IDENTIFICACIÓN MICROBIOLÓGICA, MOLECULAR; SEROLÓGICA DE Streptococcus pneumoniae, Y DETERMINACIÓN DE LA SUSCEPTIBILIDAD A PENICILINA Y ERITROMICINA EN LA CIUDAD DE COCHABAMBA / Microbiological molecular identification and serologic of Streptococcus pneumoniae and determination of the suceptibility to penicilin and eritromicin in the city of Cochabamba

Streptococcus pneumoniae es uno de los principales patógenos causantes de infecciones respiratorias e invasivas, por lo que es importante identificar rápidamente este microorganismo y determinar la susceptibilidad a los antibióticos frecuentemente utilizados, para la realización de terapias adecuadas. Con este fin se realizó la identificación de 32 aislamientos de Streptococcus pneumoniae, a partir de pacientes con infecciones respiratorias e invasivas; para su identificación se utilizaron métodos microbiológicos convencionales y como pruebas confirmatorias, métodos moleculares por reacción en cadena de la polimerasa (PCR), amplificando regiones de los genes lyt A y ply y métodos serológicos para la determinación del antígeno capsular. Se realizaron antibiogramas para determinar la susceptibilidad a Penicilina y Eritromicina. Los resultados revelaron, un mayor número de aislamientos en menores de 10 años y en mayores de 49 años y en relación a épocas estacionales, de aislamientos un mayor número durante los meses de invierno. En las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos se encontró una sensibilidad disminuida a Penicilina (SDP) de 46.88 %; resistencia a eritromicina de 6.25 % y resistencia intermedia de 15,63%. Realizando un análisis estadístico de los tres métodos como pruebas de reconfirmación, se observó una correlación baja, por lo que la prueba de la optoquina con fines de reconfirmación para Streptococcus pneumoniae, es inferior a las pruebas serológica y molecular.

Streptococcus pneumoniae is one of the main pathogens that cause breathing and invasive infections, that is why is important a quick identification of this microorganism and determine the sensitivity of the frequently used antibiotics, to execute appropriate therapies. With this purpose the identification of 32 isolates of Streptococcus pneumoniae from patients with breathing and invasive infections were carried out, conventional microbiological tests were applied for identification and for confirmation were used molecular techniques based on the chain reaction of polymerase (PCR), amplifying the regions of lyt A and ply genes and serological methods for the determination of the capsular antigen. Antibiograms were carried out in order to determinate the sensitivity to penicillin and erythromycin. The results showed a higher amount of isolates in children under 10 and adults over 49, and according to seasons, more isolates on winter months. Regarding sensitivity to antibiotics, we found a drop of 46.88% to penicillin, a drop of 6.25 to erythromycin and an intermediate drop of 15.63%. The statistical analysis among the three techniques used for reconfirmation revealed there is a low correlation among them. Therefore, optochin, used as a re-confirmation method, is lower than serological and molecular tests.

Sorotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae isolados no Brasil de 1993 a 2006

A pleuropneumonia suína (PPS) é uma doença infecto-contagiosa decorrente da infecção e efeitos patológicos do Actinobacillus (A.) pleuropneumoniae, caracterizada por pneumonia necrótica e hemorrágica associada à pleurisia fibrinosa. A doença causa prejuízos devido a perdas por morte, pouco desenvolvimento e condenações de carcaças no abatedouro. O isolamento do A. pleuropneumoniae é necessário para investigação de resistência a antibióticos e a identificação do sorotipo é importante para estudos epidemiológicos e controle da doença através de programas de vacinações. Este trabalho mostra a ocorrência dos sorotipos da bactéria através da sorotipificação pela composição da cápsula polissacarídea por imunodifusão em gel de agarose contra soros dos sorotipos 1 ao 12. As amostras (399) analisadas foram isoladas no período de 1993 a 2006 em diferentes regiões do Brasil. Houve 171 amostras não sorotipificáveis. Durante o período estudado, os sorotipos mais prevalentes foram 5 (14,8%), 3 (13,8%), 10 (7,3%),6 (6,5%) e 7 (5%). Foi observado diminuição na ocorrência dos sorotipos 5 e 3 a partir do ano de 2000, indicando que as vacinas empregadas possivelmente diminuíram a doença clínica. Neste tempo, outros sorotipos como o 4, 6, 8 e 10 ocorreram, o que requer maior atenção no comércio de animais, assim como o monitoramento dos rebanhos brasileiros.

Sorotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae isolados no Brasil de 1993 a 2006

A pleuropneumonia suína (PPS) é uma doença infecto-contagiosa decorrente da infecção e efeitos patológicos do Actinobacillus (A.) pleuropneumoniae, caracterizada por pneumonia necrótica e hemorrágica associada à pleurisia fibrinosa. A doença causa prejuízos devido a perdas por morte, pouco desenvolvimento e condenações de carcaças no abatedouro. O isolamento do A. pleuropneumoniae é necessário para investigação de resistência a antibióticos e a identificação do sorotipo é importante para estudos epidemiológicos e controle da doença através de programas de vacinações. Este trabalho mostra a ocorrência dos sorotipos da bactéria através da sorotipificação pela composição da cápsula polissacarídea por imunodifusão em gel de agarose contra soros dos sorotipos 1 ao 12. As amostras (399) analisadas foram isoladas no período de 1993 a 2006 em diferentes regiões do Brasil. Houve 171 amostras não sorotipificáveis. Durante o período estudado, os sorotipos mais prevalentes foram 5 (14,8%), 3 (13,8%), 10 (7,3%),6 (6,5%) e 7 (5%). Foi observado diminuição na ocorrência dos sorotipos 5 e 3 a partir do ano de 2000, indicando que as vacinas empregadas possivelmente diminuíram a doença clínica. Neste tempo, outros sorotipos como o 4, 6, 8 e 10 ocorreram, o que requer maior atenção no comércio de animais, assim como o monitoramento dos rebanhos brasileiros.

Sorotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae isolados no Brasil de 1993 a 2006

A pleuropneumonia suína (PPS) é uma doença infecto-contagiosa decorrente da infecção e efeitos patológicos do Actinobacillus (A.) pleuropneumoniae, caracterizada por pneumonia necrótica e hemorrágica associada à pleurisia fibrinosa. A doença causa prejuízos devido a perdas por morte, pouco desenvolvimento e condenações de carcaças no abatedouro. O isolamento do A. pleuropneumoniae é necessário para investigação de resistência a antibióticos e a identificação do sorotipo é importante para estudos epidemiológicos e controle da doença através de programas de vacinações. Este trabalho mostra a ocorrência dos sorotipos da bactéria através da sorotipificação pela composição da cápsula polissacarídea por imunodifusão em gel de agarose contra soros dos sorotipos 1 ao 12. As amostras (399) analisadas foram isoladas no período de 1993 a 2006 em diferentes regiões do Brasil. Houve 171 amostras não sorotipificáveis. Durante o período estudado, os sorotipos mais prevalentes foram 5 (14,8%), 3 (13,8%), 10 (7,3%),6 (6,5%) e 7 (5%). Foi observado diminuição na ocorrência dos sorotipos 5 e 3 a partir do ano de 2000, indicando que as vacinas empregadas possivelmente diminuíram a doença clínica. Neste tempo, outros sorotipos como o 4, 6, 8 e 10 ocorreram, o que requer maior atenção no comércio de animais, assim como o monitoramento dos rebanhos brasileiros.

Sorotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae isolados no Brasil de 1993 a 2006

A pleuropneumonia suína (PPS) é uma doença infecto-contagiosa decorrente da infecção e efeitos patológicos do Actinobacillus (A.) pleuropneumoniae, caracterizada por pneumonia necrótica e hemorrágica associada à pleurisia fibrinosa. A doença causa prejuízos devido a perdas por morte, pouco desenvolvimento e condenações de carcaças no abatedouro. O isolamento do A. pleuropneumoniae é necessário para investigação de resistência a antibióticos e a identificação do sorotipo é importante para estudos epidemiológicos e controle da doença através de programas de vacinações. Este trabalho mostra a ocorrência dos sorotipos da bactéria através da sorotipificação pela composição da cápsula polissacarídea por imunodifusão em gel de agarose contra soros dos sorotipos 1 ao 12. As amostras (399) analisadas foram isoladas no período de 1993 a 2006 em diferentes regiões do Brasil. Houve 171 amostras não sorotipificáveis. Durante o período estudado, os sorotipos mais prevalentes foram 5 (14,8%), 3 (13,8%), 10 (7,3%),6 (6,5%) e 7 (5%). Foi observado diminuição na ocorrência dos sorotipos 5 e 3 a partir do ano de 2000, indicando que as vacinas empregadas possivelmente diminuíram a doença clínica. Neste tempo, outros sorotipos como o 4, 6, 8 e 10 ocorreram, o que requer maior atenção no comércio de animais, assim como o monitoramento dos rebanhos brasileiros.

Sorotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae isolados no Brasil de 1993 a 2006

A pleuropneumonia suína (PPS) é uma doença infecto-contagiosa decorrente da infecção e efeitos patológicos do Actinobacillus (A.) pleuropneumoniae, caracterizada por pneumonia necrótica e hemorrágica associada à pleurisia fibrinosa. A doença causa prejuízos devido a perdas por morte, pouco desenvolvimento e condenações de carcaças no abatedouro. O isolamento do A. pleuropneumoniae é necessário para investigação de resistência a antibióticos e a identificação do sorotipo é importante para estudos epidemiológicos e controle da doença através de programas de vacinações. Este trabalho mostra a ocorrência dos sorotipos da bactéria através da sorotipificação pela composição da cápsula polissacarídea por imunodifusão em gel de agarose contra soros dos sorotipos 1 ao 12. As amostras (399) analisadas foram isoladas no período de 1993 a 2006 em diferentes regiões do Brasil. Houve 171 amostras não sorotipificáveis. Durante o período estudado, os sorotipos mais prevalentes foram 5 (14,8%), 3 (13,8%), 10 (7,3%),6 (6,5%) e 7 (5%). Foi observado diminuição na ocorrência dos sorotipos 5 e 3 a partir do ano de 2000, indicando que as vacinas empregadas possivelmente diminuíram a doença clínica. Neste tempo, outros sorotipos como o 4, 6, 8 e 10 ocorreram, o que requer maior atenção no comércio de animais, assim como o monitoramento dos rebanhos brasileiros.

Sorotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae isolados no Brasil de 1993 a 2006

A pleuropneumonia suína (PPS) é uma doença infecto-contagiosa decorrente da infecção e efeitos patológicos do Actinobacillus (A.) pleuropneumoniae, caracterizada por pneumonia necrótica e hemorrágica associada à pleurisia fibrinosa. A doença causa prejuízos devido a perdas por morte, pouco desenvolvimento e condenações de carcaças no abatedouro. O isolamento do A. pleuropneumoniae é necessário para investigação de resistência a antibióticos e a identificação do sorotipo é importante para estudos epidemiológicos e controle da doença através de programas de vacinações. Este trabalho mostra a ocorrência dos sorotipos da bactéria através da sorotipificação pela composição da cápsula polissacarídea por imunodifusão em gel de agarose contra soros dos sorotipos 1 ao 12. As amostras (399) analisadas foram isoladas no período de 1993 a 2006 em diferentes regiões do Brasil. Houve 171 amostras não sorotipificáveis. Durante o período estudado, os sorotipos mais prevalentes foram 5 (14,8%), 3 (13,8%), 10 (7,3%),6 (6,5%) e 7 (5%). Foi observado diminuição na ocorrência dos sorotipos 5 e 3 a partir do ano de 2000, indicando que as vacinas empregadas possivelmente diminuíram a doença clínica. Neste tempo, outros sorotipos como o 4, 6, 8 e 10 ocorreram, o que requer maior atenção no comércio de animais, assim como o monitoramento dos rebanhos brasileiros.

Padronização do teste ELISA baseado em antígeno capsular purificado dos sorotipos 3, 5 e 7 de Actinobacillus pleuropneumoniae

Three ELISA (Enzime-linked immunosorbent assay) tests based on purified capsular antigen from serotypes 3, 5 and 7 of Actinobacillus pleuropneumoniae, prevalent in Brazil, were standardized. Serum samples, collected from piglets inoculated with these three serotypes, were used to standardize the test. In order to study the dynamic of antibody synthesis, weekly blood samples were collected from these piglets. A pool of 130 sera obtained from Actinobacillus pleuropneumoniae -free pigs was used as negative control for the tests. The antigens were also tested with serum samples from animals infected with other respiratory infectious agents and vaccinated against athrofic rinitis. The antigens were efficient in detecting animals infected with App. Optical densities above the average of the negative control sera plus four standard deviation were detected. ELISA tests to serotypes 3, 5 and 7 showed specificity of 100% and sensibility of 92, 88 and 90%, respectively. No cross reaction with other serotypes or with sera of animals inoculated with other respiratory pathogens was observed. The results were analyzed using the Statistical Analysis System program. Antigens tested were adequate for serotyping animals previously screened through a polyvalent LPS-LC ELISA test.

