Histopathology and immunohistochemistry of peripheral neural sheath tumor and perivascular wall tumor in dog / Histopatologia e imuno-histoquímica de tumor de bainha de nervo periférico e de tumor de parede perivascular em cães

Soft tissue sarcomas (STS) comprise a heterogeneous group of malignancies derived from extra-skeletal mesenchymal tissues that may show similar histopathological changes. Histopathologic patterns suggestive of perivascular wall tumors (PWT) and peripheral nerve sheath tumors (PNST) have been described. This study investigated the histogenesis in a series of 71 cases of canine STS that showed morphological compatibility with what is described for PWT and PNST. Immunohistochemistry analysis were done to CD56, S100, SMA, Desmin, Von Willebrand Factor, NSE and GFAP. Twenty-one cases (29.6%) showed histopathologic features compatible with PWT, 23 cases (32.4%) with PNST and 27 cases (38.0%) shared both histopathological features. By immunohistochemistry, 59 (83.1%) cases showed positivity only for neural markers and 12 (16.9%) had simultaneous positivity for both neural and muscle markers. PNST was the most prevalent neoplasm and none of the cases were positive for muscle markers only. The histopathologic features were not useful to define the diagnosis of PWT, since most tumors were negative for muscle markers but positive for neural markers. Due to this immunoreactivity and the morphologic features, future studies may propose guidelines for the classification of these neoplasms.(AU)

Sarcoma de tecidos moles (STM) compreende um grupo heterogêneo de neoplasias malignas, derivadas de tecidos extraesqueléticos, que podem apresentar alterações histopatológicas similares. Os padrões histopatológicos sugestivos de tumor de parede perivascular (TPP) e de tumor de bainha de nervo periférico (TBNP) têm sido descritos. Este estudo investigou a histogênese de uma série de 71 STM caninos, que apresentavam compatibilidade morfológica com o que é descrito para TPP e TBNP. A análise imuno-histoquímica foi feita para CD56, S100, SMA, Desmina, Fator Von Willebrand, NSE e GFAP. Vinte e um casos (29,6%) apresentaram características histopatológicas compatíveis com TPP, 23 casos (32,4%) com TBNP e 27 casos (38,0%) apresentaram características histopatológicas de ambos. Na imuno-histoquímica, 59 (83,1%) casos apresentaram positividade somente para marcadores neurais e 12 (16,9%) tiveram positividade simultânea tanto para marcadores neurais como para marcadores musculares. TBNP foi a neoplasia mais prevalente e nenhum dos casos foi positivo para somente para marcadores musculares. As características histopatológicas não foram úteis para definir o diagnóstico de TPP, uma vez que a maioria foi negativa para marcadores musculares, mas positiva para marcadores neurais. Devido a essa imunorreatividade e às características morfológicas, pesquisas futuras poderão propor orientações para a classificação dessas neoplasias.(AU)

Histopathology and immunohistochemistry of peripheral neural sheath tumor and perivascular wall tumor in dog / Histopatologia e imuno-histoquímica de tumor de bainha de nervo periférico e de tumor de parede perivascular em cães

Soft tissue sarcomas (STS) comprise a heterogeneous group of malignancies derived from extra-skeletal mesenchymal tissues that may show similar histopathological changes. Histopathologic patterns suggestive of perivascular wall tumors (PWT) and peripheral nerve sheath tumors (PNST) have been described. This study investigated the histogenesis in a series of 71 cases of canine STS that showed morphological compatibility with what is described for PWT and PNST. Immunohistochemistry analysis were done to CD56, S100, SMA, Desmin, Von Willebrand Factor, NSE and GFAP. Twenty-one cases (29.6%) showed histopathologic features compatible with PWT, 23 cases (32.4%) with PNST and 27 cases (38.0%) shared both histopathological features. By immunohistochemistry, 59 (83.1%) cases showed positivity only for neural markers and 12 (16.9%) had simultaneous positivity for both neural and muscle markers. PNST was the most prevalent neoplasm and none of the cases were positive for muscle markers only. The histopathologic features were not useful to define the diagnosis of PWT, since most tumors were negative for muscle markers but positive for neural markers. Due to this immunoreactivity and the morphologic features, future studies may propose guidelines for the classification of these neoplasms.(AU)

Sarcoma de tecidos moles (STM) compreende um grupo heterogêneo de neoplasias malignas, derivadas de tecidos extraesqueléticos, que podem apresentar alterações histopatológicas similares. Os padrões histopatológicos sugestivos de tumor de parede perivascular (TPP) e de tumor de bainha de nervo periférico (TBNP) têm sido descritos. Este estudo investigou a histogênese de uma série de 71 STM caninos, que apresentavam compatibilidade morfológica com o que é descrito para TPP e TBNP. A análise imuno-histoquímica foi feita para CD56, S100, SMA, Desmina, Fator Von Willebrand, NSE e GFAP. Vinte e um casos (29,6%) apresentaram características histopatológicas compatíveis com TPP, 23 casos (32,4%) com TBNP e 27 casos (38,0%) apresentaram características histopatológicas de ambos. Na imuno-histoquímica, 59 (83,1%) casos apresentaram positividade somente para marcadores neurais e 12 (16,9%) tiveram positividade simultânea tanto para marcadores neurais como para marcadores musculares. TBNP foi a neoplasia mais prevalente e nenhum dos casos foi positivo para somente para marcadores musculares. As características histopatológicas não foram úteis para definir o diagnóstico de TPP, uma vez que a maioria foi negativa para marcadores musculares, mas positiva para marcadores neurais. Devido a essa imunorreatividade e às características morfológicas, pesquisas futuras poderão propor orientações para a classificação dessas neoplasias.(AU)

Quantificação do colágeno dérmico equino por duas técnicas morfométricas: contagem de pontos e segmentação de cor / Quantification of equine dermal collagen by two morphometric techniques: point counting and color segmentation

