Phenotypic characterization of Cronobacter spp. strains isolated from foods and clinical specimens in Brazil.

Several Cronobacter species are opportunistic pathogens that cause infections in humans. This study evaluated the phenotypic characteristics of 57 Cronobacter strains (C. sakazakii n=41, C. malonaticus n=10, C. dublinensis n=4, and C. muytjensii n=2) isolated from food (n=54) and clinical specimens (n=3) in Brazil. These strains included sequence types (ST): ST395-ST398, ST402, ST413 and ST433-ST439, isolated from food samples, and three C. malonaticus clinical strains previous isolated from an outbreak which were ST394 (n=1) and ST440 (n=2). Strains were tested for capsule production, biofilm formation, protease activity, hemolytic activity, cell-cell aggregation, and desiccation resistance. Capsule formation was observed with all Cronobacter strains. Forty-four (77.2%) strains showed proteolytic activity on milk agar. All strains showed ß-hemolysis against erythrocytes from guinea pig, horse and rabbit. Using erythrocytes from sheep, the majority of strains (53/57; 92.9%) showed α-hemolysis and the remaining, ß-hemolysis. All Cronobacter strains produced weak biofilms in microtiters polystyrene plates, which were independent of temperature (4, 25 and 37°C) and/or growth conditions. In glass tubes, formation of either a moderate or strong biofilm was observed in 15/57 (26.3%), 19/57 (33.3%) and 27/57 (47.4%), at 4, 25 and 37°C, respectively. Desiccation treatment decreased Cronobacter viability by 1.55 to >3.87Log10CFU/mL. Cell-cell aggregation was observed in 17 (29.8%) strains. This study showed that the Cronobacter species evaluated showed differing phenotypes, independent of their origin (clinical or not) and ST. Further studies are necessary to elucidate the factors affecting phenotype expression. This may identify novel bacterial targets that could be useful in the development of strategies to control Cronobacter in food chain and to prevent cases of infections.

Isolation, molecular and phenotypic characterization, and antibiotic susceptibility of Cronobacter spp. from Brazilian retail foods.

Several Cronobacter species are opportunistic pathogens that cause infections in humans. The aim of this study was to detect Cronobacter spp. from 90 samples of retail foods in Brazil, and characterize the strains by phenotypic tests, molecular assays and antibiotic susceptibility. Three isolation methodologies were evaluated using different selective enrichments and the isolates were identified using Vitek 2.0, PCRs protocols, fusA allele sequencing and multilocus sequence typing (MLST). Thirty-eight samples (42.2%) contained Cronobacter spp., and the highest percentage was found in flours (66.7%, 20/30), followed by spices and herbs (36.7%, 11/30), and cereal mixes for children (23.3%, 7/30). The 45 isolates included four species: C. sakazakii (n = 37), C. malonaticus (n = 3), C. dublinensis (n = 3), and C. muytjensii (n = 2); that presented 20 different fusA alleles. MLST analysis revealed 32 sequence types (STs), 13 of which were newly identified. All strains were sensitive to all antibiotics (n = 10) tested. The combination of CSB/v enrichment with DFI plating was considered the most efficient for Cronobacter spp. isolation. This study revealed the presence of Cronobacter spp. in foods commercialized in Brazil and the isolates showed a high diversity after MLST analysis and included two strains of the C. sakazakii ST4 neonatal meningitic pathovar.

Identificação de Cronobacter spp. em queijos e perfil de suscetibilidade antimicrobiana / Identification of Cronobacter spp. in cheeses and the antimicrobial susceptibility profile

