Novas estratégias terapêuticas para o controle de biofilmes orais: terapia fotodinâmica e sistema carreador de antimicrobianos / New therapeutic strategics for the control of oral biofilms: photodynamic therapy and drug delivery system

Os biofilmes orais possuem grande relevância clínica por estarem associados com o desenvolvimento de cárie dentária e candidose bucal, que são doenças infecciosas frequentemente encontradas na população. O presente trabalho foi dividido em dois estudos: Estudo 1 que teve como objetivo analisar os efeitos da terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa), mediada por Fotoenticine (FTC) e Azul de Metileno (AM), sobre biofilmes microcosmos de cárie dentária; e Estudo 2 cujo objetivo foi avaliar o gellan gum como biomaterial para carreador do antifúngico Ester fenetil do ácido caféico (CAPE) contra Candida albicans. No estudo 1, amostras de dentina cariada foram coletadas de diferentes pacientes para formar biofilmes microcosmos in vitro. Os biofilmes foram tratados com FTC ou AM associado à irradiação LED a 660 nm (28,5 J/cm²). Os dados foram analisados pela contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/mL). Além disso, a biomassa, estrutura do biofilme e produção de ácidos pelos microrganismos foram determinadas por análises microscópicas ou espectrofotométricas. Os biofilmes de diferentes pacientes apresentaram variações na composição microbiana, sendo formados por estreptococos, lactobacilos e leveduras. No geral, a TFDa diminuiu 3,7 Log10 do total de microrganismos, 2,8 Log10 de estreptococos, 3,2 Log10 de lactobacilos e 3,2 Log10 de leveduras, e atingiu a erradicação de estreptococos do grupo mutans. A TFDa também foi capaz de reduzir a biomassa, desagregar os biofilmes e diminuir a concentração de ácidos em 1,1 a 1,9 mmol de lactato/L. Em relação ao estudo 2, inicialmente, foram preparadas formulações do CAPE em diferentes concentrações de gellan gum (0,6 a 1%). As formulações foram avaliadas em relação ao sistema de liberação e ação antifúngica contra C. albicans. Verificou-se que concentrações mais altas de gellan (0,9 e 1%) levaram a uma liberação mais prolongada do CAPE em relação as concentrações mais baixas. Os valores de concentração inibitória mínima do CAPE sobre C. albicans foram aumentados quando esse composto foi incorporado no gellan. As formulações de CAPE em gellan apresentaram atividade antifúngica tanto em culturas planctônicas como em biofilmes de C. albicans, sendo esses efeitos dependentes do tempo de tratamento. O CAPE e suas formulações em gellan também levaram a uma diminuição da atividade proteolítica de C. albicans. Concluiu-se que a TFDa mediada por Fotoenticine e o sistema carreador de gellan gum podem ser estratégias terapêuticas promissoras para o controle dos biofilmes na cavidade bucal, podendo ser usadas respectivamente no tratamento da cárie e candidose. (AU)

Dental caries and oral candidiasis are infectious diseases frequently found in the population. The present work is divided into two studies, study 1 time as objective: To analyze the effects of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), mediated by Fotoenticine (FTC) and Methylene Blue (MB), on dental caries microcosm biofilms. In study 2, the objective was to evaluate gellan gum as a biomaterial to carry the antifungal caffeic acid phenethyl ester (CAPE) on Candida albicans. To conduct study 1, carious dentin samples were collected from different patients to form in vitro microcosm biofilms. The biofilms were treated with FTC or MB associated with 660 nm red LED irradiation, with energy dose of 28.5 J/cm² and power dose of 40 mW/cm². The data were analyzed by the count of Colony Forming Units (CFU/mL). In addition, the biomass, biofilm structure and acid production of the microorganisms were determined by microscopic or spectrophotometric analysis. The biofilms from different patients showed variations in microbial composition, being formed by streptococci, lactobacilli, and yeasts. Overall, aPDT decreased 3.7 Log10 of total microorganisms, 2.8 Log10 of streptococci, 3.2 Log10 of lactobacilli and 3.2 Log10 of yeasts, and achieved eradication of mutans group streptococci. PDTa was also able to reduce biomass, disaggregate biofilms, and decrease acid concentration by 1.1 to 1.9 mmol lactate/L. For study 2 of this, first the standards of CAPE were determined, such as minimum inhibitory concentration, and absorption peak, then CAPE was incorporated into gellan gum, and then the standard curve test and analysis of CAPE release was performed, finally the formulations were tested on planktonic culture and biofilm of different strains of C. albicans, it was also analyzed the action of this drug on the production of Sap. The MIC found varied from 32 to 64 µg/mL, the release tests showed a gradual release in the higher formulations, finally in the CFU/mL count both in planktonic culture and biofilm the formulations were able to inhibit the fungus. With this it is concluded that both aPDT for oral microcosm and gellan gum as caregiver of CAPE for Candida albicans inhibition are promising. (AU)

