Clonagem e expressão de fragmentos de Fab em Escherichia coli.

Introduction: Antibodies are made up of two light chains (LC) and two heavy chains (HC), linked together by disulfide bonds and divided into an antigen-binding region (Fab) and a crystallizable fragment (Fc). The interest in the production of antibody fragments, such as Fab, comes from the ability to recognize the antigen without activating antigen-dependent effector mechanisms and for studies on the structure of the antigen-antibody complex. Objective: Use a universal primer system to clone coding sequences from the human Fab region into a bacterial expression vector. Methods: The DNA of interest was cloned by amplification (PCR), purified, digested and cloned. Results: The primers correctly amplified the genes of interest. Conclusion: The use of a universal primer system allows the cloning of different sequences, regardless of the antibody target.

Introdução: Anticorpossão formados por duas cadeiasleves (LC) e duas cadeias pesadas(HC), ligadas entre si por ligações dissulfeto e divididos por região de ligação ao antígeno (Fab) e fragmento cristalizável (Fc). O interesse na produção de fragmentos de anticorpos, como o Fab, vem da capacidade de reconhecer o antigênico sem ativar mecanismos efetores dependentes do antigênico e de estudos sobre a estrutura do complexo antigênico-anticorpo. Objetivo: Utilizar um sistema de primers universal para clonar sequências codificantes da região Fab humana em vetor de expressão bacteriano. Métodos: O DNA de interesse foi clonado por amplificação (PCR), purificação, digestão, ligação e transformação. Resultados: Os primers amplificaram corretamente os genes de interesse. Conclusão: A utilização de um sistema de primers universais permite a clonagem de diferentes sequências, independentemente do alvo do anticorpo.

Gene stacking as a strategy to confer characteristics of agronomic importance in plants by genetic engineering / Empilhamento gênico como estratégia para conferir características de importância agronômica em plantas via engenharia genética

ABSTRACT: Gene stacking refers to the introduction of two or more transgenes of agronomic interest in the same plant. The main methods for genetically engineering plants with gene stacking involve (i) the simultaneous introduction, by the co-transformation process, and (ii) the sequential introduction of genes using the re-transformation processes or the sexual crossing between separate transgenic events. In general, the choice of the best method varies according to the species of interest and the availability of genetic constructions and preexisting transgenic events. We also present here the use of minichromosome technology as a potential future gene stacking technology. The purpose of this review was to discuss aspects related to the methodology for gene stacking and trait stacking (a gene stacking strategy to combine characteristics of agronomical importance) by genetic engineering. In addition, we presented a list of crops and genes approved commercially that have been used in stacking strategies for combined characteristics and a discussion about the regulatory standards. An increased number of approved and released gene stacking events reached the market in the last decade. Initially, the most common combined characteristics were herbicide tolerance and insect resistance in soybean and maize. Recently, commercially available varieties were released combining these traits with drought tolerance in these commodities. New traits combinations are reaching the farmer's fields, including higher quality, disease resistant and nutritional value improved. In other words, gene stacking is growing as a strategy to contribute to food safety and sustainability.

RESUMO: O empilhamento gênico se refere a introdução de dois ou mais transgenes de interesse agronômico na mesma planta. Os principais métodos de produção de plantas geneticamente modificadas com empilhamento gênico envolvem (i) a introdução simultânea, pelo processo de co-transformação, e (ii) a introdução sequencial de genes, pelos processos de re-transformação ou por cruzamento entre eventos transgênicos. Em geral, a escolha do melhor método varia de acordo com a espécie de interesse e a disponibilidade de construções genéticas e eventos transgênicos preexistentes. Também é apresentado aqui o uso da tecnologia de minicromossomos como tecnologia potencial de empilhamento gênico. O objetivo desta revisão é discutir aspectos relacionados à metodologia para o empilhamento de genes a combinação de características (obtida via empilhamento de genes de interesse agronômico) via engenharia genética. Além de discutir, é apresentado uma lista de culturas e genes aprovados comercialmente que tem sido usado em estratégias de empilhamento e uma discussão sobre normas regulatórias. Um número maior de eventos com empilhamento de genes foi aprovado e liberado no mercado na última década. Inicialmente, a combinação das características de tolerância a herbicidas e resistência a insetos era a mais popular, principalmente em soja e milho. Recentemente, estas características combinadas com tolerância a seca nessas culturas foram liberadas comercialmente. Novas características combinadas estão entrando na lavoura, incluindo aumento da qualidade, resistência a doenças e aumento do valor nutricional. Em outras palavras, o empilhamento gênico está crescendo como tecnologia para contribuir para a segurança alimentar e sustentabilidade.