Genotipificación del gen RHD en ADN fetal libre en plasma de embarazadas RhD negativo / Genotyping of the RHD gene in free fetal DNA in plasma of RhD negative pregnant women

Objetivo: Determinar el grupo RhD fetal a través del estudio del gen RHD en ADN fetal que se encuentra libre en plasma de embarazadas RhD negativo. Método: Se analizó la presencia de los genes RHD, SRY y BGLO en ADNfl obtenido de plasma de 51 embarazadas RhD negativo no sensibilizadas, utilizando una qPCR. Los resultados del estudio genético del gen RHD se compararon con el estudio del grupo sanguíneo RhD realizado por método serológico en muestras de sangre de cordón, y los resultados del estudio del gen SRY fueron cotejados con el sexo fetal determinado por ecografía. Se calcularon la sensibilidad, la especificidad, los valores predictivos y la capacidad discriminativa del método estandarizado. Resultados: El gen RHD estaba presente en el 72,5% de las muestras y el gen SRY en el 55,5%, coincidiendo en un 100% con los resultados del grupo RhD detectado en sangre de cordón y con el sexo fetal confirmado por ecografía, respectivamente. Conclusiones: Fue posible deducir el grupo sanguíneo RhD del feto mediante el estudio del ADN fetal que se encuentra libre en el plasma de embarazadas con un método molecular no invasivo desarrollado y validado para este fin. Este test no invasivo puede ser utilizado para tomar la decisión de administrar inmunoglobulina anti-D solo a embarazadas RhD negativo que portan un feto RhD positivo.

Objective: To determine the fetal RhD group through the study of the RHD gene in fetal DNA found free in plasma of RhD negative pregnant women. Method: The presence of the RHD, SRY and BGLO genes in fetal DNA obtained from plasma of 51 non-sensitized RhD negative pregnant women was analyzed using qPCR. The results of the genetic study of the RHD gene were compared with the RhD blood group study performed by serological method in cord blood samples, and the results of the SRY gene study were compared with the fetal sex determined by ultrasound. Sensitivity, specificity, predictive values and discriminative capacity of the standardized method were calculated. Results: The RHD gene was present in 72.5% of the samples and the SRY gene in 55.5%, coinciding 100% with the results of the RhD group detected in cord blood, and with the fetal sex confirmed by ultrasound, respectively. Conclusions: It was possible to deduce the RhD blood group of the fetus through the study of fetal DNA found free in the plasma of pregnant women with a non-invasive molecular method developed and validated for this purpose. This non-invasive test can be used to make the decision to administer anti-D immunoglobulin only to RhD-negative pregnant women carrying an RhD-positive fetus.

Anticuerpos anti-Fya con reacción anamnésica asociada con anti-D en transfusión intrauterina: reporte de un caso / Anti-Fya antibodies with anamnestic reaction associated to anti-D in intrauterine transfusion: A case report

Resumen ANTECEDENTES La enfermedad hemolítica perinatal ocurre después de una transfusión sanguínea, que sensibiliza con antígenos eritrocitarios, hemorragia materno-fetal durante el embarazo o al momento del parto. La incidencia de anticuerpos anti-D ha disminuido de 14 a 0.1% en las madres D-negativas. No existe una inmunoglobulina que evite o disminuya la aloinmunización por otros antígenos eritrocitarios durante el embarazo. La incompatibilidad del grupo sanguíneo Duffy es una causa común de enfermedad hemolítica perinatal. OBJETIVO Exponer el caso de una paciente con hijo con enfermedad hemolítica perinatal por anticuerpos anti-Fya y anti-D tratado con transfusión intrauterina. CASO CLÍNICO Paciente de 22 años, con antecedente de múltiples transfusiones sanguíneas y datos clínicos de síndrome anémico. En la semana 28 del embarazo fue valorada para aplicarle inmunoglobulina anti-D. Luego de aplicarle dos unidades de concentrado eritrocitario Rh negativo se observó incompatibilidad (++) en fase de antiglobulina humana (Coombs), por esto se realizó el escrutinio de anticuerpos irregulares en gel, que resultó positivo en células I y II (+++). Enseguida se inició el protocolo de identificación de anticuerpos irregulares con un panel de 11 células, que reportó aglutinación en las células 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8 y 11, sin mostrar especificidad. El estudio de adsorción del anticuerpo anti-D mostró células de antígeno D+ con las que se estableció el diagnóstico de anticuerpos anti-Fya y anti-D. El embarazo finalizó mediante cesárea con el nacimiento de un varón con grupo y Rh O positivo, de 30.1 semanas de gestación (talla de 40 cm y peso de 2000 g) con hidrops fetal. Se le realizaron ciclos de reanimación e ingresó a la unidad de cuidados intensivos neonatales, sin tratamiento farmacológico, y después de una hora de vida extrauterina falleció. La madre se dio de alta del hospital 36 horas después del puerperio, sin complicaciones adicionales. CONCLUSIÓN Los anticuerpos antieritrocitarios anti-Fya, solos o en combinación con otros anticuerpos, provocan enfermedad hemolítica perinatal severa. El laboratorio de inmunohematología tiene participación importante en el diagnóstico, seguimiento y tratamiento de la enfermedad hemolítica perinatal.

