Comparative study of three different dyes for evaluation of the physical integrity of the plasma membranes of bovine spermatozoa / Estudo comparativo de três diferentes corantes para avaliação da integridade física da membrana plasmática de espermatozoidesbovinos criopreservado

The morpho-functional nature of the plasma membrane assists to transport nutrients into the interior of spermatozoa, which requires the physical integrity of the membrane. This present study aims to compare three different dyes used to determine the integrity of the plasma membrane of bovine spermatozoa after freezing. The dyes tested were eosin 3% (p/v), trypan blue 0.4% (p/v), and propidium iodide (1.5 mM). Two sample groups were formed for the research. In the first group, one ejaculate was collected from each 11 animals, and in the second group, ten ejaculates were obtained from one animal. The fresh semen was evaluated using microscopy. The post-freezing samples were assessed using microscopy and flow cytometry. The results are presented in the form of average viability percentages ± standard deviations. The values membrane integrity, for the dyes eosin, trypan blue, and propidium iodide were 56.8±8.3%; 56.1±7.9%; 54.6±9.1%; respectively. There were no significant differences between the groups (p≥0.001). In comparative analysis of the techniques, flow cytometry enabled a greater number of cell evaluations, compared to phase contrast microscopy, with less variability and faster sample evaluation, hence adding value to the microscopy tests.

O aspecto morfo-funcional da membrana plasmática facilita o transporte de nutrientes para o interior do espermatozoide, o que está ligado à integridade física da membrana plasmática. O presente trabalho objetivou comparar três diferentes corantes na avaliação da integridade física da membrana plasmática do espermatozoide bovino, pós-congelamento. Utilizando os corantes eosina 3% (p/v), azul de tripan 0,4% (p/v) e iodeto de propídio (1,5mM). Foram formados dois grupos para pesquisa. O primeiro, um ejaculado de cada 11 animais e um segundo grupo de dez ejaculados de um único animal. Foi realizada avaliação microscópica do sêmen fresco (motilidade total, motilidade progressiva, vigor e integridade da membrana plasmática). Das amostras congeladas foram avaliados todos os parâmetros descritos anteriormente, além da técnica de eosina, azul de tripan, e iodeto de propídio. Os resultados estão apresentados como média de porcentagem ± desvio padrão. Os valores para a integridade de membrana, utilizando os corantes eosina, azul de tripan, e iodeto de propídio, foram 56.8±8.3%; 56.1±7.9%; 54.6±9.1%, respectivamente. Não há diferença significativa entre os grupos (p≥0.001). Na análise comparativa das técnicas podemos observar que a citometria de fluxo, possibilita um número maior de avaliação celular, quando comparado à técnica de microscopia de campo claro, possibilitando uma menor variabilidade e maior rapidez na avaliação da amostra.

Comparative study of three different dyes for evaluation of the physical integrity of the plasma membranes of bovine spermatozoa / Estudo comparativo de três diferentes corantes para avaliação da integridade física da membrana plasmática de espermatozoidesbovinos criopreservado

The morpho-functional nature of the plasma membrane assists to transport nutrients into the interior of spermatozoa, which requires the physical integrity of the membrane. This present study aims to compare three different dyes used to determine the integrity of the plasma membrane of bovine spermatozoa after freezing. The dyes tested were eosin 3% (p/v), trypan blue 0.4% (p/v), and propidium iodide (1.5 mM). Two sample groups were formed for the research. In the first group, one ejaculate was collected from each 11 animals, and in the second group, ten ejaculates were obtained from one animal. The fresh semen was evaluated using microscopy. The post-freezing samples were assessed using microscopy and flow cytometry. The results are presented in the form of average viability percentages ± standard deviations. The values membrane integrity, for the dyes eosin, trypan blue, and propidium iodide were 56.8±8.3%; 56.1±7.9%; 54.6±9.1%; respectively. There were no significant differences between the groups (p≥0.001). In comparative analysis of the techniques, flow cytometry enabled a greater number of cell evaluations, compared to phase contrast microscopy, with less variability and faster sample evaluation, hence adding value to the microscopy tests.(AU)

O aspecto morfo-funcional da membrana plasmática facilita o transporte de nutrientes para o interior do espermatozoide, o que está ligado à integridade física da membrana plasmática. O presente trabalho objetivou comparar três diferentes corantes na avaliação da integridade física da membrana plasmática do espermatozoide bovino, pós-congelamento. Utilizando os corantes eosina 3% (p/v), azul de tripan 0,4% (p/v) e iodeto de propídio (1,5mM). Foram formados dois grupos para pesquisa. O primeiro, um ejaculado de cada 11 animais e um segundo grupo de dez ejaculados de um único animal. Foi realizada avaliação microscópica do sêmen fresco (motilidade total, motilidade progressiva, vigor e integridade da membrana plasmática). Das amostras congeladas foram avaliados todos os parâmetros descritos anteriormente, além da técnica de eosina, azul de tripan, e iodeto de propídio. Os resultados estão apresentados como média de porcentagem ± desvio padrão. Os valores para a integridade de membrana, utilizando os corantes eosina, azul de tripan, e iodeto de propídio, foram 56.8±8.3%; 56.1±7.9%; 54.6±9.1%, respectivamente. Não há diferença significativa entre os grupos (p≥0.001). Na análise comparativa das técnicas podemos observar que a citometria de fluxo, possibilita um número maior de avaliação celular, quando comparado à técnica de microscopia de campo claro, possibilitando uma menor variabilidade e maior rapidez na avaliação da amostra.(AU)