Técnicas de descontaminação de linhagens de camundongos para obtenção de colônias livres de patógenos específicos

The elimination of pathogenic and infectious agents is desirable from both an animal welfare and scientific perspective. Furthermore, subclinical infections can increase the variability of experiments, which can lead to an increase in the number of animals used. Decontamination of mice can be accomplished primarily by embryo transfer, hysterectomy, medicated diet, or by cross-fostering neonates to foster mothers. Therefore, this work aims to describe techniques used to decontaminate colonies and the criteria to evaluated their choice, in addition to highlighting the importance of maintaining certified and controlled sanitary animals. This work is a literature review based on the search, through the adoption of methodological criteria, of scientific articles available in the databases: PubMed, Scopos and ScienceDirect. For this, the descriptors selected through the tool were used: “Descriptors in Health Science - DeCS”, comprising the following terms: rederivation, colony decontamination, embryo transfer, assisted reproduction and cleaning colonies crossed with each other using the Boolean operator “AND”. After bibliographical research, the different mouse colony decontamination techniques were subdivided into modules with information, guidelines and methodologies, to be used in production, maintainance and experimental facilities for creation, maintenance and scientific research. Therefore, it is concluded that the success of a decontamination program depends on the choice of technique according to the infectious agents found and their viability, as well as the implementation of continuous and effective monitoring of agents in colonies and the environment.

A eliminação de agentes patogênicos é desejável tanto do ponto de vista do bem estar animal quanto da perspectiva científica. Além disso, as infecções subclínicas podem aumentar a variabilidade dos experimentos o que pode acarretar no aumento do número de animais utilizados. A descontaminação de camundongos pode ser realizada principalmente por transferência de embriões, histerectomia, dieta medicamentosa ou por adoção cruzada de neonatos para mães adotivas. Dessa maneira, este trabalho tem o objetivo de descrever as técnicas utilizadas para descontaminação de colônias e os critérios a serem avaliados para sua escolha, além de ressaltar a importância da manutenção de animais sanitariamente certificados e controlados. Este trabalho trata-se de uma revisão de literatura baseada na busca, mediante a adoção de critérios metodológicos, de artigos científicos disponíveis nas bases de dados: PubMed, Scopos e ScienceDirect. Para isso, foram utilizados os descritores selecionados por meio da ferramenta: “Descritores em Ciência da Saúde - DeCS”, compreendendo os seguintes termos: rederivation, colony decontamination, embryo transfer, assisted reproductione e cleaning colonies cruzados entre si por meio do operador booleano “AND”. Após pesquisa bibliográfica, foram subdivididos em módulos quanto as diferentes técnicas de descontaminação de colônia de camundongos com informações, orientações, experimentações e metodologias, para serem usados em biotérios de criação, manutenção e pesquisas científicas. Dessa forma, conclui-se que o sucesso de um programa de descontaminação depende da escolha da técnica de acordo com os agentes infecciosos encontrados e a sua viabilidade, assim como a implementação de um monitoramento contínuo e eficaz dos agentes nas colônias e ambiente.

Post-modern bioethical stresses destination of surplus embryos: Brazilian analysis and brief comparisons

The objective of the present study is to point out tensions of the theoretical/practical universe that Bioethics is facing in Brazil, in the search for a praxis for the destination of surplus embryos. We consider that Bioethics analyzes the implications of such practices in society and in relationships between individuals. Brief data from other countries were presented to compare the Brazilian situation progressively from the conceptual point of view and the adoption of measures. The research is a scoping review on the main points that have been hindering the progress of discussions on the subject and consequently the respective solution. The legal status of the embryo was described from several perspectives and theories, with the resulting proposals for the destination of surplus embryos in their positive and negative aspects. The tensions of Bioethics were presented in the context of post-modernity and the consequent social and moral plurality, together with the difficulties of identifying a secular bioethical morality. In the end, we conclude the possibility of proclaiming a consensus on the destination of surplus embryos based on secular morality, supported by the figure of the "moral strangers".

El objetivo del presente estudio es señalar las tensiones del universo teórico/práctico que la bioética enfrenta en Brasil, en la búsqueda de una praxis para el destino de los embriones sobrantes. Consideramos que la bioética analiza las implicaciones de tales prácticas en la sociedad y en las relaciones entre los individuos. Se presentaron breves datos de otros países para comparar progresivamente la situación brasileña desde el punto de vista conceptual y de la adopción de medidas. La investigación es una revisión del alcance de los principales puntos que han obstaculizado el avance de las discusiones sobre el tema y, en consecuencia, la respectiva solución. Se describió el estatuto jurídico del embrión desde diversas perspectivas y teorías, con las consiguientes propuestas para el destino de los embriones sobrantes en sus aspectos positivos y negativos. Se presentaron las tensiones de la bioética en el contexto de la posmodernidad y la consecuente pluralidad social y moral, junto con las dificultades de identificar una moral bioética laica. Al final, se concluye la posibilidad de proclamar un consenso sobre el destino de los embriones sobrantes basado en una moral laica, apoyada en la figura de los "extraños morales".

O objetivo do presente estudo é destacar as tensões do universo teórico/prático que a Bioética está enfrentando no Brasil, na busca de uma praxis para a destinação de embriões excedentes. Nós consideramos que a Bioética analisa as implicações de tais práticas na sociedade e nas relações entre indivíduos. Dados resumidos de outros países são apresentados para comparar a situação brasileira progressivamente de um ponto de vista conceitual para a adoção de medidas. A pesquisa é uma revisão de escopo sobre os pontos principais que vem atrapalhando o andamento das discussões sobre o assunto e consequentemente a solução respectiva. O status legal do embrião foi descrito a partir de diversas perspectivas e teorias, com as propostas resultantes para a destinação dos embriões excedentes em seus aspectos positivos e negativos. As tensões da Bioética foram apresentadas no contexto da pós-modernidade e a consequente pluralidade social e moral, juntamente com as dificuldades de identificar uma moralidade bioética secular. Ao final, nós concluímos pela possibilidade de proclamar um consenso sobre a destinação de embriões excedentes baseado na moralidade secular, apoiado pela figura dos "estranhos morais".

Taxa de recuperação embrionária em éguas Mangalarga Marchador inseminadas com sêmen refrigerado / Embryonic recovery rate in Mangalarga Marchador mares inseminated with refrigerated semen

O acompanhamento reprodutivo da espécie equina tem sido cada vez mais aplicado na aplicade de diversos países, resultando em melhores índices reprodutivos para a espécie e em animais de linhagens selecionadas. Nos programas de transferência de embrião, a taxa de recuperação embrionária consiste em um parâmetro essencial a fim de verificar o sucesso da técnica. Por conseguinte, este trabalho propõe-se a avaliar as taxas de recuperação embrionária de éguas doadoras submetidas à inseminação artificial com sêmen refrigerado de maneira a complementar os dados relacionados ao assunto. Conforme os dados coletados durante a estação de monta de agosto de 2018 a fevereiro de 2019, obteve-se 129 lavados uterinos provenientes de 20 éguas e 83 embriões recuperados. Desse modo, a taxa de recuperação embrionária obtida foi de 64,34%. Diante dos dados apresentados neste estudo, conclui-se que a aplicabilidade da técnica de recuperação embrionária visando o uso do sêmen refrigerado na inseminação artificial de éguas se mostra promissora, pois permite o transporte de material genético de alto valor entre propriedades sem interferir drasticamente nos índices dos programas de reprodução.

