Molecular diagnostic for a screening investigation method of tick-borne pathogens in Didelphis albiventris road-killed in north of Paraná, Brazil

The synanthropization of wild animals puts public health at risk by promoting the circulation of zoonotic agents, found naturally in the wild, in the anthropic environment. The objective of this work was to carry out screening by molecular detection of pathogens of the Anaplasmatacea family in Didelphis albiventris, a specie characterized as having a synanthropic habit. Opossums that were dead (n = 25) after being road-killed were collected in the North of Paraná state, southern Brazil during the 2016 and 2018 years, through active search. A questionnaire was filled out with information about the animal and collected place. Biological samples of spleen and liver were collected. The genetic material extracted from the spleen and liver was submitted to molecular diagnosis through PCR for amplification of dsb of Ehrlichia and 16S genes for the other agents of the Anaplasmataceae family. One animal was positive for the genus Ehrlichia in semi-nested PCR for amplification of the 349 bp fragment of the dsb gene in extracted from the liver samples. In PCR for the 16S target no animal was positive. These are preliminary results that reinforce the circulation of Ehrlichia in opossums. To improve the knowledge of these agents in opossums more studies are necessary.(AU)

A sinantropização de animais silvestres coloca em risco a saúde pública por propiciar a circulação de agentes zoonóticos, encontrados naturalmente em ambiente silvestre, no ambiente antrópico. O trabalho teve como objetivo realizar a triagem por detecção molecular de patógenos da família Anaplasmataceae em Didelphis albiventris, espécie caracterizada como de hábito sinantrópico. Gambás mortos (n=25) por atropelamento durante os anos de 2016 e 2018 foram coletados na região norte do Paraná, sul do Brasil, por meio de busca ativa. Realizou-se o preenchimento de formulário com informações sobre a espécie do animal e o local do atropelamento. Foi realizada a necrópsia e coleta de amostras biológicas, de baço e fígado. O material genético extraído de baço e fígado foi submetido a diagnóstico molecular, por meio de PCR, para amplificação dos genes dsb de Ehrlichia sp. e 16S para os demais agentes da família Anaplasmataceae. Um animal foi positivo para o gênero Ehrlichia em semi-nested PCR para a amplificação do fragmento de 349 pb do gene dsb, extraído de fígado. Na PCR para detecção do gene 16S nenhum dos animais foi positivo. Esses resultados preliminares reforçam a circulação de Ehrlichias em gambás. Para melhorar o conhecimento desses agentes em gambás mais estudos são necessários.(AU)

Canine transmissible venereal tumor with spontaneous remission: case study with emphasis on clinical and cytopathological exams to monitor tumor evolution / Tumor venéreo transmissível canino com remissão espontânea: estudo de caso com ênfase aos exames clínico e citopatológico para monitoramento da evolução tumoral

The canine transmissible venereal tumor (TVTC) is a neoplasm transmitted mainly through copulation and with a high incidence in stray dogs in Brazil. In the process of tumor evolution of TVTC, the progression, stationary and regression phases are recognized. The host immunity is related to the disease's biological behavior, however, spontaneous regression observation in cases of naturally occurring TVTC is uncommon. A canine patient was attended, after beeing rescued from the street, due to an ulcerated mass in the external genitália and tick infestation. Cytopathological examination, which diagnosed TVTC, and laboratory tests that showed mild anemia and severe thrombocytopenia were performed. In view of the impossibility of carrying out other exams, it was made the presumptive diagnosis of canine monocytic ehrlichiosis (CME), and treatment was instituted. During follow-up it was observed quick improvement in clinical signs and laboratory changes, as well as a reduction in tumor mass. A new cytopathological evaluation was carried out, and was verified increase in mature lymphocytes and plasmocytes in the midst of the tumor cells, finding compatible with the stationary phase of the disease. From that moment on, it was decided to perform only clinical and cytopathological follow-up. In the following evaluations, continuous clinical remission and cytopathological findings compatible with those described in the regression phase were observed, until its complete remission. It is considered that the improvement in the general health of the patient after the treatment of CME is related to the spontaneous regression of TVTC, and that simultaneous performance of serial clinical and cytopathological exams may be feasible and useful for monitoring the stages of evolution of TVTC.

