From field sampling to pneumatic bioreactor mycelia production of the ectomycorrhizal mushroom Laccaria trichodermophora.

In order to increase survival rates of greenhouse seedlings destined for restoration and conservation programs, successful mycorrhization of the seedlings is necessary. To reforest forest ecosystems, host trees must be inoculated with ectomycorrhizal fungi and, in order to guarantee a sufficient supply of ectomycorrhizal inoculum, it is necessary to develop technologies for the mass production of ectomycorrhizal fungi mycelia. We selected the ectomycorrhizal fungus Laccaria trichodermophora, due to its ecological traits and feasible mycelia production in asymbiotic conditions. Here, we report the field sampling of genetic resources, as well as the highly productive nutritional media and cultivation parameters in solid cultures. Furthermore, in order to achieve high mycelial production, we used strain screening and evaluated pH, carbon source concentration, and culture conditions of submerged cultures in normal and baffled shake flasks. The higher productivity culture conditions in shake flasks were selected for evaluation in a pneumatic bioreactor, using modified BAF media with a 10 g/L glucose, pH 5.5, 25 °C, and a volumetric oxygen transfer coefficient (KLa) of 36 h-1. Under those conditions less biomass (12-37 %) was produced in the pneumatic bioreactor compared with the baffled shake flasks. This approach shows that L. trichodermophora can generate a large biomass concentration and constitute the biotechnological foundation of its mycelia mass production.

Hexavalent chromium removal in vitro and from industrial wastes, using chromate-resistant strains of filamentous fungi indigenous to contaminated wastes.

Two chromate-resistant filamentous fungi, strains H13 and Ed8, were selected from seven independent fungal isolates indigenous to Cr(VI)-contaminated soil because of their ability to decrease hexavalent chromium levels in the growth medium. Morphophysiological studies identified strain H13 as a Penicillium sp. isolate and Ed8 as an Aspergillus sp. isolate. When incubated in minimal medium with glucose as a carbon source and in the presence of 50 microg/mL Cr(VI), these strains caused complete disappearance of Cr(VI) in the growth medium after about 72 h of incubation. Total chromium concentration in growth medium was constant during culture growth, and no accumulation of chromium in fungal biomass was observed. Quantitative determinations of oxidized and reduced chromium species during the reduction process revealed stoichiometric conversion of Cr(VI) to Cr(III). A decrease in Cr(VI) levels from industrial wastes was also induced by Ed8 or H13 biomass. These results indicate that chromate-resistant filamentous fungi with Cr(VI)-reducing capability could be useful for the removal of Cr(VI) contamination.

A rapid and simple method for DNA extraction from yeasts and fungi isolated from Agave fourcroydes.

A simple and easy protocol for extracting high-quality DNA from different yeast and filamentous fungal species is described. This method involves two important steps: first, the disruption of cell walls by mechanical means and freezing; and second, the extraction, isolation, and precipitation of genomic DNA. The absorbance ratios (A(260)/A(280)) obtained ranged from 1.6 to 2.0. The main objective of this procedure is to extract pure DNA from yeast and filamentous fungi, including those with high contents of proteins, polysaccharides, and other complex compounds in their cell walls. The yield and quality of the DNAs obtained were suitable for micro/minisatellite primer-polymerase chain reaction (MSP-PCR) fingerprinting as well as for the sequence of the D1/D2 domain of the 26S rDNA.

Phytotoxins from the fungus Malbranchea aurantiaca.

Bioassay-directed fractionation of an ethyl acetate extract from cultures of the fungus Malbranchea aurantiaca led to the isolation of two phytotoxic compounds, namely, 1-hydroxy-2-oxoeremophil-1(10),7(11),8(9)-trien-12(8)-olide (1) and penicillic acid (2). The structure of 1 was established by spectroscopic and X-ray crystallographic analyses. Metabolites 1 and 2 caused significant inhibition of radicle growth of Amaranthus hypochondriacus with IC(50) values 6.57 and 3.86 microM, respectively. In addition, 1 inhibited activation of the calmodulin-dependent enzyme cAMP phosphodiesterase (IC(50)=10.2 microM).

Cr(VI) reduction in a chromate-resistant strain of Candida maltosa isolated from the leather industry.

A Cr(VI)-resistant yeast was isolated from tanning liquors from a leather factory in Leon, Guanajuato, Mexico. Based on morphological and physiological analyses and the D1/D2 domain sequence of the 26S rDNA, the yeast was identified as Candida maltosa. Resistance of the strain to high Cr(VI) concentrations and its ability to chemically reduce chromium was studied. When compared to the three laboratory yeasts Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae and Yarrowia lipolytica, the C. maltosa strain was found to tolerate chromate concentrations as high as 100 micro g/ml. In addition to this phenotypic trait, the C. maltosa strain showed ability to reduce Cr(VI). Chromate reduction occurred both in intact cells (grown in culture medium or in soil containing chromate) as well as in cell-free extracts. NADH-dependent chromate reductase activity was found associated with soluble protein and, to a lesser extent, with the membrane fraction.