Abstract BACKGROUND Hemolytic disease of the fetus and newborn occurs after alloimmunization with red blood cells antigens by blood transfusion, maternal-fetal hemorrhage during pregnancy or at delivery. Currently, the incidence of alloimmunization by anti-D antibody has been reduced from 14% to 0.1% of D-negative mothers, however, there is no immunoglobulin that prevents or decreases alloimmunization by other red blood cells antigens during pregnancy. The incompatibilities of the Duffy blood group are a common cause of hemolytic disease of the fetus and newborn. OBJECTIVE To present the case of a neonate with perinatal hemolytic disease secondary to anti-Fya and anti-D antibodies managed with intrauterine transfusion. CLINICAL CASE A 22-year-old patient with a history of multiple blood transfusions and clinical data of anemic syndrome. In the 28th week of pregnancy it was evaluated for the application of anti-D immunoglobulin. The blood bank was asked for two units of Rh negative erythrocyte concentrate. Incompatibility (++) in the human antiglobulin phase (Coombs) was observed, so the irregular antibody gel was screened, which was positive in cells I and II (+++). An identification protocol for irregular antibodies was initiated with a panel of 11 cells, which reported agglutination in cells 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8 and 11, without specificity. The adsorption study of the anti-D antibody showed D + antigen cells. The diagnosis of anti-Fya and anti-D antibodies was established. The pregnant woman was terminated by caesarean section, from which a male with a group was born and Rh O positive, of 30.1 weeks of gestation (size of 40 cm and weight of 2000 g) with fetal hydrops. He underwent resuscitation cycles, entered the neonatal intensive care unit, without pharmacotherapy and died after one hour of extrauterine life. The mother withdrew 36 hours after the puerperium, without additional complications. CONCLUSION The antibodies anti-Fya alone or next to other alloantibodies produce severe hemolytic disease of the fetus and newborn. The laboratory of immunohematology in the blood bank is an essential tool in the diagnosis, monitoring and treatment of hemolytic disease of the fetus and newborn.

Sangrado transvaginal durante el embarazo, como factor de riesgo para isoinmunización al antígeno Rhesus-D / Transvaginal bleeding during pregnancy associated with Rhesus-D isoimmunization

OBJETIVO: Evaluar el sangrado transvaginal en cualquier etapa del embarazo como factor de riesgo para la sensibilización al antígeno eritrocitario Rhesus-D en mujeres previamente no isoinmunizadas (Rh(-)NI), como una alternativa para la aplicación rutinaria de gama-globulina anti-D a la semana 28 de gestación. MATERIAL Y MÉTODOS: Estudio de casos y controles consecutivos, efectuado en el Instituto Nacional de Perinatología de la Ciudad de México, en el periodo de 1995 a 2001.Casos (n=24), pacientes Rh(-)NI que mostraron seroconversión positiva de anticuerpos contra el componente D del antígeno Rh durante el embarazo o en el puerperio inmediato. Controles (n=24), mujeres Rh(-)NI, captadas consecutivamente y que no presentaron seroconversión positiva de anticuerpos Anti-D. En todos los casos los recién nacidos fueron Rh positivos. Ninguna de las pacientes recibió inmunoprofilaxis Anti-D a la semana 28 de gestación. Se evaluaron periodos de sangrado transvaginal en cualquier etapa del embarazo y antes del inicio del trabajo de parto. Se estimaron razones de probabilidad e intervalos de confianza de 95 por ciento. RESULTADOS: La presencia de sangrado transvaginal se observó en 18/24 (75 por ciento) de los casos y en 5/24 de los controles (20 por ciento). La actividad uterina pretérmino y la amenaza de aborto fueron las causas más frecuentes identificadas como causa de este sangrado. La presencia de uno solo de estos eventos durante cualquier etapa del embarazo aumentó 11.4 veces (IC 95 por ciento 2.9-44.0) el riesgo de sensibilización al antígeno eritrocitario Rh-D, y si el sangrado se presentó después de la semana 20 el riesgo se incrementó 5.0 veces (IC 95 por ciento 1.3-19.1). La presencia de sangrado antes de la semana 20 no se asoció con un incremento significativo en el riesgo de sensibilización (OR=7.6, IC 95 por ciento 0.8-69.5). CONCLUSIONES: En presencia de cualquier sangrado transvaginal durante el embarazo en una paciente Rh-NI...

OBJECTIVE: The aim of the present study was to evaluate transvaginal bleeding (TVB) as a risk factor for Rhesus isoimmunization during pregnancy, in order to optimize the application of Anti-D gammaglobulin in non-immunized pregnant women, as an alternative to the routine application of Anti-D at 28 weeks of gestation. MATERIAL AND METHODS: This case-control study was conducted from 1995 to 2001 at Mexico's National Perinatology Institute. Cases (n=24) were non-immunized pregnant women who showed positive anti-D antibody seroconversion during pregnancy or during the early puerperium. Controls (n=24) were non-immunized pregnant women who enrolled after each case, with similar clinical characteristics but who had no anti-D antibody seroconversion during pregnancy. In all cases the newborns were Rh-positive. None of the patients received immunoprofilaxis at 28 weeks of gestation. The presence of TVB was recorded at any stage of pregnancy and before labor. Odds ratios with 95 percent confidence intervals were used to assess associations. RESULTS: TVB was observed in 18/24 (75 percent) cases and in 5/24 (20 percent) controls. Preterm uterine contractions and threatened miscarriage were the most frequent causes of TVB. The presence of one TVB event during pregnancy increased 11.4 times (95 percent CI 2.9-44.0) the likelihood of Rhesus isoimmunization. TVB after 20 weeks of gestation increased the likelihood 5.0 times (95 percentCI 1.3-19.1). TVB before 20 weeks of gestation was not significantly associated with Rh isoimmunization (OR=7.6, 95 percentCI 0.8-69.5). CONCLUSIONS: Prophylaxis with anti-D gammaglobulin should be given to all non-immunized Rhesus-negative pregnant woman with TVB at any stage of pregnancy.