O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é uma neoplasia transmitida principalmente através da cópula, com elevada incidência em cães errantes no Brasil. No processo de evolução tumoral do TVTC, são reconhecidas as fases de progressão, estacionária e de regressão. O estado imunológico do hospedeiro está relacionado ao comportamento biológico da doença, contudo, a observação de regressão espontânea em casos de TVTC de ocorrência natural é incomum. Foi atendida uma paciente canina, resgatada da rua, por apresentar massa ulcerada na genitália externa e infestação por carrapatos. Foram realizados exame citopatológico, que diagnosticou TVTC, e exames laboratoriais que evidenciaram anemia discreta e grave trombocitopenia. Com isso e diante da impossibilidade de realizar outros exames, foi também estabelecido o diagnóstico presuntivo de erlichiose monocítica canina (EMC) e instituído tratamento para a hemoparasitose. Durante o acompanhamento, foi observada rápida melhora dos sinais clínicos e das alterações laboratoriais, bem como a redução espontânea da massa tumoral. Em sequência, foi realizada nova avaliação citopatológica do TVTC e verificado o aumento quantitativo de linfócitos maduros e plasmócitos, em meio as células tumorais, achado compatível com a fase estacionária da doença. A partir desse momento, optou-se por realizar apenas acompanhamento clínico e avaliação citopatológica da neoplasia. Foram observados contínua remissão clínica e achados microscópicos compatíveis com a fase de regressão do tumor, até sua remissão completa. Pondera-se que a melhora na saúde geral da paciente após o tratamento da EMC esteja relacionada à regressão espontânea do TVTC, e que realização simultânea de exames clínico e citopatológico seriados pode ser viável e útil ao acompanhamento das fases de evolução do TVTC.

Canine monocytic ehrlichiosis in Buenos Aires, Argentina: comparison of serological and molecular assays / Ehrlichiose monocítica canina em Buenos Aires: comparação de testes serológicos e moleculares

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease caused by the bacterium Ehrlichia canis and transmitted by Rhipicephalus sanguineus sensu lato, a tick with worldwide distribution. When not diagnosed and treated early, disease can be severe. Currently, the disease is confirmed by serological or molecular assays. The objective of this study was to compare a serological assay based on immunochromatography (SPEED® EHRLI immunochromatographic test; BVT, France) and a molecular assay (a screening PCR followed by a nested PCR specific for E. canis) for the diagnosis of E. canis in suspected dogs from Buenos Aires city and southern Greater Buenos Aires, Argentina. Blood samples from 20 clinically healthy dogs (Control Group) and from 80 sick dogs suspected of having CME (Groups 1 to 4) were tested in parallel. Neither the immunochromatographic test nor the PCR assay was able to detect the presence of E. canis in the Control Group. In the group which had been previously tested by serology, the agreement between the tests was low (kappa: 0.200), whereas in the group which had been previously tested by PCR, the concordance between the tests was adequate (kappa: 0.650). The concordance between the tests evaluated in the total population studied was moderate (kappa: 0.496). The results of our study suggest that the use of rapid serological tests as a first approach, together with subsequent confirmation by PCR, will improve the diagnosis of CME.(AU)

A ehrlichiose monocítica canina (CME) é uma doença infecciosa transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato com distribuição mundial causada por Ehrlichia canis, que pode produzir uma doença grave se não foi diagnosticada e tratada precocemente. A confirmação da doença é feita diretamente pela detecção do DNA fazendo a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou indiretamente por métodos sorológicos. O objetivo deste estudo foi comparar o método sorológico baseado na imunocromatografia e a técnica de PCR para o diagnóstico de E. canis em cães suspeitos da Cidade de Buenos Aires e da região sul da Grande Buenos Aires. As amostras de sangue de 20 cães clinicamente saudáveis (Grupo Controle) e de 80 cães com suspeita clínica de CME (Grupo 1-4) foram avaliadas em paralelo. O diagnóstico serológico foi feito pelo teste imunocromatográfico SPEED® EHRLI (BVT, França). Para a detecção molecular, foi utilizada uma PCR de triagem para amplificar um fragmento de 345 pb do gene que codifica a subunidade 16S do rRNA da família Anaplasmataceae. As amostras positivas depois foram processadas pela PCR aninhada específica para E. canis. No Grupo Controle, a presença de E. canis não foi detectada por PCR ou anticorpos específicos com o teste imunocromatográfico. No grupo em que a sorologia foi solicitada inicialmente (1 e 2), a concordância entre os testes foi baixo (kappa: 0,200) enquanto que no grupo onde o teste inicialmente solicitado foi a PCR, a concordância entre os testes era adequado (kappa: 0,650). A concordância entre os testes avaliados na população total estudada foi moderada (kappa: 0,496). Em conclusão, os resultados do nosso estudo sugerem que o uso de testes serológicos rápidos inicialmente, juntamente com a confirmação subsequente por PCR, permitirá melhorar o diagnóstico de CME.(AU)

