RESUMO
Até o momento, não existe consenso quanto ao tratamento para a síndrome da ardência bucal (SAB), definida como queimação idiopática que afeta a mucosa bucal e a região perioral clinicamente normais. A terapia a laser de baixa intensidade (TLBI) tem se mostrado método não invasivo favorável, entretanto, a metodologia utilizada na literatura é bastante variada, gerando resultados discrepantes. O presente trabalho objetivou desenvolver um protocolo de TLBI para a SAB e avaliar sua eficácia em atenuar e/ou eliminar os sintomas. O estudo consistiu em um ensaio clínico, cego, randomizado, com controle por placebo. Valeu-se de uma amostra de 10 voluntários com SAB, separados em dois grupos por alocação oculta: 5 do Grupo Intervenção (GI) e 5 do Grupo Controle (GC). A randomização foi feita em blocos. Os voluntários compareceram a 8 consultas, em 5 semanas, e foram submetidos à TLBI ou placebo a partir da segunda consulta, até a penúltima. Além da laserterapia, foram aplicados os questionários de dor Douleur Neuropathique in 4 questions (DN4) e McGill (MPQ) e o Brief Pain Inventory (BPI), utilizados para avaliação clínica da dor. Indivíduos do GI apresentaram redução estatisticamente significativa nos escores do DN4 (p = 0.03), o que não ocorreu com o GC (p > 0.05). Também houve diferença entre os grupos para o MPQ, nos tempos (T) 1 (p = 0.02), 5 (p = 0.04) e 8 (p = 0.03), com redução significativamente distinta entre GI e GC. Tiveram significância estatística no BPI os critérios "habilidade para apreciar a vida" e "percentual de melhora com a laserterapia". No primeiro, houve diferença na comparação entre T1 e os demais tempos (T2-T8) para o GI (p < 0.05), e não para o GC (p > 0.05). Para o segundo critério BPI, no GI, o escore foi reduzido a zero no T2, mantendo-se assim até o T8. O GC, todavia, não expressou resultados estatisticamente significativos na comparação entre os tempos (p > 0.05). Os achados observados neste estudo indicam que a TLBI representa um potencial tratamento para atenuar os sintomas em pacientes com SAB. (au)
Until the present moment there is no consensus regarding to the treatment of the burning mouth syndrome (BMS), which is defined as an idiopathic burning symptom that affects clinically normal oral mucosa and perioral region. Low-level laser therapy (LLLT) has been proved favorable non-invasive method; however, the protocols in the literature is quite varied achieving different results. The present study aimed to develop a LLLT protocol for BMS and evaluate its effectiveness in mitigating and/or eliminating symptoms. The study consisted of a randomized, blinded, placebocontrolled clinical trial. A sample of ten volunteers with BMS was recruited divided into two groups by hidden allocation: five in the Intervention Group (IG) and five in the Control Group (CG). Randomization was performed in sets. The volunteers came to eight appointments, in five weeks, and were submitted to LLLT or placebo from the second appointment, until the day before the last appointment. In addition to laser therapy, the Douler Neuropathique in 4 questions (DN4) and McGill (MPQ) pain questionnaires and a brief pain inventory (BPI), for clinical pain assessment, were applied. IG showed a statistically significant improvement in the DN4 scores (p = 0.03), which did not occur in the CG (p > 0.05). There was also a difference between the groups for the MPQ, at day (T) 1 (p = 0.02), 5 (p = 0.04) and 8 (p = 0.03), with a significantly difference improvement when compare IG with CG. The criteria "ability to enjoy life" and "percentage of improvement with laser therapy" were statistically significant at BPI. In the first, there was a difference in the comparison between T1 and the other days (T2-T8) for the IG (p < 0.05), and not for the CG (p > 0.05). For the second BPI assessment the score for IG was reduced to zero in T2, thus maintaining it until T8. The CG, however, did not express statistically significant results when compared the times (p > 0.05). The findings observed in this study indicate that LLLT represents a potential treatment to improve symptoms in patients with BMS. (AU)
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , Pessoa de Meia-Idade , Síndrome da Ardência Bucal/radioterapia , Terapia com Luz de Baixa Intensidade , Dor Crônica/radioterapia , Medição da Dor , Protocolos ClínicosRESUMO
O laser de baixa intensidade (LBI) é capaz de estimular a proliferação de diferentes tipos celulares, porém pouco se sabe sobre sua eficácia na proliferação de células cultivadas na superfície dos biomateriais. