Nitric oxide biosynthesis by Leishmania amazonensis promastigotes containing a high percentage of metacyclic forms.

Due to the diversity of its physiological and pathophysiological functions and general ubiquity, the study of nitric oxide (NO) has become of great interest. In this work, it was demonstrated that Leishmania amazonensis promastigotes produces NO, a free radical synthesized from L: -arginine by nitric oxide synthase (NOS). A soluble NOS was purified from L. amazonensis promastigotes by affinity chromatography (2', 5'-ADP-agarose) and on SDS-PAGE the enzyme migrates as a single protein band of 116.2 (+/-6) kDa. Furthermore, the presence of a constitutive NOS was detected through indirect immunofluorescence using anti-cNOS and in NADPH consumption assays. The present work show that NO production, detected as nitrite in culture supernatant, is prominent in promastigotes preparations with high number of metacyclic forms, suggesting an association with the differentiation and the infectivity of the parasite.

Nitric oxide synthase (NOS) characterization in Leishmania amazonensis axenic amastigotes.

BACKGROUND: Although Leishmania virulence may be modulated by environmental and genetic factors of their mammalian hosts and sand fly vectors, molecular determinants of Leishmania sp. are the key elements. This work evidences that Leishmania amazonensis axenic amastigotes produce comparatively more NO than infective promastigotes. METHODS: A soluble NOS was purified from L. amazonensis axenic amastigotes by affinity chromatography (2',5'-ADP-agarose), and on SDS-PAGE the enzyme migrates as a single protein band. RESULTS: The presence of a constitutive NOS was detected through immunofluorescence using antibody against neuronal NOS (nNOS) and in NADPH consumption assays. CONCLUSIONS: The present data show that NOS is prominent in axenic amastigote preparations, suggesting an association with the infectivity and/or an escaping mechanism of the parasite. The relationship between the NO-generating systems in the parasite and in their host cell warrants further investigation.

Leishmanioses: reaçäo de imunofluorescência indireta para pesquisa de anticorpos IgM em fraçöes de soros separados por cromatografia de gel filtraçäo / Leishmaniasis: indirect immunofluorescent test to detect IgM antibodies in serum fractions separated by gel filtraction cromatography

Um total de 143 soros de pacientes (120 da forma cutânea localizada, seis da mucocutânea e 17 com leishmaniose visceral), provenientes de ambulatórios ou de hospitais do Grande Rio de Janeiro, suspeitos de leishmaniose tegumentar ou visceral americanas, foi submetido às reaçöes de imunofluorescência indireta (RIFI-IgM e IgG). Estes soros foram selecionados porque se apresentavam com RIFI-IgG de títulos elevados ou eram RIFI-IgM reagentes no soro. Como existe a possibilidade de falsos resultados de IgM näo reagentes na presença de títulos elevados de IgG e falsos IgM reagentes, devido à presença de fator reumatóide (autoanticorpos IgM anti-IgG), utilizou-se a separaçäo das fraçöes IgM e IgG do soro destes pacientes. Para isro, procedeu-se a separaçäo destas imunoglobulinas em coluna de Sephacryl S-300, nos casos em que os soros eram IgM negativo e IgG maior ou igual a 360, com a finalidade de se detectar falsos negativos e, em soros IgM reagentes, falsos positivos. Nestes últimos, também realizou-se a prova do látex para fator reumatóide. Deste modo a RIFI-IgM da fraçäo IgM separada no Sephacryl permitiu evidenciar apenas um soro - de paciente da forma cutânea localizada (0,7 por cento) - falso negativo por provável competiçäo com títulos de anticorpos IgG elevados. Por outro lado, permitiu o encontro de 23 (16,1 por cento) soros RIFI-IgM falso-reagentes para leishmanioses, devido à presença de fator reumatóide (seis soros eram de leishmaniose mucocutânea e os 17 restantes de leishmaniose visceral). Em outros indivíduos da forma cutânea localizada (8,4 por cento) a RIFI-IgM do soro e a RIFI da fraçäo IgM eram reagentes, embora também tivessem positivos (maior ou igual a 20 U/ml) à prova do látex, como os outros 23 indivíduos anteriores. Os 107 indivíduos restantes (74,8 por cento) foram RIFI-IgM reagentes no soro e na fraçäo IgM, mas, entretanto, todos eram negativos para fator reumatóide. Todas as RIFI-IgM das fraçöes IgM eram näo-reagentes. Os resultados demonstram a utilidade da presente metodologia na obtençäo de maior confiabilidade nos testes de RIFI-IgM para leishmanioses

Imunofluorescência (IF) para toxoplasmose em fraçöes IgM de soro humano / Imunofluorescent antibody test (IF) for toxoplasmosis in human serum IgM fractions