Canine monocytic ehrlichiosis in Buenos Aires, Argentina: comparison of serological and molecular assays / Ehrlichiose monocítica canina em Buenos Aires: comparação de testes serológicos e moleculares

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease caused by the bacterium Ehrlichia canis and transmitted by Rhipicephalus sanguineus sensu lato, a tick with worldwide distribution. When not diagnosed and treated early, disease can be severe. Currently, the disease is confirmed by serological or molecular assays. The objective of this study was to compare a serological assay based on immunochromatography (SPEED® EHRLI immunochromatographic test; BVT, France) and a molecular assay (a screening PCR followed by a nested PCR specific for E. canis) for the diagnosis of E. canis in suspected dogs from Buenos Aires city and southern Greater Buenos Aires, Argentina. Blood samples from 20 clinically healthy dogs (Control Group) and from 80 sick dogs suspected of having CME (Groups 1 to 4) were tested in parallel. Neither the immunochromatographic test nor the PCR assay was able to detect the presence of E. canis in the Control Group. In the group which had been previously tested by serology, the agreement between the tests was low (kappa: 0.200), whereas in the group which had been previously tested by PCR, the concordance between the tests was adequate (kappa: 0.650). The concordance between the tests evaluated in the total population studied was moderate (kappa: 0.496). The results of our study suggest that the use of rapid serological tests as a first approach, together with subsequent confirmation by PCR, will improve the diagnosis of CME.(AU)

A ehrlichiose monocítica canina (CME) é uma doença infecciosa transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato com distribuição mundial causada por Ehrlichia canis, que pode produzir uma doença grave se não foi diagnosticada e tratada precocemente. A confirmação da doença é feita diretamente pela detecção do DNA fazendo a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou indiretamente por métodos sorológicos. O objetivo deste estudo foi comparar o método sorológico baseado na imunocromatografia e a técnica de PCR para o diagnóstico de E. canis em cães suspeitos da Cidade de Buenos Aires e da região sul da Grande Buenos Aires. As amostras de sangue de 20 cães clinicamente saudáveis (Grupo Controle) e de 80 cães com suspeita clínica de CME (Grupo 1-4) foram avaliadas em paralelo. O diagnóstico serológico foi feito pelo teste imunocromatográfico SPEED® EHRLI (BVT, França). Para a detecção molecular, foi utilizada uma PCR de triagem para amplificar um fragmento de 345 pb do gene que codifica a subunidade 16S do rRNA da família Anaplasmataceae. As amostras positivas depois foram processadas pela PCR aninhada específica para E. canis. No Grupo Controle, a presença de E. canis não foi detectada por PCR ou anticorpos específicos com o teste imunocromatográfico. No grupo em que a sorologia foi solicitada inicialmente (1 e 2), a concordância entre os testes foi baixo (kappa: 0,200) enquanto que no grupo onde o teste inicialmente solicitado foi a PCR, a concordância entre os testes era adequado (kappa: 0,650). A concordância entre os testes avaliados na população total estudada foi moderada (kappa: 0,496). Em conclusão, os resultados do nosso estudo sugerem que o uso de testes serológicos rápidos inicialmente, juntamente com a confirmação subsequente por PCR, permitirá melhorar o diagnóstico de CME.(AU)

Canine monocytic ehrlichiosis in Buenos Aires, Argentina: comparison of serological and molecular assays

ABSTRACT: Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease caused by the bacterium Ehrlichia canis and transmitted by Rhipicephalus sanguineus sensu lato, a tick with worldwide distribution. When not diagnosed and treated early, disease can be severe. Currently, the disease is confirmed by serological or molecular assays. The objective of this study was to compare a serological assay based on immunochromatography (SPEED® EHRLI immunochromatographic test; BVT, France) and a molecular assay (a screening PCR followed by a nested PCR specific for E. canis) for the diagnosis of E. canis in suspected dogs from Buenos Aires city and southern Greater Buenos Aires, Argentina. Blood samples from 20 clinically healthy dogs (Control Group) and from 80 sick dogs suspected of having CME (Groups 1 to 4) were tested in parallel. Neither the immunochromatographic test nor the PCR assay was able to detect the presence of E. canis in the Control Group. In the group which had been previously tested by serology, the agreement between the tests was low (kappa: 0.200), whereas in the group which had been previously tested by PCR, the concordance between the tests was adequate (kappa: 0.650). The concordance between the tests evaluated in the total population studied was moderate (kappa: 0.496). The results of our study suggest that the use of rapid serological tests as a first approach, together with subsequent confirmation by PCR, will improve the diagnosis of CME.