The reproductive monitoring of the equine species has been increasingly applied in several countries, resulting in better reproductive rates for the species and in animals from selected strains. In embryo transfer programs, the embryo recovery rate is an essential parameter to verify the technique success. Therefore, the present work proposes to evaluate the embryo recovery rates of donor mares submitted to artificial insemination with refrigerated semen to complement the data related to the subject. According to the data collected during the breeding season for the period from August 2018 to February 2019, 129 uterine washes were obtained from 20 mares and 83 recovered embryos. Thus, the embryonic recovery rate obtained was 64.34%. Given the data presented in this study, it is concluded that the applicability of the embryonic recovery technique aiming at the use of refrigerated semen in artificial insemination of mares is promising, as it allows the transport of high-value genetic material between properties without interfering dramatically in breeding program indexes.

The waveless model: clinical and research applications of follicular wave suppression in cattle / Modelo waveless: aplicações clínicas e na pesquisa da supressão das ondas foliculares em bovinos

The follicular growth waves are directly linked to the fluctuations in plasma gonadotrophins, which are controlled by the hypothalamic GnRH release pattern. Therefore, if the actions of the GnRH are inhibited or blocked, the final stages of the antral follicle growth are suppressed, resulting in an induced anestrus (a.k.a. waveless model). In the human medicine, GnRH agonists or antagonists are broadly used in the control of ovarian disfunctions, as well as in the preparation of women for assisted reproductive cycles. In cattle, a similar effect can be obtained by active immunization against GnRH. This was shown to be a viable strategy, for example, for the control of chronic cases of cystic ovarian disease in oocyte donors. However, on shall take into account the substantial individual variation on the immune response and, consequently, the lack of control of the duration of the anestrus induced. The waveless model is also very useful as a research model, once it controls the potential interference of the endogenous FSH and LH, improving the sensitivity of essays with exogenous hormones and consequently reducing the required number of replicas within studies.(AU)

O padrão de crescimento folicular em ondas está diretamente associado às flutuações nas concentrações plasmáticas de gonadotrofinas, controladas por sua vez pelo padrão de liberação de GnRH hipotalâmico. Desta forma, a inibição ou bloqueio da ação do GnRH suprime as etapas finais do crescimento folicular, resultando em anestro induzido (também chamado modelo waveless). Na medicina humana, agonistas ou antagonistas de GnRH são utilizados tanto no controle de disfunções ovarianas quanto na preparação de pacientes para procedimentos de reprodução assistida. Em bovinos, este efeito pode ser obtido pela imunização ativa contra GnRH, e mostrou-se estratégia viável, por exemplo, no controle de casos crônicos de doença ovariana cística em doadoras de oócitos. Contudo, é importante considerar a grande variação individual na resposta à imunização e consequente impossibilidade de controlar a duração do anestro induzido. O modelo waveless também é de grande utilidade na pesquisa, uma vez que elimina a potencial interferência do FSH e LH endógenos, aumentando a sensibilidade nos ensaios com hormônios exógenos e consequentemente reduzindo o número de réplicas necessárias nos estudos.(AU)

Pontos críticos na produção de embriões equinos com enfoque na doadora / Critical points in the production of equine embryos with a donor approach

Inúmeras são as vantagens da utilização da técnica de transferência de embriões (TE) em equinos. No entanto, alguns fatores podem afetar a taxa de recuperação embrionária: dia da colheita do embrião; condição uterina e idade da doadora; manejos reprodutivo, sanitário e nutricional; garanhão/qualidade do sêmen; habilidade do técnico; condições climáticas, número de ovulações e adaptação da doadora. O objetivo deste artigo é revisar os fatores que podem exercer influência sobre a taxa de recuperação embrionária tendo impacto direto nos índices reprodutivos de um programa de TE.(AU)

There are countless advantages of using the embryo transfer (ET) technique in horses. However, some factors may affect the embryonic recovery rate: day of embryo collection; uterine condition and donor age; reproductive, health and nutritional management; stallion/semen quality; skill of the technician; climatic conditions, number of ovulations and adaptation of the donor. The objective of this article is to review those factors that can influence the embryonic recovery rate, having a direct impact on the reproductive rates of an ET program.(AU)

Processos que afetam a taxa de gestação pós-inovulação do embrião equino / Processes that affect pregnancy rate after embryo transfer

A transferência de embriões equinos é uma biotecnologia que traz inúmeros benefícios reprodutivos para um haras. Entretanto, os índices reprodutivos obtidos numa estação de monta podem ser afetados por diversos fatores que interferem tanto na recuperação embrionária que normalmente são relacionados à doadora de embriões, quanto na taxa de gestação na receptora de embriões. O objetivo do presente artigo foi revisar os fatores relacionados à receptora de embriões em programas de transferência de embriões equinos.(AU)

Equine embryo transfer is a biotechnology that brings reproductive benefits to a stud farm. However, the reproductive rates obtained in a breeding season can be affected by several factors that interfere both in the embryonic recovery that are normally related to the embryo donor, and in the pregnancy rate in the embryo recipient. The aim of this article was to review the factors related to the recipient of embryos in equine embryo transfer programs.(AU)

Estudos para o incremento da produção de embriões in vivo e in vitro em vacas de corte taurinas e sintéticas / Studies to improve in vivo and in vitro embryo production in beef cows from taurine and synthetic breeds

O Brasil destaca-se por ser um dos líderes mundiais na produção in vitro de embriões, o que é decorrente do rebanho nacional ser predominantemente composto por raças zebuínas, que possuem maior número de folículos antrais aspiráveis. Por outro lado, vacas taurinas apresentam menor população folicular antral, o que limita o número de ovócitos obtidos por seção de aspiração folicular (ovum pick-up; OPU). Portanto, na região Sul do Brasil há demanda para produção tanto in vivo como in vitro de embriões de doadoras de raças taurinas e sintéticas. Este texto discute estudos recentes que buscam estratégias para aperfeiçoar as etapas envolvidas na produção de embriões bovinos, bem como para aumentar o aproveitamento de receptoras utilizadas nos programas de transferência de embriões (TE), com foco em vacas taurinas e sintéticas.(AU)

Brazil stands among the leaders on in vitro embryo production, as the Brazilian herd is predominantly composed by Zebu breeds, which have a greater number of antral follicles available to ovum pick-up (OPU). On the other hand, taurine cows have a lower antral follicle population, which limits the number of oocytes obtained by each OPU section. Therefore, in the Brazilian Southern region there is a demand for both in vivo and in vitro production of embryos from donors of taurine and synthetic breeds. This text discusses recent studies that seek strategies to improve the steps involved in the production of bovine embryos, as well as to increase the use of recipients in embryo transfer (ET) programs, focusing on taurine and synthetic cows.(AU)

Bem-estar animal nos procedimentos de produção in vivo de embriões na espécie ovina / Animal welfare in the in vivo production of sheep embryos

A presente revisão tem por objetivo abordar aspectos relacionados ao bem-estar animal na produção in vivo de embriões ovinos. A cobrança da sociedade tem impulsionado o uso de práticas que atendam os preceitos de bem-estar na produção animal. Nesse contexto, destaca-se a necessidade de aprimoramento de procedimentos menos invasivos, como a coleta não cirúrgica de embriões. Avanços recentes nos protocolos de dilatação cervical melhoraram os resultados e tornaram essa técnica uma alternativa viável na espécie ovina. No entanto, a avaliação do estado de bem-estar das doadoras submetidas à coleta transcervical mostra a necessidade de melhor controle da dor durante a sua realização. Assim, acreditamos que a associação dos esforços de diferentes pesquisas pode proporcionar a resolução desses entraves e possibilitar maior aplicabilidade comercial da biotécnica.(AU)