Identificación y susceptibilidad de Candida spp. en el área ginecológica

Resumen La candidiasis es una infección causada por la acción patógena de Candida spp., catalogada como la segunda causa a nivel mundial de infección vaginal en mujeres con edades comprendidas entre 15 y 45 años. Siendo Candida albicans la más prevalente con distribución global. Uno de los problemas de importancia clínica es la resistencia a los antifúngicos debido al uso irracional de los mismos como terapia empírica y profilaxis. Objetivo . Caracterizar la infección por Candida spp., según: perfiles de susceptibilidad y frecuencias de candidiasis vulvo - vaginal relacionada con el balance de contenido vaginal. Así como, la presencia de coinfecciones en mujeres de edad fértil en las ciudades Cuenca - Azogues, que asisten a consulta en el Hospital Monte Sinaí, periodo enero - noviembre de 2020. Materiales y métodos . Estudio de tipo descriptivo, documental de corte transversal, la muestra estuvo conformada por 136 aislados clínicos, se utilizó un muestreo por cobertura total. Resultados . El grupo etario que prevaleció fue de 19 - 39 años. Candida albicans fue la más prevalente en muestras de secreción vaginal con 92.6 %, seguido de Candida glabrata 6.6 % y Candida parapsilosis con 0.7 %. Las tasas de resistencia se diferenciaron en Miconazol con 19.9 %, Itraconazol 16.9 %, y Fluconazol 14%. Conclusiones . El agente etiológico causal de candidiasis vulvo - vaginal fue Candida albicans. La interpretación del balance de contenido vaginal y perfiles de susceptibilidad, son herramientas clave para el óptimo tratamiento de la paciente con infecciones vaginales, evitando la automedicación y la farmacorresistencia.

Abstract Candidiasis is an infection caused by the pathogenic action of Candida spp., Classified as the second worldwide cause of vaginal infection in women aged between 15 and 45 years. Being Candida albicans the most prevalent with global distribution. One of the clinically important problems is resistance to antifungals due to their irrational use as empirical therapy and prophylaxis. Objective : To characterize the infection by Candida spp., according to: susceptibility profiles and frequencies of vulvo-vaginal candidiasis related to the balance of vaginal content. As well as, the presence of co-infections in women of childbearing age in Cuenca - Azogues cities, who attend a consultation at the Monte Sinaí Hospital, January - November 2020 period. Materials and methods . A descriptive, observational cross-sectional study, the sample consisted of 136 clinical isolates, a full coverage sampling was used. Results. The age group that prevailed was 19 - 39 years. Candida albicans was the most prevalent in vaginal discharge samples with 92.6%, followed by Candida glabrata 6.6% and Candida parapsilosis with 0.7%. Resistance rates differed in Miconazole with 19.9%, Itraconazole 16.9%, and Fluconazole 14%. Conclusions . The causative etiological agent of vulvo-vaginal candidiasis was Candida albicans. The interpretation of the balance of vaginal content and susceptibility profiles are a key tool for the optimal treatment of the patient with vaginal infections, avoiding self-medication and drug resistance.

Resumo Candidíase é uma infecção causada pela ação patogênica de Candida spp., Classificada como a segunda causa mundial de infecção vaginal em mulheres com idade entre 15 e 45 anos. Sendo Candida albicans a mais prevalente com distribuição global. Um dos problemas clinicamente importantes é a resistência aos antifúngicos devido ao seu uso irracional como terapia empírica e profilaxia. Objetivo . Caracterizar a infecção por Candida spp., De acordo com: perfis de suscetibilidade e frequências de candidíase vulvovaginal relacionadas ao equilíbrio do conteúdo vaginal. Assim como, a presença de coinfecções em mulheres em idade fértil nos municípios de Cuenca - Azogues, atendidas em consulta no Hospital Monte Sinaí, período janeiro - novembro de 2020. Materiais e métodos . Estudo descritivo, observacional, transversal, a amostra foi composta por 136 isolados clínicos, foi utilizada uma amostra de cobertura total. Resultados . A faixa etária prevalente foi de 19 a 39 anos. Candida albicans foi a mais prevalente nas amostras de corrimento vaginal com 92,6%, seguida por Candida glabrata 6,6% e Candida parapsilosis com 0,7%. As taxas de resistência diferiram no Miconazol com 19,9%, Itraconazol 16,9% e Fluconazol 14%. Conclusões . O agente etiológico causador da candidíase vulvovaginal foi Candida albicans. A interpretação do equilíbrio do conteúdo vaginal e dos perfis de suscetibilidade é uma ferramenta fundamental para o tratamento ideal da paciente com infecções vaginais, evitando a automedicação e a resistência aos medicamentos

Efeitos do sobrenadante da cultura de Streptococcus mutans sobre os fatores de virulência de C. albicans: estudos in vitro e in vivo / Effects of the culture supernatant of Streptococcus mutans on the virulence factors of C. albicans: in vitro and in vivo studies