RESUMO: A ehrlichiose monocítica canina (CME) é uma doença infecciosa transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato com distribuição mundial causada por Ehrlichia canis, que pode produzir uma doença grave se não foi diagnosticada e tratada precocemente. A confirmação da doença é feita diretamente pela detecção do DNA fazendo a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou indiretamente por métodos sorológicos. O objetivo deste estudo foi comparar o método sorológico baseado na imunocromatografia e a técnica de PCR para o diagnóstico de E. canis em cães suspeitos da Cidade de Buenos Aires e da região sul da Grande Buenos Aires. As amostras de sangue de 20 cães clinicamente saudáveis (Grupo Controle) e de 80 cães com suspeita clínica de CME (Grupo 1-4) foram avaliadas em paralelo. O diagnóstico serológico foi feito pelo teste imunocromatográfico SPEED® EHRLI (BVT, França). Para a detecção molecular, foi utilizada uma PCR de triagem para amplificar um fragmento de 345 pb do gene que codifica a subunidade 16S do rRNA da família Anaplasmataceae. As amostras positivas depois foram processadas pela PCR aninhada específica para E. canis. No Grupo Controle, a presença de E. canis não foi detectada por PCR ou anticorpos específicos com o teste imunocromatográfico. No grupo em que a sorologia foi solicitada inicialmente (1 e 2), a concordância entre os testes foi baixo (kappa: 0,200) enquanto que no grupo onde o teste inicialmente solicitado foi a PCR, a concordância entre os testes era adequado (kappa: 0,650). A concordância entre os testes avaliados na população total estudada foi moderada (kappa: 0,496). Em conclusão, os resultados do nosso estudo sugerem que o uso de testes serológicos rápidos inicialmente, juntamente com a confirmação subsequente por PCR, permitirá melhorar o diagnóstico de CME.

Homeopatia e isoterapia no tratamento da Ehrlichiose canina / Homeopathy and isotherapy on canine Ehrlichiosis treatment

A Ehrlichiose canina é uma doença infecciosa causada pela bactéria Ehrlichia canis. O tratamento consiste no uso de antibiótico, sendo Doxiciclina o medicamento mais usado. O objetivo da pesquisa foi propor um novo tratamento para tal patologia através de medicamento homeopático associado à isoterapia (nosódio). Para tanto, foram utilizados 10 cães com alterações clínico laboratoriais tipicamente causadas pela Ehrlichiose canina. Também foi realizado teste com o SNAP 4Dx, sendo todos os cães positivos para anticorpos anti-Ehrlichia canis. Os animais foram acompanhados através de exames durante o dia zero e as semanas 1, 3, 5, 9, 13, 15 e 18, e ambos obtiveram recuperação do quadro clínico- laboratorial durante tal período, concluindo-se que este tratamento foi viável para os animais participantes do projeto.AU

Canine Ehrlichiosis is a infectious disease caused by. Ehrlichia canis. The treatment consists on the use of antibiotics, and Doxiciclin is the most used medicine. The researchs objective was to propose a new treatment for this patology through an homeopathic medicine associated with isotherapy (nosode). Towards this, it was used 10 dogs with clinical-laboratorial changes caused by canine Ehrlichiosis. There was also made a SNAP 4Dx test, where all the dogs were positive for anti- Ehrlichia canis antibodies. The animals were watched by exams during the day 0 and weeks 1, 3, 5, 9, 13, 15 and 18, and both reached the recovery of clinical and laboratorial findings during this period, concluding that this treatment was possible for these studied animals.AU

Homeopatia e isoterapia no tratamento da Ehrlichiose canina / Homeopathy and isotherapy on canine Ehrlichiosis treatment

A Ehrlichiose canina é uma doença infecciosa causada pela bactéria Ehrlichia canis. O tratamento consiste no uso de antibiótico, sendo Doxiciclina o medicamento mais usado. O objetivo da pesquisa foi propor um novo tratamento para tal patologia através de medicamento homeopático associado à isoterapia (nosódio). Para tanto, foram utilizados 10 cães com alterações clínico – laboratoriais tipicamente causadas pela Ehrlichiose canina. Também foi realizado teste com o SNAP 4Dx, sendo todos os cães positivos para anticorpos anti-Ehrlichia canis. Os animais foram acompanhados através de exames durante o dia zero e as semanas 1, 3, 5, 9, 13, 15 e 18, e ambos obtiveram recuperação do quadro clínico- laboratorial durante tal período, concluindo-se que este tratamento foi viável para os animais participantes do projeto.

