RESUMO
A epididimite infecciosa ovina é uma das principais enfermidades reprodutivas de carneiros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver protocolos de PCR em tempo real para B. ovis e H. somni e avaliar sua aplicabilidade em amostras de sêmen e urina de carneiros. Delinearam-se primers e sondas espécie-específicos para cada agente. As sondas foram delineadas com o sistema TaqMan incorporando um marcador FAM para B. ovis e Cy5 para H. somni na extremidade 5' e um quencher na extremidade 3'. A PCR em tempo real para B. ovis e H. somni foi altamente sensível, uma vez que a amplificação de DNA ocorreu com até 0,2ng de DNA/reação. A especificidade dos iniciadores e sondas foi avaliada com amostras de DNA de outros agentes causadores de epididimite ovina e nenhuma amplificação inespecífica foi observada. A aplicabilidade da técnica em amostras biológicas também foi confirmada, pois não houve perda de eficácia (P>0,05) quando comparada à PCR convencional com amostras de sêmen e urina de carneiros experimentalmente infectados(AU)
Assuntos
Animais , Brucella ovis/isolamento & purificação , Pasteurellaceae/isolamento & purificação , Urina/microbiologia , Sêmen/microbiologia , Ovinos/microbiologia , Epididimite/diagnóstico , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/veterináriaRESUMO
A epididimite infecciosa ovina é uma das principais enfermidades reprodutivas de carneiros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver protocolos de PCR em tempo real para B. ovis e H. somni e avaliar sua aplicabilidade em amostras de sêmen e urina de carneiros. Delinearam-se primers e sondas espécie-específicos para cada agente. As sondas foram delineadas com o sistema TaqMan incorporando um marcador FAM para B. ovis e Cy5 para H. somni na extremidade 5' e um quencher na extremidade 3'. A PCR em tempo real para B. ovis e H. somni foi altamente sensível, uma vez que a amplificação de DNA ocorreu com até 0,2ng de DNA/reação. A especificidade dos iniciadores e sondas foi avaliada com amostras de DNA de outros agentes causadores de epididimite ovina e nenhuma amplificação inespecífica foi observada. A aplicabilidade da técnica em amostras biológicas também foi confirmada, pois não houve perda de eficácia (P>0,05) quando comparada à PCR convencional com amostras de sêmen e urina de carneiros experimentalmente infectados.
Assuntos
Animais , Brucella ovis/isolamento & purificação , Epididimite/diagnóstico , Ovinos/microbiologia , Pasteurellaceae/isolamento & purificação , Sêmen/microbiologia , Urina/microbiologia , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/veterináriaRESUMO
The purpose of this study was to evaluate the agar gel immunodiffusion and the rapid serum agglutination tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis. The serological profile during the 12 months of infection showed a large fluctuation of antibodies that favors the failure in the diagnostic. The evaluation of tests after the experimental infection allowed to suggest that none of the tests were able to detect the infection throughout the period of study. The study reinforces the importance of considering the clinical signs to support the diagnosis of Brucella ovis infection in rams.
O objetivo deste estudo foi avaliar o uso do teste de imunodifusão em gel de ágar e o teste sorológico de aglutinação rápida comparados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis para o diagnóstico confirmatório da brucelose ovina. O perfil sorológico durante os 12 meses pós-infecção mostrou flutuação da resposta por anticorpos, que favorece a falha no diagnóstico. A avaliação dos testes indicou que nenhum dos testes foi capaz de detectar a infecção durante todo o período de estudo. O estudo ressalta a importância de considerar os sinais clínicos para apoiar o diagnóstico confirmatório da infecção por Brucella ovis em carneiros.
RESUMO
The purpose of this study was to evaluate the agar gel immunodiffusion and the rapid serum agglutination tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis. The serological profile during the 12 months of infection showed a large fluctuation of antibodies that favors the failure in the diagnostic. The evaluation of tests after the experimental infection allowed to suggest that none of the tests were able to detect the infection throughout the period of study. The study reinforces the importance of considering the clinical signs to support the diagnosis of Brucella ovis infection in rams.
O objetivo deste estudo foi avaliar o uso do teste de imunodifusão em gel de ágar e o teste sorológico de aglutinação rápida comparados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis para o diagnóstico confirmatório da brucelose ovina. O perfil sorológico durante os 12 meses pós-infecção mostrou flutuação da resposta por anticorpos, que favorece a falha no diagnóstico. A avaliação dos testes indicou que nenhum dos testes foi capaz de detectar a infecção durante todo o período de estudo. O estudo ressalta a importância de considerar os sinais clínicos para apoiar o diagnóstico confirmatório da infecção por Brucella ovis em carneiros.
RESUMO
The purpose of this study was to evaluate the agar gel immunodiffusion and the rapid serum agglutination tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis. The serological profile during the 12 months of infection showed a large fluctuation of antibodies that favors the failure in the diagnostic. The evaluation of tests after the experimental infection allowed to suggest that none of the tests were able to detect the infection throughout the period of study. The study reinforces the importance of considering the clinical signs to support the diagnosis of Brucella ovis infection in rams.
O objetivo deste estudo foi avaliar o uso do teste de imunodifusão em gel de ágar e o teste sorológico de aglutinação rápida comparados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis para o diagnóstico confirmatório da brucelose ovina. O perfil sorológico durante os 12 meses pós-infecção mostrou flutuação da resposta por anticorpos, que favorece a falha no diagnóstico. A avaliação dos testes indicou que nenhum dos testes foi capaz de detectar a infecção durante todo o período de estudo. O estudo ressalta a importância de considerar os sinais clínicos para apoiar o diagnóstico confirmatório da infecção por Brucella ovis em carneiros.