Candida albicans possui capacidade de causar uma ampla variedade de manifestações clínicas devido a múltiplos fatores de virulência que agem simultaneamente para vencer o sistema imune e invadir os tecidos do hospedeiro. Estudos recentes demonstraram que o crescimento de C. albicans pode ser inibido por metabólitos produzidos por Streptococcus mutans, que estão presentes no sobrenadante da cultura bacteriana. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar se o sobrenadante da cultura de S. mutans, além de inibir o crescimento de C. albicans, é capaz de atenuar os mecanismos de virulência desse fungo. Inicialmente, uma suspensão padronizada de S. mutans (107 células/mL) foi incubada em caldo BHI a 37ºC por 4 h em 5% de CO2. O crescimento em BHI foi filtrado em membrana de 0,22 µm, obtendo-se o sobrenadante da cultura de S. mutans livre de células. A seguir, uma suspensão padronizada de C. albicans (107 células/mL) foi adicionada ao sobrenadante filtrado da cultura de S. mutans em caldo BHI, sendo incubada a 37ºC por 24 h. Para os grupos controle, a suspensão de C. albicans foi colocada em caldo BHI ou YPD esterilizados e incubada nas mesmas condições. Após o período de incubação, o crescimento de C. albicans foi centrifugado e lavado para obtenção de uma suspensão padronizada de C. albicans contendo as células sobreviventes da exposição ao sobrenadante de S. mutans. Essa suspensão de C. albicans foi então utilizada nos testes in vitro e in vivo para determinação dos fatores de virulência desse micro-organismo. No estudo in vitro, foi investigada a atividade proteolítica extracelular de C. albicans, bem como sua capacidade de filamentação, adesão e formação de biofilmes (1:30, 6, 24 e 48 h). Para o estudo in vivo, foi utilizado o modelo de Galleria mellonella, analisando-se a curva de sobrevivência, o número de células fúngicas e hemócitos na hemolinfa de larvas infectadas por C. albicans. Para a análise estatística foi utilizado ANOVA, teste de Tukey, Kruskal-Wallis e Log-rank, com nível de significância de 5%. Verificou-se que as células de C. albicans expostas ao sobrenadante de S. mutans apresentaram redução na filamentação, formação de biofilmes e patogenicidade em G. mellonella em relação ao controle. A exposição ao sobrenadante de S. mutans também mudou o padrão de aderência de C. albicans. Entretanto, o sobrenadante de S. mutans não reduziu a atividade proteolítica de C. albicans. Concluiu-se que o sobrenadante de S. mutans apresentou capacidade de inibir importantes mecanismos de virulência de C. albicans, podendo ser uma fonte de novos agentes antifúngicos a ser explorada

Candida albicans has the ability to cause a wide variety of clinical manifestations due to multiple virulence factors that act simultaneously to overcome the immune system and invade host tissues. Recent studies have shown that the growth of C. albicans can be inhibited by metabolites produced by Streptococcus mutans. Thus, the objective of this study was to investigate whether the culture supernatant of S. mutans is able to attenuate the virulence mechanisms of this fungus. Initially, a standardized suspension of S. mutans (107 cells/mL) was incubated in BHI broth at 37ºC for 4 h in 5% CO2. The growth in BHI was filtered through a 0.22 µm membrane, obtaining the cell free culture supernatant of S. mutans. Then, a standardized suspension of C. albicans (107 cells/mL) was prepared and added to the supernatant of the culture of S. mutans in BHI broth, being incubated at 37ºC for 24 h. For the control groups, the suspension of C. albicans was placed in sterile BHI or YPD broth and incubated under the same conditions. After the incubation period, the growth of C. albicans was centrifuged and washed to obtain a standardized suspension of C. albicans containing the surviving cells from exposure to the S. mutans supernatant. This suspension of C. albicans was then used to perform in vitro and in vivo tests to determine the virulence factors of this microorganism. In the in vitro study, the extracellular proteolytic activity of C. albicans was investigated, as well as its capacity for filamentation, adhesion and biofilm formation (1:30, 6, 24 and 48 h). For the in vivo study, the Galleria mellonella model was used, analyzing the survival curve, the number of fungal cells and hemocytes in the hemolymph of larvae infected with C. albicans. For statistical analysis, ANOVA, Tukey's test, Kruskal-Wallis and Log-rank were used, with a significance level of 5%. It was found that the cells of C. albicans exposed to the supernatant of S. mutans showed a reduction in filament, formation of biofilms and pathogenicity in G. mellonella in relation to the control. Exposure to the S. mutans supernatant also changed the pattern of adherence of C. albicans. However, the S. mutans supernatant did not reduce the proteolytic activity of C. albicans. It was concluded that the supernatant of S. mutans had the capacity to inhibit important mechanisms of virulence of C. albicans, being able to be a source of new antifungal agents to be explored.

Atividade antifúngica da associação entre plasma frio em pressão atmosférica e antifúngicos poliênicos convencionais sobre biofilmes de Candida albicans / Antifungal activity of the association between atmospheric pressure cold plasma and conventional polyene antifungals on biofilms of Candida albicans

A crescente incidência da resistência às drogas antifúngicas tornou-se um grande desafio para áreas médica e odontológica, fazendo com que a busca por métodos de tratamento alternativos ou em combinação com as já utilizadas sejam urgentemente necessárias. O objetivo deste projeto foi avaliar os efeitos da associação entre o plasma frio em pressão atmosférica e antifúngicos poliênicos convencionais utilizados no tratamento tópico da candidose bucal. Para tanto, foram realizados: a) Determinação das concentrações inibitórias dos antifúngicos poliênicos nistatina e anfotericina B e do plasma frio em pressão atmosférica sobre biofilmes de C. albicans; b) Avaliação do efeito dos tratamentos isolados e associados em condições/concentrações sub-inibitórias para fins de comparação e c) Avaliação dos diferentes protocolos de aplicação dos tratamentos, visando a obtenção da condição experimental mais eficaz para o controle do biofilme fúngico. Os dados de unidades formadoras de colônia foram comparados estatisticamente entre os grupos por One-way ANOVA e post hoc Tukey, com nível de significância de 5%. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que o jato de plasma apresentou efeito antifúngico similar quando aplicado isoladamente ou em associação com nistatina e anfotericina B. Ainda, foi possível concluir que o jato de plasma frio apresenta efeito antifúngico mais eficaz do que os tratamentos dos biofilmes utilizando nistatina e anfotericina B no tempo de 5 minutos(AU)

