Comparação de diluidores comerciais na motilidade, funcionalidade e integridade da membrana plasmática do espermatozoide bovino / Comparison of commercial diluents on motility, functionality and integrity of plasma membrane of bovine spermatozoa

O objetivo do estudo foi comparar o efeito de três diluidores comerciais (Tryladil®, Botu-Bov® e OptiXcell®) na qualidade do espermatozoide bovino após o processo de criogenia. Para tal, foram utilizados oito touros da raça Nelore (2 ejaculados/touro). As amostras de sêmen fresco, diluído e pós-descongelamento foram avaliadas, comparando os parâmetros de motilidade total, vigor, funcionalidade da membrana (HOST) e integridade da membrana (eosina). Os dados foram expressos em média e desvio padrão. As variáveis foram submetidas às análises de ANOVA e Tukey ou teste de Friedman e Dunn's, dependendo da normalidade (p< 0,05). Os achados mostram que no momento da diluição não houve diferença (p˃0,005) entre os diluidores comerciais nos parâmetros avaliados (exceto integridade da membrana plasmática). No entanto, no momento do pós-descongelamento os espermatozoides criopreservados utilizando-se o diluidor Tryladil® apresentaram maiores valores (p˂0,005) referentes a integridade e funcionalidade da membrana plasmática comparado aos diluídos em Botu-Bov® e OptIXcell®. Os parâmetros relacionados a cinética espermática (motilidade e vigor) não se diferiram (p˃0,005) entre os diluidores comerciais utilizados. Em conclusão, no momento pós-descongelamento o diluidor Tryladil® apresentou os melhores resultados nos parâmetros de integridade e funcionalidade da membrana plasmática. Sendo assim, recomenda-se o diluidor Tryladil® para criopreservação de sêmen de bovinos da raça Nelore.

The main of the study was to compare the quality of frozen bull semen processed with three different commercially extenders (Tryladil®, Botu-Bov® and OptiXcell®). For this, eight Nelore bulls (two ejaculate per bull). Sperm samples were analyzed fresh, diluted and frozen-thawed. The parameters analyzed were total motility, sperm vigor, functional integrity of sperm plasma membrane (HOST) and plasma membrane integrity (eosin). Date were expressed as mean and standard deviation. The variables were subjected to ANOVA (Tukey test) or Friedman (Dunn's test) test according to normality (p< 0,05). The results indicate that there was no difference (p˃0,005) among all treatments in the parameters evaluated (except plasma membrane integrity) at dilution moment. However, Tryladil extender promoted an increase (p˂0,005) in functional and integrity of sperm plasma membrane compared with others extenders at the post-thawing analyze. After thawing, there was no difference (p˃0,005) among all treatments in the kinetic parameters. In conclusion, the Tryladil® extender promoted an increase in functional and integrity of frozen-thawed sperm plasma membrane. Therefore, the Tryladil® extender is recommended to be use as an extender for Nelore bull sperm cryopreservation.

Comparação de diluidores comerciais na motilidade, funcionalidade e integridade da membrana plasmática do espermatozoide bovino / Comparison of commercial diluents on motility, functionality and integrity of plasma membrane of bovine spermatozoa

O objetivo do estudo foi comparar o efeito de três diluidores comerciais (Tryladil®, Botu-Bov® e OptiXcell®) na qualidade doespermatozoide bovino após o processo de criogenia. Para tal, foram utilizados oito touros da raça Nelore (2 ejaculados/touro).As amostras de sêmen fresco, diluído e pós-descongelamento foram avaliadas, comparando os parâmetros de motilidade total,vigor, funcionalidade da membrana (HOST) e integridade da membrana (eosina). Os dados foram expressos em média e desviopadrão. As variáveis foram submetidas às análises de ANOVA e Tukey ou teste de Friedman e Dunns, dependendo da normalidade(p 0,05). Os achados mostram que no momento da diluição não houve diferença (p0,005) entre os diluidores comerciais nosparâmetros avaliados (exceto integridade da membrana plasmática). No entanto, no momento do pós-descongelamento osespermatozoides criopreservados utilizando-se o diluidor Tryladil® apresentaram maiores valores (p0,005) referentes a integridade efuncionalidade da membrana plasmática comparado aos diluídos em Botu-Bov® e OptIXcell®. Os parâmetros relacionados a cinéticaespermática (motilidade e vigor) não se diferiram (p0,005) entre os diluidores comerciais utilizados. Em conclusão, no momentopós-descongelamento o diluidor Tryladil® apresentou os melhores resultados nos parâmetros de integridade e funcionalidade damembrana plasmática. Sendo assim, recome

The main of the study was to compare the quality of frozen bull semen processed with three different commercially extenders (Tryladil®, Botu-Bov® and OptiXcell®). For this, eight Nelore bulls (two ejaculate per bull). Sperm samples were analyzed fresh, diluted and frozen-thawed. The parameters analyzed were total motility, sperm vigor, functional integrity of sperm plasma membrane (HOST) and plasma membrane integrity (eosin). Date were expressed as mean and standard deviation. The variables were subjected to ANOVA (Tukey test) or Friedman (Dunns test) test according to normality (p< 0,05). The results indicate that there was no difference (p˃0,005) among all treatments in the parameters evaluated (except plasma membrane integrity) at dilution moment. However, Tryladil extender promoted an increase (p˂0,005) in functional and integrity of sperm plasma membrane compared with others extenders at the post-thawing analyze. After thawing, there was no difference (p˃0,005) among all treatments in the kinetic parameters. In conclusion, the Tryladil® extender promoted an increase in functional and integrity of frozen-thawed sperm plasma membrane. Therefore, the Tryladil® extender is recommended to be use as an extender for Nelore bull sperm cryopreservation.(AU)