This review aims to address aspects related to animal welfare in the in vivo production of ovine embryos. The use of practices that meet the precepts of welfare in animal production has been driven by demands from society. In this context, there is a need to improve less invasive procedures, such as nonsurgical embryo collection. Recent advances in cervical dilation protocols have improved results and made this technique a viable alternative in sheep. However, the assessment of the state of welfare of donors undergoing transcervical collection shows the need for better pain control during its performance. Thus, the association of different research efforts can provide the resolution of these obstacles and enable greater commercial applicability of the biotechnique.(AU)

Análisis bioético (subjetivismo moral) desde la percepción de los clínicos sobre la situación de los embriones sometidos a fecundación in vitro. Quito-Ecuador / Bioethical analysis (moral subjectivism) from the perception of clinicians on the situation of embryos subjected to in vitro fertilization. Quito-Ecuador / Análise bioética (subjetivismo moral) a partir da percepção dos médicos sobre a situação dos embriões submetidos à fertilização in vitro. Quito-Equador

Resumen: Objetivo. Analizar las percepciones y prácticas de los clínicos en relación con el manejo del embrión sometido a técnicas de fecundación in vitro. Metodología. Cualitativa (subjetivista y fenomenológico). Se realizaron 15 las entrevistas semiestructuradas aplicando un muestreo por saturación dirigidas a personal clínico que haya participado en procedimientos de fecundación in vitro. Los datos se analizaron con el programa Atlas Ti 8.0®. Resultado. Los clínicos consideran al embrión como un ser humano o futuro ser humano y, además, merecedor de respeto y consideración, proponiendo incluso mejoras en los procesos de manipulación y almacenaje. Conclusión. Los embriones no son considerados como entes susceptibles de recibir daño, desde argumentos no solo técnicos sino éticos. Desde la corriente principialista, se describe la necesidad de promover actitudes de responsabilidad y prudencia para evitar el dogmatismo (objetivismo moral) proponiendo una postura deliberativa.

Abstract: The objective of this paper is to analyze the perceptions and practices of clinicians in relation to the management of embryos subjected to in vitro fertilization techniques. Methodology is Qualitative (subjectivist and phenomenological). A total of 15 semi-structured interviews were conducted using saturation sampling for clinical personnel who have participated in vitro fertilization procedures. The data is analyzed with the Atlas Ti 8.0® program. Results: Clinicians consider the embryo as a Human being or future human being, in addition, deserving of respect and consideration even proposing improvements in the processes of handling and storage. Conclusion. Embryos are not considered as entities susceptible of damage from not only technical but ethical arguments. From the principialist current, the need to promote attitudes of responsibility and prudence to avoid dogmatism (moral objectivism) is described, proposing a deliberative position.

Resumo: Objetivo. Analisar as percepções e práticas dos médicos em relação ao manejo do embrião submetido a técnicas de fertilização in vitro. Metodologia. Qualitativo (subjetivo e fenomenológico). Foram realizadas 15 entrevistas semiestruturadas por amostragem de saturação para pessoal clínico que participou de procedimentos de fertilização in vitro. Os dados são analisados com o programa Atlas Ti 8.0®. Resultado. Os médicos consideram o embrião como um ser humano ou futuro, além de merecer respeito e consideração, propondo até melhorias nos processos de manuseio e armazenamento. Conclusão. Os embriões não são considerados como entidades suscetíveis a receber danos não apenas de argumentos técnicos, mas éticos. A partir da corrente principialista, descreve-se a necessidade de promover atitudes de responsabilidade e prudência para evitar o dogmatismo (objetivismo moral), propondo uma posição deliberativa.

The Addition of Dydrogesterone after Frozen Embryo Transfer in Hormonal Substituted Cycles with Low Progesterone Levels / Uso adicional de didrogesterona após transferência de blastocisto em ciclos substituídos com valores baixos de progesterona

Abstract Objective To determine whether a rescue strategy using dydrogesterone (DYD) could improve the outcomes of frozen embryo transfer cycles (FET) with low progesterone (P4) levels on the day of a blastocyst transfer. Methods Retrospective cohort study including FET cycles performed between July 2019 and October 2020 following an artificial endometrial preparation cycle using estradiol valerate and micronized vaginal P4 (400 mg twice daily). Whenever the serum P4 value was below 10 ng/mL on the morning of the planned transfer, DYD 10 mg three times a day was added as supplementation. The primary endpoint was ongoing pregnancy beyond 10 weeks. The sample was subdivided into two groups according to serum P4 on the day of FET: low (< 10 ng/mL, with DYD supplementation) or normal (above 10 ng/mL). We performed linear or logistic generalized estimating equations (GEE), as appropriate. Results We analyzed 304 FET cycles from 241 couples, 11.8% (n = 36) of which had serum P4 below 10 ng/mL on the FET day. Baseline clinical data of patients was comparable between the study groups. Overall, 191 cycles (62.8%) had a biochemical pregnancy, of which 131 (44,1%) were ongoing pregnancies, with a 29,8% miscarriage rate. We found no statistically significant differences in the hCG positive (63 vs 64%) or ongoing pregnancy rates (50 vs 43,3%) between those FETs with low or normal serum P4 values, even after multivariable logistic regression modelling. Conclusion Our results indicate that DYD 10 mg three times a day administered in women who perform FET with P4 serum levels < 10 ng/mL, allows this group to have pregnancy rates beyond 12 weeks at least as good as those with serum levels above 10 ng/mL.

Resumo Objetivo Determinar se uma estratégia de resgate usando didrogesterona (DYD) pode melhorar os resultados dos ciclos de transferência de embriões congelados (TEC) com baixos níveis de progesterona (P4) no dia de uma transferência de blastocisto. Métodos Estudo de coorte retrospectivo que incluiu ciclos TEC realizados entre julho de 2019 e outubro de 2020 após um ciclo de preparação endometrial artificial usando valerato de estradiol e P4 vaginal micronizado (400 mg duas vezes ao dia). Sempre que o valor de P4 sérico estava abaixo de 10 ng/mL na manhã da transferência planejada, adicionou-se 10 mg de DYD tri-diário como suplementação. O desfecho primário foi gravidez evolutiva após 10 semanas. A amostra foi subdividida em dois grupos de acordo com o P4 sérico no dia da TEC: baixo (< 10 ng/mL, com suplementação de DYD) ou normal (acima de 10 ng/mL). Realizamos equações de estimativa generalizada linear ou logística (GEE), conforme apropriado. Resultados Analisaram-se 304 ciclos de FET de 241 casais, dos quais 11,8% (n = 36) tinham valores de P4 sérico abaixo de 10 ng/mL no dia da TEC. Os dados clínicos e demográficos dos pacientes eram comparáveis entre os grupos. Globalmente, 191 ciclos (62,8%) tiveram uma gravidez bioquímica, dos quais 131 (44,1%) foram gestações em curso, com uma taxa de aborto espontâneo de 29,8%. Não encontramos diferenças estatisticamente significativas na taxa de gravidez bioquímica (63 vs. 64%) ou nas taxas de gravidez evolutiva (50 vs. 43,3%) entre TEC com valores séricos de P4 baixos ou normais, mesmo após modelação com regressão logística multivariável. Conclusão Nossos resultados indicam que a suplementação com DYD 10 mg três vezes ao dia em mulheres com níveis séricos de P4 abaixo de 10 ng/mL em ciclos de TEC substituídos parecem conseguir resultados pelo menos tão bons como nos ciclos com valores superiores para taxas de gravidez em curso além de 12 semanas.