The increasing incidence of antifungal resistance represents a great challenge in the medical areas and Dentistry. For this reason, the search for alternative methods or combination with the conventional ones is urgently necessary. The aim of this project is to evaluate, the effects of association between atmospheric pressure cold plasma and conventional polyene antifungals used for the treatment of oral candidiasis will be studied. With this purpose, the following methodologies were be used: a) To determine the inhibitory concentrations of the polyene antifungals nystatin and amphotericin B and cold plasma on C. albicans biofilms, b) To evaluate the combination of treatments in subinhibitory conditions, including isolated treatments for comparison purposes and c) To evaluate different protocols of treatment application, aiming to obtain the most effective protocol against fungal biofilm. Data was compared by One-way ANOVA and post hoc Tukey, with a significance level of 5%. Considering the results, it could be concluded that cold plasma showed similar effects when applied alone or in association to nystatin and amphotericin B. Cold plasma showed more effective antifungal effect on biofilms when compared to nystatin and amphotericin B, after 5 min exposure(AU)

Desenvolvimento de formulações probióticas para a prevenção da candidose bucal: estudo in vitro e in vivo / Development of probiotic formulations for prevention of oral candidiasis: in vitro and in vivo study

Os probióticos são considerados uma alternativa potencial para o controle da candidose, no entanto, existe uma falta de produtos probióticos direcionados para a cavidade bucal. Neste estudo, desenvolvemos formulações probióticas usando gellan gum, um biopolímero natural usado como aditivo alimentar, e investigamos os efeitos dessas formulações em Candida albicans. Para isso, Lactobacillus paracasei 28.4, uma cepa recentemente isolada da cavidade bucal, foi incorporada em várias concentrações de gellan gum (1 a 0,6%). Todas as concentrações testadas foram capazes de incorporar as células de L. paracasei, mantendo a viabilidade bacteriana. As formulações probióticas permaneceram estáveis por 7 dias quando armazenadas à temperatura ambiente ou a 4°C. Entretanto, o armazenamento a longo prazo das formulações probióticas foi conseguido apenas quando L. paracasei 28.4 foi liofilizado. As formulações probióticas proporcionaram uma liberação de células de L. paracasei por 24 horas, o que foi suficiente para inibir o crescimento de C. albicans com efeitos dependentes das concentrações celulares incorporadas no gellan gum. As formulações probióticas também tiveram atividade inibitória contra os biofilmes de Candida, reduzindo o número de células de Candida (p<0,0001), diminuindo a biomassa total (p=0,0003) e prejudicando a formação de hifas (p=0,0002) em relação ao grupo controle não tratado. Contudo, a formulação probiótica de gellan gum a 1% proporcionou uma colonização oral de L. paracasei em camundongos com aproximadamente 6 log de UFC/mL após 10 dias. Essa formulação inibiu o crescimento de C. albicans (p<0,0001), impediu o desenvolvimento de lesões de candidose (p=0,0013) e suprimiu a inflamação (p = 0,0006) quando comparada aos camundongos não tratados. Estes resultados indicam que o gellan gum pode ser um biomaterial promissor como sistema transportador de probióticos para prevenir a candidose oral(AU)

Probiotics are considered a potential alternative for the control of candidiasis, however there is a lack of probiotic products targeted for the oral cavity. In this study, we developed probiotic formulations using gellan gum, a natural biopolymer used as a food-additive, and investigated the effects of this delivery method on Candida albicans. Lactobacillus paracasei 28.4, a strain recently isolated from the oral cavity, was incorporated in several concentrations of gellan gum (1 to 0.6%). All tested concentrations could incorporate L. paracasei cells while maintaining bacterial viability. Probiotic-gellan formulations were stable for 7 days when stored at room temperature or 4°C. Long-term storage of bacterial impregnated gellan gum could be achieved when L. paracasei 28.4 was lyophilized. The probiotic-gellan formulations provided a release of L. paracasei cells over 24 hours that was sufficient to inhibit the growth of C. albicans with effects dependent on the cell concentrations incorporated into gellan gum. The probiotic-gellan formulations also had inhibitory activity against Candida biofilms by reducing the number of Candida cells (p < 0.0001), decreasing the total biomass (p = 0.0003) and impairing hyphae formation (p = 0.0002) in relation to the control group, not treated. However, only probiotic formulation of gellan gum 1% provided an oral colonization of L. paracasei in mice with approximately 6 log of CFU/mL after 10 days. This formulation inhibited the C. albicans growth (p < 0.0001), prevented the development of candidiasis lesions (p = 0.0013), and suppressed the inflammation (p = 0.0006) when compared to the mice not treated. These results indicate that gellan gum is a promising biomaterial as a carrier system of probiotics to prevent oral candidiasis(AU)

Atividade antifúngica do extrato bruto e frações de Streptococcus mutans sobre Candida albicans em modelos de estudo in vivo / Antifungal activity of crude extract and fractions of Streptococcus mutans on Candida albicans in models of in vivo study

