Conservación de cepas vacunales de Leptospira en nitrógeno líquido / Preservation for vaccinal strains of Leptospira at liquid nitrogen

INTRODUCCIÓN: las cepas de Leptospira interrogans que integran la vacuna cubana vax-SPIRAL® son conservadas en medio semisólido de Fletcher, el cual garantiza el mantenimiento de la viabilidad de las células por pocos meses. OBJETIVO: en este estudio, se evaluó la crioconservación en nitrógeno líquido de 6 variantes de crioprotectores como método de conservación a largo plazo de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRAL®. MÉTODOS: la viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación, frente a una batería de antisueros de referencia correspondientes a los serogrupos vacunales. RESULTADOS: solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 por ciento, y glicerol 2,5 por ciento como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas, tras 19 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad. CONCLUSIONES: los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación en nitrógeno líquido con un apropiado agente crioprotector, como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira.

INTRODUCTION: Leptospira interrogans strains of Cuban vaccine vax-SPIRAL®are preserved in Fletcher's semi-solid medium, which guarantees the preservation of the cell viability for a few months. OBJECTIVE: to evaluate the cryopreservation at liquid nitrogen of 6 different cryoprotectors as a long-term preservation method for Leptospira interrogans strains used as antigens in vaccine vax-SPIRAL® against leptospirosis. METHODS: viability was systematically evaluated according to the cell yield of the recently thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera from vaccinal serogroups. RESULTS: the use of 2.5 percent and 5 percent dimethyl sulfoxide, and 2.5 percent glycerol allowed quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletion after 19 months of cryopreservation. CONCLUSIONS: the results showed the feasibility of the cryopreservation at liquid nitrogen using suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccinal strains of Leptospira.

Conservación de cepas vacunales de Leptospira en nitrógeno líquido / Preservation for vaccinal strains of Leptospira at liquid nitrogen

INTRODUCCIÓN: las cepas de Leptospira interrogans que integran la vacuna cubana vax-SPIRAL® son conservadas en medio semisólido de Fletcher, el cual garantiza el mantenimiento de la viabilidad de las células por pocos meses. OBJETIVO: en este estudio, se evaluó la crioconservación en nitrógeno líquido de 6 variantes de crioprotectores como método de conservación a largo plazo de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRAL®. MÉTODOS: la viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación, frente a una batería de antisueros de referencia correspondientes a los serogrupos vacunales. RESULTADOS: solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 por ciento, y glicerol 2,5 por ciento como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas, tras 19 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad. CONCLUSIONES: los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación en nitrógeno líquido con un apropiado agente crioprotector, como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira (AU)

INTRODUCTION: Leptospira interrogans strains of Cuban vaccine vax-SPIRAL®are preserved in Fletcher's semi-solid medium, which guarantees the preservation of the cell viability for a few months. OBJECTIVE: to evaluate the cryopreservation at liquid nitrogen of 6 different cryoprotectors as a long-term preservation method for Leptospira interrogans strains used as antigens in vaccine vax-SPIRAL® against leptospirosis. METHODS: viability was systematically evaluated according to the cell yield of the recently thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera from vaccinal serogroups. RESULTS: the use of 2.5 percent and 5 percent dimethyl sulfoxide, and 2.5 percent glycerol allowed quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletion after 19 months of cryopreservation. CONCLUSIONS: the results showed the feasibility of the cryopreservation at liquid nitrogen using suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccinal strains of Leptospira (AU)

Conservación de cepas vacunales de Leptospira en nitrógeno líquido / Preservation for vaccinal strains of Leptospira at liquid nitrogen

INTRODUCCIÓN: las cepas de Leptospira interrogans que integran la vacuna cubana vax-SPIRAL® son conservadas en medio semisólido de Fletcher, el cual garantiza el mantenimiento de la viabilidad de las células por pocos meses. OBJETIVO: en este estudio, se evaluó la crioconservación en nitrógeno líquido de 6 variantes de crioprotectores como método de conservación a largo plazo de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRAL®. MÉTODOS: la viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación, frente a una batería de antisueros de referencia correspondientes a los serogrupos vacunales. RESULTADOS: solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 por ciento, y glicerol 2,5 por ciento como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas, tras 19 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad. CONCLUSIONES: los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación en nitrógeno líquido con un apropiado agente crioprotector, como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira (AU)