Um total de 221 soros de pacientes procedentes de ambulatórios de hospitais do Rio de Janeiro, cuja suspeita clínica era a de infecçåo recente pelo Toxoplasma gondii, foi submetido à reaçåo de imunofluorescéncia indireta (IF) para a pesquisa de anticorpos das classes de imunogloobulinas M e G. Os soros dos 221 indivíduos foram diluídos ao quádruplo, a partir de 1:16. Já que existe a possibilidade de falsos resultados IgM negativos na presença de títulos elevados de IgG e falsos resultados IgM positivos na presença de fator reumatóide (auto-anticorpos IgM anti IgG), utilizou-se a separaçåo das fraçöes IgM e IgG do soro de pacientes. Este procedimento, usando-se coluna de sephacryl S-300, foi realizado em 187 soros IF-IgM nåo reagentes e IF-Ig maior ou igual a 1:1024, com a finalidade de detectar falsos IF-IgM negativos, e em 34 soros IF-IgM reagentes para detectar falsos If-IgM positivos. Nestes últimos também realizou-se a prova látex para a pesquisa dos chamados fatores reumatóides. A IF, realizada na fraçåo IgM separada do soro, permitiu evidenciar 21 soros (11,2 por cento) falso - IgM nåo reagentes devido à possivel competiçåo com anticorpos anti-T. gondii em títulos elevados nas fraçöes IgC. Permitiu, inclusive, o encontro de 5 soros (14,7 por cento) IF-IgM falso reagentes para T. gondii devido à presença de auto-anticorpos IgM anti IgG (fator reumatóide). Os resultados demonstraram a utilidade do presente procedimento no sentido de obter-se maior acurácia nos testes IF-IgM para toxoplasmose

Indirect immunofluorescence test in new world Leishmaniasis: serological and clinical relation-ship

O teste de imunofluorescência indireta (IF) para a detecçäo de anticorpos anti-Leismania nas classes IgG e IgM foi realizado em soros de indivíduos dos seguintes grupos: 214 pacientes com leismaniose cutânea, quatro pacientes com leismaniose mucocutânea, 28 indivíduos sadios com intradermorreaçäo de Montenegro (IDRM) positiva, 29 indivíduos sadios com IDRM negativa e 16 pacientes com leishmaniose visceral. Os indivíduos dos quatro primeiros grupos eram provenientes de uma área da periferia da cidade do Rio de Janeiro (Jacarepaguá) onde a leishmaniose tegumentar causada por Leishmania braziliensis brasiliensis é endêmica. Entre os pacientes com leishmaniose cutânea foi observado que os títulos de IF-IgM foram significantemente mais altos nos casos com menos de quatro meses de evoluçäo do que em pacientes com períodos mais longos de evoluçäo da doença e que os títulos de IF-IgG foram significantemente mais altos em pacientes com lesöes múltiplas do que nos portadores de lesäo única. Os pacientes com leishmaniose visceral tiveram títulos de IF-IgG significantemente superiores aos dos pacientes com leishamiose cutânea. zum grupo de 28 indivíduos selecionados entre os 214 pacientes com leishmaniose cutânea tiveram seus títulos de IF (IgG e IgM) comparados aos de dois grupos controles constituídos de indivíduos sadio, moradores na área endêmica com IDRM respectivamente positiva e negativa. Títulos de IF-IgG e IF-IgM significantemente superiores foram encontrados no grupo com doença ativa. O mesmo grupo de pacientes apresentou título de IF-IgG significantemente mais baixos após a terapêutica antimonial do que durante a mesma

Canine Visceral Leishmaniasis in Rio de Janeiro, Brazil: clinical, parasitological, therapeutical and epidemiological findings (1977-1983)

Durante inquéritos caninos realizados na periferia da cidade do Rio de Janeiro, foram estudados clínica e laboratorialmente 40 cäes. Todos apresentavam diagnóstico parasitológico e/ou sorológico de leishmaniose. Dentre esses, 19 procediam de áreas de ocorrência de leishmaniose visceral (LV) - Realengo, Bangu e Senador Camará. Sinais clínicos sugestivos da infecçäo foram observados em 36,8% deles (incluindo emagrecimento - 100%, linfadenopatia e depilaçäo - 85,7%). Outros 21 cäes procediam da área de Campo Grande onde tanto a LV como a leishmaniose tegumentar americana (LTA) ocorrem. Sinais clínicos da infecçäo por Leishmania, principalmente ulceraçöes cutâneas e mucocutâneas, foram observadas em 76,2% deles. Em 39 cäes foram encontrados leishmanias: 22% em vísceras, 42,5% em vísceras e pele normal e 35% um ulceraçöes cutâneas ou mucocutâneas. Todos os estoques de Leishmania isolados de cäes provenientes das áreas de LV e da área de LV + LTA foram caracterizados como L. donovani (exceto em um caso) conforme seus esquisodemas, zimodemas e serodemas. O único estoque caracterizado como L. braziliensis brazilienzis foi isolado de linfonodo de um cäo de Campo Grande, com leishmaniose visceral e sem alteraçöes cutâneas. A tentativa de tratamento pelo antimonial em oito cäes positivos para Leishmania donovani näo reverteu o curso da doença e um deles apresentou intenso agravamento, morrendo em curto período