Evaluación de dos métodos de criopreservación de embriones de llamas sobre las tasas de supervivencia in vivo e in vitro / Evaluation of two embryo cryopreservation methods in llama on the in vivo e in vitro embryonic survival rates

El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de dos métodos de criopreservación sobre la supervivencia in vivo e in vitro de embriones de llama. Se recuperaron 73 embriones en estadio de blastocisto eclosionado mediante una técnica no quirúrgica a los 6.5 días post servicio en llamas superestimuladas. Las llamas receptoras se distribuyeron aleatoriamente en grupo Control (n = 14), de vitrificación (n=30) y de congelación lenta (n=29). Para la vitrificación, los embriones fueron expuestos a la solución de vitrificación (SV) conteniendo 20% Glicerol + 20% Etilenglicol + 0.5M Sucrosa + 10% suero fetal bovino (SFB) + 50 µg/ml sulfato de gentamicina, y sumergidos en nitrógeno líquido dentro de pajillas de 0.25 ml. Para la congelación lenta, los embriones fueron expuestos a fosfato buffer salino (PBS) con 1.5 M de Etilenglicol + 10% de SFB + 50 µg/ml de sulfato de gentamicina, aspirados en pajillas de 0.25 ml, y enfriados a una tasa de descenso de 0.12 °C/min hasta 5 °C y, luego, en la boca del tanque de nitrógeno, se continuó el descenso a una tasa de 5 °C /min hasta -20 °C por 5 min, y luego se sumergieron en el nitrógeno líquido. En la descongelación se utilizaron soluciones de dilución conteniendo dos concentraciones de sucrosa: 0.5 M y 0.2 M para congelación lenta y 0.25 M y 0.12 M para vitrificación. Se realizó una evaluación in vivo a todos los embriones del grupo control y al 50% de los embriones de los dos grupos experimentales, mediante transferencia directa a hembras receptoras previamente sincronizadas. El diagnóstico de preñez se llevó a cabo por ecografía transrectal a los 20 y 30 días. La preñez fue de 4/13, 2/12 y 0/11 para las receptoras de los grupos Control, Vitrificados y Congelación lenta, respectivamente, sin diferencia estadística. Para la evaluación in vitro, los embriones criopreservados fueron cultivados en PBS + 20% SFB, en una atmósfera compuesta por 5% de CO2, 20% de O2 y 75% de N2, durante 1 h a 39 °C, y se observó ...

The aim of the study was to evaluate in llama embryos the effect of two cryopreservation methods on the in vivo and in vitro survival rate. Seventy three hatched blastocysts were recovered by a non-surgical technique at day 6.5 after mating from superstimulated llamas. Receptors were randomly allocated to a control group (n=14), vitrification (n=30) and slow freezing (n=29). On vitrification, embryos were exposed to a vitrification solution (VS) containing 20% Glycerol + 20% Ethylene glycol + 0.5 M Sucrose + 10% fetal calf serum (FCS) + 50 µg/ml gentamicin sulfate, and then plunged into liquid nitrogen in 0.25 ml straws. On the slow freezing, embryos were exposed to phosphate buffer saline (PBS) with 1.5 M Ethylene glycol + 10% FCS + 50 µg/ml gentamicin sulfate, loaded in 0.25 ml straws, and cooled at a rate of 0.12 °C/min to 5 °C. Then, further temperature decrease at 5 °C /min rate, to -20 °C, for 5 min at the mouth of the nitrogen tank; finally straws were plunged into liquid nitrogen. For thawing, two dilution solutions were used composed of two sucrose concentrations: 0.5 M and 0.2 M for slow freezing, and 0.25 M and 0.12 M for vitrification. An in vivo evaluation was performed in all embryos of the control group and in 50% of the experimental groups by direct transfer into previously synchronized female recipients. Pregnancy diagnosis was carried out by transrectal ultrasound evaluation at 20 and 30 days. Pregnancy was in 4/13, 2/12, and 0/11 in recipients from control, vitrification and slow freezing groups respectively, without significant difference. For the in vitro evaluation cryopreservated embryos were cultured in PBS + 20% FCS under atmosphere compose of 5% CO2, 20% O2, and 75% N2 at 39 °C for 1 h, then reexpansion ...