Cronobacter spp. é um patógeno oportunista que pode causar infecções em indivíduos de qualquer idade, cuja incidência é maior em neonatos, pacientes imunocomprometidos e idosos. Neste estudo Cronobacter spp. foi pesquisado em 90 amostras de queijos (30 do tipo Minas Frescal, 30 do tipo Prato e 30 do tipo Prato fatiado). As espécies isoladas foram identificadas, e foi avaliado o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos. A pesquisa foi realizada utilizando-se pré-enriquecimento em água peptonada tamponada, enriquecimento seletivo no caldo lauril sulfato triptose contendo vancomicina, isolamento no meio Enterobacter sakazakii Isolation Agar e identificação no Vitek 2.0. As espécies foram identificadas por meio de múltipla PCR com alvo no gene cgcA. O antibiograma foi realizado pela técnica de difusão em ágar (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. foi isolada em uma (1,1 %) amostra de queijo tipo Minas Frescal, identificada como C. sakazakii que apresentou sensibilidade a todos os antimicrobianos testados. Cronobacter spp. pode nمo representar risco à saْde dos indivíduos pelo consumo de queijos produzidos com leite pasteurizado. Entretanto, a presença de Cronobacter spp. em uma amostra de queijo demonstra falhas na produção, o que reforça a necessidade de maior adesão às Boas Práticas de Fabricação.

Cronobacter spp. is an opportunistic pathogen that may cause infections in individuals ofany age, and the highest incidence occurs in neonates, immunocompromised patients andelderly persons. This study investigated Cronobacter spp. occurrence in 90 cheese samples(30 “Minas Frescal” type cheeses, 30 “Prato” type and 30 sliced “Prato” type). The isolatedspecies were identified and the antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains wasevaluated. The microbiological assay was performed with pre-enrichment in buffered peptonewater, and selective-enrichment in modified lauryl sulphate tryptose broth containingvancomycin. Isolation and identification were done in Enterobacter sakazakii Isolation Agar andin Vitek 2.0, respectively. The species identification was performed by multiple PCR targetingcgaA gene. Antibiogram was done using agar diffusion method (Kirby-Bauer). Cronobacter spp.was isolated from one (1.1 %) sample of “Minas Frescal” type cheese, identified as C. sakazakii which was sensitive to all of tested antimicrobials. Cronobacter spp. does not represent arisk to the individuals health by consuming cheeses made from pasteurized milk. However,the presence of Cronobacter spp. in one sample of analyzed cheese indicates failures in their production, reinforcing the need for following the Good Manufacturing Practices.

Pesquisa, identificação e perfil de suscetibilidade antimicrobiana de Cronobacter spp. em produtos destinados à alimentação infantil / Detection, identification and antimicrobial susceptibility profile of Cronobacter spp. in products for infant feeding

Cronobacter spp. emergiu como perigo microbiológico em fórmulas infantis desidratadas (FID), responsável por infecções graves em neonatos. Contudo, muitos pacientes não ingeriram FID, o que indica que outros alimentos podem atuar como veículo do patógeno. Os objetivos deste estudo foram pesquisar Cronobacter spp. em alimentos infantis, identificar as espécies e avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos das cepas isoladas. Foram analisadas 47 amostras pré-cozidas de cereais à base de grãos, amidos de milho e farinhas lácteas. A pesquisa foi realizada com pré-enriquecimento em água peptonada tamponada, enriquecimento seletivo no Cronobacter Screening Broth, isolamento por meio de Enterobacter sakazakii Isolation Agar e identificação no Vitek 2.0. A identificação das espécies foi realizada por reação em cadeia pela polimerase com alvo nos genes rpoB e cgcA. O antibiograma foi realizado pelo método de difusão em ágar (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. foi identificada em 11 amostras (23,4 %). Oito cepas foram identificadas como C. sakazakii (72,7 %), duas como C. malonaticus (18,2 %) e uma como C. dublinensis (9,1 %). Apenas uma cepa de C. malonaticus apresentou resistência intermediária a ciprofloxacina. Os produtos destinados à alimentação infantil avaliados podem apresentar risco, no caso destes alimentos serem ingeridos por pacientes pertencentes ao grupo de risco, como neonatos e idosos.