Estudos realizados in vitro tem demonstrado que Streptococcus mutans podem produzir metabólitos capazes de inibir Candida albicans, tornando interessante a identificação e desenvolvimento de novas substâncias para o tratamento da candidose bucal. Assim, o objetivo desse estudo foi extrair, fracionar e identificar as substâncias produzidas por S. mutans e avaliar seus efeitos sobre a patogenicidade de C. albicans e na resposta imunológica em modelos de estudo in vivo. As substâncias do sobrenadante da cultura de S. mutans foram extraídas com acetato de etila e posteriormente fracionadas em coluna de sílica derivatizada C-18 (150 g, Φ = 3,5 cm) utilizando diferentes soluções de MeOH:H2O (36:64, 49:51, 60:40, 76:24, 100:0) como eluente, obtendo cinco diferentes frações (SM-F1, SM-F2, SMF3, SM-F4 e SM-F5). A identificação das substâncias contidas no extrato bruto e frações foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas. Foram testados os efeitos do extrato bruto e frações do sobrenadante da cultura de S. mutans sobre a candidose experimental induzida em modelo invertebrado de Galleria mellonella e em camundongos imunossuprimidos. Para a escolha da concentração a ser testada nos modelos in vivo foi realizada a determinação da Concentração Inibitória Mínima do extrato bruto e frações sobre C. albicans. No modelo de infecção experimental com G. mellonella, os efeitos do extrato e frações foram analisados pelos testes de curva de sobrevivência, quantificação de UFC/mL de C. albicans na hemolinfa e determinação da densidade hemocitária das larvas de G. mellonella. O extrato, assim como as frações com melhores resultados em modelo de invertebrado foram selecionados para o estudo de candidose bucal em camundongos. Nesse modelo experimental, o desenvolvimento de candidose foi avaliado pelos testes de recuperação e determinação de UFC/mL de C. albicans da cavidade bucal, análise macroscópica e microscópica do dorso da língua. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo Programa Graph Pad Prism 5.0, com nível de significância de 5%. Na determinação da concentração inibitória mínima, apenas o extrato bruto e a fração SM-F2 demonstraram efeito sobre C. albicans, sendo 10 mg/mL e 15mg/mL, respectivamente. No modelo de G. mellonella não houve aumento da sobrevida das larvas com a utilização profilática do extrato, ocorrendo 100% de morte nas primeiras 24 h em ambos os grupos com infecção. No entanto, ao realizarmos o tratamento pós-infecção com o extrato bruto houve um aumento da sobrevida em 18,75 a 25%. Como não houve efeito profilático para o extrato bruto, as frações foram administradas apenas terapeuticamente, verificando-se aumento da sobrevida das larvas com as fração SM-F1 e SM-F2. Na contagem de UFC/mL de C. albicans na hemolinfa das larvas, foi verificada diferença estatisticamente significante apenas com o extrato bruto e fração SM-F2 após 12 h de infecção Em relação a densidade hemocitária, os grupos tratados com extrato bruto e frações (SM-F1 e SM-F2) apresentaram maior número de hemócitos circulantes na hemolinfa em relação ao grupo apenas infectado com C. albicans. Portanto, as frações SM-F1 e SM-F2 foram escolhidas para os testes em camundongos. Nesse modelo de estudo, verificou-se que o extrato bruto, SM-1 e SM-F2 foram capazes de reduzir significamente o número de UFC/mL de Candida na cavidade bucal e as lesões de candidose no dorso da língua, sendo esses efeitos mais proeminentes para SM-F2. Assim, concluiu-se que as frações SM-F1 e SM-F2 do extrato de S. mutans contêm substâncias antifúngicas com ação terapêutica sobre a candidose experimental, podendo ser alvos de novas estratégias terapêuticas para a candidose bucal(AU)

In vitro studies have shown that Streptococcus mutans can produce metabolites capable of inhibiting Candida albicans, becoming interesting the identification and development of new substances for the treatment of oral candidiasis. Thus, the objective of this study was to extract, fractionate and identify the substances produced by S. mutans and evaluate their effects on the pathogenicity of C. albicans and on the immune response in in vivo study models. Substances from the S. mutans culture supernatant were extracted with ethyl acetate and subsequently fractionated on a C-18 derivatized silica column (150 g, Φ = 3.5 cm) using different solutions of MeOH:H2O (36:64, 49:51, 60:40, 76:24, 100:0) as eluent, obtaining five different fractions (SM-F1, SM-F2, SM-F3, SM-F4 and SM-F5). The identification of the substances contained in the crude extract and fractions was performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The crude extract products and the fractions of the supernatant of the S. mutans culture were assessed on experimental candidiasis induced in invertebrate model of Galleria mellonella and in immunosuppressed mice. For a choice of the concentration to be tested in the in vivo models, a determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the crude extract and fractions on C. albicans was performed. In the model of experimental infection with G. mellonella, the effects of extract and fractions were analyzed by the survival curve test, quantification of CFU/mL of C. albicans in hemolymph and determination of haemocyte density of G. mellonella larvae. The extract, as well as fractions with better results in invertebrate model were selected for the study of oral candidiasis in mice. In this experimental model, the development of candidiasis was evaluated by the tests of recovery and determination of CFU/mL of C. albicans from the mice's oral cavity, macroscopic and microscopic examination of the tongue dorsum. The data obtained were statistically analyzed by Graph Pad Prism 5.0, with a significance level of 5%. In the determination of the minimal inhibitory concentration, only the crude extract and the SM-F2 fraction showed effect on C. albicans, with 10 mg/mL and 15 mg/mL, respectively. In the model of G. mellonella there was no increase in the larvae survival with the prophylactic use of the extract, occurring 100% of death in the first 24 h in both groups with infection. However, when we performed the post infection treatment with the crude extract there was an increase in survival from 18.75 to 25%. As there was no prophylactic effect for the crude extract, the fractions were administered only therapeutically, verifying increased survival of the larvae with the SM-F1 and SM-F2 fraction. In the CFU/mL count of C. albicans on larval hemolymph, a statistically significant difference was observed only with crude extract and SM-F2 fraction after 12 h of infection. In relation to hemocyte density, the groups treated with crude extract and fractions (SM-F1 and SM-F2) had a higher number of hemocytes circulating in the hemolymph compared to the group only infected with C. albicans. Therefore, the fractions SM-F1 and SMF2 were chosen for the tests in mice. In this study model, it was verified that the crude extract, SM-F1 and SM-F2 were able to significantly reduce the number of CFU/mL of Candida in oral cavity and lesions of candidiasis of the tongue dorsum, these effects were more prominent for SM-F2. Thus, it was concluded that the SM-F1 and SM-F2 fractions of the S. mutans extract contain antifungal substances with therapeutic action on experimental candidiasis, being able to be targets of new therapeutic strategies for oral candidiasis(AU)