INTRODUCTION: Leptospira interrogans strains of Cuban vaccine vax-SPIRAL®are preserved in Fletcher's semi-solid medium, which guarantees the preservation of the cell viability for a few months. OBJECTIVE: to evaluate the cryopreservation at liquid nitrogen of 6 different cryoprotectors as a long-term preservation method for Leptospira interrogans strains used as antigens in vaccine vax-SPIRAL® against leptospirosis. METHODS: viability was systematically evaluated according to the cell yield of the recently thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera from vaccinal serogroups. RESULTS: the use of 2.5 percent and 5 percent dimethyl sulfoxide, and 2.5 percent glycerol allowed quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletion after 19 months of cryopreservation. CONCLUSIONS: the results showed the feasibility of the cryopreservation at liquid nitrogen using suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccinal strains of Leptospira (AU)

[Preservation for vaccinal strains of Leptospira at liquid nitrogen]. / Conservación de cepas vacunales de Leptospira en nitrógeno líquido.

INTRODUCTION: Leptospira interrogans strains of Cuban vaccine vax-SPIRAL are preserved in Fletcher's semi-solid medium, which guarantees the preservation of the cell viability for a few months. OBJECTIVE: to evaluate the cryopreservation at liquid nitrogen of 6 different cryoprotectors as a long-term preservation method for Leptospira interrogans strains used as antigens in vaccine vax-SPIRAL against leptospirosis. METHODS: viability was systematically evaluated according to the cell yield of the recently thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera from vaccinal serogroups. RESULTS: the use of 2.5% and 5% dimethyl sulfoxide, and 2.5% glycerol allowed quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletion after 19 months of cryopreservation. CONCLUSIONS: the results showed the feasibility of the cryopreservation at liquid nitrogen using suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccinal strains of Leptospira.

Repeated dose toxicity study of a live attenuated oral cholera vaccine in Sprague Dawley rats.

BACKGROUND AND AIMS: A live attenuated vaccine candidate against human cholera has been developed from the genetically modified Vibrio cholerae O1, biotype El Tor, serotype Ogawa, 638 strain. Previous single dose toxicity and local tolerance studies have demonstrated that the product is innocuous in Sprague Dawley rats by oral route and single dose. The present paper describes a repeated dose toxicity study using a further dose compared to the proposed clinical schedule. METHODS: Sprague Dawley rats (140-180g) were treated with two doses of the vaccine candidate with a dedicated placebo formulation or were not treated at all (controls). The test products were inoculated at a 21-day interval. Animals were observed daily, body weight was determined weekly and food and water intakes were measured every other day. Three and 14 days after the last inoculation, groups of rats were humanely sacrificed, bled and macroscopically examined. Blood samples were taken for hematology, serum biochemistry and to determine the vibriocide antibody titers. A comprehensive list of tissue and organ samples was taken for microscopic studies. RESULTS: There was no mortality and no animal showed any clinical symptoms. Food and water intake, body weight, and hematological and biochemical variables did not show differences of toxicological and/or statistical relevance among the experimental groups. Macroscopic examination did not demonstrate any alterations and there were no histological findings of toxicological significance. CONCLUSIONS: The vaccine was considered potentially safe for human use as indicated by the results in Sprague Dawley rats.

Estudio de tolerancia local de la vacuna vax-TyVi® en ratas Sprague Dawley / Local tolerance study of vax-TyVi® vaccine in Sprague Dawley rats