One Plus One is Better than Two: An Approach Towards a Single Blastocyst Transfer Policy for All IVF Patients / Um mais um é melhor que dois: Uma abordagem pela prática da transferência de embrião único para todos os pacientes de FIV

Abstract Objective It is known that the single embryo transfer (SET) is the best choice to reduce multiples and associated risks. The practice of cryopreserving all embryos for posterior transfer has been increasingly performed for in vitro fertilization (IVF) patients at the risk of ovarian hyperstimulation syndrome or preimplantation genetic testing for aneuploidy. However, its widespread practice is still controverse. The aim of this study was to evaluate how effective is the transfer of two sequential SET procedures compared with a double embryo transfer (DET) in freeze-only cycles. Methods This retrospective study reviewed 5,156 IVF cycles performed between 2011 and 2019, and 506 cycles using own oocytes and freeze-only policy with subsequent elective frozen-thawed embryo transfers (eFET) were selected for this study. Cycles having elective SET (eSET, n = 209) comprised our study group and as control group we included cycles performed with elective DET (eDET, n = 291). In the eSET group, 57 couples who had failed in the 1st eSET had a 2nd eFET, and the estimated cumulative ongoing pregnancy rate was calculated and compared with eDET. Results After the 1st eFET, the ongoing pregnancy rates were similar between groups (eSET: 35.4% versus eDET: 38.5%; p =0.497), but the estimated cumulative ongoing pregnancy rate after a 2nd eFET in the eSET group (eSET + SET) was significantly higher (48.8%) than in the eDET group (p < 0.001). Additionally, the eSET +SET group had a 2.7% rate of multiple gestations, which is significantly lower than the eDET group, with a 30.4% rate (p < 0.001). Conclusion Our study showed the association of freeze-only strategy with until up to two consecutive frozen-thawed eSETs resulted in higher success rates than a frozenthawed DET, while drastically reducing the rate of multiple pregnancies.

Resumo Objetivo Sabe-se que a transferência de embrião único (SET) é a melhor escolha para reduzir as gestações múltiplas e riscos associados. A prática da criopreservação de todos os embriões para transferência posterior tem sido cada vez mais utilizada para fertilização in vitro (FIV), em especial quando há risco de síndrome de hiperestimulação ovariana ou realização de teste genético pré-implantacional. Entretanto, sua utilização disseminada ainda é controversa. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia de duas SET sequenciais em comparação com uma transferência de embrião dupla (DET) em ciclos de FIV onde todos os embriões foram criopreservados. Métodos Neste estudo retrospectivo foram revisados 5.156 ciclos de FIV realizados entre 2011 e 2019, e 506 ciclos usando oócitos próprios e criopreservação de todos os embriões com transferências eletivas subsequentes de embriões descongelados, foram selecionados para este estudo. Ciclos com transferência eletiva de embrião único (eSET, n = 209) compuseram nosso grupo de estudo e como grupo de controle incluímos os ciclos com transferência eletiva de dois embriões (eDET, n = 291). No grupo eSET, 57 casais que falharam na 1ª tentativa de eSET tiveram uma 2ª eFET e a taxa de gravidez em curso cumulativa foi estimada para o grupo eSET e comparada com o grupo eDET. Resultados Após a 1ª eFET, as taxas de gravidez em curso foram semelhantes entre os grupos (eSET: 35,4% versus eDET: 38,5%; p = 0,497), mas a taxa de gravidez em curso cumulativa estimada após a 2ª eFET no grupo eSET (eSET + SET) foi significativamente maior (48,8%) do que no grupo eDET (p <0,001). Além disso, as taxas de gestação múltipla foram expressivamente inferiores no grupo eSET + SET (2,7%) quando comparado ao grupo eDET (30,4%; p < 0,001). Conclusão Nosso estudo mostrou que a associação das estratégias de congelamento de todos os embriões com até duas eSETs sequenciais resultou em maiores taxas de sucesso do que uma DET com embriões descongelados, além de reduzir drasticamente a ocorrência de gestações múltiplas.

Asynchrony between in vivo and in vitro rabbit embryos

Background: Comparative features of embryos developed under in vitro and in vivo conditions are particularly important in designing embryo transfer procedures that fulfil embryo-recipient synchronization requirements. Objective: To determine the degree of asynchrony in rabbit embryo development between cultured and in vivo embryos. Methods: A total of 55 non- lactating multiparous female rabbits were used. Embryos were classified as 16-cells or early morulae at 48 hours post-coitum (hpc). Embryos were cultured during 30 or 32 h and embryo development was compared with in vivo embryos of 72 hpc. In vitro and in vivo embryos at 72 hpc were classified as early or compacted morulae. Bayesian statistics was used. Difference between in vivo and in vitro embryos and the actual probability of the difference between the in vivo and in vitro embryo higher than zero (P) was estimated. Results: The percentage of compacted morulae was higher in in vivo embryos than in in vitro embryos with +6 h of asynchrony (73.5 and 32.8%, P=1.00). But the percentage of compacted morulae was similar with +8 h asynchrony. Conclusions: In vitro embryos delay their development by + 8 hours compared to in vivo embryos.

Antecedentes: El desarrollo comparativo de embriones producidos in vitro e in vivo es particularmente importante para el diseño de procedimientos de transferencia de embriones cuando se requiere sincronización entre el embrión y la hembra receptora. Objetivo: Determinar el grado de asincronía en el desarrollo embrionario entre embriones in vivo y cultivados. Métodos: Un total de 55 conejas multiparas no lactantes fueron utilizadas. Los embriones se clasificaron en 16 células o mórulas tempranas a las 48 horas después del coito (hpc). Los embriones se cultivaron durante 30 ó 32 horas y el desarrollo embrionario se comparó con embriones de 72 hpc obtenidos in vivo. Los embriones in vitro e in vivo a 72 hpc se clasificaron como mórulas tempranas o compactas. Se utilizó estadística bayesiana. Se estimó la diferencia entre embriones in vivo e in vitro y la probabilidad de que la diferencia sea superior a cero (P). Resultados: El porcentaje de mórulas compactas fue mayor en embriones in vivo que en embriones in vitro con +6 horas de asincronía (73,5 y 32,8%, P=1,00), pero el porcentaje de mórulas compactas fue similar con asincronía de +8 horas. Conclusión: Los embriones cultivados retrasan +8 horas su desarrollo en comparación con los embriones in vivo.

Antecedentes: A aquisição do desenvolvimento de embriões produzidos in vitro e in vivo é particularmente importante na concepção de procedimentos de transferência de embriões em que a sincronização entre o embrião e a fêmea receptora é necessária. Objetivo: Determinar o grau de assincronia no desenvolvimento embrionário entre embriões cultivados e in vivo. Métodos: Um total de 55 coelhos multíparos não lactantes foram usados. Os embriões foram classificados em 16 células ou mórulas iniciais 48 horas de gestação (hpc). Os embriões foram cultivados por 30 ou 32 horas e o desenvolvimento embrionário foi comparado com embriões de 72 hpc obtidos in vivo. Embriões in vitro e in vivo a 72 hpc foram classificados como mórulas precoces ou compactadas. Estatísticas bayesianas foram usadas. A diferença entre embriões in vivo e in vitro e a probabilidade de que a diferença seja maior que zero (P) foi estimada. Resultados: A porcentagem de mórulas compactadas foi maior em embriões in vivo do que em embriões in vitro com +6 horas de assincronia (73,5 e 32,8%, P=1,00). Mas a porcentagem de mórulas compactadas foi semelhante com assincronia de +8 horas. Conclusão: Embriões cultivados atrasam seu desenvolvimento em +8 horas em comparação com embriões in vivo.