Chemical composition and antifungal potential of Brazilian propolis against Candida spp.

Propolis is known to have biological properties against numerous microorganisms of clinical interest. This study aimed to determine the chemical composition and antifungal activity of Brazilian propolis (types 3 and 13) against Candida spp. and their effects on the morphology of preformed and mature Candida biofilms. Samples of propolis (3 and 13) collected by Apis mellifera honeybees were obtained from different regions in Brazil. Ethanolic extracts of propolis (EEP) were prepared, fractionated and submitted to chemical analysis by GC/MS. The extracts and their hexane, dichloromethane and ethyl acetate fractions were tested for their ability to inhibit Candida spp. (C. albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C. kruzei, C. tropicalis and C. parapsilosis) by determination of the minimum inhibitory and fungicidal concentrations (MIC/MFC). Additionally, their effects on morphology of preformed and mature biofilms were observed by scanning electron microscopy. The phenolic compounds p-coumaric acid, caffeic acid phenethyl ester (CAPE), kaempferol and quercetin were identified in the EEP-3 and its bioactive dichloromethane fraction; and isoflavonoids such as medicarpin, vestitol and formononetin were found in the EEP-13, and triterpenes in its bioactive hexane fraction. The EEP-3 and EEP-13 and their bioactive fractions showed MIC values ranging from 0.2 to 125µg/mL and MFC values between 125 and 500µg/mL. The EEP and fractions were predominantly fungistatic agents. All extracts and fractions disrupted biofilm structures at 500µg/mL and amorphous areas with cell damage were clearly observed in preformed and mature biofilms. Propolis types 3 and 13 have strong anti-Candida activity and should be considered as promising candidates to treat oral and systemic candidiasis.

Análise das lesões clínicas de caninos e felinos acometidos pelas principais infecções fúngicas

As principais infecções fúngicas que acometem caninos e felinos apresentam manifestações clínicas enquadradascomo dermatopatias de diferentes etiologias, os quais dificultam a conduta clínica, devido as diversas suspeitas clínicas. Este trabalho objetivou analisar as lesões clínicas e sítios de lesões advindas da malasseziose, candidose, dermatofitose e esporotricose ocorridas em felinos e caninos atendidos emPelotas, RS (Brasil) em um período de oito anos de estudo. Nos resultados observados, a malasseziose e candidose otológica apresentam similaridade com sinais de prurido e cerúmen enegrecido nos animais estudados. A dermatofitose se manifestou principalmente em lesões alopécicas, crostosas e pruriginosas,sendo a região cranial e torácica mais afetada em caninos, ao passo que em felinos ocorreu em maior frequência nos ouvidos externos, região da cabeça e face, membros anteriores e abdômen. Úlceras, exsudação e nódulos foram os sinais mais observados em caninos e felinos com esporotricose, principalmente no plano facial, com envolvimento nasal, além da região externa dos ouvidos em felinos.

Análise das lesões clínicas de caninos e felinos acometidos pelas principais infecções fúngicas

As principais infecções fúngicas que acometem caninos e felinos apresentam manifestações clínicas enquadradascomo dermatopatias de diferentes etiologias, os quais dificultam a conduta clínica, devido as diversas suspeitas clínicas. Este trabalho objetivou analisar as lesões clínicas e sítios de lesões advindas da malasseziose, candidose, dermatofitose e esporotricose ocorridas em felinos e caninos atendidos emPelotas, RS (Brasil) em um período de oito anos de estudo. Nos resultados observados, a malasseziose e candidose otológica apresentam similaridade com sinais de prurido e cerúmen enegrecido nos animais estudados. A dermatofitose se manifestou principalmente em lesões alopécicas, crostosas e pruriginosas,sendo a região cranial e torácica mais afetada em caninos, ao passo que em felinos ocorreu em maior frequência nos ouvidos externos, região da cabeça e face, membros anteriores e abdômen. Úlceras, exsudação e nódulos foram os sinais mais observados em caninos e felinos com esporotricose, principalmente no plano facial, com envolvimento nasal, além da região externa dos ouvidos em felinos. (AU)

Dermatopatias fúngicas: aspectos clínicos, diagnósticos e terapêuticos / Fungal dermatopathy: clinical, diagnosis and therapeutic aspects