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do LBI na proliferação e viabilidade de células-tronco do ligamento periodontal humano (PDLSCs) cultivadas em arcabouços de quitosana. A quitosana foi submetida a testes para identificação do teor real de massa e grau de desacetilação. Membranas de quitosana foram preparadas pela técnica de evaporação de solvente e submetidas a caracterização de morfologia e de superfície. PDLSCs previamente isoladas e caracterizadas foram cultivadas sobre quatro superfícies: (P) plástico da placa de cultivo, não irradiado, como controle positivo de crescimento celular; (Q) quitosana, não irradiado; (L1) quitosana, irradiado com dose de 1 J/cm²; e (L4) quitosana, irradiado com 4 J/cm². As irradiações foram realizadas com laser diodo InGaAlP, com comprimento de onda de 660 nm, potência de 30 Mw, diâmetro da ponta de 0.01cm² e modo de ação contínuo, em dose única. Os dados mostraram que a quitosana apresentou um teor real de massa de 88,08% e grau de desacetilação de 91,37±3,77%. A análise das membranas por MEV mostrou superfície uniforme e homogênea, com espessura média de 68,71 µm. A análise por microscopia de força atômica revelou uma rugosidade média de 285 nm. O peso das membranas variou de 0,03 a 0,04 g, indicando a sua uniformidade, e o pH de superfície exibiu média de 6,9±0,25, valor próximo ao pH da saliva. A viabilidade e a proliferação celular foram avaliadas através dos ensaios de Alamar Blue, Live/Dead, Annexin V/PI e Ki67, além da análise do ciclo celular, e a morfologia celular foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O ensaio do Alamar Blue mostrou diferenças significativas na atividade mitocondrial entre os grupos nos intervalos de 24 h (L1>Q, p= 0,0118) e em 48 h (L1>Q, p= 0,0022; L4>Q, p=0,0002; L4>L1, p= 0,0022). O ensaio Live/Dead mostrou maior densidade de células vivas nos grupos irradiados (L1 e L4) em relação ao grupo sem irradiação (Q), o que foi comprovado pelo ensaio da Annexin V/PI, que mostrou um maior percentual de células viáveis em L4 (89,5%) e L1 (87,0%) em comparação com Q (78,4%) em 72 h. A imunoexpressão da proteína Ki67 foi maior em L4 e L1 e estes dois grupos apresentaram também um maior percentual de células nas fases proliferativas do ciclo celular (S e G2/M). A análise por MEV mostrou no grupo Q células com morfologia mais arredondada e com poucas projeções, além de debris celulares, enquanto nos grupos irradiados as células exibiram um arranjo mais plano, com projeções mais distribuídas e pontos de adesão focal, especialmente em L4. Em conjunto, os resultados do presente trabalho permitem concluir que a laserterapia nos padrões estudados, especialmente na dose de 4 J/cm², influencia positivamente a viabilidade e a proliferação de PDLSCs em membranas de quitosana, permitindo assim que as células superem eventuais efeitos adversos do microambiente do arcabouço (AU).
Low-level laser irradiation (LLLI) is able to stimulate the proliferation of various cell types, but little is known about its effectiveness on the proliferation of cells cultured on biomaterial surfaces. The aim of this study was to evaluate the influence of LLLI on the proliferation and viability of human periodontal ligament stem cells (PDLSCs) cultured on chitosan scaffolds. Chitosan was submitted to tests to identify the real mass content and degree of deacetylation. Chitosan membranes were prepared by solvent evaporation technique and submitted to morphology and surface characterization. PDLSCs previously isolated and characterized were grown on the surfaces of four groups: (P) culture plate plastic, non-irradiated, as a positive control of cell growth; (C) chitosan, non-irradiated; (L1) chitosan irradiated with a dose of 1 J/cm²; and (L4) chitosan, irradiated with 4 J/cm². The irradiations were performed with InGaAlP diode laser with wavelength of 660 nm, power 30 mW, tip diameter of 0.01cm², and continuous action mode in a single dose. Cell viability and proliferation were evaluated by Alamar Blue, Live/Dead, Annexin V/PI and Ki67 assays, as well as cell cycle analysis, whereas cell morphology was evaluated by MEV. The data showed that the chitosan presented a real mass content of 88.08% and degree of deacetylation of 91.37 ± 3.77%. SEM analysis showed membranes with uniform and homogeneous surface, with a mean thickness of 68.71 µm. Analysis by AFM revealed roughness around 285 nm. The weight of the membranes ranged from 0.03 to 0.04 g, indicating their uniformity, and the surface pH exhibited a mean of 6.9 ± 0.25, a value close to the pH of the saliva. The Alamar Blue assay showed significant differences in mitochondrial activity between groups at 24 h (L1> C, p = 0.0118) and at 48 h (L1> C, p = 0.0022; L4> C, p = 0.0002; L4>L1, p = 0.0022). The Live/Dead assay showed higher density of live cells in irradiated groups (L1 and L4) compared to the group without irradiation (C), which was confirmed by assay of Annexin V/PI, which showed a greater percentage of viable cells in L4 (89.5%) and L1 (87.0%) compared to C (78.4%) at 72 h. The Ki67 immunoexpression was higher in L4 and L1 and these two groups also showed a higher percentage of cells in the proliferative phases of the cell cycle (S and G2/M). The SEM analysis showed in group C cells with more rounded morphology and with few projections, as well as cell debris, whereas in the irradiated groups the cells exhibited a more flat arrangement, more distributed projections and focal adhesion points, especially in L4. Taken together, the results of the present study shown that laser therapy in the studied patterns, especially at the dose of 4 J/cm², has a positive effect on viability and proliferation of PDLSCs on chitosan membranes, thereby allowing the cells to overcome any adverse effects of the scaffold microenvironment (AU).