Os colágenos tipos I e III apresentam diferentes tonalidades de birrefringência em cortes histológicos corados com Picrosirius red e analisados em microscópio sob luz polarizada. Com base nessa propriedade, os colágenos podem ser quantificados por histomorfometria. Entretanto, são muitas as variáveis que podem afetar a distribuição das cores na imagem histológica, e a escolha adequada dos parâmetros de análise têm grande influência no resultado final. O objetivo deste trabalho foi comparar a quantificação histomorfométrica de colágeno em pele equina pela morfometria por contagem de pontos e pela segmentação de cor com diversas configurações, a fim de se determinar o melhor método de avaliação. Para a morfometria por contagem de pontos, foram utilizadas três gratículas diferentes (391, 588 e 792 pontos de interseções) e, para a segmentação de cor, seis combinações de hue e brightness no software ImageJ. Os valores foram submetidos ao teste de Friedman, seguido pelo teste de Tukey com 5% de significância. Os resultados demonstraram que a quantificação dos colágenos na gratícula de 792 pontos foi equivalente aos resultados da segmentação de cor com brightness de 1-255 e hue de 0-42 e 43-120 para os colágenos tipos I e III, respectivamente. Dessa forma, conclui-se que a análise automática da segmentação de cor, utilizando configuração adequada para brightness e hue, pode substituir a morfometria por contagem de pontos de forma confiável e segura.(AU)

The types I and III collagens present different tonalities of birefringence in histological sections stained with Picrosirius red, that can be analyzed under a polarized light microscope. Based on this property, collagens can be quantified by histomorphometry. However, many variables can affect the color distribution in the histological image, and the appropriate choice of the analysis parameters have a significant influence on the final result. The objective of this study was to compare the histomorphometric quantification of collagen in the equine skin by counting points planimetry and color segmentation with different configurations to determine the best method of evaluation. For planimetry, three different graticules (391, 588 and 792 intersections) were used and, for color segmentation, six combinations of hue and brightness in ImageJ software. The values were submitted to the Friedman test followed by Tukey with 5% significance. The results showed that the quantification of collagens in the graticule of 792 intersections was equivalent to the results of color segmentation with a brightness of 1-255 and hue of 0-42 and 43-120 for collagens type I and III, respectively. Automatic analysis of the color segmentation, using suitable configuration for brightness and hue can replace the counting points planimetry reliably and safely.(AU)

Quantificação do colágeno dérmico equino por duas técnicas morfométricas: contagem de pontos e segmentação de cor / Quantification of equine dermal collagen by two morphometric techniques: point counting and color segmentation

Os colágenos tipos I e III apresentam diferentes tonalidades de birrefringência em cortes histológicos corados com Picrosirius red e analisados em microscópio sob luz polarizada. Com base nessa propriedade, os colágenos podem ser quantificados por histomorfometria. Entretanto, são muitas as variáveis que podem afetar a distribuição das cores na imagem histológica, e a escolha adequada dos parâmetros de análise têm grande influência no resultado final. O objetivo deste trabalho foi comparar a quantificação histomorfométrica de colágeno em pele equina pela morfometria por contagem de pontos e pela segmentação de cor com diversas configurações, a fim de se determinar o melhor método de avaliação. Para a morfometria por contagem de pontos, foram utilizadas três gratículas diferentes (391, 588 e 792 pontos de interseções) e, para a segmentação de cor, seis combinações de hue e brightness no software ImageJ. Os valores foram submetidos ao teste de Friedman, seguido pelo teste de Tukey com 5% de significância. Os resultados demonstraram que a quantificação dos colágenos na gratícula de 792 pontos foi equivalente aos resultados da segmentação de cor com brightness de 1-255 e hue de 0-42 e 43-120 para os colágenos tipos I e III, respectivamente. Dessa forma, conclui-se que a análise automática da segmentação de cor, utilizando configuração adequada para brightness e hue, pode substituir a morfometria por contagem de pontos de forma confiável e segura.(AU)

The types I and III collagens present different tonalities of birefringence in histological sections stained with Picrosirius red, that can be analyzed under a polarized light microscope. Based on this property, collagens can be quantified by histomorphometry. However, many variables can affect the color distribution in the histological image, and the appropriate choice of the analysis parameters have a significant influence on the final result. The objective of this study was to compare the histomorphometric quantification of collagen in the equine skin by counting points planimetry and color segmentation with different configurations to determine the best method of evaluation. For planimetry, three different graticules (391, 588 and 792 intersections) were used and, for color segmentation, six combinations of hue and brightness in ImageJ software. The values were submitted to the Friedman test followed by Tukey with 5% significance. The results showed that the quantification of collagens in the graticule of 792 intersections was equivalent to the results of color segmentation with a brightness of 1-255 and hue of 0-42 and 43-120 for collagens type I and III, respectively. Automatic analysis of the color segmentation, using suitable configuration for brightness and hue can replace the counting points planimetry reliably and safely.(AU)

Biocerâmica de fosfato de cálcio nanoestruturada micro-macroporosa em grânulos de absorção rápida no preenchimento de defeito crítico em rádio de coelhos (Oryctolagus cuniculus) / Bioceramics of calcium phosphate nano-structured micro-macro porous granules rapidly absorbed in filling critical radial defect in rabbits (Oryctolagus cuniculus)

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, por radiografia, histologia e densitometria óssea, o efeito da HA/ßTCP em grânulos de absorção rápida em defeito ósseo crítico em rádio de coelhos. Foram utilizados 35 coelhos machos, da raça Nova Zelândia, e realizou-se um defeito crítico nos rádios direito e esquerdo. Os animais foram distribuídos em GI, enxerto autólogo e GII, HA/ßTCP em grânulos de absorção rápida. Avaliações radiográficas foram feitas antes da cirurgia, após, aos oito, 15, 30, 45 e 60 dias e avaliações histológicas e de densitometria. Verificou-se diferença significativa ao se comparar a densidade mineral óssea obtida ao longo do tempo de estudo. Observou-se formação de rede vascular entre os poros da biocerâmica desde o primeiro tempo de avaliação, (oito dias). Foram observados tecido ósseo primário e trabéculas em tecido ósseo preexistente a partir de 30 dias da implantação. Aos 60 dias, constatou-se presença de matriz óssea em segmentos ósseos preexistentes, caracterizando a formação óssea centrípeta. A biocerâmica HA/ßTCP nanoestruturada micro-macroporosa em grânulos de absorção rápida não causa alterações microscópicas indicativas de rejeição, permite a invasão e a multiplicação celular, bem como propicia a regeneração óssea, constituindo um implante apropriado para preenchimento de falhas ósseas críticas.(AU)

