Detección y tipificación de virus del papiloma humano en biopsias de carcinoma ductal infiltrante y lesiones benignas de mama en mujeres venezolanas

Objetivo: Realizar la detección y tipificación del virus del papiloma humano (VPH) en muestras de biopsias de tejido mamario con carcinoma ductal infiltrante. Métodos: Estudio descriptivo de corte transversal de 57 biopsias de carcinoma ductal infiltrante, y 41 biopsias de lesiones benignas de mama de pacientes venezolanas, estas fueron evaluadas utilizando la técnica PCR-RFLP en busca de la presencia del genoma del virus de papiloma humano. El riesgo OR fue evaluado mediante análisis estadístico con el paquete SPSS 12.0. Resultados: Treinta y tres (57,9 %) de las muestras de carcinoma ductal infiltrante tuvieron un resultado positivo para virus de papiloma humano, 19 de ellas pudieron ser tipificadas como: VPH-6b 15,15 %; VPH-11 3,03 %; VPH-18 12,12 %; VPH-33 27,27 %; VPH-45 3,03 % y VPH-58 3,03 %; de este grupo el 42,4 % fueron positivas no determinadas para la presencia de ADN del virus. Seis biopsias de lesiones benignas (14,6 %), presentaron infección por virus de papiloma humano, determinándose para ellas los tipos VPH-6b 33,33 %, VPH-11 16,67%, VPH-33 16,67% y 33,33 % positivas no determinadas. Se determinó estadísticamente que la presencia de virus de papiloma humano en tejido mamario aumenta 10,77 veces la posibilidad de desarrollar carcinoma ductal infiltrante. Conclusiones: Los hallazgos corroboran los resultados de otros investigadores, colocando al virus de papiloma humano como posible agente involucrado en la inmortalización de las células epiteliales de la mama.

Objective: To perform the detection and typing of human papilloma (HPV) virus in biopsy samples of breast tissue invasive ductal cancer. Methods: Cross-sectional study of 57 biopsies of invasive ductal carcinoma, and 41 biopsies of benign breast lesions of Venezuelan patients were evaluated using the PCR-RFLP technique for the presence of the human papillomavirus genome. The OR risk was evaluated by statistical analysis using SPSS package. Results: Thirty-three (57.9%) of invasive ductal carcinoma samples had a positive result for human papillomavirus, 19 of them could be classified as: HPV-6b 15.15%; HPV-11 3.03%; HPV-18 12.12%; HPV-33 27.27%; HPV-45 3.03% and HPV-58 3.03%. This group 42.4% were positive not determined for the presence of virus DNA. Six biopsies of benign lesions (14.6%) had human papillomavirus infection, determining for themselves the types HPV-6b 33.33%, 16.67% HPV-11, HPV-33 16.67% and 33.33% not determined positive. It is statistically determined that the presence of human papillomavirus in breast tissue 10.77 times increases the possibility of developing invasive ductal carcinoma. Conclusions: These findings corroborate the results of other researchers, placing human papillomavirus as a possible agent involved in the immortalization of epithelial cells of the breast.

Estandarización de un sistema PCR multiplex para la determinación molecular de infertilidad masculina idiopática

Objetivo: Diseñar y optimizar sistemas de reacción en cadena de polimerasa individuales y multiplex para la detección de microdeleciones de genes asociados a infertilidad masculina en el cromosoma Y. Métodos: Se estandarizaron sistemas de reacción en cadena de polimerasa multiplex utilizando oligonucleótidos STS (Sequence Target Site) específicos asociados a infertilidad masculina, con previa estandarización de cada par de oligos en reacciones individuales. Resultados: Se logró estandarizar 7 sistemas individuales y 2 sistemas multiplex de alta sensibilidad y especificidad que pueden indicar la presencia o ausencia de un gen, en este caso, son utilizados para indicar la mutación por microdeleción de algún fragmento específico de Yq que conlleva a la inactivación de un gen. Conclusiones: Se pudo realizar la estandarización de dos sistemas multiplex para el análisis de microdeleciones del cromosoma Y asociados a infertilidad masculina como una herramienta molecular para el diagnóstico rápido y preciso de esta patología. El amplificado del marcador RBM1 no pudo ser incluido en ninguna de los dos multiplex estandarizados, no obstante, se sugiere el estudio de otros marcadores de infertilidad masculina que puedan ser incluidos en la estandarización de nuevos multiplex.

