RESUMO
SUMMARY Aim: A new stability-indicating liquid chromatography method was developed and validated for the quantitative determination of luliconazole. Materials and methods: Preliminary forced degradation study demonstrated an additional peak of the degradation product at the same retention time to the drug, due to this, the method was developed optimizing the chromatographic conditions to provide sufficient peak resolution (R ≥ 2). The experimental design was evaluated to assess the robustness and the best chromatographic conditions to be used for the validation. Methodology: Luliconazole solutions were exposed to various stress conditions to evaluate the method indication stability, in which the degradation product (DP-1) formed was isolated, identified, and evaluated in silico to predict degradation pathway and toxicity. The procedure was validated by robustness, selectivity, linearity, precision, and accuracy. Liquid chromatography was performed in a Phenomenex® RP-18 column with a mixture of acetonitrile and 0.3% (v/v) triethylamine solution as a mobile phase in isocratic elution. Results and conclusions: The method demonstrated robustness, good recovery, precision, linear response over a range from 5.0 to 40.0 μg.mL-1- and to be stability indicating. The alkaline stress condition resulted in the formation of DP-1. HRMS studies identified this product as an hydroxyacetamide derivative, and in silico studies did not show toxic potential.
RESUMEN Objetivo: Un nuevo método indicativo de estabilidad por cromatografía líquida fue desarrollado y validado para la determinación cuantitativa de luliconazol. Materiales y métodos: Estudios preliminares de degradación forzada demostraron un pico adicional en el mismo tiempo de retención del fármaco. El método desarrollado para optimizar las condiciones cromatográicas proporcionó una adecuada resolución (R ≥ 2). El diseño experimental fue evaluado para verificar su robustez y la mejor condición cromatográica para validación. Metodología: Las soluciones de luliconazol fueron expuestas a diferentes condiciones de estrés para evaluar la indicación de estabilidad del método, el aislamiento del producto de degradación formado (DP-1), su identificación y análisis in silico para predecir su ruta de degradación y toxicidad. El procedimiento se validó por robustez, selectividad, linealidad, precisión y exactitud. Las condiciones cromatográficas incluyeron una columna Phenomenex® RP-18, como fase móvil una mezcla de acetonitrilo y solución 0,3% (v/v) de trietilamina en elución isocrática. Resultados y conclusiones: El método mostró ser robusto, con buena recuperación, precisión, respuesta lineal en el rango de 5,0 a 40,0 μg.mL-1 e indicativo de la estabilidad. La condición de estrés alcalina resultó en la formación de DP-1. Estudios por HRMS identificaron este producto como un derivado hidroxiacetamida y los estudios in silico no mostraron potencial de toxicidad.
RESUMO Objetivo: Um novo método indicativo de estabilidade por cromatograia líquida foi desenvolvido e validado para a determinação quantitativa de luliconazol. Materiais e métodos: Estudos preliminares de degradação forçada demonstraram um pico adicional no mesmo tempo de retenção do medicamento. O método desenvolvido para otimizar as condições cromatográficas proporcionou resolução adequada (R ≥ 2). O delineamento experimental foi avaliado para verificar sua robustez e a melhor condição cromatográica para validação. Metodologia: Soluções de luliconazol foram expostas a diferentes condições de estresse para avaliar a indicação da estabilidade do método, o isolamento do produto de degradação formado (DP-1), sua identificação e análise in silico para predizer sua rota de degradação e toxicidade. O procedimento foi validado quanto à robustez, seletividade, linearidade, precisão e exatidão. As condições cromatográficas incluíram uma coluna Phenomenex® RP-18, como fase móvel uma mistura de acetonitrila e solução de trietilamina 0,3% (v/v) em eluição isocrática. Resultados e conclusões: O método mostrou-se robusto, com boa recuperação, precisão, resposta linear na faixa de 5,0 a 40,0 μg.mL-1 e indicativo de estabilidade. A condição de estresse alcalino resultou na formação de DP-1. Os estudos da HRMS identificaram este produto como um derivado da hidroxiacetamida e os estudos in silico não mostraram nenhum potencial de toxicidade.
