 (ovócitos resfriados a 4ºC após doze horas de maturação); e grupo 12/29 (ovócitos resfriados a 29ºC após doze horas de maturação). Os ovócitos permaneceram resfriados por 45 minutos. Em todos os grupos os ovócitos completaram 24 horas de maturação. Em seguida, as células da corona radiata foram removidas e os ovócitos fixados em lâminas e corados com orceína acética. Não se observou diferença significativa (P>0,05) na incidência de metáfase II diplóide entre o grupo-controle (6,0%) e os grupos resfriados a 4ºC (8,9%) e 29ºC (8,0%) antes do começo da maturação e doze horas após o inicio da maturação (3,9% e 0,0%, respectivamente). Os resultados sugerem que resfriamento em diferentes períodos de maturação não afeta a ploidia de ovócitos bovinos após completarem 24 horas de maturação in vitro. Palavras-chaves: Bovinos, diplóide, ovócitos, maturação in vitro, resfriamento.
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The present study aimed to verify the incidence of bovine diploid oocytes when cooled at various maturation stages. Bovine cumulus-oocyte complexes were recovered from ovaries at a local slaughterhouse and divided into five groups: control group (uncooled oocytes), 0/4 h group (oocytes cooled at 4ºC before the onset of maturation), 0/29 (composed of oocytes cooled at 29ºC before the onset of maturation), 12/4 (cooled 12 h at 4ºC after the onset of maturation), and 12/29 h group (cooled 12 h at 29ºC after the onset of maturation). the oocytes remained cooled for 45 min. in all groups, the oocytes completed 24 h maturation. Subsequently, the cumulus cells were removed, and the denuded oocytes fixed on slides and stained with aceto-orcein. No differences (P > 0.05) in the incidence of diploid metaphase ii oocytes were observed between the control group (6.0%) and oocytes cooled at 4ºC and 29ºC before (8.9% and 8.0%) and after 12 h the onset of maturation (3.9% and 0.0%). These results suggest that the nuclear stage at which bovine oocytes are cooled does not affect the incidence of diploid oocytes after 24 h maturation. Key-Words: Bovine, cooling, diploid, in vitro maturation, oocytes.
O presente estudo objetivou verificar o efeito do resfriamento de ovócitos bovinos em diferentes estágios de maturação na ploidia. Ovócitos bovinos foram obtidos de ovários de abatedouro e divididos em cinco grupos: grupo-controle (ovócitos não resfriados); grupo 0/4 (ovócitos resfriados a 4ºC antes do inicio da maturação); grupo 0/29 (ovócitos resfriados a 29ºC antes do início da maturação); grupo 12/4 (ovócitos resfriados a 4ºC após doze horas de maturação); e grupo 12/29 (ovócitos resfriados a 29ºC após doze horas de maturação). Os ovócitos permaneceram resfriados por 45 minutos. Em todos os grupos os ovócitos completaram 24 horas de maturação. Em seguida, as células da corona radiata foram removidas e os ovócitos fixados em lâminas e corados com orceína acética. Não se observou diferença significativa (P>0,05) na incidência de metáfase II diplóide entre o grupo-controle (6,0%) e os grupos resfriados a 4ºC (8,9%) e 29ºC (8,0%) antes do começo da maturação e doze horas após o inicio da maturação (3,9% e 0,0%, respectivamente). Os resultados sugerem que resfriamento em diferentes períodos de maturação não afeta a ploidia de ovócitos bovinos após completarem 24 horas de maturação in vitro. Palavras-chaves: Bovinos, diplóide, ovócitos, maturação in vitro, resfriamento.