Canine Ehrlichiosis is a infectious disease caused by. Ehrlichia canis. The treatment consists on the use of antibiotics, and Doxiciclin is the most used medicine. The research’s objective was to propose a new treatment for this patology through an homeopathic medicine associated with isotherapy (nosode). Towards this, it was used 10 dogs with clinical-laboratorial changes caused by canine Ehrlichiosis. There was also made a SNAP 4Dx test, where all the dogs were positive for anti- Ehrlichia canis antibodies. The animals were watched by exams during the day 0 and weeks 1, 3, 5, 9, 13, 15 and 18, and both reached the recovery of clinical and laboratorial findings during this period, concluding that this treatment was possible for these studied animals.

Prevalence of canine ehrlichiosis among animals treated at the corozal veterinary hospital of the faculty of veterinary medicine, university of Panama / Prevalência de ehrlichiose canina entre animais atendidos no complexo hospitalário veterinário do corozal, faculdade de medicina veterinária, universidade de panamá

The aim of this study was to determine the prevalence of canine Ehrlichiosis among animals treated at the Corozal Veterinary Hospital of the Faculty of Veterinary Medicine, University of Panama, Brazil. The survey was conducted retrospectively with data obtained from January 2004 to December 2009, based on the records of clinical cases of canine ehrlichiosis, confirmed with blood smear, race and demographics data (age, sex and place of origin) of each animal. The results revealed that 10.12% of the treated animals (n = 1452) were positive in the period under review. These animals were of both sexes with a mean age of approximately 3.6 years. The monthly prevalence recorded was 9.98%, with a significantly higher infection rate in 2008 (14.83%). The positive cases were significantly higher in the months of March, May and September and lowest in February, with a noteworthy density of cases equal to or higher than the average from May to October. Breed and place of origin of the animals were identified as risk factors.(AU)

Foi determinada a prevalência de Ehrlichiose canina entre animais atendidos no Complexo Hospitalário Veterinário do Corozal da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de Panamá. O levantamento foi realizado de forma retrospectiva com dados obtidos no período de janeiro de 2004 a dezembro de 2009. Para o trabalho, foram utilizados os registros dos casos clínicos de ehrlichiose canina, confirmados através de esfregaço sanguíneo, a raça e os aspectos demográficos (idade, sexo e local de origem) de cada animal. Os resultados revelaram que 10,12% dos animais atendidos (n = 1.452) mostraram-se positivos para o problema no período em análise. Esses animais eram de ambos os sexos com idade media de aproximadamente 3,6 anos. A prevalência mensal registrada foi de 9,98%, com taxa de infecção significativamente superior em 2008 (14,83%). O número de casos positivos foi significativamente superior nos meses de março, maio e setembro e menor no mês de fevereiro, destacando-se haver densidade de casos igual ou superior à média de maio a outubro. A raça e o local de origem dos animais foram identificados como fatores de risco.(AU)

Prevalence of canine ehrlichiosis among animals treated at the corozal veterinary hospital of the faculty of veterinary medicine, university of Panama / Prevalência de ehrlichiose canina entre animais atendidos no complexo hospitalário veterinário do corozal, faculdade de medicina veterinária, universidade de panamá

The aim of this study was to determine the prevalence of canine Ehrlichiosis among animals treated at the Corozal Veterinary Hospital of the Faculty of Veterinary Medicine, University of Panama, Brazil. The survey was conducted retrospectively with data obtained from January 2004 to December 2009, based on the records of clinical cases of canine ehrlichiosis, confirmed with blood smear, race and demographics data (age, sex and place of origin) of each animal. The results revealed that 10.12% of the treated animals (n = 1452) were positive in the period under review. These animals were of both sexes with a mean age of approximately 3.6 years. The monthly prevalence recorded was 9.98%, with a significantly higher infection rate in 2008 (14.83%). The positive cases were significantly higher in the months of March, May and September and lowest in February, with a noteworthy density of cases equal to or higher than the average from May to October. Breed and place of origin of the animals were identified as risk factors.

Foi determinada a prevalência de Ehrlichiose canina entre animais atendidos no Complexo Hospitalário Veterinário do Corozal da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de Panamá. O levantamento foi realizado de forma retrospectiva com dados obtidos no período de janeiro de 2004 a dezembro de 2009. Para o trabalho, foram utilizados os registros dos casos clínicos de ehrlichiose canina, confirmados através de esfregaço sanguíneo, a raça e os aspectos demográficos (idade, sexo e local de origem) de cada animal. Os resultados revelaram que 10,12% dos animais atendidos (n = 1.452) mostraram-se positivos para o problema no período em análise. Esses animais eram de ambos os sexos com idade media de aproximadamente 3,6 anos. A prevalência mensal registrada foi de 9,98%, com taxa de infecção significativamente superior em 2008 (14,83%). O número de casos positivos foi significativamente superior nos meses de março, maio e setembro e menor no mês de fevereiro, destacando-se haver densidade de casos igual ou superior à média de maio a outubro. A raça e o local de origem dos animais foram identificados como fatores de risco.