The objective of this study was to evaluate the effect of HA/ ßTCP on rapid absorption granules in rabbit radiography, histology, and bone densitometry. Thirty - five male rabbits of the New Zealand breed were used and a critical defect was performed on the right and left radios. The animals were distributed in GI, autologous graft and GII HA / ßTCP in rapidly absorbed granules. Radiographic, histological, and densitometry evaluations were performed before surgery, then after eight, 15, 30, 45 and 60 days. A significant difference was found when comparing the bone mineral density obtained over the study time. Formation of vascular network between the bioceramic pores was observed by the first evaluation time, (eight days). Primary bone tissue and trabeculae were observed from preexisting bone tissue after 30 days of implantation. At 60 days, the presence of bone matrix was observed from the preexisting bone segments, characterizing the centripetal bone formation. The micro-macroporous nanocomposite HA / ßTCP of rapidly absorbing granules do not cause microscopic changes indicative of rejection, allows invasion, cell multiplication, and promotes bone regeneration, constituting an appropriate implant for filling of critical bone failures.(AU)

Babesia spp. no líquido peritoneal em cão com ascite - relato de caso / Babesia spp. in the peritoneal fluid in dog with ascites - case report

Babesia canis é um protozoário cosmopolita que parasita eritrócitos de cães domésticos e selvagens. O diagnóstico é realizado mediante a observação direta do microrganismo em hemácias no esfregaço de sangue periférico, métodos sorológicos e técnicas moleculares. O objetivo deste trabalho é relatar pela primeira vez a presença de merozoítos de Babesia spp. no líquido peritoneal de um cão com ascite. No Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa, foi atendido um cão, macho, sem raça definida, de sete meses de idade, com histórico de emaciação, apatia e abaulamento abdominal. No exame físico, foram evidenciadas mucosas hipocoradas, ascite, sopro sistólico grau IV/V e taquipneia. Nos exames laboratoriais, evidenciou-se anemia normocítica/normocrômica, trombocitopenia e hipoproteinemia. No esfregaço sanguíneo, foram observadas estruturas intraeritrocitárias compatíveis com Babesia spp. A avaliação do líquido ascítico foi compatível com transudato modificado e observaram-se inúmeras estruturas intra e extracelulares compatíveis com merozoítas de Babesia spp. A presença de microrganismos intra e extracelular poderia estar relacionada a uma lesão no baço com extravasamento do conteúdo para a cavidade abdominal. A coleta do líquido peritoneal pode ser uma alternativa para o diagnóstico de babesiose quando o animal com suspeita da infecção apresentar ascite.(AU)

Babesia canis is a cosmopolitan protozoan that parasites erythrocytes of domestic and wild dogs. The diagnosis is performed by direct observation of the microorganism in red blood cells in the peripheral blood smear, serological methods and molecular techniques. The aim of this work is to report for the first time the presence of merozoites of Babesia spp. in the peritoneal fluid of a dog with ascites. At the Veterinary Hospital of the Federal University of Viçosa was attended a Mixed-breed seven month old dog, male, with history of emaciation, apathy and abdominal bulging. Pale mucous membranes, ascites, grade IV/V systolic murmur and tachypnea were evidenced in the physical examination. Laboratory tests revealed normocytic/normochromic anemia, thrombocytopenia, and hypoproteinemia. Intra-erythrocyte structures compatible with Babesia spp. were observed in the blood smear. The evaluation of the ascites fluid was compatible with modified transudate where numerous intra and extracellular structures compatible with Babesia spp. merozoites were observed. The presence of intra and extracellular microorganisms could be related to an injury of the spleen with extravasation of the contents into the abdominal cavity. Collection of the peritoneal fluid may be an alternative for the diagnosis of babesiosis when the animal with suspected infection has ascites.(AU)

Babesia spp. no líquido peritoneal em cão com ascite - relato de caso / Babesia spp. in the peritoneal fluid in dog with ascites - case report

Babesia canis é um protozoário cosmopolita que parasita eritrócitos de cães domésticos e selvagens. O diagnóstico é realizado mediante a observação direta do microrganismo em hemácias no esfregaço de sangue periférico, métodos sorológicos e técnicas moleculares. O objetivo deste trabalho é relatar pela primeira vez a presença de merozoítos de Babesia spp. no líquido peritoneal de um cão com ascite. No Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa, foi atendido um cão, macho, sem raça definida, de sete meses de idade, com histórico de emaciação, apatia e abaulamento abdominal. No exame físico, foram evidenciadas mucosas hipocoradas, ascite, sopro sistólico grau IV/V e taquipneia. Nos exames laboratoriais, evidenciou-se anemia normocítica/normocrômica, trombocitopenia e hipoproteinemia. No esfregaço sanguíneo, foram observadas estruturas intraeritrocitárias compatíveis com Babesia spp. A avaliação do líquido ascítico foi compatível com transudato modificado e observaram-se inúmeras estruturas intra e extracelulares compatíveis com merozoítas de Babesia spp. A presença de microrganismos intra e extracelular poderia estar relacionada a uma lesão no baço com extravasamento do conteúdo para a cavidade abdominal. A coleta do líquido peritoneal pode ser uma alternativa para o diagnóstico de babesiose quando o animal com suspeita da infecção apresentar ascite.(AU)

Babesia canis is a cosmopolitan protozoan that parasites erythrocytes of domestic and wild dogs. The diagnosis is performed by direct observation of the microorganism in red blood cells in the peripheral blood smear, serological methods and molecular techniques. The aim of this work is to report for the first time the presence of merozoites of Babesia spp. in the peritoneal fluid of a dog with ascites. At the Veterinary Hospital of the Federal University of Viçosa was attended a Mixed-breed seven month old dog, male, with history of emaciation, apathy and abdominal bulging. Pale mucous membranes, ascites, grade IV/V systolic murmur and tachypnea were evidenced in the physical examination. Laboratory tests revealed normocytic/normochromic anemia, thrombocytopenia, and hypoproteinemia. Intra-erythrocyte structures compatible with Babesia spp. were observed in the blood smear. The evaluation of the ascites fluid was compatible with modified transudate where numerous intra and extracellular structures compatible with Babesia spp. merozoites were observed. The presence of intra and extracellular microorganisms could be related to an injury of the spleen with extravasation of the contents into the abdominal cavity. Collection of the peritoneal fluid may be an alternative for the diagnosis of babesiosis when the animal with suspected infection has ascites.(AU)