Well-of-the-well (WOW) versus polyester mesh (PM): a comparison of single-embryo culture systems in bovines

Background: Mexico is innovating in the livestock industry through in vitro generation of bovine embryos with technologies such as well-of-the-well (WOW) and polyester mesh (PM) single-embryo culture systems. These techniques allow to maintain embryos in separate areas of a shared culture medium. Objective: To compare the quantity and quality of bovine embryos produced in WOW and PM culture systems versus the conventional (CG) culture system. Methods: In total, 345 embryos fertilized in vitro were evaluated for blastocyst yield in the three culture systems. To count blastocyst cell numbers, 69 embryos in each system were differentially stained for trophectoderm (TE), inner cell mass (ICM), and apoptotic cells. A qPCR gene expression analysis was performed for embryos in all three systems. Results: The WOW, PM and CG systems developed similar amount of blastocysts (41, 35 and 36%, respectively; p>0.05). Blastocysts in all three systems showed adequate amounts of ICM and apoptotic cells. Blastocysts in the PM system showed a greater number of TE cells [63.7 versus 58.6% in the CG system (p0.05). The ATP5B expression was higher in WOW than in PM (p0.05). The TJP3 expression was higher in PM than in WOW and CG (p<0.05). Expression of ID2 and CLDN4 was higher in WOW than in PM and CG (p<0.05). The biplot graphic from Principal Component Analysis (PCA) revealed that CG was located near degenerated embryos, whereas PM was located near arrested embryos, larger ICM and TE, and TJP3 expression. The WOW was located toward blastocysts, morulae, and expression of CLDN4, ID2 and GNAS. Conclusion: Compared with CG, both the PM and WOW systems are good options for culturing single embryos in the bovine model. Moreover, the PCA results suggest that embryos developed in the WOW system have greater capacity for generating blastocysts with increased ability to form TE and ICM layers, which might improve implantation.

Antecedentes: México está innovando en la industria ganadera a través de la generación in vitro de embriones bovinos con tecnologías de cultivo individual como lo son Pozo dentro de Pozo (WOW) y Malla de Poliéster (PM). Estos mantienen los embriones en áreas separadas mientras comparten un mismo medio de cultivo celular. Objetivo: Comparar la cantidad y calidad de embriones bovinos producidos en los sistemas WOW y PM contra el sistema de cultivo convencional en grupo (CG). Métodos: En total se evaluaron 345 embriones fertilizados in vitro para determinar la producción de blastocistos generados en los tres sistemas. Para contar el número de células por blastocisto, 69 embriones en cada sistema se tiñeron diferencialmente para trofectodermo (TE), masa celular interna (ICM) y células apoptóticas. Se realizó un análisis de expresión génica por qPCR de los embriones obtenidos en los tres sistemas. Resultados: Los sistemas WOW, PM y CG desarrollaron similares cantidades de blastocistos (41, 35 y 36%, respectivamente; p>0,05). Los blastocistos en los tres sistemas mostraron cantidades adecuadas de ICM y células apoptóticas. Los blastocistos en el sistema PM mostraron un mayor número de células TE [63,7% versus 58,6% en el sistema CG (p0,05). La expresión de ATP5B fue mayor en WOW que en PM (p<0,05), pero similar a CG (p<0,05). La expresión de TJP3 fue mayor en PM que en WOW y CG (p<0,05). La expresión de ID2 y CLDN4 fue mayor en WOW que en PM y CG (p<0,05). El gráfico de biplot del análisis de componentes principales reveló que CG se encontró cerca de embriones degenerados, mientras que PM se encontró cerca de embriones en arresto, ICM, TE, y TJP3. El WOW se localizó hacia blastocistos, mórulas y la expresión de CLDN4, ID2 y GNAS. Conclusión: En el modelo bovino los sistemas PM y WOW son buenas opciones para cultivar embriones individuales, ya que se obtienen resultados muy similares a los obtenidos con el sistema CG. Además, los resultados de PCA sugieren que los embriones individuales desarrollados en el sistema WOW generan blastocistos con mayor capacidad de formar TE e ICM, lo que podría mejorar su éxito de implantación.

Antecedentes: O México está inovando na indústria pecuária por meio da geração in vitro de embriões bovinos com tecnologias de cultura de embriões individuais, bem como em poço (WOW) e malha de poliéster (PM). Estes mantêm os embriões em áreas separadas, enquanto compartilham o mesmo meio de cultura de células. Objetivo: Comparar a quantidade e a qualidade de embriões bovinos produzidos nos sistemas de cultura WOW e PM com o sistema convencional de cultura em grupo (CG). Métodos: No total, 345 embriões fertilizados in vitro foram avaliados para determinar a produção de blastocistos gerados nos três sistemas. O número de células por blatocisto foi contado, 69 embriões em cada sistema foram diferencialmente corados para trofectoderme (TE), massa celular interna (ICM) e células apoptóticas. Uma análise de expressão gênica qPCR foi realizada para os embriões obtidos nos três sistemas. Resultados: Os sistemas WOW, PM e CG desenvolveram quantidades semelhantes de blastocistos (41, 35 e 36%, respectivamente; p>0,05). Os blastocistos nos três sistemas mostraram quantidades adequadas de ICM e células apoptóticas. Os blastocistos no sistema PM mostraram um número maior de células TE [63,7 versus 58,6% no sistema CG (p0,05). A expressão de ATP5B foi maior no WOW do que no PM (p<0,05), mas semelhante ao GC (p<0,05). A expressão de TJP3 foi maior no PM do que no WOW e CG (p<0,05). A expressão de ID2 e CLDN4 foi maior no WOW do que no PM e CG (p<0,05). O gráfico biplot da análise de componentes principais revelou que CG foi encontrado próximo a embriões degenerados, enquanto PM foi encontrado próximo a embriões presos, ICM, TE e TJP3. WOW foi encontrado para ter blastocistos, mórulas e a expressão de CLDN4, ID2 e GNAS. Conclusão: Em comparação com o CG, os sistemas PM e WOW são boas opções para a cultura de embriões individuais no modelo bovino. Além disso, os resultados da PCA sugerem que embriões individuais desenvolvidos no sistema WOW têm maior capacidade de desenvolver blastocistos com maior capacidade de formar as camadas TE e ICM, o que poderia melhorar seu sucesso de implantação.

Importantes áreas de atuação do Zebrafish como modelo experimental: uma breve revisão

Zebrafish (danio rerio), is the animal model that has been revolutionizing the scientific community, with its 70% genetic compatibility with humans, the fish brings many expectations in relation to various areas of the scientific field in which research is involved. Zebrafish was widely used in toxicological tests previously, however, today it has been explored in several areas of science such as developmental biology, pharmacology, ecotoxicology, veterinary sciences, evolutionary biology, human diseases, vaccination, food safety, among others. It is a model that has stood out due to the advantages it presents in relation to other conventional models such as rodents for example, it is an animal that is easy to install and handle, mainly offering low installation cost, high fertility rate, promoting hundreds of embryos in a single mating, development is external, its translucent embryos favor the optical visualization of organogenesis, development occurs in hours, enabling research in a shorter period of time. It is possible to manipulate these organs through micro-injection techniques, and also in relation to the guidelines that regulate the use of animals in research, it is only considered an animal after free life, that is, from 120 (hpf). Since at 96(hpf) your main organs are already formed. Given this potential, the use of zebrafish in scientific research is growing, and its use has been revolutionary, presenting a significant and promising role within this population.

