Produção de hibridomas secretores de anticorpos anti-Neospora caninum para uso em imunodiagnóstico / Production of hybridomas secreting anti-Neospora caninum antibodies for use in immunodiagnostic

The Neospora caninum is a protozoan Apicomplexa with greater involvement in abortions worldwide. The economic losses determined by neosporosis also include abortions besides the early disposal of cows, costs for replacing animals in the herd, drop in milk production as well as milk in fat production. The immunological diagnosis involves purchasing costly diagnostic kits on the market. Therefore, the aim of this study was the production of hybridomas secreting polyclonal antibodies with affinity to Neospora caninum (Nc-1 strain) for immunodiagnostic use. For antibodies production, we used sonicated protozoa from Vero cells in culture, purified by filtration. These tachyzoites were employed for immunization of BALB / c mice using saponin as adjuvant, which allowed obtaining polyclonal antibodies capable of revealing fluorescein reaction in indirect immunofluorescence. The fusion of splenic cells, from the immunized mice with myeloma cells SP2 / 0 resulted in 72.4% hybridomas secreting anti-Nc-1antibodies. These hybridomas secreted antibodies positive to N. caninum and negative to Toxoplasma gondii.

O Neospora caninum é um protozoário apicomplexa com maior implicação em abortamentos em muitos países do mundo. As perdas econômicas determinadas pela neosporose incluem além dos abortamentos também o descarte precoce de vacas, os custos de reposição de novos animais no rebanho, a queda na produção leiteira, bem como na produção da gordura no leite. O diagnóstico imunológico envolve a aquisição de kits diagnósticos existentes no mercado os quais apresentam alto custo. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi à produção de hibridomas secretores de anticorpos policlonais com afinidade ao Neospora caninum (cepa Nc-1) para utilização em imunodiagnósticos. Para a produção dos anticorpos usou-se o protozoário sonicado, proveniente da cultura em células VERO, que foi purificado por filtração. Esses taquizoítos foram utilizados na imunização dos camundongos BALB/c, usando-se como adjuvante a saponina, o que permitiu a obtenção de anticorpos policlonais capazes de revelar a fluoresceína na reação da imunofluorescência indireta. A fusão das células esplênicas, provenientes dos camundongos imunizados com as células de mieloma SP2/0 resultou na obtenção de 72,4% de hibridomas secretores de anticorpos anti-Nc-1. Esses hibridomas secretaram anticorpos positivos ao N. caninum e negativos ao Toxoplasma gondii.

Produção de hibridomas secretores de anticorpos anti-Neospora caninum para uso em imunodiagnóstico

The Neospora caninum is a protozoan Apicomplexa with greater involvement in abortions worldwide. The economic losses determined by neosporosis also include abortions besides the early disposal of cows, costs for replacing animals in the herd, drop in milk production as well as milk in fat production. The immunological diagnosis involves purchasing costly diagnostic kits on the market. Therefore, the aim of this study was the production of hybridomas secreting polyclonal antibodies with affinity to Neospora caninum (Nc-1 strain) for immunodiagnostic use. For antibodies production, we used sonicated protozoa from Vero cells in culture, purified by filtration. These tachyzoites were employed for immunization of BALB / c mice using saponin as adjuvant, which allowed obtaining polyclonal antibodies capable of revealing fluorescein reaction in indirect immunofluorescence. The fusion of splenic cells, from the immunized mice with myeloma cells SP2 / 0 resulted in 72.4% hybridomas secreting anti-Nc-1antibodies. These hybridomas secreted antibodies positive to N. caninum and negative to Toxoplasma gondii.