Objective: To design and optimize individual systems and multiplex polymerase chain reaction for detection of microdeletions of male infertility associated genes on the Y chromosome. Methods: multiplex polymerase chain reaction systems were standardized using oligonucleotides STS (Sequence Target Site) specific to male infertility associated with prior standardization of each pair of oligos in individual reactions. Results: It was possible to standardize 7 individual systems and two multiplex systems high sensitivity and specificity that may indicate the presence or absence of a gene, in this case, are used to indicate the mutation microdeletion of a specific fragment Yq leading to the inactivation of a gene. Conclusions: standardization could make two multiplex systems for the analysis of microdeletions of the Y chromosome associated with male infertility as a molecular tool for rapid and accurate diagnosis of this disease. The amplified RBM1 marker could not be included in either standard multiplex, despite the studies of other markers of male infertility is suggested to be included in new in the standardization of new multiplexes.

Electroforesis horizontal en geles de poliacrilamida en la detección y tipificación del virus de papiloma humano / Horizontal electrophoresis in polyacrylamide gels in the detection and typing of human papillomavirus

OBJETIVO: estandarizar el uso de electroforesis horizontal en poliacrilamida como un método rápido de fácil implementación y de alta sensibilidad para la detección y tipificación del virus del papiloma humano por reacción en cadena de la polimerasa-polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción con la enzima HpyCH4V como única enzima de restricción. MÉTODOS: Se utilizó el ácido desoxirribonucleico de 17 tipos de virus del papiloma humano, clonados en la colección del Laboratorio de Biología y Medicina Experimental (LABIOMEX-ULA), para la amplificación de la región flanqueada por los oligonucleótidos MY09/ MY11, los amplificados obtenidos se sometieron a digestión enzimática con la enzima HpyCH4V. El producto se corrió en geles de poliacrilamida de rápida polimerización en equipos de electroforesis horizontales. El ácido desoxirribonucleico se tiñó con bromuro de etidio y fueron fotografiados con la utilización de un trans-iluminador de luz ultravioleta. RESULTADOS: Se corrieron muestras de 17 tipos diferentes de virus del papiloma humano en geles de poliacrilamida en electroforesis horizontal sudmarina. Se observaron patrones de digestión, con la enzima de restricción HpyCH4V, bien definidos y distintos para 15 tipos diferentes. Se presentó una coincidencia de patrón polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción para los tipos 45 y 52 ambos de alto riesgo. Se obtuvo una excelente resolución en corridas de 2,5 cm de longitud para cualquier patrón polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción de los 17 tipos de virus del papiloma humano analizados. CONCLUSIÓN: El análisis de las corridas permitió una eficiente caracterización de los 17 tipos virales. La comparación del índice de movilidad relativa con polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción virtual de los fragmentos amplificados presentó diferencias mínimas, el análisis de la movilidad en agarosa y poliacrilamida se ajustaron perfectamente permitiendo la sustitución de la agarosa por la poliacrilamida.

OBJECTIVE: to standardize the use of horizontal electrophoresis in polyacrylamide as a quick method of easy implementation and high sensitivity for the detection and typing of Human Papillomavirus by PCR-FRLP with HpyCH4V enzyme as unique restriction enzyme. METHODS: DNA from 17 Human Papillomavirus types, cloned in the collection of the Laboratory of Experimental Biology and Medicine, for amplification of the region flanked by the MY09/ MY11 oligonucleotides were used, the amplified obtained were subjected to enzymatic digestion with the enzyme HpyCH4V. The product was run on polyacrylamide gels rapid polymerization horizontal electrophoresis equipment. Stained with ethidium bromide and were photographed with the use of a trans-illuminating UV. RESULTS: Samples of 17 different Human Papillomavirus types polyacrylamide gel electrophoresis were run horizontally. Digestion patterns were observed with the restriction enzyme HpyCH4V, well-defined and different for different types 15. A pattern match for RFLP types 45 and 52 both high risk presented. Excellent resolution on runs of 2.5 cm in length for any RFLP pattern of the 17 Human Papillomavirus types analyzed was obtained. CONCLUSION: The analysis of the runs allows efficient characterization of the 17 Human Papillomavirus types. Comparing the relative mobility rate with the virtual RFLP of amplified fragments present minimal differences, analyzing mobility in agarose and polyacrylamide perfectly adjusted allowing for substitution of agarose by polyacrylamide.

[Characterization of extended-spectrum ß-lactamases-producing Klebsiella pneumoniae isolates of two intensive care units]. / Caracterización de cepas de Klebsiella pneumoniae productora de ß-lactamasa de espectro extendido aisladas en dos unidades de cuidados intensivos.