Zebrafish (Danio rerio), é o modelo animal que vem revolucionando a comunidade científica, com seus 70% de compatibilidade genética com os humanos, o peixe traz muitas expectativas em relação à várias áreas do campo científico no que envolve as pesquisas. A anteriormente o zebrafish foi muito utilizado em testes toxicológicos, porém, hoje ele tem sido explorado em diversas áreas da ciência como, biologia do desenvolvimento, farmacologia, ecotoxicologia, ciências veterinárias, biologia da evolução, doenças humanas, vacinação, segurança alimentar, entre outras. É um modelo que tem se destacado devido as vantagens que apresenta em relação a outros modelos convencionais. É um animal de fácil instalação e manejo, principalmente oferecendo baixo custo de instalação, alta taxa de fertilidade, promovendo centenas de embriões em um único acasalamento, o desenvolvimento é externo, seus embriões translúcidos favorecem a visualização óptica da organogênese, o desenvolvimento ocorre em horas, possibilitando uma pesquisa em menor espaço de tempo. É possível a manipulação desses órgãos através de técnicas de microinjeções, e ainda em relação as diretrizes que regulamentam o uso de animais em pesquisas, ele só é considerado um animal após vida livre, ou seja, a partir das 120(hpf). Sendo que em 96(hpf) seus órgãos principais já estão formados. Diante desse potencial cresce cada vez mais a utilização do zebrafish em pesquisas científicas, e o seu uso tem sido revolucionário, apresentando um papel significativo e promissor dentro dessa população.

Increased antral follicle population and in vitro embryo production in pregnant Holstein / Aumento da população folicular antral e produção in vitro de embriões em fêmeas gestantes da raça Holandesa

This study used Holstein cattle to evaluate the following: I) the productive and reproductive characteristics of cows with low, intermediate and high antral follicle counts (AFCs) that were subjected to artificialin semination (AI) and comparison of AFC variability at the time of AI (nonpregnant) and at two time points during pregnancy (30 and 60 days), and II) whether the pregnancy status and different pregnancy periods in heifers improves the efficiency at in vitro embryo production (IVEP). In study I, 75 high-milk production cows with body condition scores (BCSs) of 2.75 to 4.75 and ages of 23 to 99 months were selected. Onthe day of estrus, AFCs (follicles ≥ 3 mm), BCS, body weight, and diameters of the dominant follicle, ovaries and the corpus luteum were evaluated. Posteriorly, AFC was monitored in pregnant cows at 30 days (n =35) and at 60 days for comparison of AFC before pregnancy versus different periods. In study II, heifers (n = 9) with BCS of 2.5 to 3.5 and ages of 10 to 16 months were selected for ovum pick-up and an IVEP program before AI (nonpregnant) as well as at 0 to 30, 31 to 60, and > 60 days of pregnancy. Statistical analysis was performed using PROC GLM and binary logistic regression model (P ≤ 0.05). In study I, AFC was not associated with variations in productive and reproductive parameters. However, AFCs in the low group increased following pregnancy (AI: 14.82 ± 1.36, 30 days: 23.45 ± 2.31 and 60 days: 35.18 ± 3.17 follicles). AFCs increased from AI to 60 days in the intermediate group but did not vary among time points in the high group. AFCs varied among AFC groups in AI and at 30 days of pregnancy but not at 60 days. In study II, the mean of total oocytes (17.43 ± 4.52 vs. 41.67 ± 3.79) and viable oocytes (13.77 ± 3.63 vs. 30.56± 3.45) increased from AI (nonpregnant) to the first 30 days of pregnancy. [...]

Este estudo utilizou fêmeas da raça Holandesa para avaliar: i) variação da contagem de folículos antrais na gestação; ii) resultado da produção in vitro de embriões em doadoras antes e depois da gestação. No estudo I, 75 vacas de alta produção de leite com escores de condição corporal (ECC) de 2,75 a 4,75 e idades de 23 a 99 meses foram selecionadas. No dia do estro a CFA foi avaliada (folículos ≥ 3 mm) além do escore corporal, peso corporal e diâmetros do folículo dominante, ovários e corpo lúteo. Posteriormente, a CFA foi monitorada nas vacas gestantes (n = 35) aos 30 e 60 dias. No estudo II, novilhas (n = 9) com ECC de 2,5 a 3,5 e idades de 10 a 16 meses foram selecionadas para obtenção de oócitos antes e depois da gestação, no primeiro, segundo e acima dos dois meses de gestação. A análise estatística foi realizada usando PROC GLM e modelo de regressão logística binária (P ≤ 0,05). No estudo I, a CFA não foi associada a variações nos parâmetros produtivos e reprodutivos. No entanto, as vacas de baixa CFA apresentaram aumento no número de folículos após início da gestação (IA: 14,82 ± 1,36, 30 dias: 23,45 ± 2,31 e 60 dias:35,18 ± 3,17 folículos). A CFA aumentou da IA para 60 dias no grupo de CFA intermediária, mas não variou ao longo do tempo no grupo de alta CFA. A CFA variou entre os grupos comparando-se o momento da IA e 30 dias de gestação. No estudo II, entre a IA e o primeiro mês de gestação, houve aumento do total de oócitos (17,43 ± 4,52 vs. 41,67 ± 3,79), bem como de oócitos viáveis (13,77 ± 3,63 vs. 30,56 ± 3,45). O número médio de embriões produzidos aumentou durante a gestação, [...]

Increased antral follicle population and in vitro embryo production in pregnant Holstein / Aumento da população folicular antral e produção in vitro de embriões em fêmeas gestantes da raça Holandesa

This study used Holstein cattle to evaluate the following: I) the productive and reproductive characteristics of cows with low, intermediate and high antral follicle counts (AFCs) that were subjected to artificialin semination (AI) and comparison of AFC variability at the time of AI (nonpregnant) and at two time points during pregnancy (30 and 60 days), and II) whether the pregnancy status and different pregnancy periods in heifers improves the efficiency at in vitro embryo production (IVEP). In study I, 75 high-milk production cows with body condition scores (BCSs) of 2.75 to 4.75 and ages of 23 to 99 months were selected. Onthe day of estrus, AFCs (follicles ≥ 3 mm), BCS, body weight, and diameters of the dominant follicle, ovaries and the corpus luteum were evaluated. Posteriorly, AFC was monitored in pregnant cows at 30 days (n =35) and at 60 days for comparison of AFC before pregnancy versus different periods. In study II, heifers (n = 9) with BCS of 2.5 to 3.5 and ages of 10 to 16 months were selected for ovum pick-up and an IVEP program before AI (nonpregnant) as well as at 0 to 30, 31 to 60, and > 60 days of pregnancy. Statistical analysis was performed using PROC GLM and binary logistic regression model (P ≤ 0.05). In study I, AFC was not associated with variations in productive and reproductive parameters. However, AFCs in the low group increased following pregnancy (AI: 14.82 ± 1.36, 30 days: 23.45 ± 2.31 and 60 days: 35.18 ± 3.17 follicles). AFCs increased from AI to 60 days in the intermediate group but did not vary among time points in the high group. AFCs varied among AFC groups in AI and at 30 days of pregnancy but not at 60 days. In study II, the mean of total oocytes (17.43 ± 4.52 vs. 41.67 ± 3.79) and viable oocytes (13.77 ± 3.63 vs. 30.56± 3.45) increased from AI (nonpregnant) to the first 30 days of pregnancy. [...](AU)