La vacuna antitifoídica vax-TyVi® consiste en una preparación de polisacárido capsular Vi deSalmonella typhi, el cual es diluido en una solución buffer isotónica solución amortiguador, a la que se le añade fenol como preservo. Cada dosis de 0,5 mL contiene 25 µg de polisacárido como sustancia activa. En nuestro país el esquema de vacunación contra la fiebre tifoidea con vax- TyVi® se aplica a los alumnos de 9-10 años (5to grado), una 2da dosis a la edad de 12-13 años (8vo grado) y una 3ra dosis a la edad de 16-17 años (11no grado). Además, es vacunado el personal de riesgo de Salud Pública y el personal que manipula alimentos. En el presente trabajo se describe el ensayo de tolerancia local llevado a cabo con la vacuna vax-TyVi® durante su fase de estudios preclínicos, actualmente utilizada en la vacunación contra la fiebre tifoidea en Cuba. Se empleó un total de 170 ratas que fueron tratadas con la vacuna, su placebo (todos los componentes, excepto la materia prima activa), o que no recibieron tratamiento alguno(controles). Se realizaron observaciones clínicas diarias durante todo el ensayo, se determinó el consumo de agua y alimentos y se realizaron investigaciones anatomopatológicas a animales sacrificados 3, 7, 14, 21, 28, 35 y 42 días después de la inoculación. No se observaron muerte ni síntomas de toxicidad; no se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los pesos vivos, el consumo de agua ni el de alimentos entre los grupos del ensayo. Tampoco seobservaron lesiones anatomopatológicas que indicaran toxicidad por parte del producto inoculado. Los resultados permitieron concluir que la potencialidad de la vacuna vax-TyVi® para producir efectos adversos locales es baja(AU)

Conservación de cepas vacunales de Leptospira a -70 ºC / Preservation of vaccine strains of Leptospira at - 70 °C

Se evaluó la crioconservación a - 70 ºC con 9 variantes de crioprotectores como método de conservación de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRALâ. La viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación frente a antisueros de referencia. Solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 % o leche descremada 5 % como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas tras 7 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad, mientras el glicerol tuvo un efecto variable sobre el grado de recuperación de las cepas evaluadas. Los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación a - 70 ºC con un apropiado agente crioprotector como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira.

The goal of this study was to evaluate the cryopreservation at -70ºC with the use of 9 different cryoprotectants as a preservation method for the strains of Leptospira interrogans used as antigens in the leptospiral vaccine vax-SPIRALâ. Viability was systematically evaluated according to the cell yield achieved by the just thawed strains in EMJH medium. Virulence stability was estimated in Hamsters and antigenicity was evaluated by microscopic agglutination test using reference antisera before and after cryopreservation. Only the use of 2,5% and 5% dimethyl sulfoxide or 5% skim milk allowed a quick recovery of the three strains without virulence or antigenicity depletions after 7 months of cryopreservation while glycerol had a variable effect on the degree of recovery of each strain. The results showed the feasibility of the cryopreservation at -70 °C with the use of a suitable cryoprotectant as a preservation method for vaccine strains of Leptospira.

Conservación de cepas vacunales de Leptospira a -70 ºC / Preservation of vaccine strains of Leptospira at - 70 °C

Se evaluó la crioconservación a - 70 ºC con 9 variantes de crioprotectores como método de conservación de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRALâ. La viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación frente a antisueros de referencia. Solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 por ciento o leche descremada 5 por ciento como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas tras 7 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad, mientras el glicerol tuvo un efecto variable sobre el grado de recuperación de las cepas evaluadas. Los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación a - 70 ºC con un apropiado agente crioprotector como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira(AU)

Evaluación de la potencialidad vacunal de 2 cepas de Leptospira interrogans serogrupo Ballum / Evaluation of the vaccine potentiality of 2 strains from Leptospira interrogans serogroup Ballum

Se caracterizaron 2 cepas candidatas vacunales del serogrupo Ballum y fueron estudiadas su inmunogenicidad y poder protector en hámster. Las formulaciones vacunales monovalentes obtenidas demostraron una alta inmunogenicidad y capacidad de protección homóloga y en menor cuantía de protección cruzada

Evaluación de la potencialidad vacunal de 2 cepas de Leptospira interrogans serogrupo Ballum / Evaluation of the vaccine potentiality of 2 strains from Leptospira interrogans serogroup Ballum

Se caracterizaron 2 cepas candidatas vacunales del serogrupo Ballum y fueron estudiadas su inmunogenicidad y poder protector en hámster. Las formulaciones vacunales monovalentes obtenidas demostraron una alta inmunogenicidad y capacidad de protección homóloga y en menor cuantía de protección cruzada(AU)

Caracterización microbiológica de cepas candidatas vacunales de Leptospira interrogans serogrupo Ballum