Obtenção de antígeno de Ehrlichia canis para desenvolvimento de teste sorológico visando o diagnostico de ehrlichiose canina

A ehrlichiose canina é doença causada por bactérias Gram negativas estritamente intracelular, que pertencem ao gênero Ehrlichia.Diferentes espécies deste gênero podem parasitar leucócitos, eritrócitos e plaquetas e desencadear alterações patológicas em vários órgãos . O principal agente etiológico da ehrichiose canina é a espécie Ehrlichia canis. O diagnostico etiológico da ehrlichiose é importante para o tratamento e monitoramento epidemiológico da doença. O diagnostico laboratorial pode ser realizado através da visualização de mórulas em esfregaços sanguíneos, podendo ser confirmado pela titulação de anticorpos séricos, pelo isolamento do microrganismo ou ainda pela detecção do DNA da Ehrlichia spp pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os testes sorológicos são os mais indicados devido ás dificuldades encontradas nos testes de detecção direta do microrganismo. Entretanto, reações cruzadas podem ocorrer devido a antígenos comuns presentes nas diferentes espécies de gênero Ehrlichia. Proteínas antigênicas de superfície, características de E. canis, tem sido pesquisadas com o objetivo de melhorar a especificidade dos testes sorológicos. A identificação dessas moléculas tem possibilitado a obtenção de proteínas recombinantes que podem ser utilizadas como antígenos específicos evitando assim possíveis reações cruzadas. A produção de antígenos pela tecnologia do DNA recombinante permite a obtenção de grande quantidade de proteínas especificas a partir de cultura celular sem a necessidade de utilizar modelos in vivo (animais-infecções experimentais). Os testes comerciais para diagnostico da ehrlichiose canina são importados e onerosos para o clínico veterinário. Desta forma, o objetivo deste estudo foi obter, pela tecnologia do DNA recombinante, uma proteína antigênica de E. canis e avaliar a aplicação desse produto em testes imunológicos visando o diagnostico sorológicos da ehrlichiose canina. Para tanto, um isolado de E. canis (amostra São Paulo)foi cultivado em células DH82 para obtenção do DNA da bactéria. Após amplificação do DNA bacteriano, correspondente à porção antigênica da proteína TRP36, o fragmento foi ligado ao vetor de clonagem pBAD/Thio –TOPO. O plasmidio contendo o gene codificado da TRP36 foi transferido por eletroporação para células E. coli DH-10B para expressão da proteína TRP36. Após isolamento por cromatografia de afinidade, a proteína recombinante foi avaliada por ensaios imunológicos quanto a sua antigenicidade. Os testes de ELISA indireto e Western blot, utilizando a TRP36 como antígeno, revelaram a presença de anticorpos específicos nos soros de animais infectados naturalmente com E. canis. Estes resultados confirmam a antigenidade da proteína recombinante obtida. Os resultados dos testes preliminares de aglutinação do látex sensibilizado com essa proteína como antígeno, indicam a possibilidade de usar essa molécula recombinante no sorodiagnóstico da ehrlichiose canina.

Ehrlichia canis and Anaplasma platys in ticks of dogs in Cuiaba, Mato Grosso / Ehrlichia canis e Anaplasma platys em carrapatos de cães de Cuiabá, Mato Grosso

Diseases transmitted by arthropods such as Rhipicephalus sanguineus, are caused by a spectrum of pathogens. Among these are the canine monocytic ehrlichiosis and cyclical thrombocytopenia with a cosmopolitan distribution. Aiming to verify the presence of DNA of Anaplasma platys and Ehrlichia canis in ticks R. sanguineus collected in the period 2008 to 2009 of 380 infected dogs. Ticks, after maceration, were subjected to DNA extraction and then nested PCR was performed for amplification of A. platys and E. canis. Of these, 81 (29.7%) amplified DNA from ehrlichiais agents, where 38 (17.9%) amplified in E. canis and 32 (15.7%) for A. platys. The observation of two pathogens, combined with worldwide distribution of the tick R. sanguineus, demonstrates the high risk of infection with these pathogens in dogs in the city of Cuiaba.