Este estudo utilizou fêmeas da raça Holandesa para avaliar: i) variação da contagem de folículos antrais na gestação; ii) resultado da produção in vitro de embriões em doadoras antes e depois da gestação. No estudo I, 75 vacas de alta produção de leite com escores de condição corporal (ECC) de 2,75 a 4,75 e idades de 23 a 99 meses foram selecionadas. No dia do estro a CFA foi avaliada (folículos ≥ 3 mm) além do escore corporal, peso corporal e diâmetros do folículo dominante, ovários e corpo lúteo. Posteriormente, a CFA foi monitorada nas vacas gestantes (n = 35) aos 30 e 60 dias. No estudo II, novilhas (n = 9) com ECC de 2,5 a 3,5 e idades de 10 a 16 meses foram selecionadas para obtenção de oócitos antes e depois da gestação, no primeiro, segundo e acima dos dois meses de gestação. A análise estatística foi realizada usando PROC GLM e modelo de regressão logística binária (P ≤ 0,05). No estudo I, a CFA não foi associada a variações nos parâmetros produtivos e reprodutivos. No entanto, as vacas de baixa CFA apresentaram aumento no número de folículos após início da gestação (IA: 14,82 ± 1,36, 30 dias: 23,45 ± 2,31 e 60 dias:35,18 ± 3,17 folículos). A CFA aumentou da IA para 60 dias no grupo de CFA intermediária, mas não variou ao longo do tempo no grupo de alta CFA. A CFA variou entre os grupos comparando-se o momento da IA e 30 dias de gestação. No estudo II, entre a IA e o primeiro mês de gestação, houve aumento do total de oócitos (17,43 ± 4,52 vs. 41,67 ± 3,79), bem como de oócitos viáveis (13,77 ± 3,63 vs. 30,56 ± 3,45). O número médio de embriões produzidos aumentou durante a gestação, [...](AU)

Morphometry of bovine blastocysts produced in vitro in culture media with antioxidants cysteamine or oily extract of Lippia origanoides / [Morfometria de blastocistos bovinos produzidos in vitro em meio de cultura com antioxidantes cisteamina ou extrato oleoso de Lippia origanoides]

This study aimed to evaluate the ultrastructural morphometry of bovine embryos produced in vitro grown at different concentrations of antioxidants. After in vitro maturation and fertilization, the presumptive zygotes were assigned into five treatments. T1) without the addition of any antioxidants (negative control); T2) addition of 50µM/mL cysteamine; and T3, T4 and T5) adding 2.5µg/mL, 5.0µg/mL or 10.0µg/mL of the antioxidants derived from the oily extract from Lippia origanoides, respectively. On D7 of culture, the embryos in the blastocyst stage were fixed and prepared for electron transmission microscopy. These were evaluated for the proportion of cytoplasm-to-nucleus, cytoplasm-to-mitochondria, cytoplasm-to-vacuoles, cytoplasm-to-autophagic vacuoles and cytoplasm-to-lipid droplets. Blastocysts cultured in media containing oily extract of Lippia origanoides presented morphological characteristics such as high cell:mitochondria ratio and low cell:vacuoles and cell:autophagic vacuole ratio, possibly been morphological indicators of embryonic quality. Inner cell mass (ICM) from blastocysts cultured in media without any antioxidants had the highest cell:vacuole ratio. Similar results were found in the trophectoderm (TE) cells of blastocysts from treatment 2. Embryo culture media supplemented with antioxidants derived from Lippia origanoides oil produced embryos with a higher cytoplasmic proportion of organelles, such as mitochondria. Also, treatments without any antioxidants or with the addition of cysteamine presented cytoplasmic vacuolization, a characteristic related to production of poor-quality embryos.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar a morfometria ultraestrutural de embriões bovinos produzidos in vitro e cultivados em diferentes concentrações de antioxidantes. Após a maturação e a fertilização in vitro, os possíveis zigotos foram divididos em cinco tratamentos: T1) sem adição de antioxidantes (controle negativo); T2) adição de 50µM/mL de cisteamina; e T3, T4 e T5) adição de 2,5µg/mL, 5,0µg/mL ou 10,0µg/mL dos antioxidantes derivados do extrato oleoso de Lippia origanoides, respectivamente. No D7 de cultivo, os embriões em estágio de blastocisto foram fixados e preparados para microscopia eletrônica de transmissão. Estes foram avaliados para a proporção entre citoplasma e núcleo, citoplasma e mitocôndria, citoplasma e vacúolos, citoplasma e vacúolos autofágicos e citoplasma e gotículas lipídicas. Blastocistos cultivados em meio contendo extrato oleoso de Lippia origanoides apresentaram características morfológicas como alta relação célula:mitocôndria e baixa relação célula:vacúolos e célula:vacúolo autofágico, possíveis indicadores morfológicos de qualidade embrionária. A massa celular interna (MCI) de blastocistos cultivados em meio sem quaisquer antioxidantes teve a maior razão célula:vacúolo. Resultados semelhantes foram encontrados nas células do trofectoderma (TE) de blastocistos do tratamento 2. Portanto, o meio de cultivo embrionário suplementado com antioxidantes derivados do óleo de Lippia origanoides produziu embriões com maior proporção citoplasmática de organelas, como mitocôndrias. Além disso, tratamentos sem antioxidantes ou com adição de cisteamina apresentaram vacuolização citoplasmática, característica relacionada à produção de embriões de baixa qualidade.(AU)

Lentivirus vectors fail to deliver transgenes into bovine zygotes after co-incubation with sperm during in vitro fertilization / [Lentivírus falham na entrega de transgenes em zigotos bovinos após coincubação com espermatozoide, durante fertilização in vitro]

As vantagens dos animais transgênicos têm sido demonstradas em diferentes aplicações, entretanto muitas metodologias usadas para gerar animais geneticamente modificados (GM) apresentam baixas taxas de eficiência. O objetivo deste estudo foi avaliar a entrega dos vetores lentivirais (VLs) em zigotos durante a fertilização in vitro (FIV), para gerar embriões GM, com o gene da proteína verde fluorescente (GFP) ou do fator IX de coagulação humana (FIX). Vetores lentivirais com os genes GFP (pLGW-GFP-LV) ou FIX (pLWE2-FIX-LV) foram utilizados na FIV ou na cultura de embriões in vitro (CIV). A coincubação de pLWE2-FIX-LV com espermatozoides e complexos oócitos-células do cumulus (COCs) durante a FIV diminuiu (P<0,05) as taxas de clivagem e de blastocistos, enquanto com pLGW-GFP-LV diminuiu (P<0,05) a taxa de blastocisto quando se comparou ao controle sem VL. A coincubação de pLWE2-FIX-LV e pLGW-GFP-LV com presumíveis zigotos durante a CIV não afetou (P>0,05) o desenvolvimento embrionário. A expressão da proteína GFP não foi detectada em embriões após a coincubação de FIV ou CIV, embora as células do cumulus expressassem a proteína até o dia oito de cultivo in vitro. Reações em cadeia da polimerase (PCR) não detectaram os genes GFP ou FIX em embriões, mas ambos foram detectados em células do cumulus. Assim, a coincubação de VL com espermatozoide bovino e COCs não é eficaz para produzir embriões geneticamente modificados por meio de FIV.(AU)

Contagem de folículos antrais: relação com a eficiência das biotécnicas e fertilidade / Antral follicle count: relationship with the efficiency of biotechniques and fertility