Biocerâmica de fosfato de cálcio nanoestruturada micro-macroporosa em grânulos de absorção rápida no preenchimento de defeito crítico em rádio de coelhos (Oryctolagus cuniculus) / Bioceramics of calcium phosphate nano-structured micro-macro porous granules rapidly absorbed in filling critical radial defect in rabbits (Oryctolagus cuniculus)

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, por radiografia, histologia e densitometria óssea, o efeito da HA/ßTCP em grânulos de absorção rápida em defeito ósseo crítico em rádio de coelhos. Foram utilizados 35 coelhos machos, da raça Nova Zelândia, e realizou-se um defeito crítico nos rádios direito e esquerdo. Os animais foram distribuídos em GI, enxerto autólogo e GII, HA/ßTCP em grânulos de absorção rápida. Avaliações radiográficas foram feitas antes da cirurgia, após, aos oito, 15, 30, 45 e 60 dias e avaliações histológicas e de densitometria. Verificou-se diferença significativa ao se comparar a densidade mineral óssea obtida ao longo do tempo de estudo. Observou-se formação de rede vascular entre os poros da biocerâmica desde o primeiro tempo de avaliação, (oito dias). Foram observados tecido ósseo primário e trabéculas em tecido ósseo preexistente a partir de 30 dias da implantação. Aos 60 dias, constatou-se presença de matriz óssea em segmentos ósseos preexistentes, caracterizando a formação óssea centrípeta. A biocerâmica HA/ßTCP nanoestruturada micro-macroporosa em grânulos de absorção rápida não causa alterações microscópicas indicativas de rejeição, permite a invasão e a multiplicação celular, bem como propicia a regeneração óssea, constituindo um implante apropriado para preenchimento de falhas ósseas críticas.(AU)

The objective of this study was to evaluate the effect of HA/ ßTCP on rapid absorption granules in rabbit radiography, histology, and bone densitometry. Thirty - five male rabbits of the New Zealand breed were used and a critical defect was performed on the right and left radios. The animals were distributed in GI, autologous graft and GII HA / ßTCP in rapidly absorbed granules. Radiographic, histological, and densitometry evaluations were performed before surgery, then after eight, 15, 30, 45 and 60 days. A significant difference was found when comparing the bone mineral density obtained over the study time. Formation of vascular network between the bioceramic pores was observed by the first evaluation time, (eight days). Primary bone tissue and trabeculae were observed from preexisting bone tissue after 30 days of implantation. At 60 days, the presence of bone matrix was observed from the preexisting bone segments, characterizing the centripetal bone formation. The micro-macroporous nanocomposite HA / ßTCP of rapidly absorbing granules do not cause microscopic changes indicative of rejection, allows invasion, cell multiplication, and promotes bone regeneration, constituting an appropriate implant for filling of critical bone failures.(AU)

Caracterização de colágenos tipos I e III no estroma do carcinoma de células escamosas cutâneo em cães / Characterization of types I and III collagen in the stroma of cutaneous squamous cell carcinoma in dogs

O carcinoma de células escamosas (CCE) é uma neoplasia epitelial maligna que acomete cães e diversas outras espécies, incluindo a humana. O CCE afeta vários sítios anatômicos e pode desenvolver metástase. O objetivo deste estudo foi a caracterização das fibras de colágenos tipos I e III no estroma do CCE cutâneo de cães. Para este trabalho, utilizaram-se 44 amostras de pele incluídas em parafina e que tiveram prévio diagnóstico de CCE. As amostras foram processadas histologicamente e coradas com hematoxilina/eosina para confirmação do diagnóstico e classificação do grau de diferenciação tumoral e com a coloração histoquímica de picrosirius para observação dos colágenos tipos I e III. O colágeno tipo III mostrou maior expressão nos CCEs cutâneos bem diferenciados. O papel do colágeno do tipo III nas neoplasias não está bem esclarecido, e outros fatores além do grau de diferenciação celular podem estar envolvidos em sua expressão e determinar sua importância na biologia tumoral.(AU)

Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant epithelial tumor that affects dogs and several other species, including humans. The SCC occurs in various anatomical sites and can develop metastasis. The aim of this study was to characterize types I and III collagen fibers in the stroma of cutaneous SCC in dogs. For this work 44 paraffin-embedded samples with previous diagnostic of SCC were used. Samples were processed and evaluated histologically with hematoxylin/eosin to confirm the diagnosis and classification of cell differentiation degree and with Picrosirius for observation of types I and III collagen. Type III collagen expression was higher in well-differentiated SCC. The role of type III collagen in cancer is not very clear and factors other than cell differentiation degree may be involved in its expression and determine its importance in tumor biology.(AU)

Caracterização de colágenos tipos I e III no estroma do carcinoma de células escamosas cutâneo em cães / Characterization of types I and III collagen in the stroma of cutaneous squamous cell carcinoma in dogs

O carcinoma de células escamosas (CCE) é uma neoplasia epitelial maligna que acomete cães e diversas outras espécies, incluindo a humana. O CCE afeta vários sítios anatômicos e pode desenvolver metástase. O objetivo deste estudo foi a caracterização das fibras de colágenos tipos I e III no estroma do CCE cutâneo de cães. Para este trabalho, utilizaram-se 44 amostras de pele incluídas em parafina e que tiveram prévio diagnóstico de CCE. As amostras foram processadas histologicamente e coradas com hematoxilina/eosina para confirmação do diagnóstico e classificação do grau de diferenciação tumoral e com a coloração histoquímica de picrosirius para observação dos colágenos tipos I e III. O colágeno tipo III mostrou maior expressão nos CCEs cutâneos bem diferenciados. O papel do colágeno do tipo III nas neoplasias não está bem esclarecido, e outros fatores além do grau de diferenciação celular podem estar envolvidos em sua expressão e determinar sua importância na biologia tumoral.

Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant epithelial tumor that affects dogs and several other species, including humans. The SCC occurs in various anatomical sites and can develop metastasis. The aim of this study was to characterize types I and III collagen fibers in the stroma of cutaneous SCC in dogs. For this work 44 paraffin-embedded samples with previous diagnostic of SCC were used. Samples were processed and evaluated histologically with hematoxylin/eosin to confirm the diagnosis and classification of cell differentiation degree and with Picrosirius for observation of types I and III collagen. Type III collagen expression was higher in well-differentiated SCC. The role of type III collagen in cancer is not very clear and factors other than cell differentiation degree may be involved in its expression and determine its importance in tumor biology.

Platelet rich plasma associated with heterologous fresh and thawed chondrocytes on osteochondral lesions of rabbits / Associação de plasma rico em plaquetas e condrócitos heterólogos frescos e descongelados em lesão osteocondral de coelhos

Chondrocytes obtained from stifle joint of New Zealand White rabbits were cultivated. Half of cells were maintained in culture for later implantation and the others frozen during six months to evaluate viability. A circular osteochondral defect was created in the right stifle of other twenty seven rabbits. The control group (CG) received no treatment. The thawed (TH) and fresh (FH) heterologous groups received, respectively, an implant of cultivated thawed or fresh heterologous chondrocytes associated with platelet rich plasma (PRP). The CG group showed greatest pain and lameness compared to the other groups seven days after the implantation. Microscopically, at 45 and 90 days, the TH and FH groups showed filling with cartilaginous tissue containing chondrocytes surrounded by a dense matrix of glycosaminoglycans. In the CG group, healing occurred with vascularized fibrous connective tissue without integration to the subchondral bone. Cryopreserved heterologous chondrocytes were viable for implantation and healing of osteochondral lesions; the association with PRP allows the fixation of cells in the lesion and offers growth factors which accelerates repair with tissue similar to articular hyaline cartilage.

Cultivaram-se condrócitos obtidos da articulação do joelho de coelhos. Metade das células foi mantida em cultura para posterior implantação, e a outra metade foi congelada durante seis meses com a finalidade de avaliar a viabilidade. Criou-se um defeito circular osteocondral no joelho direito de outros vinte e sete coelhos. O grupo controle (GC) não recebeu tratamento. Os grupos descongelado (TH) e fresco (FH) receberam, respectivamente, implantes heterólogos de condrócitos cultivados descongelados e frescos, associados com PRP. O grupo GC apresentou maior dor e claudicação em comparação com os outros grupos aos sete dias após o implante. Microscopicamente, aos 45 e 90 dias, os grupos TH e FH mostraram preenchimento da falha com tecido cartilaginoso contendo condrócitos circundados por uma matriz densa de glicosaminoglicanos. Nesse período, no grupo CG, a cura ocorreu com tecido conjuntivo fibroso vascularizado e sem integração com o osso subcondral. Condrócitos heterólogos criopreservados foram viáveis para implantação e tratamento de lesões osteocondrais; a associação com o PRP permitiu a fixação de células na lesão e ofereceu fatores de crescimento que aceleraram a reparação com o tecido semelhante à cartilagem hialina articular.

Platelet rich plasma associated with heterologous fresh and thawed chondrocytes on osteochondral lesions of rabbits / Associação de plasma rico em plaquetas e condrócitos heterólogos frescos e descongelados em lesão osteocondral de coelhos

Chondrocytes obtained from stifle joint of New Zealand White rabbits were cultivated. Half of cells were maintained in culture for later implantation and the others frozen during six months to evaluate viability. A circular osteochondral defect was created in the right stifle of other twenty seven rabbits. The control group (CG) received no treatment. The thawed (TH) and fresh (FH) heterologous groups received, respectively, an implant of cultivated thawed or fresh heterologous chondrocytes associated with platelet rich plasma (PRP). The CG group showed greatest pain and lameness compared to the other groups seven days after the implantation. Microscopically, at 45 and 90 days, the TH and FH groups showed filling with cartilaginous tissue containing chondrocytes surrounded by a dense matrix of glycosaminoglycans. In the CG group, healing occurred with vascularized fibrous connective tissue without integration to the subchondral bone. Cryopreserved heterologous chondrocytes were viable for implantation and healing of osteochondral lesions; the association with PRP allows the fixation of cells in the lesion and offers growth factors which accelerates repair with tissue similar to articular hyaline cartilage.(AU)

Cultivaram-se condrócitos obtidos da articulação do joelho de coelhos. Metade das células foi mantida em cultura para posterior implantação, e a outra metade foi congelada durante seis meses com a finalidade de avaliar a viabilidade. Criou-se um defeito circular osteocondral no joelho direito de outros vinte e sete coelhos. O grupo controle (GC) não recebeu tratamento. Os grupos descongelado (TH) e fresco (FH) receberam, respectivamente, implantes heterólogos de condrócitos cultivados descongelados e frescos, associados com PRP. O grupo GC apresentou maior dor e claudicação em comparação com os outros grupos aos sete dias após o implante. Microscopicamente, aos 45 e 90 dias, os grupos TH e FH mostraram preenchimento da falha com tecido cartilaginoso contendo condrócitos circundados por uma matriz densa de glicosaminoglicanos. Nesse período, no grupo CG, a cura ocorreu com tecido conjuntivo fibroso vascularizado e sem integração com o osso subcondral. Condrócitos heterólogos criopreservados foram viáveis para implantação e tratamento de lesões osteocondrais; a associação com o PRP permitiu a fixação de células na lesão e ofereceu fatores de crescimento que aceleraram a reparação com o tecido semelhante à cartilagem hialina articular.(AU)

Avaliação da coinfecção do circovírus suíno 2 com Mycoplasma hyopneumoniae em amostras de pulmões coletadas em abatedouro na região da zona da mata mineira / Evaluation of the co-infection caused by swine circovirus 2 and Mycoplasma hyopneumoniae in lung samples obtained from slaughterhouse in the mata mineira region, Brazil