Doenças transmitidas por artrópodes, como o Rhipicephalus sanguineus, são causadas por um espectro de patógenos. Dentre estas, estão a erliquiose monocítica canina e trombocitopenia cíclica com distribuição cosmopolita. Com o objetivo de verificar a presença de DNA de Anaplasma platys e Ehrlichia canis em carrapatos R. sanguineus coletados no período de 2008 a 2009 de 380 cães infestados. Os carrapatos, após a maceração, foram submetidos a extração de DNA e, em seguida, foi realizada a Nested PCR para a amplificação da espécie A. platys e E. canis. Destes, 81 (29.7%) amplificaram o DNA dos agentes ehrlichiais, onde 38 (17.9%) amplificaram para E. canis e 32 (15.7%) para A. platys. A observação dos dois patógenos, combinado com distribuição mundial do carrapato R. sanguineus, demonstra o elevado risco de infecção por esses patógenos de cães na cidade de Cuiabá.

Ehrlichia canis and Anaplasma platys in ticks of dogs in Cuiaba, Mato Grosso / Ehrlichia canis e Anaplasma platys em carrapatos de cães de Cuiabá, Mato Grosso

Diseases transmitted by arthropods such as Rhipicephalus sanguineus, are caused by a spectrum of pathogens. Among these are the canine monocytic ehrlichiosis and cyclical thrombocytopenia with a cosmopolitan distribution. Aiming to verify the presence of DNA of Anaplasma platys and Ehrlichia canis in ticks R. sanguineus collected in the period 2008 to 2009 of 380 infected dogs. Ticks, after maceration, were subjected to DNA extraction and then nested PCR was performed for amplification of A. platys and E. canis. Of these, 81 (29.7%) amplified DNA from ehrlichiais agents, where 38 (17.9%) amplified in E. canis and 32 (15.7%) for A. platys. The observation of two pathogens, combined with worldwide distribution of the tick R. sanguineus, demonstrates the high risk of infection with these pathogens in dogs in the city of Cuiaba.

Doenças transmitidas por artrópodes, como o Rhipicephalus sanguineus, são causadas por um espectro de patógenos. Dentre estas, estão a erliquiose monocítica canina e trombocitopenia cíclica com distribuição cosmopolita. Com o objetivo de verificar a presença de DNA de Anaplasma platys e Ehrlichia canis em carrapatos R. sanguineus coletados no período de 2008 a 2009 de 380 cães infestados. Os carrapatos, após a maceração, foram submetidos a extração de DNA e, em seguida, foi realizada a Nested PCR para a amplificação da espécie A. platys e E. canis. Destes, 81 (29.7%) amplificaram o DNA dos agentes ehrlichiais, onde 38 (17.9%) amplificaram para E. canis e 32 (15.7%) para A. platys. A observação dos dois patógenos, combinado com distribuição mundial do carrapato R. sanguineus, demonstra o elevado risco de infecção por esses patógenos de cães na cidade de Cuiabá.

Biochemical changes in pancytopenic and non pancytopenic dogs with ehrlichiosis / Alterações bioquímicas em cães citopênicos e não citopênicos com ehrlichiose

In order to study the biochemical changes in naturally infected dogs with Ehrlichia canis, blood samples from 57 animals were collected. Thirty-five healthy dogs were used as control group. Dosage of serum protein, albumin, globulin, albumin:globulin ratio (A:G), urea, creatinine, alanine aminotransferase (ALT) e alkaline phosphatase (AP) were carried out. The comparison of mean in infected and control group as well as the distribution of frequencies were investigated in order to associate the disease to the findings. Hypoproteinemia, hypoalbuminemia, decreased A:G ratio, hyperglobulinemia, and uremia were associated to ehrlichiosis (p 0.05). Regarding pancytopenia, it was observed that ALT and creatinine were, respectively, the marker of ehrlichiosis in non pancytopenic (NP) and pancytopenic (P) dogs. There were no significantly differences in protein profile in NP and P dogs that support the presence of a marker for the disease.

Com o objetivo de estudar os parâmetros bioquímicos associados às funções renal e hepática em cães naturalmente infectados por Ehrlichia canis e associá-los à ehrlichiose, foram colhidas 57 amostras de sangue, com realização de dosagem de proteína plasmática total, albumina, globulina, relação albumina/ globulina (A/G), uréia, creatinina, alanino aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA). Outros 35 cães em higidez foram utilizados como controle. Foram comparadas as médias dos animais infectados e controle, bem como a distribuição de freqüências, para associação dos resultados com a doença. Hipoproteinemia, hipoalbuminemia, redução da A/G, hiperglobulinemia e aumento de uréia estiveram associados à doença (p 0,05). Foram comparados também os achados entre animais não pancitopênicos (NPan) e em pancitopenia (Pan), verificando-se que no primeiro grupo, houve aumento de ALT, e nos animais pancitopênicos, a creatinina foi o principal indicador de ehrlichiose. No caso do perfil protéico, não houve diferença que pudesse servir como marcador da fase da enfermidade nos animais infectados.