A implementação das biotécnicas reprodutivas juntamente com os programas de melhoramento genético tem contribuído expressivamente para uma rápida disseminação de indivíduos melhoradores, tanto pelo uso da inseminação artificial, quanto pela produção in vivo e in vitro de embriões. No entanto, a eficiência destes programas está condicionada a uma série de fatores que podem afetar de maneira significativa a performance reprodutiva tanto em bovinos de corte, como de leite. Neste contexto, a contagem de folículos antrais (CFA) se destaca como um dos fatores de maior influência e ainda pouco compreendido. Empregando a ultrassonografia, fêmeas podem ser classificada em baixa, intermediária ou alta CFA, devido à alta variabilidade desta contagem no rebanho. Além disso, a alta repetibilidade desta característica possibilita realizar esta classificação em diferentes momentos da vida reprodutiva da fêmea. De maneira geral, doadoras de alta CFA tem proporcionado maiores rendimentos embrionários tanto na técnica in vivo quanto in vitro. Entretanto, fêmeas de baixa CFA têm apresentado maiores diâmetros foliculares e maior taxa de prenhez quando submetidas à IATF. Embora a CFA atue como um fator de grande influência, sua herdabilidade é baixa e não há relação com características zootécnicas de programas de melhoramento. Finalmente, a CFA tem se destacado como uma importante ferramenta de seleção de matrizes e que tem contribuído significativamente para um maior sucesso nos programas reprodutivos.

The implementation of reproductive biotechniques and genetic improvement programs has significantly contributed to a fast dissemination of animals with high genetic, both by artificial insemination and in vivo and in vitro embryo production. However, the efficiency of these programs is conditioned to several factors that can considerably affect the reproductive performance in both beef and dairy cattle. In this context, the antral follicle count (AFC) stands out as one of the most influential and still poorly understood factors. Females can be classified as low, intermediate, or high AFC by ultrasonography due to the high variability of this count in the herd. In addition, the high repeatability of this characteristic allows high confidence in carrying out this classification at different times of the reproductive life. In general, high AFC donors have provided higher embryo yields both in vivo and in vitro. However, females with low AFC have shown larger follicular diameters and higher pregnancy rate when submitted to TAI. Although AFC is a factor of great influence, its heritability is low and there is no relationship with zootechnical characteristics of breeding programs. Finally, AFC has emerged as an important tool to female’s selection and has significantly contributed to greater success in breeding programs.

Influence of different protein supplements on the recovery and in vitro maturation of bovine oocytes / Influencia de diferentes suplementos proteicos en la recuperación y maduración in vitro de ovocitos bovinos / Influência de diferentes suplementações proteicas sobre a recuperação e maturação in vitro de oócitos bovinos

Abstract Background: Oocyte quality and maturation are influenced by protein supplementation. Objective: To evaluate the influence of fetal bovine serum (FBS) and bovine serum albumin (BSA) concentrations on the recovery and in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes. Methods: The study was divided into Stage 1 (oocyte recovery), and Stage 2 (IVM). In the first stage, three experiments were conducted according to the recovery (R) medium used: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; and (R3) the best results from R1, R2, and the combination of FBS+BSA (5+5%). Within the second stage, the maturation medium was supplemented according to three experiments: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0.4 vs. 0.8% BSA; and (M3) better results of M1, M2, and the combination of FBS+BSA (5+0.8%). Results: In Stage 1 (R1 and R2), the media with 10% FBS and 10% BSA showed better oocyte quality results and were defined for experiment R3. In R3, the 10% FBS and the combination of FBS+BSA (5+5%) allowed recovery of better-quality oocytes. In Stage 2 (M1 and M2), media with both levels of FBS (5 and 10%) and 0.8% BSA were defined as better according to the maturation and viability rates of cumulus cells, so they were defined for experiment M3. In M3, no difference was noted among the supplements. Conclusions: For oocyte recovery, 10% FBS and the combination of FBS+BSA (5+5%) can be used to obtain immature oocytes. For the in vitro maturation, FBS (both levels, 5 and 10%) and BSA (0.8%) can be used alone or in combination.

Resumen Antecedentes: La calidad y maduración de los ovocitos son influenciados por la suplementación proteica. Objetivo: Evaluar la influencia de concentraciones de suero fetal bovino (FBS) y albúmina sérica bovina (BSA) en la recuperación y maduración in vitro (IVM) de ovocitos bovinos. Métodos: El estudio se dividió en Etapa 1 (recuperación de ovocitos) y Etapa 2 (IVM). En la primera etapa, tres experimentos se realizaron de acuerdo con el medio de recuperación: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; y (R3) los mejores resultados de R1, R2 y la combinación de FBS+BSA (5+5%). En la segunda etapa, el medio de maduración fue suplementado para tres experimentos: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0,4 vs. 0,8% BSA; y (M3) mejores resultados de M1, M2 y la combinación de FBS+BSA (5+0,8%). Resultados: En la Etapa 1 (R1 y R2), los medios con 10% FBS y 10% BSA mostraron mejores resultados de calidad oocitaria y fueron definidos para el experimento R3. En R3, 10% FBS y la combinación de FBS+BSA (5+5%) permitieron la recuperación de ovocitos de mejor calidad. En la Etapa 2 (M1 y M2), los medios con ambos niveles de FBS (5 y 10%) y 0,8% de BSA se definieron como mejores de acuerdo con las tasas de maduración y viabilidad de las células del cumulus, por lo que se definieron para el experimento M3. En M3, no se observó diferencia entre los suplementos. Conclusiones: Para la recuperación de ovocitos, se puede utilizar 10% de FBS y la combinación de FBS+BSA (5+5%) para obtener ovocitos inmaduros. Para la maduración in vitro, FBS (ambos niveles, 5 y 10%) y BSA (0,8%) se pueden usar solos o en combinación.

Resumo Antecedentes: A qualidade e a maturação de oócitos são influenciadas pela suplementação proteica. Objetivo: Avaliar a influência de concentrações de soro fetal bovino (FBS) e albumina sérica bovina (BSA) sobre a recuperação e maturação in vitro (IVM) de oócitos bovinos. Métodos: O estudo foi dividido em Etapa 1 (recuperação de oócitos) e Etapa 2 (IVM). Na primeira etapa, três experimentos foram realizados de acordo com o meio de recuperação: (R1) 10 vs. 20% FBS; (R2) 5 vs. 10% BSA; e (R3) melhores resultados de R1, R2 e a combinação de FBS+BSA (5+5%). Na segunda etapa, o meio de maturação foi suplementado de acordo com três experimentos: (M1) 5 vs. 10% FBS; (M2) 0,4 vs. 0,8% BSA; e (M3) melhores resultados de M1, M2 e a combinação de FBS+BSA (5+0,8%). Resultados: Na Etapa 1 (R1 e R2), os meios com 10% FBS e 10% BSA mostraram melhores resultados de qualidade oocitária e foram definidos para o experimento R3. Em R3, 10% FBS e a combinação de FBS+BSA (5+5%) permitiram a recuperação de oócitos de melhor qualidade. Na segunda etapa (M1 e M2), meios com ambos os níveis de FBS (5 e 10%) e 0,8% BSA foram definidos como os melhores de acordo com as taxas de maturação e viabilidade de células do cumulus, então foram definidos para o experimento M3. No M3, não houve diferença entre os suplementos. Conclusões: Para a recuperação oocitária, 10% FBS e a combinação de FBS+BSA (5+5%) podem ser usados para obter oócitos imaturos. Para maturação in vitro, FBS (ambos os níveis, 5 e 10%) e BSA (0,8%) podem ser usados sozinhos ou em combinação.