Poroleprieuria, a new xylariaceous genus from Mexico.

Poroleprieuria gen. nov. is described and illustrated to accommodate P. rogersii in the Xylariaceae, Xylariales. This ascomycete, known only from the type collection, is characterized by reniform, light brown, smooth ascospores with a germ pore; cylindrical, persistent asci lacking an apical apparatus, septate persistent paraphyses, and erumpent, erect, dark brown, fragile, subcylindrical stromata. The characteristics of this xylariaceous fungus were compared with those of some other ascomycetes having superficially similar cylindrical stromata or ascospores with germ pores.

Effect of selected phytotoxins from Guanomyces polythrix on the calmodulin-dependent activity of the enzymes cAMP phosphodiesterase and NAD-kinase.

The effect of a series of phytotoxins isolated from the fungus Guanomyces polytrix on calmodulin (CaM)-dependent nicotinamide adenine dinucleotide kinase (NADK) and CaM-dependent cyclic nucleotide phosphodiesterase (PDE) activities was investigated. The results indicated that (2S,3S)-5-hydroxy-6,8-dimethoxy-2,3-dimethyl-4H-2,3-dihydronaphtho[2,3-b]-pyran-4-one, (2S,3S)-5-hydroxy-6,8,10-trimethoxy-2,3-dimethyl-4H-2,3-dihydro-naphtho[2,3-b]-pyran-4-one, (2S,3R)-5-hydroxy-6,8-dimethoxy-2,3-dimethyl-2,3-dihydro-4H-naphtho[2,3-b]-pyran-4-one, (2S,3R)-5-hydroxy-6,8,10-trime-thoxy-2,3-dimethyl-2,3-dihydro-4H-naphtho[2,3-b]-pyran-4-one, 5-hydro-xy-6,8-dimethoxy-2,3-dimethyl-4H-naphtho[2,3-b]-pyran-4-one, rubrofusarin B, and ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one inhibited the activation of both target enzymes in the presence of CaM. On the other hand, (2S)-5-hydroxy-6,8-dimethoxy-2-methyl-4H-2,3-dihydronaphtho[2,3-b]-pyran-4-one and (2S)-5-hydroxy-6,8,10-trimethoxy-2-methyl-4H-2,3-dihydronaphtho-[2,3-b]-pyran-4-one inhibited the activation of PDE and the basal activity of NADK. Thus, these phytotoxins are CaM inhibitors and may exert their phytotoxic action by inhibiting the CaM-dependent process, although they could also interfere with other cellular metabolic phenomena. This is the first report of the use of the NADK assay to detect or quantify CaM inhibitors, and it could be a valuable tool for studying those CaM isoforms regulating NADK.

Levaduras asociadas con el hábitat natural de Histoplasma capsulatum en Guerrero, México / Yeasts associated to natural habitat of Histoplasma capsulatum in Guerrero, Mexico

Objetivo: En el presente trabajo, primero que sobre el tema se ha realizado en México, se registran las especies de levaduras encontradas en diferentes sustratos colectados en espacios cerrados y abiertos (que representan los nichos ecológicos en que se desarrolla Histoplasma capsulatum var. capsulatum). Material y métodos: Los sustratos a partir de los cuales se hizo el aislamiento de levaduras se obtuvieron en distintas localidades de los municipios de Quechultenango y Olinalá, en el estado de Guerrero. Resultados y discusión: De guano de murciélago muestreado en grutas y cuevas se aislaron Candida Catenulata, C. ciferrii, C famata, C. guillermondii y Rhodotorula spp.; del suelo de una mina únicamente se aisló C. ciferril. Las especies C. albicans, C. ciferrii y C. tropicalis se aislaron de suelo con excretas de gallináceas, y C. famata, Cryptococcus albidus var. albidus, Trichosporon beigelii t Trichosporon spp. de suelo con excretas de gallo. Del intestino de murciélagos insectívoros únicamente se aisló C. famata, y, de murciélagos polinívoros C. lipolytica, Cr. abidus var. albidus y Trichosporon spp. De cada una de estas especies se mencionan sus características distintivas, así como los diferentes ambientes y sustratos de los cuales han sido aisladas

Hongos filamentosos asociados con el hábitat natural de Histoplasma capsulatum en Guerrero, México / Filamentous fungi associated to natural habitat of Histoplasma capsulatum in Guerrero, Mexico