Este trabalho teve como objetivo pesquisar a associação do PCV2 e M. Hyopneumoneae em amostras de pulmão de suínos. 32 fragmentos de pulmões, sendo 16 com lesões macroscópicas (CLM) e 16 sem lesões macroscópicas (SLM) foram analisados pela histopatologia, pelo teste de imuno-histoquímica (IHC) e pela reação de polimerase em cadeia em tempo real (qPCR). Não foi observada correlação positiva entre a histopatologia e a imuno-histoquímica. Não houve também, correlação positiva entre número de amostras com lesões características de pneumonia viral e a carga viral de PCV2 medida por qPCR. Analisando os dados obtidos da detecção dos agentes e lesões microscópicas associadas, constatou-se que em 4 amostras analisadas (12,5%) houve uma co-infecção entre o PCV2 e M. Hyopneumoneae. Este resultado demonstra uma possível associação deste dois agentes. Novos estudos deverão ser realizados para determinação de outros possíveis patógenos envolvidos na patogenia da PRDC na região da Zona da Mata Mineira.(AU)

The aim of this study was determine the association between PCV2 and M. Hyopneumoneae in pig lung samples. Thirty two lung fragments, from which 16 had macroscopic lesions (CLM) and the other 16 had no macroscopic lesions (SLM), were analyzed by histopathology, immunohistochemistry assays and polymerase chain reaction in real time (qPCR). No positive correlation was observed among the histology and the immunohistochemistry assay (IHC). There was also no positive correlation between the number of samples with viral pneumonia type of lesions and PCV2 viral load measured by qPCR. Analysis of the data obtained by detection of agents and associated microscopic findings showed that PCV2 and M. Hyopneumoneae co-infection was found in four samples (12,5%). This result reveals a possible association of these two agents. Further studies are required to determine additional potential pathogens involved in the pathogenesis of the PRDC in the Mata Mineira region, Brazil.(AU)

EVALUATION OF THE CO-INFECTION CAUSED BY SWINE CIRCOVIRUS 2 AND Mycoplasma hyopneumoniae IN LUNG SAMPLES OBTAINED FROM A SLAUGHTERHOUSE IN THE MATA MINEIRA REGION, BRAZIL / Avaliação da coinfecção do circovírus suíno 2 com Mycoplasma hyopneumoniae em ...

Este trabalho teve como objetivo pesquisar a associação do PCV2 e M. Hyopneumoneae em amostras de pulmão de suínos. 32 fragmentos de pulmões, sendo 16 com lesões macroscópicas (CLM) e 16 sem lesões macroscópicas (SLM) foram analisados pela histopatologia, pelo teste de imuno-histoquímica (IHC) e pela reação de polimerase em cadeia em tempo real (qPCR). Não foi observada correlação positiva entre a histopatologia e a imuno-histoquímica. Não houve também, correlação positiva entre número de amostras com lesões características de pneumonia viral e a carga viral de PCV2 medida por qPCR. Analisando os dados obtidos da detecção dos agentes e lesões microscópicas associadas, constatou-se que em 4 amostras analisadas (12,5%) houve uma co-infecção entre o PCV2 e M. Hyopneumoneae. Este resultado demonstra uma possível associação deste dois agentes. Novos estudos deverão ser realizados para determinação de outros possíveis patógenos envolvidos na patogenia da PRDC na região da Z

Avaliação da coinfecção do circovírus suíno 2 com Mycoplasma hyopneumoniae em amostras de pulmões coletadas em abatedouro na região da zona da mata mineira / Evaluation of the co-infection caused by swine circovirus 2 and Mycoplasma hyopneumoniae in lung samples obtained from slaughterhouse in the mata mineira region, Brazil

Este trabalho teve como objetivo pesquisar a associação do PCV2 e M. Hyopneumoneae em amostras de pulmão de suínos. 32 fragmentos de pulmões, sendo 16 com lesões macroscópicas (CLM) e 16 sem lesões macroscópicas (SLM) foram analisados pela histopatologia, pelo teste de imuno-histoquímica (IHC) e pela reação de polimerase em cadeia em tempo real (qPCR). Não foi observada correlação positiva entre a histopatologia e a imuno-histoquímica. Não houve também, correlação positiva entre número de amostras com lesões características de pneumonia viral e a carga viral de PCV2 medida por qPCR. Analisando os dados obtidos da detecção dos agentes e lesões microscópicas associadas, constatou-se que em 4 amostras analisadas (12,5%) houve uma co-infecção entre o PCV2 e M. Hyopneumoneae. Este resultado demonstra uma possível associação deste dois agentes. Novos estudos deverão ser realizados para determinação de outros possíveis patógenos envolvidos na patogenia da PRDC na região da Zona da Mata Mineira.

The aim of this study was determine the association between PCV2 and M. Hyopneumoneae in pig lung samples. Thirty two lung fragments, from which 16 had macroscopic lesions (CLM) and the other 16 had no macroscopic lesions (SLM), were analyzed by histopathology, immunohistochemistry assays and polymerase chain reaction in real time (qPCR). No positive correlation was observed among the histology and the immunohistochemistry assay (IHC). There was also no positive correlation between the number of samples with viral pneumonia type of lesions and PCV2 viral load measured by qPCR. Analysis of the data obtained by detection of agents and associated microscopic findings showed that PCV2 and M. Hyopneumoneae co-infection was found in four samples (12,5%). This result reveals a possible association of these two agents. Further studies are required to determine additional potential pathogens involved in the pathogenesis of the PRDC in the Mata Mineira region, Brazil.

EVALUATION OF THE CO-INFECTION CAUSED BY SWINE CIRCOVIRUS 2 AND Mycoplasma hyopneumoniae IN LUNG SAMPLES OBTAINED FROM A SLAUGHTERHOUSE IN THE MATA MINEIRA REGION, BRAZIL / Avaliação da coinfecção do circovírus suíno 2 com Mycoplasma hyopneumoniae em ..