RESUMO
abstract Valsartan was submitted to forced degradation under acid hydrolysis condition as prescribed by the ICH. Degraded sample aliquots were separated via HPLC using a Hypersil ODS (C18) column (250 x 4.6 mm i.d., 5 µm). Either photodiode array (PDA) detection or mass spectrometry (MS) full scan monitoring of HPLC runs were used. HPLC-PDA failed to indicate Valsartan degradation under forced acid degradation, showing an insignificant peak area variation and that Valsartan apparently remained pure. HPLC-MS using electrospray ionization (ESI) and total ionic current (TIC) monitoring did not reveal any peak variation either, but inspection of the ESI mass spectra showed the appearance of m/z 306 and m/z 352 ions for the same retention time as that of Valsartan (m/z 436). These ions were identified as being protonated molecules of two co-eluting degradation products formed by hydrolysis. These assignments were confirmed by ESI-MS/MS with direct infusion of the degraded samples. The results showed that the use of selective HPLC-MS is essential for monitoring Valsartan degradation. Efficient HPLC separation coupled to selective and structural diagnostic MS monitoring seems therefore mandatory for comprehensive drug degradation studies, particularly for new drugs and formulations, and for method development.
resumo Valsartana (VAL) foi submetida à degradação forçada em meio ácido conforme procedimento descrito no ICH. Os produtos de degradação (PDs) foram monitorados ao longo do tempo de degradação pela técnica de Cromatografia Líquida (LC) utilizando uma coluna Hypersil ODS (C18) (250 x 4,6 mm d.i., 5 µm). A detecção foi feita com dois detectores: espectrofotométrico (PDA) e espectrometria de massas (MS) por corrente iônica total. Ambas as técnicas falharam na identificação dos PDs obtidos ao longo do monitoramento, mostrando insignificantes variações na área do pico e permanecendo com pureza de pico ao longo de toda a eluição. Somente depois da avaliação por íon extraído (XIC), foi possível observar o aumento do íon m/z 306 e m/z 352 exatamente no mesmo tempo de retenção do íon molecular (m/z 436). Estes resultados mostram um caso simples e didático em que somente o uso de um método seletivo de LC-MS pode ser utilizado para monitorar produtos de degradação. Neste trabalho, é apresentado um caso real em que a separação por LC deve ser acoplada a métodos seletivos obtidos por MS, especialmente no estudo de PDs para novos fármacos, formulações e no desenvolvimento de métodos.
Assuntos
Espectrometria de Massas/classificação , Valsartana/farmacocinética , Metabolismo , Cromatografia Líquida de Alta Pressão , Teste de Esforço , HidróliseRESUMO
Em julho de 2008, a ANVISA publicou um informe técnico esclarecendo um item importante da RE nº 1 (2005), que trata sobre os estudos de estabilidade de medicamentos. Este documento originou uma nova RDC de nº 58, publicada em dezembro de 2013, a qual estabelece limites para produtos de degradação em medicamentos. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o comportamento do antineoplástico cloridrato de doxorrubicina frente a condições de decomposição (hidrólise ácida, básica, oxidação, temperatura e fotólise), a fim de se determinar suas principais vias de degradação e também elucidar as estruturas de seus principais produtos de degradação. Para isso foi desenvolvido e validado um método indicativo de estabilidade por HPLC-DAD-MS, o qual utiliza como fase estacionária uma coluna Luna C18(2) (150 mm x 3,0 mm, µm) com gradiente de fase móvel de tampão formiato de amônio 5 mmoles.L-1 pH 3 e metanol e fluxo de 0,3 mL.min-1. Ao longo do estudo foram encontrados diversos produtos de degradação, dentre eles a 7- deoxidehidrodoxorrubicinona, originada por hidrólise ácida e também o produto da degradação térmica de m/z 530, o qual foi encontrado nas análises do medicamento após expirado seu prazo de validade. Além disso, a avaliação da toxicidade in vitro de amostras contendo produtos de degradação de origem térmica indicou atividade citotóxica para células mononucleares
ANVISA has published in July 2008, a technical sheet expaining an important item of the RE No. 1 (2005), which describes drugs stability studies. This document originated a new RDC No. 58, published in December 2013, which sets thresholds for degradation products in pharmaceuticals. The aim of this study was to evaluate the behavior for the antineoplastic doxorubicin when exposed to stress conditions (acid and base hydrolysis, oxidaton, photolysis and temperature) in order to determine the major pathaways of degradation and also to elucidate the stuctures of their main degradation products. To this was developed and validated a target stability indicatinf method by HPLC-DAD-MS, with Luna C18 (2) (150 mm x 3.0 mm. 3 µm) column as stationary phase and a mobile phase gradient composed of ammonium formate buffer 5 mmoles.L-1 and pH 3 and metanol with flow of 0.3 ml min-1. Throughout the study many degradation products was discovered, among them 7- deoxydehydrodoxorubicinone, formed by acid hydrolysis and also the main product of termal decomposition of m/z 530, wich was found in the analyzes of the medicine after the expiry of its validity were found. Furthermore, evaluation of the in vitro toxicity of samples containing degradation products of thermal decomposition was found to be citotoxic for mononuclear cells
