RESUMO
Objectives: Osteoarthritis (OA) is a degenerative disease associated with chondrocyte injury. This study investigated the dysregulation of microRNA-650 (miR-650) in cartilage tissues of patients with OA. Its function and mechanism were also investigated in OA cell models. Methods: miR-650 levels were examined in 15 OA cartilage tissues and ten healthy cartilage tissues. SW1353 cells were used for cell function experiments and IL-1ß was applied to the cells to mimic OA conditions in vitro. Cell functions such as proliferation, apoptosis, and inflammation were detected. The downstream target gene of miR-650 was identified and confirmed by bioinformatic analysis and luciferase activity assay. Rescue experiments were performed to verify the mechanism. Results: Suppressed expression of miR-650 was tested in patients with OA and cell models. Overexpression of miR-650 increased cell proliferation but suppressed apoptosis and inflammation of SW1353. As the target gene of miR-650, WNT1 overexpression counteracted the role of miR-650 in the function of SW1353. Conclusion: miR-650 can protect against articular cartilage injury in OA by targeting WNT1. Level of Evidence I, Experimental Study.
Objetivos: A osteoartrite (OA) é uma doença degenerativa acompanhada de lesão dos condrócitos. Este estudo examinou a desregulação do microRNA-650 (miR-650) nos tecidos da cartilagem de doentes com OA. A sua função e mecanismo também foram explorados em modelos celulares de OA. Métodos: Os níveis de miR-650 foram examinados em 15 tecidos de cartilagem de OA e em 10 tecidos de cartilagem normal saudável. As células SW1353 foram utilizadas para experiências de função celular, e a IL-1ß atua sobre as células para imitar as condições da OA in vitro. Foram detectadas funções celulares, incluindo a proliferação, a apoptose e a inflamação. O gene alvo a jusante do miR-650 foi reconhecido e confirmado por meio de análise bioinformática e ensaio de atividade da luciferase. Foram efetuadas experiências de recuperação para verificação do mecanismo. Resultados: Foi testada uma expressão oprimida do miR-650 tanto em doentes com OA como em modelos celulares. A sobreexpressão do miR-650 aumentou a proliferação celular, mas suprimiu a apoptose e a inflamação da SW1353. Como gene alvo do miR-650, a sobreexpressão do WNT1 contrariou o papel do miR-650 na função do SW1353. Conclusão: O miR-650 pode proteger contra a lesão da cartilagem articular na OA através da ação sobre o WNT1. Nível de Evidência I, Estudo de Experimental.
RESUMO
ABSTRACT Objectives: Osteoarthritis (OA) is a degenerative disease associated with chondrocyte injury. This study investigated the dysregulation of microRNA-650 (miR-650) in cartilage tissues of patients with OA. Its function and mechanism were also investigated in OA cell models. Methods: miR-650 levels were examined in 15 OA cartilage tissues and ten healthy cartilage tissues. SW1353 cells were used for cell function experiments and IL-1β was applied to the cells to mimic OA conditions in vitro. Cell functions such as proliferation, apoptosis, and inflammation were detected. The downstream target gene of miR-650 was identified and confirmed by bioinformatic analysis and luciferase activity assay. Rescue experiments were performed to verify the mechanism. Results: Suppressed expression of miR-650 was tested in patients with OA and cell models. Overexpression of miR-650 increased cell proliferation but suppressed apoptosis and inflammation of SW1353. As the target gene of miR-650, WNT1 overexpression counteracted the role of miR-650 in the function of SW1353. Conclusion: miR-650 can protect against articular cartilage injury in OA by targeting WNT1. Level of Evidence I, Experimental Study.
RESUMO Objetivos: A osteoartrite (OA) é uma doença degenerativa acompanhada de lesão dos condrócitos. Este estudo examinou a desregulação do microRNA-650 (miR-650) nos tecidos da cartilagem de doentes com OA. A sua função e mecanismo também foram explorados em modelos celulares de OA. Métodos: Os níveis de miR-650 foram examinados em 15 tecidos de cartilagem de OA e em 10 tecidos de cartilagem normal saudável. As células SW1353 foram utilizadas para experiências de função celular, e a IL-1β atua sobre as células para imitar as condições da OA in vitro. Foram detectadas funções celulares, incluindo a proliferação, a apoptose e a inflamação. O gene alvo a jusante do miR-650 foi reconhecido e confirmado por meio de análise bioinformática e ensaio de atividade da luciferase. Foram efetuadas experiências de recuperação para verificação do mecanismo. Resultados: Foi testada uma expressão oprimida do miR-650 tanto em doentes com OA como em modelos celulares. A sobreexpressão do miR-650 aumentou a proliferação celular, mas suprimiu a apoptose e a inflamação da SW1353. Como gene alvo do miR-650, a sobreexpressão do WNT1 contrariou o papel do miR-650 na função do SW1353. Conclusão: O miR-650 pode proteger contra a lesão da cartilagem articular na OA através da ação sobre o WNT1. Nível de Evidência I, Estudo de Experimental.
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The pioneer transcription factor (TF) PU.1 controls hematopoietic cell fate by decompacting stem cell heterochromatin and allowing nonpioneer TFs to enter otherwise inaccessible genomic sites. PU.1 deficiency fatally arrests lymphopoiesis and myelopoiesis in mice, but human congenital PU.1 disorders have not previously been described. We studied six unrelated agammaglobulinemic patients, each harboring a heterozygous mutation (four de novo, two unphased) of SPI1, the gene encoding PU.1. Affected patients lacked circulating B cells and possessed few conventional dendritic cells. Introducing disease-similar SPI1 mutations into human hematopoietic stem and progenitor cells impaired early in vitro B cell and myeloid cell differentiation. Patient SPI1 mutations encoded destabilized PU.1 proteins unable to nuclear localize or bind target DNA. In PU.1-haploinsufficient pro-B cell lines, euchromatin was less accessible to nonpioneer TFs critical for B cell development, and gene expression patterns associated with the pro- to pre-B cell transition were undermined. Our findings molecularly describe a novel form of agammaglobulinemia and underscore PU.1's critical, dose-dependent role as a hematopoietic euchromatin gatekeeper.