Objetivo: Se determinaron los hongos filamentosos asociados a los ambientes y sustratos de donde se ha aislado Histoplasma capsulatum, a partir de muestras de guano e intestino de murciélagos, así como de excretas de aves de corral Material y métodos: Las muestras procedieron de varias grutas y otras localidades de Guerrero, México, principalmentes de juxtlahuaca y Olinalá. Resultados y discusión: Del guano de murciélago se aislaron, además de H. capsulatum, ascomicetas como Aphanoascus fulvescens, Gymnascella citrina, Gymnoascus dankaliensis (Onygenales) y Cheatomidium fimeti (Sordariales); Hongos conidiales, como Aspergillus flavo-furcatis, A. terreus, A. terreus var. aureus, varias especies no determinadas de Penicillium, Malbranchea aurantiaca y Sporothrix sp. De las excretas de gallo de pelea se aisló Phoma sp. Del intestino de murciélagos insectívoros, hematófagos, nectarívoros y frugívoros se aislaron varias especies de hongos conidiales, como Aspergillus candidus, A. flavofurcatis, A. sulphureus, A. sydowii, A. terreus, A. versicolor, Apergillus sp., M. aurantiaca, Gliomastis murorum y Scopulariopsis sp.; y sólo un ascomicete, Ch. fimeti. Se comentan ciertas propiedades biológicas de los hongos encontrados, la mayoría de ellos registrados por primera vez por estos sustratos y ambientes en México

Determinación de algunos parámetros para la producción doméstica de tibicos / Determination of some parameters for the household production of tibicos

Con el objeto de obtener alimentos no convencionales para humanos y animales domésticos, se determinaron las mejores condiciones de cultivo de los tibicos (asociaciones simbióticas de bacterias y levaduras) para producir, en forma doméstica, el mayor rendimento de biomosa a partir de nueve distintos sustratos azucarados de relativo bajo costo, seis consistentes en productos y subproductos de la industria azucarera (piloncillo, melaza, melado, mascabado, azúcar morena y azúcar blanca) y el jugo de betadel, tuna y piña. Se utilizaron diferentes concentraciones de cada sustrato, así como varias temperaturas y tiempos de incubacion. La biomasa de tibicos se midió por peso húmedo drenado (g/100 ml); la tasa específica de crecimiento se calculó en g/hora. El valor más alto en la producción de tibicos (78.8g/100 ml) se obtuvo con 50 g de piloncillo en el medio de cultivo, 29-C y 72 horas de incubación; no obstante, la mayor productividad de biomasa (1.9 g/hora) se obtuvo en el mismo medio a las 24 horas de incubación a 29-C. El segundo mejor sustato fue la melaza, y aunque con ella se produce menos biomasa, es más barato producir 1 g de tibicos utilizando melaza en lugar de piloncillo, cuando se calcula el costo de producción. En el trabajo se comentan las ventajas que ofrece el cultivo de los tibicos en condiciones caseras, sencillas y de bajo costo

Estudio de las levaduras de los tibcos y pruebas de alimentación con aves y roedores utilizando estas zoogleas en al dieta / Study on the yeast of tibicos and feeding tests with birds and rodents utilizing this zoogloeae in the diet

Los objetivos de este trabajo fueron aislar e identificar las levaduras asociadas en las zoogleas llamadas tibicos en México, y realizar pruebas de alimentación con aves y roedores para determinar si el consumo de dichos tibicos ocasionaba lesiones en órganos internos, dado que estas asociaciones microbianas se utilizan popularmente para hacer bebidas fermentadas, como el tepache, que se consumen como refrescos por su bajo contenido alcohólico, o con la intención de reducir de peso, a pesar de que existe la creencia de que pueden causar úlceras gástricas o daños en los riñones de consumidores habituales. Con respecto a las levaduras estudiadas, se presenta la descripción de Brettanomyces intermedius, registrada por primera vez para los tibicos y de Saccharomyces cerevisiae, especie que frecuentemente ha sido hallada en tibicos y en otras bebidas formentadas de origen indígena. En relación al uso de los tibicos como componentes de diversas dietas con las que se alimentaron aves (polos de engorda y gallina ponedoras) y roedores (ratas y conejos), se comunican los efectos sobre el peso de los animales y, para el caso de las gallinas, también sobre la postura de huevos. En general, el peso de los animales aumentó menos y la postura de huevos también se redujo, conforme se incrementó el porcentaje de tibicos en la dieta. Con ninguna de las proporciones de tibicos utilizadas en las dietas de todos los animales de estos experimentos se encontraron lesiones histológicas específicas en los órganos examindos: riñon, hígado, corazón y pulmón. La degeneración grasa del hígado encontrada en aves y ratas que probablemente resultó de una desnutrición crónica, fue más frecuente cuando los animales ingirieron dietas con más del 50% de tibicos