Cronobacter spp. emerged as a microbiological hazard in powdered infant formulas (PIF)causing severe infections in newborns. However, among these patients many of them had not ingested PIF indicating that other foods categories might be as the pathogen vehicle. This study aimed at investigating Cronobacter spp. in infant foods, identifying the species and evaluatingthe antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains. Forty-seven samples of precooked grain-based cereals, corn starch and milk flours were analyzed. The microbiological analysis was performed with pre-enrichment in buffered peptone water, followed by selective-enrichment in Cronobacter Screening Broth, isolation in Enterobacter sakazakii Isolation Agar and identificationin Vitek 2.0. The identification of species was performed by polymerase chain reaction targetingrpoB and cgaA genes. The antibiogram was carried out using the agar diffusion method(Kirby-Bauer). Cronobacter spp. was identified in 11 samples (23.4 %). Eight strains wereidentified as C. sakazakii (72.7 %), two as C. malonaticus (18.2 %) and one as C. dublinensis (9.1 %). Only one C. malonaticus strain showed an intermediate resistance to ciprofloxacin. The evaluated samples produced for infant feeding might cause hazard when ingested by patients belonging tothe risk group as newborns and elderly.

Pesquisa, identificação e perfil de suscetibilidade antimicrobiana de Cronobacter spp. em produtos destinados à alimentação infantil / Detection, identification and antimicrobial susceptibility profile of Cronobacter spp. in products for infant feeding

Cronobacter spp. emergiu como perigo microbiológico em fórmulas infantis desidratadas (FID), responsável por infecções graves em neonatos. Contudo, muitos pacientes não ingeriram FID, o que indica que outros alimentos podem atuar como veículo do patógeno. Os objetivos deste estudo foram pesquisar Cronobacter spp. em alimentos infantis, identificar as espécies e avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos das cepas isoladas. Foram analisadas 47 amostras pré-cozidas de cereais à base de grãos, amidos de milho e farinhas lácteas. A pesquisa foi realizada com pré-enriquecimento em água peptonada tamponada, enriquecimento seletivo no Cronobacter Screening Broth, isolamento por meio de Enterobacter sakazakii Isolation Agar e identificação no Vitek 2.0. A identificação das espécies foi realizada por reação em cadeia pela polimerase com alvo nos genes rpoB e cgcA. O antibiograma foi realizado pelo método de difusão em ágar (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. foi identificada em 11 amostras (23,4 %). Oito cepas foram identificadas como C. sakazakii (72,7 %), duas como C. malonaticus (18,2 %) e uma como C. dublinensis (9,1 %). Apenas uma cepa de C. malonaticus apresentou resistência intermediária a ciprofloxacina. Os produtos destinados à alimentação infantil avaliados podem apresentar risco, no caso destes alimentos serem ingeridos por pacientes pertencentes ao grupo de risco, como neonatos e idosos.

Cronobacter spp. emerged as a microbiological hazard in powdered infant formulas (PIF) causing severe infections in newborns. However, among these patients many of them had not ingested PIF indicating that other foods categories might be as the pathogen vehicle. This study aimed at investigating Cronobacter spp. in infant foods, identifying the species and evaluating the antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains. Forty-seven samples of precooked grain-based cereals, corn starch and milk flours were analyzed. The microbiological analysis was performed with pre-enrichment in buffered peptone water, followed by selective-enrichment in Cronobacter Screening Broth, isolation in Enterobacter sakazakii Isolation Agar and identification in Vitek 2.0. The identification of species was performed by polymerase chain reaction targeting rpoB and cgaA genes. The antibiogram was carried out using the agar diffusion method (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. was identified in 11 samples (23.4 %). Eight strains were identified as C. sakazakii (72.7 %), two as C. malonaticus (18.2 %) and one as C. dublinensis (9.1 %). Only one C. malonaticus strain showed an intermediate resistance to ciprofloxacin. The evaluated samples produced for infant feeding might cause hazard when ingested by patients belonging to the risk group as newborns and elderly.