Assuntos
Humanos , Ligamento Periodontal , Quitosana/farmacologia , Proliferação de Células , Células-Tronco Mesenquimais , Técnicas In Vitro/métodos , Estatísticas não Paramétricas , Terapia com Luz de Baixa Intensidade/instrumentaçãoRESUMO
A fotobiomodulação (PBM) estimula a proliferação de diferentes tipos celulares, incluindo células-tronco. A células-tronco da polpa do dente decíduo esfoliado (SHEDs) apresentam um potencial de diferenciação maior do que as demais célulastronco mesenquimais, sendo o foco de diversas pesquisas na área da engenharia tecidual. Para que as células proliferarem e se diferenciem in vitro é necessário o desenvolvimento de um microambiente favorável, o qual pode ser fornecido por um biomaterial que mimetize a matriz extracelular natural, destacando-se para esta finalidade o ácido poliláctico (PLA) por suas propriedades de biocompatibilidade e biodegradabilidade, além do baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da PBM em diferentes doses na proliferação e viabilidade de SHEDs cultivadas sobre arcabouços bidimensionais de PLA. As SHEDs foram cultivadas sobre os filmes e divididas em três grupos: (C) controle não irradiado; (L1) irradiadas com dose de 1 J/cm2 ; e (L4) irradiadas com dose de 4 J/cm2 . As irradiações foram realizadas com laser diodo InGaAlP, com comprimento de onda de 660 nm e potência de 30 Mw, em dose única. A viabilidade e a proliferação celular foram avaliadas nos intervalos de 24, 48 e 72 horas após a irradiação, através do ensaio do Alamar Blue, enquanto a morfologia e a distribuição das células na superfície dos filmes foram avaliadas por MEV no intervalo de 72 horas. Os dados quantitativos foram submetidos a testes estatísticos não paramétricos. Os dados do ensaio do Alamar Blue mostraram que os grupos L1 e L4 exibiram uma maior proliferação celular em comparação ao grupo C, sendo as diferenças significativas entre L1 e C em 48 e 72 h (p<0,0001) e entre L4 e C em 24 (p<0,01), 48 (p<0,001) e 72 h (p<0,0001). O percentual de redução do Alamar blue mostrou-se significativamente maior em L4 em comparação com L1 em 24 e 72 h (p<0,05). A análise das amostras por MEV mostrou que nos grupos irradiados as células apresentavam uma distribuição mais homogênea ao longo da superfície dos filmes e uma maior densidade celular em comparação com o grupo C, sendo esta diferença ainda mais evidente no grupo L4. Conclui-se que a PBM nos parâmetros estudados, especialmente na dose de 4 J/cm2 , estimula a proliferação de SHEDs em contato com filmes de PLA, constituindo assim uma ferramenta metodológica com potencial aplicação nas técnicas de engenharia tecidual (AU).
Photobiomodulation (PBM) stimulates the proliferation of different cell types, including stem cells. Stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) present a greater differentiation potential compared to other mesenchymal stem cells, being the focus of several studies in the field of tissue engineering. In order for cells to proliferate and differentiate in vitro it is necessary to develop a favorable microenvironment, which can be provided by a biomaterial that mimics the natural extracellular matrix, with polylactic acid (PLA) being distinguished for this purpose due to its properties of biocompatibility and biodegradability, as well as low cost. The aim of this study was to evaluate the effect of PBM in different doses on the proliferation and viability of SHEDs cultured on two-dimensional PLA scaffolds. SHEDs were cultured on the films and divided into three groups: (C) non-irradiated control; (L1) irradiated with a dose of 1 J/cm2 ; and (L4) irradiated with a dose of 4 J/cm2 . The irradiations were performed with an InGaAlP diode laser, with wavelength of 660 nm and power of 30 Mw, in a single dose. Cell viability and proliferation were evaluated at 24, 48 and 72 h after irradiation by Alamar Blue assay, while cell morphology and distribution on the surface of the films were evaluated by SEM at 72 hours. The quantitative data were submitted to non-parametric statistical tests. Data from Alamar blue assay showed that groups L1 and L4 exhibited greater cell proliferation compared to group C, with significant differences between L1 and C at 48 and 72 h (p<0.0001) and between L4 and C in 24 (p<0.01), 48 (p<0.001) and 72 h (p<0.0001). The percentage of reduction of Alamar blue was significantly higher in L4 compared to L1 at 24 and 72 h (p<0.05). Analysis of the samples by SEM showed that in the irradiated groups the cells had a more homogeneous distribution along the surface of the films and a higher cell density compared to the group C, with this difference being even more evident in the group L4. We conclude that PBM in the studied parameters, especially with the dose of 4 J/cm2 , stimulates the proliferation of SHEDs in contact with PLA films, thus constituting a methodological tool with potential application in tissue engineering techniques (AU).