O Neospora caninum é um protozoário apicomplexa com maior implicação em abortamentos em muitos países do mundo. As perdas econômicas determinadas pela neosporose incluem além dos abortamentos também o descarte precoce de vacas, os custos de reposição de novos animais no rebanho, a queda na produção leiteira, bem como na produção da gordura no leite. O diagnóstico imunológico envolve a aquisição de kits diagnósticos existentes no mercado os quais apresentam alto custo. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi à produção de hibridomas secretores de anticorpos policlonais com afinidade ao Neospora caninum (cepa Nc-1) para utilização em imunodiagnósticos. Para a produção dos anticorpos usou-se o protozoário sonicado, proveniente da cultura em células VERO, que foi purificado por filtração. Esses taquizoítos foram utilizados na imunização dos camundongos BALB/c, usando-se como adjuvante a saponina, o que permitiu a obtenção de anticorpos policlonais capazes de revelar a fluoresceína na reação da imunofluorescência indireta. A fusão das células esplênicas, provenientes dos camundongos imunizados com as células de mieloma SP2/0 resultou na obtenção de 72,4% de hibridomas secretores de anticorpos anti-Nc-1. Esses hibridomas secretaram anticorpos positivos ao N. caninum e negativos ao Toxoplasma gondii.

Produção de hibridomas secretores de anticorpos anti- Neospora caninum para uso em imunodiagnóstico / Production of hybridomas secreting anti-Neospora caninum antibodies for use in immunodiagnostic

The Neospora caninum is a protozoan Apicomplexa with greater involvement in abortions worldwide. The economic losses determined by neosporosis also include abortions besides the early disposal of cows, costs for replacing animals in the herd, drop in milk production as well as milk in fat production. The immunological diagnosis involves purchasing costly diagnostic kits on the market. Therefore, the aim of this study was the production of hybridomas secreting polyclonal antibodies with affinity to Neospora caninum (Nc-1 strain) for immunodiagnostic use. For antibodies production, we used sonicated protozoa from Vero cells in culture, purified by filtration. These tachyzoites were employed for immunization of BALB / c mice using saponin as adjuvant, which allowed obtaining polyclonal antibodies capable of revealing fluorescein reaction in indirect immunofluorescence. The fusion of splenic cells, from the immunized mice with myeloma cells SP2 / 0 resulted in 72.4% hybridomas secreting anti-Nc-1antibodies. These hybridomas secreted antibodies positive to N. caninum and negative to Toxoplasma gondii.(AU)

O Neospora caninum é um protozoário apicomplexa com maior implicação em abortamentos em muitos países do mundo. As perdas econômicas determinadas pela neosporose incluem além dos abortamentos também o descarte precoce de vacas, os custos de reposição de novos animais no rebanho, a queda na produção leiteira, bem como na produção da gordura no leite. O diagnóstico imunológico envolve a aquisição de kits diagnósticos existentes no mercado os quais apresentam alto custo. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi à produção de hibridomas secretores de anticorpos policlonais com afinidade ao Neospora caninum (cepa Nc-1) para utilização em imunodiagnósticos. Para a produção dos anticorpos usou-se o protozoário sonicado, proveniente da cultura em células VERO, que foi purificado por filtração. Esses taquizoítos foram utilizados na imunização dos camundongos BALB/c, usando-se como adjuvante a saponina, o que permitiu a obtenção de anticorpos policlonais capazes de revelar a fluoresceína na reação da imunofluorescência indireta. A fusão das células esplênicas, provenientes dos camundongos imunizados com as células de mieloma SP2/0 resultou na obtenção de 72,4% de hibridomas secretores de anticorpos anti-Nc-1. Esses hibridomas secretaram anticorpos positivos ao N. caninum e negativos ao Toxoplasma gondii.(AU)

Obtención de anticuerpos monoclonales de ratón contra proteasa de cisteína 5 recombinante de Entamoeba histolytica / Production of monoclonal antibodies against cysteine protease 5 of Entamoeba histolytica