Comparative study of three different dyes for evaluation of the physical integrity of the plasma membranes of bovine spermatozoa / Estudo comparativo de três diferentes corantes para avaliação da integridade física da membrana plasmática de espermatozoidesbovinos criopreservado

The morpho-functional nature of the plasma membrane assists to transport nutrients into the interior of spermatozoa, which requires the physical integrity of the membrane. This present study aims to compare three different dyes used to determine the integrity of the plasma membrane of bovine spermatozoa after freezing. The dyes tested were eosin 3% (p/v), trypan blue 0.4% (p/v), and propidium iodide (1.5 mM). Two sample groups were formed for the research. In the first group, one ejaculate was collected from each 11 animals, and in the second group, ten ejaculates were obtained from one animal. The fresh semen was evaluated using microscopy. The post-freezing samples were assessed using microscopy and flow cytometry. The results are presented in the form of average viability percentages ± standard deviations. The values membrane integrity, for the dyes eosin, trypan blue, and propidium iodide were 56.8±8.3%; 56.1±7.9%; 54.6±9.1%; respectively. There were no significant differences between the groups (p≥0.001). In comparative analysis of the techniques, flow cytometry enabled a greater number of cell evaluations, compared to phase contrast microscopy, with less variability and faster sample evaluation, hence adding value to the microscopy tests.

O aspecto morfo-funcional da membrana plasmática facilita o transporte de nutrientes para o interior do espermatozoide, o que está ligado à integridade física da membrana plasmática. O presente trabalho objetivou comparar três diferentes corantes na avaliação da integridade física da membrana plasmática do espermatozoide bovino, pós-congelamento. Utilizando os corantes eosina 3% (p/v), azul de tripan 0,4% (p/v) e iodeto de propídio (1,5mM). Foram formados dois grupos para pesquisa. O primeiro, um ejaculado de cada 11 animais e um segundo grupo de dez ejaculados de um único animal. Foi realizada avaliação microscópica do sêmen fresco (motilidade total, motilidade progressiva, vigor e integridade da membrana plasmática). Das amostras congeladas foram avaliados todos os parâmetros descritos anteriormente, além da técnica de eosina, azul de tripan, e iodeto de propídio. Os resultados estão apresentados como média de porcentagem ± desvio padrão. Os valores para a integridade de membrana, utilizando os corantes eosina, azul de tripan, e iodeto de propídio, foram 56.8±8.3%; 56.1±7.9%; 54.6±9.1%, respectivamente. Não há diferença significativa entre os grupos (p≥0.001). Na análise comparativa das técnicas podemos observar que a citometria de fluxo, possibilita um número maior de avaliação celular, quando comparado à técnica de microscopia de campo claro, possibilitando uma menor variabilidade e maior rapidez na avaliação da amostra.

Comparative study of three different dyes for evaluation of the physical integrity of the plasma membranes of bovine spermatozoa / Estudo comparativo de três diferentes corantes para avaliação da integridade física da membrana plasmática de espermatozoidesbovinos criopreservado

The morpho-functional nature of the plasma membrane assists to transport nutrients into the interior of spermatozoa, which requires the physical integrity of the membrane. This present study aims to compare three different dyes used to determine the integrity of the plasma membrane of bovine spermatozoa after freezing. The dyes tested were eosin 3% (p/v), trypan blue 0.4% (p/v), and propidium iodide (1.5 mM). Two sample groups were formed for the research. In the first group, one ejaculate was collected from each 11 animals, and in the second group, ten ejaculates were obtained from one animal. The fresh semen was evaluated using microscopy. The post-freezing samples were assessed using microscopy and flow cytometry. The results are presented in the form of average viability percentages ± standard deviations. The values membrane integrity, for the dyes eosin, trypan blue, and propidium iodide were 56.8±8.3%; 56.1±7.9%; 54.6±9.1%; respectively. There were no significant differences between the groups (p≥0.001). In comparative analysis of the techniques, flow cytometry enabled a greater number of cell evaluations, compared to phase contrast microscopy, with less variability and faster sample evaluation, hence adding value to the microscopy tests.(AU)

O aspecto morfo-funcional da membrana plasmática facilita o transporte de nutrientes para o interior do espermatozoide, o que está ligado à integridade física da membrana plasmática. O presente trabalho objetivou comparar três diferentes corantes na avaliação da integridade física da membrana plasmática do espermatozoide bovino, pós-congelamento. Utilizando os corantes eosina 3% (p/v), azul de tripan 0,4% (p/v) e iodeto de propídio (1,5mM). Foram formados dois grupos para pesquisa. O primeiro, um ejaculado de cada 11 animais e um segundo grupo de dez ejaculados de um único animal. Foi realizada avaliação microscópica do sêmen fresco (motilidade total, motilidade progressiva, vigor e integridade da membrana plasmática). Das amostras congeladas foram avaliados todos os parâmetros descritos anteriormente, além da técnica de eosina, azul de tripan, e iodeto de propídio. Os resultados estão apresentados como média de porcentagem ± desvio padrão. Os valores para a integridade de membrana, utilizando os corantes eosina, azul de tripan, e iodeto de propídio, foram 56.8±8.3%; 56.1±7.9%; 54.6±9.1%, respectivamente. Não há diferença significativa entre os grupos (p≥0.001). Na análise comparativa das técnicas podemos observar que a citometria de fluxo, possibilita um número maior de avaliação celular, quando comparado à técnica de microscopia de campo claro, possibilitando uma menor variabilidade e maior rapidez na avaliação da amostra.(AU)