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J Neurosci Methods ; 147(2): 88-98, 2005 Sep 30.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-16111763

RESUMO

Voltage-gated Na(+) channel (VGSC) diversity is achieved through a number of mechanisms: multiple subunits, multiple genes encoding the pore-forming VGSC alpha-subunit and multiple gene isoforms generated by alternative splicing. A major type of VGSCalpha alternative splicing is in D1:S3, which has been proposed to be developmentally regulated. We recently reported a D1:S3 spliced form of Na(v)1.5 in human metastatic breast cancer cells. This novel 'neonatal' isoform differs from the counterpart 'adult' form at seven amino acids (in the extracellular loop between S3-S4 of D1). Here, we generated an anti-peptide polyclonal antibody, named NESOpAb, which specifically recognised 'neonatal' but not 'adult' Na(v)1.5 when tested on cells specifically over-expressing one or other of these Na(v)1.5 spliced forms. The antibody was used to investigate developmental expression of 'neonatal' Na(v)1.5 (nNa(v)1.5) in a range of mouse tissues by immunohistochemistry. Overall, the results were consistent with nNa(v)1.5 protein being more abundantly expressed in selected tissues (particularly heart and brain) from neonate as compared to adult animals. Importantly, NESOpAb blocked functional nNa(v)1.5 ion conductance when applied extracellularly at concentrations as low as 0.05 ng/ml. Possible biological and clinical applications of NESOpAb are discussed.


Assuntos
Processamento Alternativo/fisiologia , Anticorpos/imunologia , Especificidade de Anticorpos , Proteínas Musculares/imunologia , Canais de Sódio/imunologia , Animais , Animais Recém-Nascidos , Western Blotting/métodos , Linhagem Celular , Clonagem Molecular , Estimulação Elétrica/métodos , Humanos , Imuno-Histoquímica/métodos , Potenciais da Membrana/efeitos dos fármacos , Potenciais da Membrana/genética , Potenciais da Membrana/fisiologia , Camundongos , Proteínas Musculares/química , Proteínas Musculares/genética , Mutagênese/fisiologia , Canal de Sódio Disparado por Voltagem NAV1.5 , Técnicas de Patch-Clamp/métodos , Isoformas de Proteínas/química , Isoformas de Proteínas/imunologia , RNA Mensageiro/biossíntese , Reprodutibilidade dos Testes , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/métodos , Canais de Sódio/química , Canais de Sódio/genética , Transfecção/métodos
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