Biochemical changes in pancytopenic and non pancytopenic dogs with ehrlichiosis / Alterações bioquímicas em cães citopênicos e não citopênicos com ehrlichiose

In order to study the biochemical changes in naturally infected dogs with Ehrlichia canis, blood samples from 57 animals were collected. Thirty-five healthy dogs were used as control group. Dosage of serum protein, albumin, globulin, albumin:globulin ratio (A:G), urea, creatinine, alanine aminotransferase (ALT) e alkaline phosphatase (AP) were carried out. The comparison of mean in infected and control group as well as the distribution of frequencies were investigated in order to associate the disease to the findings. Hypoproteinemia, hypoalbuminemia, decreased A:G ratio, hyperglobulinemia, and uremia were associated to ehrlichiosis (p 0.05). Regarding pancytopenia, it was observed that ALT and creatinine were, respectively, the marker of ehrlichiosis in non pancytopenic (NP) and pancytopenic (P) dogs. There were no significantly differences in protein profile in NP and P dogs that support the presence of a marker for the disease.

Com o objetivo de estudar os parâmetros bioquímicos associados às funções renal e hepática em cães naturalmente infectados por Ehrlichia canis e associá-los à ehrlichiose, foram colhidas 57 amostras de sangue, com realização de dosagem de proteína plasmática total, albumina, globulina, relação albumina/ globulina (A/G), uréia, creatinina, alanino aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA). Outros 35 cães em higidez foram utilizados como controle. Foram comparadas as médias dos animais infectados e controle, bem como a distribuição de freqüências, para associação dos resultados com a doença. Hipoproteinemia, hipoalbuminemia, redução da A/G, hiperglobulinemia e aumento de uréia estiveram associados à doença (p 0,05). Foram comparados também os achados entre animais não pancitopênicos (NPan) e em pancitopenia (Pan), verificando-se que no primeiro grupo, houve aumento de ALT, e nos animais pancitopênicos, a creatinina foi o principal indicador de ehrlichiose. No caso do perfil protéico, não houve diferença que pudesse servir como marcador da fase da enfermidade nos animais infectados.

Fase aguda da ehrlichiose monocítica canina: um estudo retrospectivo de 10 anos / Acute phase of canine monocitic ehrlichiosis: a ten years study

Um levantamento de mais de dez anos (janeiro de 1990 a maio de 2000) dos casos de Ehrlichiose Monocítica Canina (CME) diagnosticados pela presença de mórula de E. canis em células monocelulares no esfregaço de sangue periférico, no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da UNESP, campus de Botucatu, demonstrou maior incidência da doença em fase aguda nos meses mais quentes do ano. As principais alterações hematológicas encontradas foram anemia não-regenerativa de grau moderado, hipoproteinemia, trombocitopenia, leucopenia por neutropenia e linfopenia absolutas(AU)

A ten-years study (from january 1990 to may 2000) of the canine Monocitic Ehrlichiosis (CME) diagnosed by the presence of the Erlichia canis morulae in mononuclear cells at the Clinical Laboratory of the Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, in Botucatu, Brazil, showed an increased frequency of the disease in the acute phase, during the warm seasins of the year. Some of the more important hematological findings were: an arregenerative moderate anemia, hipoproteinemia, thrombocytopenia and leucopenia with absolute neutropenia and lymphopenia(AU)

Fase aguda da ehrlichiose monocítica canina: um estudo retrospectivo de 10 anos / Acute phase of canine monocitic ehrlichiosis: a ten years study

Um levantamento de mais de dez anos (janeiro de 1990 a maio de 2000) dos casos de Ehrlichiose Monocítica Canina (CME) diagnosticados pela presença de mórula de E. canis em células monocelulares no esfregaço de sangue periférico, no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da UNESP, campus de Botucatu, demonstrou maior incidência da doença em fase aguda nos meses mais quentes do ano. As principais alterações hematológicas encontradas foram anemia não-regenerativa de grau moderado, hipoproteinemia, trombocitopenia, leucopenia por neutropenia e linfopenia absolutas

A ten-years study (from january 1990 to may 2000) of the canine Monocitic Ehrlichiosis (CME) diagnosed by the presence of the Erlichia canis morulae in mononuclear cells at the Clinical Laboratory of the Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, in Botucatu, Brazil, showed an increased frequency of the disease in the acute phase, during the warm seasins of the year. Some of the more important hematological findings were: an arregenerative moderate anemia, hipoproteinemia, thrombocytopenia and leucopenia with absolute neutropenia and lymphopenia