Se caracterizaron microbiológicamente 2 cepas candidatas vacunales de Leptospira interrogans serogrupo Ballum, como parte de los trabajos encaminados a la obtención de nuevas formulaciones vacunales antileptospirósicas para uso humano. Se evaluó la cinética de crecimiento de ambas cepas en medio proteico EMJH y en 3 medios libres de proteínas. Se estimó la virulencia en hámsters mediante el cálculo de la dosis letal media. Fueron analizados los perfiles antigénicos celulares y extracelulares mediante SDS-PAGE unidimensional y comparados con aquellos de cepas pertenecientes a los serogrupos Canicola, Icterohaemorrhagiae y Pomona. La homología antigénica entre serogrupos heterólogos se analizó mediante western blotting con suero de hámsters vacunados con vax-SPIRAL®. Los resultados obtenidos demostraron un crecimiento fastidioso de ambas cepas de Ballum en los medios de cultivo estudiados, una alta virulencia en el modelo animal y una gran homología antigénica, con cepas pertenecientes a otros serogrupos de Leptospira de mayor circulación en Cuba.

Two candidate vaccines of Ballum serogroup Leptospira interrogans were microbiologically characterized as part of the work directed to the obtention of new antileptospirosis vaccine formulations for human use. The growth kynetics of both strains was evaluated in EMJH protein medium and in 3 protein free media. The virulence was estimated in hamsters by the calculation of the mean lethal dose. The cellular and extracellular antigenic profiles were analyzed by unidimensional SDS-PAGE and compared with those from strains of Canicola, Icterohaemorrhaagiaae and Pomona serogroups.The antigenic homology among heterologous groups was analyzed by western blotting with serun from hasterms vaccinated with vax-SPIRAL®. The results obtained showed a fastidious growth of both strains of Ballum in the studied media, a high virulence in the animal model and a large antigenic homology with strains from other serogroups of Lepstospira prevailing in Cuba.

Crecimiento, virulencia y antigenicidad de Leptospira interrogans serovar mozdok en medio EMJH modificado / Growth, virulence and antigenecity of Leptospira interrogans serovar mozdok in modified EMJH medium

Se evaluó la influencia de concentraciones crecientes de Tween 80 en el medio sintético EMJH sobre el crecimiento, la virulencia y antigenicidad de Leptospira interrogans serovar mozdok, para incrementar los rendimientos y aprovechar al máximo la capacidad destoxificante de la albúmina sérica bovina. El crecimiento fue evaluado espectrofotométricamente mediante el análisis de la cinética del crecimiento bacteriano, los rendimientos de biomasa obtenidos y el consumo de la fuente de carbono. La virulencia fue estimada en el modelo hámster sirio y la antigenicidad fue determinada mediante la técnica de microaglutinación frente a un antisuero policlonal de conejo. Bajo condiciones de cultivo controladas, el incremento de la concentración de Tween 80 hasta 3, 25 mg/mL determinó una aceleración del metabolismo bacteriano, que logró duplicar los rendimientos celulares con un consumo total de la fuente de carbono, sin afectación de la virulencia y antigenicidad durante numerosos subcultivos sucesivos

Crecimiento, virulencia y antigenicidad de Leptospira interrogans serovar mozdok en medio EMJH modificado / Growth, virulence and antigenicidad of Leptospira interrogans serovar mozdok between modified EMJH

Se evaluó la influencia de concentraciones crecientes de Tween 80 en el medio sintético EMJH sobre el crecimiento, la virulencia y antigenicidad de Leptospira interrogans serovar mozdok, para incrementar los rendimientos y aprovechar al máximo la capacidad destoxificante de la albúmina sérica bovina. El crecimiento fue evaluado espectrofotométricamente mediante el análisis de la cinética del crecimiento bacteriano, los rendimientos de biomasa obtenidos y el consumo de la fuente de carbono. La virulencia fue estimada en el modelo hámster sirio y la antigenicidad fue determinada mediante la técnica de microaglutinación frente a un antisuero policlonal de conejo. Bajo condiciones de cultivo controladas, el incremento de la concentración de Tween 80 hasta 3, 25 mg/mL determinó una aceleración del metabolismo bacteriano, que logró duplicar los rendimientos celulares con un consumo total de la fuente de carbono, sin afectación de la virulencia y antigenicidad durante numerosos subcultivos sucesivos(AU)