Este trabalho teve como objetivo pesquisar a associação do PCV2 e M. Hyopneumoneae em amostras de pulmão de suínos. 32 fragmentos de pulmões, sendo 16 com lesões macroscópicas (CLM) e 16 sem lesões macroscópicas (SLM) foram analisados pela histopatologia, pelo teste de imuno-histoquímica (IHC) e pela reação de polimerase em cadeia em tempo real (qPCR). Não foi observada correlação positiva entre a histopatologia e a imuno-histoquímica. Não houve também, correlação positiva entre número de amostras com lesões características de pneumonia viral e a carga viral de PCV2 medida por qPCR. Analisando os dados obtidos da detecção dos agentes e lesões microscópicas associadas, constatou-se que em 4 amostras analisadas (12,5%) houve uma co-infecção entre o PCV2 e M. Hyopneumoneae. Este resultado demonstra uma possível associação deste dois agentes. Novos estudos deverão ser realizados para determinação de outros possíveis patógenos envolvidos na patogenia da PRDC na região da Z

Effect of freezing on rabbit cultured chondrocytes / Efeitos do congelamento sobre condrócitos cultivados de coelhos

This work evaluated the effect of freezing on chondrocytes maintained in culture, aiming the establishment of a cell bank for future application as heterologous implant. Chondrocytes extracted from joint cartilage of nine healthy New Zealand White rabbits were cultivated and frozen with the cryoprotector 5 percent dimethylsulfoxide for six months. Phenotypic and scanning electron microscopy analyses were carried out to identify morphological and functional differences between fresh and thawed cells. After enzymatic digestion, a total of 4.8x10(5)cells per rabbit were obtained. Fresh chondrocytes showed a high mitotic rate and abundant matrix was present up to 60 days of culture. Loss of phenotypic stability was notable in the thawed chondrocytes, with a low labeling of proteoglycans and weak immunostaining of type II collagen. The present study showed important loss of chondrocyte viability under the freezing conditions. For future in vivo studies of heterologous implant, these results suggests that a high number of cells should be implanted in the host site in order to achieve an adequate number of viable cells. Furthermore, the chondrocytes should be implanted after two weeks of culture, when the highest viability rate is found.(AU)

Avaliaram-se os efeitos do congelamento sobre condrócitos mantidos em cultura, com o objetivo de se estabelecer um banco celular para futura aplicação como implante heterólogo. Condrócitos extraídos da cartilagem articular de nove coelhos saudáveis, da raça Nova Zelândia Branca, foram cultivados e submetidos ao congelamento, com o citoprotetor sulfóxido de dimetila a 5 por cento, por um período de seis meses. Análises fenotípicas e de microscopia eletrônica de varredura foram realizadas com o objetivo de identificar diferenças morfológicas e funcionais entre as células frescas e as descongeladas. Após a digestão enzimática, foram obtidas 4,8x10(5) células por coelho. Os condrócitos frescos apresentaram elevada taxa mitótica e abundante presença de matriz até os 60 dias de cultura. Nas culturas dos condrócitos descongelados, a perda de estabilidade fenotípica foi marcante, o que foi demonstrado pela baixa intensidade da coloração dos proteoglicanos e pela fraca imunomarcação do colágeno tipo II. Sob as condições de congelamento utilizadas, houve importante perda de viabilidade condrocítica. Para futuros estudos in vivo de implante heterólogo, estes resultados sugerem que o elevado número de células deve ser implantado no sítio hospedeiro, com o objetivo de se obter maior quantidade de células viáveis, e que os condrócitos deverão ser implantados com duas semanas de cultivo, período em que apresentam melhor taxa de viabilidade.(AU)

Efeitos do congelamento sobre condrócitos cultivados de coelhos / Effect of freezing on rabbit cultured chondrocytes

This work evaluated the effect of freezing on chondrocytes maintained in culture, aiming the establishment of a cell bank for future application as heterologous implant. Chondrocytes extracted from joint cartilage of nine healthy New Zealand White rabbits were cultivated and frozen with the cryoprotector 5 percent dimethylsulfoxide for six months. Phenotypic and scanning electron microscopy analyses were carried out to identify morphological and functional differences between fresh and thawed cells. After enzymatic digestion, a total of 4.8x10(5)cells per rabbit were obtained. Fresh chondrocytes showed a high mitotic rate and abundant matrix was present up to 60 days of culture. Loss of phenotypic stability was notable in the thawed chondrocytes, with a low labeling of proteoglycans and weak immunostaining of type II collagen. The present study showed important loss of chondrocyte viability under the freezing conditions. For future in vivo studies of heterologous implant, these results suggests that a high number of cells should be implanted in the host site in order to achieve an adequate number of viable cells. Furthermore, the chondrocytes should be implanted after two weeks of culture, when the highest viability rate is found.

Avaliaram-se os efeitos do congelamento sobre condrócitos mantidos em cultura, com o objetivo de se estabelecer um banco celular para futura aplicação como implante heterólogo. Condrócitos extraídos da cartilagem articular de nove coelhos saudáveis, da raça Nova Zelândia Branca, foram cultivados e submetidos ao congelamento, com o citoprotetor sulfóxido de dimetila a 5 por cento, por um período de seis meses. Análises fenotípicas e de microscopia eletrônica de varredura foram realizadas com o objetivo de identificar diferenças morfológicas e funcionais entre as células frescas e as descongeladas. Após a digestão enzimática, foram obtidas 4,8x10(5) células por coelho. Os condrócitos frescos apresentaram elevada taxa mitótica e abundante presença de matriz até os 60 dias de cultura. Nas culturas dos condrócitos descongelados, a perda de estabilidade fenotípica foi marcante, o que foi demonstrado pela baixa intensidade da coloração dos proteoglicanos e pela fraca imunomarcação do colágeno tipo II. Sob as condições de congelamento utilizadas, houve importante perda de viabilidade condrocítica. Para futuros estudos in vivo de implante heterólogo, estes resultados sugerem que o elevado número de células deve ser implantado no sítio hospedeiro, com o objetivo de se obter maior quantidade de células viáveis, e que os condrócitos deverão ser implantados com duas semanas de cultivo, período em que apresentam melhor taxa de viabilidade.

