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Proteínas de Membrana/metabolismo , Transdução de Sinais , Proteínas ras/metabolismo , Proteínas de Ciclo Celular/metabolismo , Guanosina Difosfato/metabolismo , Guanosina Trifosfato/metabolismo , Proteínas de Membrana/química , Fosfoproteínas Fosfatases/metabolismo , Conformação Proteica , Proteínas Son Of Sevenless , Proteínas ras/química , ras-GRF1Assuntos
Transdução de Sinais/fisiologia , Proteínas ras/metabolismo , Animais , Proteínas Quinases Dependentes de Cálcio-Calmodulina/metabolismo , Proteínas de Ligação ao GTP/metabolismo , Proteínas Ativadoras de GTPase , Fatores de Troca do Nucleotídeo Guanina , Guanosina Trifosfato/metabolismo , Humanos , Metabolismo dos Lipídeos , Proteínas/metabolismo , Proteínas Proto-Oncogênicas p21(ras)/metabolismo , Proteínas rab3 de Ligação ao GTP , Proteínas Ativadoras de ras GTPase , Fatores ras de Troca de Nucleotídeo GuaninaRESUMO
The gene products for the mitotic regulator genes RCC1 and Ran, p45rcc1 and p24ran, were expressed in Escherichia coli, purified in large amounts, and characterized for their biochemical properties. p24ran binds guanine nucleotide as a 1:1 complex, which is only slowly released from the protein. p45rcc1 catalyzes the exchange of nucleotide bound to the guanine nucleotide binding protein p24ran in the same way as the protein purified from HeLa cells. Likewise, the nucleotide dissociation from HeLa cell-derived p24ran protein is equally efficient with recombinant and nonrecombinant proteins. The recombinant proteins form a strong complex which contains no bound nucleotide. The kinetics of nucleotide exchange on p24ran in the presence or absence of p45rcc1 can be conveniently monitored either by the direct tryptophan fluorescence of p24ran or by fluorescence energy transfer measurements involving fluorescent nucleotides.
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Proteínas de Ciclo Celular , Proteínas de Ligação a DNA/química , Proteínas de Ligação a DNA/metabolismo , Fatores de Troca do Nucleotídeo Guanina , Proteínas Nucleares/química , Proteínas Nucleares/metabolismo , Sequência de Bases , Clonagem Molecular , Primers do DNA , Proteínas de Ligação a DNA/biossíntese , Escherichia coli/metabolismo , Proteínas de Ligação ao GTP/química , Proteínas de Ligação ao GTP/metabolismo , Expressão Gênica , Genes Reguladores , Guanosina Difosfato/metabolismo , Guanosina Trifosfato/metabolismo , Células HeLa , Humanos , Cinética , Mitose , Dados de Sequência Molecular , Proteínas Nucleares/biossíntese , Reação em Cadeia da Polimerase , Proteínas Recombinantes/biossíntese , Proteínas Recombinantes/química , Proteínas Recombinantes/metabolismo , Mapeamento por Restrição , Espectrometria de Fluorescência , Proteína ran de Ligação ao GTPRESUMO
The three-dimensional structure of the H-ras oncogene product p21 has been determined in both its active, GTP-bound and its inactive, GDP-bound forms. This has supplied a wealth of information on the mode of binding of guanine nucleotides, on the mechanism of the GTPase reaction and on the conformational change of the protein which accompanies GTP hydrolysis. The structural analysis has also given clues to the interaction of p21 with the regulatory proteins GAP (GTPase Activating Protein) and nucleotide exchange factor. The three-dimensional structures of oncogenic mutants of p21 have also been determined and can nicely explain different biochemical and biological behaviour of these mutant proteins.
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Proteínas Proto-Oncogênicas p21(ras)/química , Sequência de Aminoácidos , Animais , Sítios de Ligação/genética , Proteínas Ativadoras de GTPase , Guanosina Trifosfato/metabolismo , Humanos , Hidrólise , Conformação Molecular , Dados de Sequência Molecular , Mutação , Proteínas/metabolismo , Proteínas Proto-Oncogênicas p21(ras)/fisiologia , Proteínas Ativadoras de ras GTPaseRESUMO
The three-dimensional structure of the active guanosine triphosphate (GTP)-analogue-containing complex of the H-ras-encoded p21 has been determined. It was necessary to correct the topology of p21 as published earlier. The structure analysis shows all of the interactions between protein and GTP and how the important cofactor Mg2+ is bound. From the oncogenic mutants of p21 crystallized, a Gly12 to Arg mutation has been analyzed in detail. It shows that the overall structure of the mutant is not perturbed and that the side chain of Arg12 is coming close to the gamma-phosphate for an interaction.
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Proteínas Proto-Oncogênicas p21(ras)/química , Regulação Alostérica , Sequência de Aminoácidos , Sítios de Ligação , Ativação Enzimática , GTP Fosfo-Hidrolases/genética , GTP Fosfo-Hidrolases/metabolismo , Proteínas Ativadoras de GTPase , Guanosina Difosfato/metabolismo , Guanosina Trifosfato/análogos & derivados , Guanosina Trifosfato/metabolismo , Humanos , Ligação de Hidrogênio , Magnésio/metabolismo , Modelos Moleculares , Dados de Sequência Molecular , Estrutura Molecular , Mutação , Ligação Proteica , Conformação Proteica , Proteínas/metabolismo , Proteínas Proto-Oncogênicas p21(ras)/genética , Proteínas Proto-Oncogênicas p21(ras)/metabolismo , Difração de Raios X , Proteínas Ativadoras de ras GTPaseRESUMO
Adenylate kinase, the product of the adk locus in Escherichia coli K12, catalyzes the conversion of AMP and ATP to two molecules of ADP. The gene has been cloned by complementation of an adk temperature sensitive mutation. The DNA sequence of the complete coding region and of 5'- and 3'-untranslated regions were determined. The resulting protein sequence was found to contain several regions of high homology with cytosolic adenylate kinase of pig muscle (AK1), whose three-dimensional structure has been determined. The most significant of the amino acid exchanges is the replacement of histidine 36 with glutamine. This residue is believed to play a role in catalysis through metal ion binding. The codon usage pattern and the determination of adenylate kinase molecules per cell shows that the enzyme is one of the more abundant soluble proteins of the bacterial cells.