Micoses são doenças infecciosas causadas pelo desenvolvimento e multiplicação de fungos patogênicos em diferentes tecidos e órgãos com manifestações clínicas bastante variadas. Dermatologicamente, estas infecções podem ser classificadas de acordo com a localização do agente em micoses superficiais, cutâneas e subcutâneas, representadas respectivamente pelos fungos Malassezia pachydermtis, dermatófitos, principalmente Microsporum canis,e Sporothrix schenckii. Nas últimas décadas, a utilização crescente de terapias imunossupressivas, o surgimento de infecções retrovirais, em humanos e animais, foram decisivas para a emergência de doenças oportunistas, sendo as doenças fúngicas uma das mais importantes. Além disso, algumas das infecções fúngicas são zoonoses e tem grande importância em saúde pública. O presente trabalho se propôs a realizar detalhada revisão de literatura com o objetivo de fornecer informações relevantes a respeito dos aspectos clínicos, diagnósticos e terapêuticos das principais dermatopatias fúngicas na clínica de pequenos animais.

Mycoses are infectious diseases caused by the development and multiplication of pathogenic fungi in different tissues and organs with various clinical manifestations. Dermatologically, these infections can be classified according to the location of the agent in superficial mycoses, cutaneous and subcutaneous, represented respectively by the fungus Malassezia pachydermtis, dermatophytes, mainly Microsporum canisand Sporothrix schenckii. In recent decades the increasing use of immunosuppressive therapies, emergence of retroviral infections in humans and animals have been crucial to the emergence of opportunistic infections like fungal diseases. Besides, some of fungal infections are zoonoses and have important implications in public health. This study aimed to perform a detailed review about the clinical features, diagnosis and treatment of major fungal skin diseases in small animal clinic

Efeito dos óleos essenciais de Cymbopogon citratus e Melaleuca alternifolia sobre Candida albicans estudo in vitro e in vivo / Effects of essential oils from Cymbopogon citratus and Melaleuca alternifolia on Candida albicans - study in vitro and in vivo

O objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro e in vivo dos óleos essenciais de Cymbopogon citratus e Melaleuca alternifolia sobre Candida albicans. No estudo in vitro foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) de M. alternifolia e C. citratus em culturas planctônicas de C. albicans de acordo com as normas da NCCLS. Os efeitos dos óleos essenciais também foram testados sobre biofilmes de C. albicans formados no fundo da placa de 96 poços por 48 horas. Para a realização do estudo in vivo, foram utilizados 42 camundongos imunossuprimidos por injeções de prednisolona. A indução de candidose experimental foi realizada por inoculações de C. albicans (108 células/mL) no dorso da língua dos animais e administração de tetraciclina na água de beber. A seguir, os camundongos foram tratados com 3 aplicações do óleo essencial de C. citratus, M. alternifolia ou solução fisiológica (grupo Controle) no dorso da língua. Foram realizadas coletas de amostras bucais, antes e após o tratamento, para recuperação de leveduras da cavidade bucal dos animais e contagem de UFC/mL. Após 5 dias da indução da candidose experimental, os animais foram submetidos à eutanásia para análise histológica e de microscopia eletrônica do dorso da língua. Os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes de Tukey e Kruskal-Wallis (p ≤ 0,05). Os resultados obtidos nos testes realizados in vitro demonstraram que a CIM foi de 0,195% para M. alternifolia e menor que 0,01% para C. citratus. A redução microbiana observada nos biofilmes de C. albicans foi de 6,88 e 5,84 log, respectivamente, para M. alternifolia e C. citratus. Em relação à recuperação de C. albicans da cavidade bucal dos animais, verificou-se redução microbiana de 6,49 log para M. alternifolia e 5,95 log para C. citratus. Na análise microscópica do dorso da língua, observou-se colonização de leveduras e hifas em todos os grupos experimentais, não havendo diferença...

The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity in vitro and in vivo of essential oils of Cymbopogon citratus and Melaleuca alternifolia on Candida albicans. In vitro study was determined the minimum inhibitory concentration (MIC) of M. alternifolia and C. citratus in planktonic cultures of C. albicans according to NCCLS standards. The effects of essential oils were also tested on biofilms of C. albicans formed deep inside the 96-well plate for 48 hours. For the study in vivo, we used 42 mice immunosuppressed by injections of prednisolone. The induction of experimental candidiasis was performed by inoculation of C. albicans (108 cells / mL) on the back of the tongue of animals and administration of tetracycline in drinking water. Next, the mice were treated with three applications of the essential oil of C. citratus, M. alternifolia or saline (control group) on the back of the tongue. Samples were collected with mouth before and after treatment for recovery of yeasts from the oral cavity of animals and number of CFU / mL. 5 days after induction of experimental candidiasis, the animals were euthanized for histological and electron microscopy of the tongue. The results were statistically analyzed by Tukey's test and Kruskal-Wallis test (p ≤ 0.05). The results obtained in in vitro tests showed that the MIC was 0.195% for M. alternifolia and less than 0.01% for C. citratus. The microbial reduction observed in biofilms of C. albicans was 6.88 and 5.84 log, respectively, for M. alternifolia and C. citratus. Regarding the recovery of C. albicans from the oral cavity of animals, there was a reduction of 6.49 log for microbial M. alternifolia and 5.95 for log C. citratus. In the microscopic analysis of the tongue, there was colonization of yeasts and hyphae in all experimental groups, no statistically significant difference between groups. However, it was found that the group treated with Melaleuca alternifolia showed fewer epithelial...(AU)

