RESUMO
A citometria de fluxo é uma técnica que apresenta resultados com extrema rapidez para análises de propriedades celulares como volume, complexidade morfológica e conteúdo de DNA, e é considerada mais conveniente que outras técnicas. Entretanto, as análises muitas vezes geram histogramas com variações que podem ser devidas a vários fatores, dentre os quais, as diferenças entre os softwares que realizam a aquisição dos dados gerados pelo citômetro de fluxo. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o desempenho de quatro softwares comumente utilizados em análises de citometria de fluxo, por meio de quantificações do conteúdo de DNA e análises do coeficiente de variação gerados por eles. Foram realizadas leituras de 25 amostras foliares de bananeira NBA (AA) utilizando o citômetro de fluxo modelo FACSCalibur (BD) e 25 histogramas de cada software (CellQuest, WinMDI, FlowJo e FCS Express) foram analisados para obtenção do conteúdo de DNA estimado e do coeficiente de variação das estimativas. Não há diferença entre os softwares quanto aos valores de conteúdo de DNA. Entretanto, as análises do CV indicaram que a precisão do software WinMDI foi baixa e que os valores de CV foram subestimados, enquanto que os demais softwares apresentaram valores de CV mais condizentes com a literatura. O software CellQuest é recomendado por ser desenvolvido pela própria empresa fabricante do citômetro de fluxo utilizado nas análises do presente trabalho.(AU)
Flow cytometry is a technique that yields rapid results in analyses of cell properties such as volume, morphological complexity and quantitative DNA content, and it is considered more convenient than other techniques. However, the analysis usually generates histograms marked by variations that can be produced by many factors, including differences between the software packages that capture the data generated by the flow cytometer. The objective of the present work was to evaluate the performance of four software products commonly used in flow cytometry based on quantifications of DNA content and analyses of the coefficients of variation associated with the software outputs. Readings were obtained from 25 NBA (AA) banana leaf samples using the FACSCalibur (BD) flow cytometer, and 25 histograms from each software product (CellQuest, WinMDI, FlowJo and FCS Express) were analyzed to obtain the estimated DNA content and the coefficient of variation (CV) of the estimates. The values of DNA content obtained from the software did not differ significantly. However, the CV analysis showed that the precision of the WinMDI software was low and that the CV values were underestimated, whereas the remaining software showed CV values that were in relatively close agreement with those found in the literature. The CellQuest software is recommended because it was developed by the same company that produces the flow cytometer used in the present study.(AU)
Assuntos
Musa , Citometria de Fluxo , DNA/química , DNA/análiseRESUMO
A citometria de fluxo é uma técnica que apresenta resultados com extrema rapidez para análises de propriedades celulares como volume, complexidade morfológica e conteúdo de DNA, e é considerada mais conveniente que outras técnicas. Entretanto, as análises muitas vezes geram histogramas com variações que podem ser devidas a vários fatores, dentre os quais, as diferenças entre os softwares que realizam a aquisição dos dados gerados pelo citômetro de fluxo. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o desempenho de quatro softwares comumente utilizados em análises de citometria de fluxo, por meio de quantificações do conteúdo de DNA e análises do coeficiente de variação gerados por eles. Foram realizadas leituras de 25 amostras foliares de bananeira NBA (AA) utilizando o citômetro de fluxo modelo FACSCalibur (BD) e 25 histogramas de cada software (CellQuest, WinMDI, FlowJo e FCS Express) foram analisados para obtenção do conteúdo de DNA estimado e do coeficiente de variação das estimativas. Não há diferença entre os softwares quanto aos valores de conteúdo de DNA. Entretanto, as análises do CV indicaram que a precisão do software WinMDI foi baixa e que os valores de CV foram subestimados, enquanto que os demais softwares apresentaram valores de CV mais condizentes com a literatura. O software CellQuest é recomendado por ser desenvolvido pela própria empresa fabricante do citômetro de fluxo utilizado nas análises do presente trabalho.
Flow cytometry is a technique that yields rapid results in analyses of cell properties such as volume, morphological complexity and quantitative DNA content, and it is considered more convenient than other techniques. However, the analysis usually generates histograms marked by variations that can be produced by many factors, including differences between the software packages that capture the data generated by the flow cytometer. The objective of the present work was to evaluate the performance of four software products commonly used in flow cytometry based on quantifications of DNA content and analyses of the coefficients of variation associated with the software outputs. Readings were obtained from 25 NBA (AA) banana leaf samples using the FACSCalibur (BD) flow cytometer, and 25 histograms from each software product (CellQuest, WinMDI, FlowJo and FCS Express) were analyzed to obtain the estimated DNA content and the coefficient of variation (CV) of the estimates. The values of DNA content obtained from the software did not differ significantly. However, the CV analysis showed that the precision of the WinMDI software was low and that the CV values were underestimated, whereas the remaining software showed CV values that were in relatively close agreement with those found in the literature. The CellQuest software is recommended because it was developed by the same company that produces the flow cytometer used in the present study.