Transferencia embrionaria ipsilateral y contralateral a la posición del cuerpo lúteo y supervivencia embrionaria en llamas / Embryo transfer ipsilateral and contralateral to the position of the corpus luteum and embryo survival in llamas

El presente trabajo se realizó con el propósito de evaluar el efecto de la transferencia embrionaria ipsilateral y contralateral a la posición del cuerpo lúteo (CL), así como el tamaño del CL sobre la tasa de supervivencia embrionaria en llamas. Se utilizaron 43 llamas receptoras, adultas, distribuidas aleatoriamente en 4 grupos: G1 (n=10): CL en ovario derecho y transferencia ipsilateral, G2 (n=10): CL en ovario derecho y transferencia contralateral, G3 (n=15): CL en ovario izquierdo y transferencia ipsilateral y G4 (n=8): CL en ovario izquierdo y transferencia contralateral. Se usaron 10 llamas como donadoras de embriones, que fueron sincronizadas con LH (1 ml) (Día 0=D0), superovuladas con1000 UI de eCG en el D3, a las que se les provocó luteólisis con PGF 2 en el D7 y se les empadró en el D8. Ese día, las receptoras se trataron con LH para sincronizarlas con las donadoras. En el D14 se colectó, evaluó y transfirió los embriones. El 60 (G1) y 75% (G3) de las hembras preñaron con transferencia ipsilateral derecha e izquierda, respectivamente, mientras solo el 30 (G2) y 25% (G4) preñaron con transferencia contralateral derecha e izquierda, respectivamente. Sin embargo, solo se encontró diferencia significativa entre el grupo G3 con los grupos G2 y G4 (p<0.05). Los resultados indican una mayor tasa de supervivencia embrionaria en llamas al realizar la transferencia en el cuerno ipsilateral a la posición del CL ubicado en el ovario izquierdo.

The study was carried out to evaluate the effect the embryo transfer to the uterine horn ipsilateral and contralateral to the side of the corpus luteum (CL) and the size of CL on the embryo survival in llamas. It was used 43 recipient adult females randomly assigned to 4 groups: G1 (n=10): CL in right ovary and ipsilateral embryo transfer, G2 (n=10): CL in right ovary and contralateral transfer, G3 (n=15): CL in left ovary and ipsilateral transfer, and G4 (n=8): CL in left ovary and contralateral transfer. Ten llamas were used as embryo donors. They were synchronized with LH (1 ml) on Day 0 (D0), superovulated with 1000 UI eCG on D3, luteolysis was induced with PGF 2 on D7, and mated on D8. Recipients were treated on D7 with LH to get synchrony with the donors. On D14 embryos were collected, evaluated and transferred. The results showed that 60 (G1) and 75% (G3) recipients conceived when embryo transfer was right and left ipsilateral respectively, while only 30 (G2) and 25% (G4) conceived when embryo transfer was right and left contralateral respectively. However, statistical difference was only observed between G3 with G2 and G4 (p<0.05). These results indicate that pregnancy rate is higher in llamas when the embryo transfer was done in to the uterine horn ipsilateral to the CL in the left ovary.

Estimulación con gonadotropina coriónica equina (ECG) durante las fases luteal y no luteal sobre la respuesta ovárica y calidad embrionaria en llamas / Equine chorionic gonadotrophin (ECG) stimulation during the luteal and non-luteal phases on ovarian response and embryo quality in llamas

Se evaluó el efecto del tratamiento superovulatorio en las dos fases del ciclo ovárico sobre la respuesta folicular y la calidad embrionaria en 45 llamas hembras adultas. Se incluyeron en el estudio aquellos animales que a la ecografía presentaron un folículo preovulatorio >7 mm. Los animales se distribuyeron en tres grupos: T0 (no estimulado), T1 (tratamiento superovulatorio en fase no luteal) y T2 (tratamiento superovulatorio en fase luteal). Los animales de T1 y T2 recibieron 1 ml de LH (día 0) para sincronizar la onda folicular y 1000 UI de eCG (día 3) como tratamiento superovulatorio. Se utilizaron esponjas vaginales impregnadas con progesterona entre el día 3 y 7 para simular la fase luteal en el T2. La inducción de la ovulación se hizo mediante monta natural y aplicación de 1 ml de GnRH (día 8). La colección y evaluación de embriones se realizó 7 días post cópula (día 15) en T1 y T2. En el grupo T0 se realizó monta natural y aplicación de GnRH y 7 días después se realizó la colección de embriones. El número de folículos preovulatorios fue mayor en T1 (11.07 ± 7.53) y T2 (6.13 ± 7.11) con respecto a T0 (1.07 ± 0.26) (p<0.05). El número de cuerpos lúteos fue mayor en T1 (9.27 ± 3.37) con respecto a T0 (1.07 ± 0.26) y T2 (6.47 ± 4.29) (p<0.05). Asimismo, el número de embriones recuperados fue mayor en T1 (3.47 ± 4.26) con respecto a T0 (0.33 ± 0.48) y T2 (1.33 ± 2.53). Los resultados permiten concluir que la aplicación del tratamiento superovulatorio durante una fase no luteal permiten obtener una mejor respuesta ovárica y embrionaria en comparación con tratamientos superovulatorios aplicados en fase luteal.