Candidose na medicina veterinária: um enfoque micológico, clínico e terapêutico / Candidosis on veterinary medicine: a mycological, clinical and therapeutic approuch

O gênero Candida é composto por leveduras que vivem como comensais na microbiota de homens e animais. Em geral, não causam nenhum dano aos seus hospedeiros, entretanto, em virtude de desequilíbrios nas defesas química, física e imunológica, esses microrganismos podem se tornar patogênicos. Infecções por Candida spp. são pouco frequentes na Medicina Veterinária no entanto, nos últimos anos, tem sido observado aumento considerável de relatos de enfermidades causadas por essas leveduras, acometendo diferentes animais. Várias espécies do gênero são implicadas em quadros infecciosos, sendo a C. albicans a principal delas, seguida por C. tropicalis e C. parapsilosis. Considerando-se o potencial patogênico do gênero Candida, aliado ao surgimento de cepas resistentes a derivados azólicos, in vitro, o presente trabalho se propôs a realizar detalhada revisão de literatura, abordando os aspectos clínico-laboratoriais, etiológicos e terapêuticos da candidose na Medicina Veterinária.

The Candida genus is composed by yeasts that live as commmensal on human and animals' microbiota. In general, they do not cause any damage to their hosts. However, due instability on chemical, physical and immunological defenses, these microorganisms can become pathogens. Candida spp. infections are rare on Veterinary Medicine. However, on the last years, a considerable raise of illness caused by these yeasts has been related on varied animal species. Several species of this genus has been mentioned as responsible for infectious diseases in animals, being C. albicans the main of them, followed by C. tropicalis and C. parapsilosis. Considering the pathogenic role of the genus Candida, allied to the emerging of resistant strains to the azole derivatives, in vitro, the present research proposed to perform a detailed review, approaching clinic-laboratorial, etiologic and therapeutic aspects of the candidosis on Veterinary medicine.

Candidose na medicina veterinária: um enfoque micológico, clínico e terapêutico

The Candida genus is composed by yeasts that live as commmensal on human and animals' microbiota. In general, they do not cause any damage to their hosts. However, due instability on chemical, physical and immunological defenses, these microorganisms can become pathogens. Candida spp. infections are rare on Veterinary Medicine. However, on the last years, a considerable raise of illness caused by these yeasts has been related on varied animal species. Several species of this genus has been mentioned as responsible for infectious diseases in animals, being C. albicans the main of them, followed by C. tropicalis and C. parapsilosis. Considering the pathogenic role of the genus Candida, allied to the emerging of resistant strains to the azole derivatives, in vitro, the present research proposed to perform a detailed review, approaching clinic-laboratorial, etiologic and therapeutic aspects of the candidosis on Veterinary medicine.

O gênero Candida é composto por leveduras que vivem como comensais na microbiota de homens e animais. Em geral, não causam nenhum dano aos seus hospedeiros, entretanto, em virtude de desequilíbrios nas defesas química, física e imunológica, esses microrganismos podem se tornar patogênicos. Infecções por Candida spp. são pouco frequentes na Medicina Veterinária no entanto, nos últimos anos, tem sido observado aumento considerável de relatos de enfermidades causadas por essas leveduras, acometendo diferentes animais. Várias espécies do gênero são implicadas em quadros infecciosos, sendo a C. albicans a principal delas, seguida por C. tropicalis e C. parapsilosis. Considerando-se o potencial patogênico do gênero Candida, aliado ao surgimento de cepas resistentes a derivados azólicos, in vitro, o presente trabalho se propôs a realizar detalhada revisão de literatura, abordando os aspectos clínico-laboratoriais, etiológicos e terapêuticos da candidose na Medicina Veterinária.

Candidose na medicina veterinária: um enfoque micológico, clínico e terapêutico

The Candida genus is composed by yeasts that live as commmensal on human and animals' microbiota. In general, they do not cause any damage to their hosts. However, due instability on chemical, physical and immunological defenses, these microorganisms can become pathogens. Candida spp. infections are rare on Veterinary Medicine. However, on the last years, a considerable raise of illness caused by these yeasts has been related on varied animal species. Several species of this genus has been mentioned as responsible for infectious diseases in animals, being C. albicans the main of them, followed by C. tropicalis and C. parapsilosis. Considering the pathogenic role of the genus Candida, allied to the emerging of resistant strains to the azole derivatives, in vitro, the present research proposed to perform a detailed review, approaching clinic-laboratorial, etiologic and therapeutic aspects of the candidosis on Veterinary medicine.

O gênero Candida é composto por leveduras que vivem como comensais na microbiota de homens e animais. Em geral, não causam nenhum dano aos seus hospedeiros, entretanto, em virtude de desequilíbrios nas defesas química, física e imunológica, esses microrganismos podem se tornar patogênicos. Infecções por Candida spp. são pouco frequentes na Medicina Veterinária no entanto, nos últimos anos, tem sido observado aumento considerável de relatos de enfermidades causadas por essas leveduras, acometendo diferentes animais. Várias espécies do gênero são implicadas em quadros infecciosos, sendo a C. albicans a principal delas, seguida por C. tropicalis e C. parapsilosis. Considerando-se o potencial patogênico do gênero Candida, aliado ao surgimento de cepas resistentes a derivados azólicos, in vitro, o presente trabalho se propôs a realizar detalhada revisão de literatura, abordando os aspectos clínico-laboratoriais, etiológicos e terapêuticos da candidose na Medicina Veterinária.