Objetivo. Obtener anticuerpos monoclonales de ratón contra la proteasas de cisteína 5 (EhCP5) de Entamoeba histolytica. Materiales y métodos. Se inmunizaron ratones BALB/c por vía intraperitoneal con adyuvante de Freund completo e incompleto con la proteína recombinante EhCP5 obtenida a partir del cultivo de E.coli DH5α trasfectada con el vector recombinante pJC45 que expresa dicha proteína. Se seleccionó el animal con mejor respuesta de anticuerpos. Al cual se le extrajo su bazo como fuente de linfocitos B, los cuales se fusionaron utilizando PEG con células de mieloma de ratón SP2-0/Ag14. Se procedió a selección de los hibridomas y a la evaluación de los sobrenadantes de las colonias que crecieron a los 7 días mediante ELISA. Los hibridomas con valores más altos de anticuerpos específicos contra la proteína EhCP5r se seleccionaron, y los clones obtenidos por diluciones limitantes fueron expandidos. Resultados. A partir de un clon secretor estable se purifico el anticuerpo monoclonal anti EhCP5r del isotipo IgG1 por cromatografía de afinidad con proteína G. Los clones fueron expandidos in vivo ein vitro. Con el anticuerpo purificado se diseñaron tres sistemas de captura para evaluar la aplicabilidad del anticuerpo monoclonal anti EhCP5r como método inmunodiagnóstico. Conclusiones. Se logro la producción de un anticuerpo monoclonal específico contra EhCP5r que permite diferenciar Entamoeba histolytica de Entamoeba dispar.

Objective. Obtain mouse monoclonal antibodies against cysteine proteases 5 (EhCP5) of Entamoeba histolytica. Materials and methods. BALB/c mice were immunized intraperitoneally with complete and incomplete Freund adjuvant EhCP5 with the recombinant EhCP5 protein obtained from E.coli DH5α culture transfected with the recombinant vector pJC45 that expresses said protein. The animal with the best antibody response was selected. Its spleen was extracted as a source of B-lymphocytes, which were merged using PEG miceSP2-0/Ag14 myeloma cells. The team proceeded to undergo the selection of the hybridomas and the evaluation of the supernatants of the colonies that grew after 7 days by ELISA. The hybridomas with higher values of specific antibodies against the protein EhCP5r were selected, and clones obtained by limiting dilution were expanded Results. With the use of a stable secreting clone the monoclonal antibody anti EhCP5r IgG1 isotype was purified by affinity chromatography with protein G. The clones were expanded in vivo and in vitro. Three capture systems were designed with the purified antibody to assess the applicability of the monoclonal antibody anti EhCP5r as an immunodiagnostic method. Conclusions. The production of a specific monoclonal antibody against EhCP5r was achieved to differentiate Entamoeba histolytica from Entamoeba dispar.

Toxoplasma gondii: caracterización de un anticuerpo monoclonal anti-P30

Se caracterizó un anticuerpo monoclonal específico a Toxoplasma gondii. El hibridoma produjo inmunoglobulinas IgG. El análisis por Western Blot demostró que el anticuerpo monoclonal fue específico para el antígeno de masa molecular aparente de 30 kd, presente en la superficie del parásito. El anticuerpo monoclonal se purificó a partir de fluido ascítico de ratón y se acopló a Sefarosa 4B. Este inmunoabsorbente fue utilizado con el fin de purificar el antígeno parasitario específico. El anticuerpo monoclonal estudiado puede ser de utilidad para las técnicas que contribuyan con el diagnóstico de la toxoplasmosis.

A specific monoclonal antibody was characterized to Toxoplasma gondii. The hybridoma produced IgG immunoglobulins. The Western Blot analysis showed that the monoclonal antibody was specific for the antigen of an apparent mollecular mass of 30 kd, which was present on the antigen surface. The monoclonal antibody was purified starting from mouse´s ascitic fluid and it was matched with Sepharose 4B. This immunoabsorbent was used to purify the specific parasitary antigen. The monoclonal antibody studied may be useful for those tecniques contributing to the toxoplasmosis diagnosis.