The effect of superovulatory treatment during the two phases of the ovarian cycle on follicular growth and embryo quality was evaluated in 45 sexually adult llamas. Animals bearing a >7 mm follicle, observed by ultrasonography, were selected and allocated into 3 groups: T0 (non-stimulated), T1 (superovulatory treatment during the non luteal phase), and T2 (superovulatory treatment during the luteal phase). Animals in groups T1 and T2 received 1 ml of LH (day 0) for synchronization of the follicular wave and 1000 IU of Ecg (day 3) as superovulatory treatment. Vaginal sponges impregnated with progesterone were used on days 3 to 7 in T2 to simulate the luteal phase. The induction of the ovulation (day 8) was done through natural mating and the application of GnRH (1 ml). Embryo recovery was done 7 days after natural mating (day 15) on T1 and T2. Similarly, embryo recovery was done 7 days after natural mating and application of GnRH in T0. The number of preovulatory follicles was larger in T1 (11.07 ± 7.53) and T2 (6.13 ± 7.11) than in T0 (1.07 ± 0.26) (p<0.05). The number of corpora lutea was larger in T1 (9.27 ± 3.37) than in T0 (1.07 ± 0.26) and T2 (6.47 ± 4.29) (p<0.05). The number of recovered embryos was larger in T1 (3.47 ± 4.26) than in T0 (0.33 ± 0.48) and T2 (1.33 ± 2.53). The results showed that superovulatory treatment during the non luteal phase had a better response than superovulatory treatment during the luteal phase.

Efecto de fracciones del plasma seminal, según su peso molecular, sobre la inducción de la ovulación en llamas (Lama glama) / Effect of plasma seminal fractions, based on molecular weight, on the induction of ovulation in llamas (Lama glama)

El presente estudio fue realizado con el propósito de evaluar el efecto de varias fracciones de plasma seminal de llamas, según su peso molecular (PM), sobre la inducción de la ovulación. Se utilizó 54 llamas hembras sin cría y en óptimo estado reproductivo, con folículo dominante ≥7 mm de diámetro determinado por ecografía transrectal por tres días consecutivos. Los animales se distribuyeron al azar a uno de los seis tratamientos: A) fracción de plasma seminal con PM ≥30 kDa, B) fracción de plasma seminal con PM entre 10 y 30 kDa, C) fracción de plasma seminal con PM entre 5 y 10 kDa, D) fracción de plasma seminal con PM <5 kDa, E) plasma seminal completo, y F) PBS. Los animales fueron tratados con una solución de 1.5 ml de la fracción de plasma seminal o placebo correspondiente por vía intramuscular. Las llamas fueron evaluadas por ecografía en el día 2 y 9 post-tratamiento para determinar la tasa de ovulación y el tamaño del cuerpo lúteo. Los resultados indicaron una tasa de ovulación del 100 por ciento en los grupos A y E, 11.1 por ciento en B y 0 por ciento en los demás tratamientos. No se encontró diferencias estadísticas entre grupos respecto al diámetro luteal. Los resultados obtenidos permiten señalar que la fracción de plasma seminal con peso molecular mayor a 30 kDa induce la ovulación en llamas.

The present study was conducted to evaluate the effect of different fractions of llama seminal plasma, based on the molecular weight (MW), on the ovulation. Fifty four female adult llamas without calf at foot and in good reproductive conditions were used. The animals were bearing a ≥7 mm dominant follicle determined by ultrasound diagnosis during a three consecutive days. Females were randomly distributed in six groups: A, fraction of seminal plasma with MW ≥30 kDa; B, fraction of seminal plasma with MW ≥10 and <30 kDa; C, fraction of seminal plasma with MW ≥5 and <10 kDa ; D, fraction of seminal plasma with MW <5 kDa; E, complete plasma seminal; and F, PBS. Animals were treated with a 1.5 ml solution of the corresponding fraction or placebo via i.m. Ovarian ultrasound was performed at day 2 and 9 post-treatment to determine the ovulation rate and the size of the corpora lutea. Ovulation rate was 100 por ciento in groups A and E, 11.1 por ciento in group B and 0 por ciento in the other groups. No statistical differences were observed between groups on the size of the corpus luteum. The results indicated that the plasma seminal fraction with molecular weight ≥30 kDa induce ovulation in llamas.