Quimionucleólise cervical associada à espondilectomia ventral em cães: aspectos clínico-cirúrgicos, radiográficos e histológicos / Cervical chemonucleolysis associated to ventral slot in dogs: clinical-surgical, radiological, and histological aspects

Foram avaliados aspectos clínico-cirúrgicos, radiográficos e histológicos de discos intervertebrais cervicais caninos após quimionucleólise com quimiopapaína associada à espondilectomia ventral em 24 cães. Em todos foi realizada a espondilectomia ventral na região do disco intervertebral C2-C3 e quimionucleólises nos demais discos cervicais. Os cães foram sacrificados às 24 horas, e aos 8, 30, 60, 90 e 120 dias após aplicação da enzima para a obtenção de cortes sagitais dos discos intervertebrais tratados e das estruturas cartilaginosas e ósseas adjacentes. Nos mesmos períodos, foram realizadas radiografias para monitoração da espessura dos espaços intervertebrais. Todos toleraram bem o procedimento cirúrgico e não apresentaram alterações clínicas significativas. Na avaliação radiográfica, observou-se marcada redução dos espaços intervertebrais 24 horas após o tratamento. Do oitavo ao 90º dia após aplicação da enzima, foi verificada ausência total de espaço intervertebral na região dos discos tratados. Aos 120 dias, as espessuras dos espaços intervertebrais corresponderam, em média, a 59,1 por cento da espessura anterior ao procedimento. Na avaliação histológica, foram observadas digestão nuclear e redução da intensidade de coloração pela safranina-O 24 horas após a quimionucleólise. A partir do 60º dia, havia material amorfo no espaço nuclear, que, aos 120 dias, tinha aparência fibrocartilaginosa. A quimionucleólise associada à espondilectomia ventral determinou a lise dos discos intervertebrais e lesões nas estruturas cartilaginosas e ósseas adjacentes, com tendência à reparação por tecido fibrocartilaginoso ao longo do tempo.(AU)

The clinical-surgical, radiological, and histological aspects of chemonucleolysis with chymopapain in canine cervical intervertebral disks associated to ventral slot in 24 dogs were evaluated. The ventral slot was accomplished in the area of the intervertebral disks C2-C3 and chemonucleolysis in the other cervical disks. The dogs were clinically and radiographically monitored for up to 120 days. Each group of four animals was submitted to euthanasia with an anesthetic overdose at 24 hours, and at 8, 30, 60, 90, and 120 days after the enzyme injection for the acquisition of sagittal sections of the treated disks, as well as adjacent cartilaginous endplates and bony structures. In this study, all dogs tolerated the surgical procedure, without detectable postoperative pain or neurological deficit. In the radiographic evaluation, it was observed consistent disk space narrowing 24 hours after the procedure and total absence of space from the 8th to the 90th day of postoperative in the area of all treated disks. However, 120 days after treatment, there was an increase in disk height, corresponding on average to 59.1 percent of the preinjection value. In the histological evaluation, it was observed nuclear digestion and decrease of safranin-O staining intensity 24 hours after disk injection. At eight days, the nuclear content was still vacuolated, but more fibrillar. An irregularly defined mass was observed in the nuclear space on days 60th and 90th, but it seemed fibrocartilaginous tissue on day 120th. Chemonucleolysis with chymopapain associated to the ventral slot in the cervical column of dogs determined lysis of intervertebral disks, cervical instability, and lesions of cartilaginous and bone adjacent structures that tend to repair with fibrocartilaginous tissue along the time.(AU)

Quimionucleólise cervical associada à espondilectomia ventral em cães: aspectos clínico-cirúrgicos, radiográficos e histológicos / Cervical chemonucleolysis associated to ventral slot in dogs: clinical-surgical, radiological, and histological aspects

Foram avaliados aspectos clínico-cirúrgicos, radiográficos e histológicos de discos intervertebrais cervicais caninos após quimionucleólise com quimiopapaína associada à espondilectomia ventral em 24 cães. Em todos foi realizada a espondilectomia ventral na região do disco intervertebral C2-C3 e quimionucleólises nos demais discos cervicais. Os cães foram sacrificados às 24 horas, e aos 8, 30, 60, 90 e 120 dias após aplicação da enzima para a obtenção de cortes sagitais dos discos intervertebrais tratados e das estruturas cartilaginosas e ósseas adjacentes. Nos mesmos períodos, foram realizadas radiografias para monitoração da espessura dos espaços intervertebrais. Todos toleraram bem o procedimento cirúrgico e não apresentaram alterações clínicas significativas. Na avaliação radiográfica, observou-se marcada redução dos espaços intervertebrais 24 horas após o tratamento. Do oitavo ao 90º dia após aplicação da enzima, foi verificada ausência total de espaço intervertebral na região dos discos tratados. Aos 120 dias, as espessuras dos espaços intervertebrais corresponderam, em média, a 59,1 por cento da espessura anterior ao procedimento. Na avaliação histológica, foram observadas digestão nuclear e redução da intensidade de coloração pela safranina-O 24 horas após a quimionucleólise. A partir do 60º dia, havia material amorfo no espaço nuclear, que, aos 120 dias, tinha aparência fibrocartilaginosa. A quimionucleólise associada à espondilectomia ventral determinou a lise dos discos intervertebrais e lesões nas estruturas cartilaginosas e ósseas adjacentes, com tendência à reparação por tecido fibrocartilaginoso ao longo do tempo.

The clinical-surgical, radiological, and histological aspects of chemonucleolysis with chymopapain in canine cervical intervertebral disks associated to ventral slot in 24 dogs were evaluated. The ventral slot was accomplished in the area of the intervertebral disks C2-C3 and chemonucleolysis in the other cervical disks. The dogs were clinically and radiographically monitored for up to 120 days. Each group of four animals was submitted to euthanasia with an anesthetic overdose at 24 hours, and at 8, 30, 60, 90, and 120 days after the enzyme injection for the acquisition of sagittal sections of the treated disks, as well as adjacent cartilaginous endplates and bony structures. In this study, all dogs tolerated the surgical procedure, without detectable postoperative pain or neurological deficit. In the radiographic evaluation, it was observed consistent disk space narrowing 24 hours after the procedure and total absence of space from the 8th to the 90th day of postoperative in the area of all treated disks. However, 120 days after treatment, there was an increase in disk height, corresponding on average to 59.1 percent of the preinjection value. In the histological evaluation, it was observed nuclear digestion and decrease of safranin-O staining intensity 24 hours after disk injection. At eight days, the nuclear content was still vacuolated, but more fibrillar. An irregularly defined mass was observed in the nuclear space on days 60th and 90th, but it seemed fibrocartilaginous tissue on day 120th. Chemonucleolysis with chymopapain associated to the ventral slot in the cervical column of dogs determined lysis of intervertebral disks, cervical instability, and lesions of cartilaginous and bone adjacent structures that tend to repair with fibrocartilaginous tissue along the time.