BACKGROUND: Extended-spectrum ß-lactamase (ESBL)- producing Klebsiella pneumonia is more the frequently implied bacterium infections nosocomiales in the Neonatal High Risk Unit (NHRU), and adult intensive care unit (aICU) in the The Andes University Hospital Autonomy Institute. AIM: To determine the microbiological and molecular characteristics associated with infections caused by this bacterium. MATERIAL AND METHODS: 17 strains of K. pneumoniae isolated from neonates from NHRU with nosocomial infections and 11 isolates from patients hospitalized in the aICU between June to November 2009 were characterized by in vitro agar diffusion test and MIC, the production of ß-lactamase, the presence of blaTEM blaSHV y blaCTX-M genes and genotyping. RESULTS: A high percentage of resistance to ß-lactams and the presence of ESßL TEM, SHV and CTX-M in 41.2 y 82% of strains obtained at HRNU and at aICU respectively were detected. BLEE (+) phenotype was detected in 17,6% of HRNU strains and 91% of aICU strains. Genotypic analysis by REP-PCR detected several clones suggesting that resistant clones of ESBL-producing K. pneumoniae are endemic not only specific circulation and transmission of a single common among patients. CONCLUSION: K. pneumoniae strains that produce ß-lactamases circulate in these critical units studied representing a therapeutic challenge that is necessary to fight against.

Caracterización de cepas de Klebsiella pneumoniae productora de β-lactamasa de espectro extendido aisladas en dos unidades de cuidados intensivos / Characterization of extended-spectrum β-lactamases-producing Klebsiella pneumoniae isolates of two intensive care units

Background: Extended-spectrum β-lactamase (ESBL)- producing Klebsiella pneumonia is more the frequently implied bacterium infections nosocomiales in the Neonatal High Risk Unit (NHRU), and adult intensive care unit (aICU) in the The Andes University Hospital Autonomy Institute. Aim: To determine the microbiological and molecular characteristics associated with infections caused by this bacterium. Material and Methods: 17 strains of K. pneumoniae isolated from neonates from NHRU with nosocomial infections and 11 isolates from patients hospitalized in the aICU between June to November 2009 were characterized by in vitro agar diffusion test and MIC, the production of β-lactamase, the presence of blaTEM blaSHV y blaCTX-M genes and genotyping. Results: A high percentage of resistance to β-lactams and the presence of ESβL TEM, SHV and CTX-M in 41.2 y 82% of strains obtained at HRNU and at aICU respectively were detected. BLEE (+) phenotype was detected in 17,6% of HRNU strains and 91% of aICU strains. Genotypic analysis by REP-PCR detected several clones suggesting that resistant clones of ESBL-producing K. pneumoniae are endemic not only specific circulation and transmission of a single common among patients. Conclusion: K. pneumoniae strains that produce β-lactamases circulate in these critical units studied representing a therapeutic challenge that is necessary to fight against.

Introducción: Klebsiella pneumoniae productora de β-lactamasa de espectro extendido (βLEE) es la bacteria más frecuentemente implicada en infecciones nosocomiales en las Unidades de Alto Riesgo Neonatal (UARN) y Cuidados intensivos de adulto (UCIa) del Instituto Autónomo Hospital Universitario de Los Andes. Objetivo: Determinar las características microbiológicas y moleculares asociadas a las infecciones causadas por esta bacteria. MaterialyMétodos: Se caracterizaron la susceptibilidad in vitro por difusión en agar y CIM, la presencia de β-lactamasa y la presencia de genes blaTEM blaSHV y blaCTX-M y la genotipificación en 17 cepas de K. pneumoniae aisladas de neonatos con infección nosocomial, así como 11 aisladas de pacientes hospitalizados en la UCIa entre junio y noviembre de 2009. Resultados: Esta investigación reveló un alto porcentaje de resistencia a β-lactámicos y la presencia de genes tipo blaTEM, blaSHV y blaCTX-M en 41,2 y 82% de las cepas procedentes de UARN y UCIa, respectivamente. Producción de BLEE se detectó en 17,6% cepa de UARN y en 91% de las pertenecientes a UCIa. Mediante el análisis genotípico REP-PCR se detectaron varias clones lo cual sugiere que existen clones resistentes de K. pneumoniae productora de βLEE específicas no endémicas más que la circulación y transmisión de un aislado habitual entre pacientes. Conclusión: En las unidades críticas estudiadas circulan cepas de K. pneumoniae productoras de β-lactamasas constituyendo un problema terapéutico importante y necesario de combatir.