Foram padronizados testes de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) baseados em antígeno capsular purificado de Actinobacillus pleuropneumoniae sorotipos 3, 5 e 7, prevalentes no Brasil. Para a padronização foram utilizadas amostras de soro provenientes de leitões inoculados com os três sorotipos do agente em estudo, dos quais se colheram amostras de sangue semanais, durante 15 semanas para estudo da dinâmica da síntese de anticorpos. O controle negativo dos testes constituiu-se de um mistura de 130 soros de animais livres de Actinobacillus pleuropneumoniae (App). Os antígenos também foram testados com amostras de soro de animais infectados com outros agentes causadores de doenças respiratórias e vacinados contra rinite atrófica. Os antígenos produzidos foram eficientes na detecção de animais infectados com App, permitindo determinar densidades óticas superiores à média dos soros controles negativos acrescida de quatro desvios-padrões. Os testes de ELISA para os sorotipos 3, 5 e 7 apresentaram especificidade de 100% e sensibilidade de 92, 88 e 90%, respectivamente. Não ocorreram reações cruzadas com outros sorotipos, assim como com soros de animais inoculados com outros agentes causadores de problemas respiratórios. Os resultados foram analisados através da análise discriminante de ANDERSON (1958), utilizando-se o programa Statistical Analysis System. Concluiu-se que os antígenos testados são adequados para sorotipar animais que tenham sido submetidos ao screening através de um teste de ELISA polivalente baseado em LPS-LC.

Padronização do teste ELISA baseado em antígeno capsular purificado dos sorotipos 3, 5 e 7 de Actinobacillus pleuropneumoniae

Three ELISA (Enzime-linked immunosorbent assay) tests based on purified capsular antigen from serotypes 3, 5 and 7 of Actinobacillus pleuropneumoniae, prevalent in Brazil, were standardized. Serum samples, collected from piglets inoculated with these three serotypes, were used to standardize the test. In order to study the dynamic of antibody synthesis, weekly blood samples were collected from these piglets. A pool of 130 sera obtained from Actinobacillus pleuropneumoniae -free pigs was used as negative control for the tests. The antigens were also tested with serum samples from animals infected with other respiratory infectious agents and vaccinated against athrofic rinitis. The antigens were efficient in detecting animals infected with App. Optical densities above the average of the negative control sera plus four standard deviation were detected. ELISA tests to serotypes 3, 5 and 7 showed specificity of 100% and sensibility of 92, 88 and 90%, respectively. No cross reaction with other serotypes or with sera of animals inoculated with other respiratory pathogens was observed. The results were analyzed using the Statistical Analysis System program. Antigens tested were adequate for serotyping animals previously screened through a polyvalent LPS-LC ELISA test.

Foram padronizados testes de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) baseados em antígeno capsular purificado de Actinobacillus pleuropneumoniae sorotipos 3, 5 e 7, prevalentes no Brasil. Para a padronização foram utilizadas amostras de soro provenientes de leitões inoculados com os três sorotipos do agente em estudo, dos quais se colheram amostras de sangue semanais, durante 15 semanas para estudo da dinâmica da síntese de anticorpos. O controle negativo dos testes constituiu-se de um mistura de 130 soros de animais livres de Actinobacillus pleuropneumoniae (App). Os antígenos também foram testados com amostras de soro de animais infectados com outros agentes causadores de doenças respiratórias e vacinados contra rinite atrófica. Os antígenos produzidos foram eficientes na detecção de animais infectados com App, permitindo determinar densidades óticas superiores à média dos soros controles negativos acrescida de quatro desvios-padrões. Os testes de ELISA para os sorotipos 3, 5 e 7 apresentaram especificidade de 100% e sensibilidade de 92, 88 e 90%, respectivamente. Não ocorreram reações cruzadas com outros sorotipos, assim como com soros de animais inoculados com outros agentes causadores de problemas respiratórios. Os resultados foram analisados através da análise discriminante de ANDERSON (1958), utilizando-se o programa Statistical Analysis System. Concluiu-se que os antígenos testados são adequados para sorotipar animais que tenham sido submetidos ao screening através de um teste de ELISA polivalente baseado em LPS-LC.