Identificação de Cronobacter spp. em queijos e perfil de suscetibilidade antimicrobiana / Identification of Cronobacter spp. in cheeses and the antimicrobial susceptibility profile

Cronobacter spp. é um patógeno oportunista que pode causar infecções em indivíduos de qualquer idade, cuja incidência é maior em neonatos, pacientes imunocomprometidos e idosos. Neste estudo Cronobacter spp. foi pesquisado em 90 amostras de queijos (30 do tipo Minas Frescal, 30 do tipo Prato e 30 do tipo Prato fatiado). As espécies isoladas foram identificadas, e foi avaliado o perfil de suscetibilidade a antimicrobianos. A pesquisa foi realizada utilizando-se pré-enriquecimento em água peptonada tamponada, enriquecimento seletivo no caldo lauril sulfato triptose contendo vancomicina, isolamento no meio Enterobacter sakazakii Isolation Agar e identificação no Vitek 2.0. As espécies foram identificadas por meio de múltipla PCR com alvo no gene cgcA. O antibiograma foi realizado pela técnica de difusão em ágar (KirbyBauer). Cronobacter spp. foi isolada em uma (1,1 %) amostra de queijo tipo Minas Frescal, identificada como C. sakazakii que apresentou sensibilidade a todos os antimicrobianos testados. Cronobacter spp. pode não representar risco à saúde dos indivíduos pelo consumo de queijos produzidos com leite pasteurizado. Entretanto, a presença de Cronobacter spp. em uma amostra de queijo demonstra falhas na produção, o que reforça a necessidade de maior adesão às Boas Práticas de Fabricação.

Cronobacter spp. is an opportunistic pathogen that may cause infections in individuals of any age, and the highest incidence occurs in neonates, immunocompromised patients and elderly persons. This study investigated Cronobacter spp. occurrence in 90 cheese samples (30 “Minas Frescal” type cheeses, 30 “Prato” type and 30 sliced “Prato” type). The isolated species were identified and the antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains was evaluated. The microbiological assay was performed with pre-enrichment in buffered peptone water, and selective-enrichment in modified lauryl sulphate tryptose broth containing vancomycin. Isolation and identification were done in Enterobacter sakazakii Isolation Agar and in Vitek 2.0, respectively. The species identification was performed by multiple PCR targeting cgaA gene. Antibiogram was done using agar diffusion method (Kirby-Bauer). Cronobacter spp. was isolated from one (1.1 %) sample of “Minas Frescal” type cheese, identified as C. sakazakii which was sensitive to all of tested antimicrobials. Cronobacter spp. does not represent a risk to the individuals health by consuming cheeses made from pasteurized milk. However, the presence of Cronobacter spp. in one sample of analyzed cheese indicates failures in their production, reinforcing the need for following the Good Manufacturing Practices.

Pesquisa de Cronobacter spp. em fórmulas infantis desidratadas / Screening the dehydrated powdered infant formulae for Cronobacter spp

Cronobacter spp. é uma bactéria oportunista associada a surtos de infecção em neonatos e criançasem virtude de consumo de fórmulas infantis desidratadas (FID). Neste contexto, o setor reguladortem criado normas específicas para o controle destes agentes patogênicos nas fórmulas infantis. Nesteestudo foi pesquisada a ocorrência de Cronobacter spp. em 60 amostras de FID comercializadas no Riode Janeiro, Brasil. Foram analisadas 30 amostras de fórmulas infantis para lactantes (0-6 meses) e 30 defórmulas infantis de seguimento para lactantes (> 6 meses) seguindo-se a metodologia de cultivo descritano Bacteriological Analytical Manual Online–FDA (2012). A identificação das colônias característicasfoi realizada com uso de kits ID32E, API20E e do sistema Vitek 2.0; e pela reação da polimerase emcadeia (PCR) com alvo no gene gluA. Nenhuma amostra apresentou contaminação por Cronobacterspp. Concluiu-se que a ocorrência de Cronobacter spp. em FID parece ser baixa, o que indica que osprodutores estão cumprindo o disposto nas normas brasileiras vigentes de forma a evitar a contaminaçãodos produtos por este micro-organismo...