Avaliação imunológica dos camundongos geneticamente selecionados para diferente capacidade de produção de anticorpo

INTRODUCTION: The potentiality of the inflammatory response or the specific immune response of the individual are complex characteristics that vary continuously and have a normal distribution in a heterogeneous population, since they are under polygenic control. Aiming at the study of the genetic regulation of specific immunity, our laboratory developed strains of heterogeneous mice genetically selected for high – HIII and low – LIII ability to produce antibodies to certain antigens through the process of genetic selection bidirectional. For some genetic and immunological studies, isogenic mice must be used. Therefore, we produced isogenic trunks of these parental lines in the vivarium of the Immunogenetics laboratory of the Butantan Institute, which after the selection process were subjected to inbreeding. OBJECTIVE: Evaluate the ability to produce antibodies as well as cells – B and T lymphocytes (CD4 and CD8) after stimulating the immune system with diphtheria anatoxin, comparing isogenic trunks with parental lineages. METHODOLOGY: Isogenic mice from Stem A (High) and Stem E (Low) and heterogeneous (HIII and LIII) were immunized with diphtheria anatoxin. The primary and secondary humoral immune response was evaluated in serum by quantifying the production of anti-diphtheria IgG antibodies using the ELISA technique. For the characterization of the T and B lymphocyte cell response profile, the spleen and lymph nodes were collected and the cells were identified by surface markers (CD4, CD8, B220) and evaluated by flow cytometry. RESULTS: The results show significant increases in the concentration of antibodies produced by the groups when comparing normal serum with primary and secondary responses. The production of antibodies in the secondary response was higher in animals from the HIII and Stem A strains compared to the other groups. In the cellular response, a significant increase in T lymphocytes (CD4+and CD8+) and B lymphocytes was seen in the lymph node in the experimental HIII group compared to the other groups, however in the spleen a significantly increased T cell response was detected in the immunized animals in the LIII group. Regarding the isogenic trunks, the animals from Stem A showed an increase in CD4+ T lymphocytes when compared to the experimental Stem E in splenic cells. CONCLUSIONS: Animals selected for high antibody production capacity showed greater responses both in IgG secretion in the secondary response and in the higher frequency of T and B cells in the lymph nodes. It is important to in-depth study of the modulation mechanism of the immune response in these strains to understand the multi-specific genetic effects against certain antigens.

INTRODUÇÃO: A potencialidade da resposta inflamatória ou da resposta imune específica do indivíduo são características complexas que variam de forma contínua e têm uma distribuição normal numa população heterogênea, pois estão sob controle poligênico. Visando o estudo da regulação genética da imunidade específica nosso laboratório desenvolveu linhagens de camundongos heterogênicos geneticamente selecionadas para alta (“High” - HIII) e baixa (“Low” - LIII) capacidade de produção de anticorpos a certos antígenos através do processo de seleção genética bidirecional. Para alguns estudos genéticos e imunológicos devem ser utilizados camundongos isogênicos, assim, produzimos no Biotério do laboratório de Imunogenética do Instituto Butantan troncos isogênicos destas linhagens parentais, que após o processo seletivo foram submetidas a cruzamentos consanguíneos. OBJETIVO: Avaliar a capacidade de produção de anticorpos assim como as células – linfócitos B e T (CD4+ e CD8+) após o estímulo do sistema imune com anatoxina diftérica comparando os troncos isogênicos com as linhagens parentais. METODOLOGIA: Camundongos isogênicos (High – Tronco A e Low – Tronco E) e heterogênicos (HIII e LIII) foram imunizados com anatoxina diftérica. A resposta imune humoral primária e secundária foram avaliadas no soro pela quantificação da produção de anticorpos IgG antidiftéricos através da técnica de ELISA. Para a caracterização do perfil de resposta celular de linfócitos T e B, foram coletados o baço e linfonodos e as células foram identificadas por marcadores de superfície (CD4, CD8, B220) e avaliadas por citometria de fluxo. RESULTADOS: Os resultados mostram aumentos significativos na concentração de anticorpos produzidos pelos grupos quando comparadas o soro normal com as respostas primária e secundária. A produção de anticorpos na resposta secundária foi maior nos animais das linhagens HIII e Tronco A em relação aos outros grupos. Na resposta celular foi visualizado no linfonodo um aumento significante de linfócitos T (CD4+e CD8+) e linfócitos B no grupo HIII experimental em relação aos outros grupos, entretanto no baço a resposta significativamente aumentada das células T foi detectada nos animais imunizados do grupo LIII. Em relação aos troncos isogênicos, os animais do Tronco A apresentaram um aumento de linfócitos T CD4+ quando comparados ao Tronco E experimental nas células esplênicas. CONCLUSÕES: Os animais selecionados para alta capacidade de produção de anticorpos apresentaram respostas maiores tanto na secreção de IgG na resposta secundária como na maior frequência de células T e B nos linfonodos. Sendo importante o estudo aprofundado do mecanismo de modulação da resposta imune nessas linhagens para entendimento de efeitos genéticos multiespecíficos frente a determinados antígenos.

Photosensitizers and exposure times to light showed tissue compatibility in isogenic mice / Fotossensibilizadores e tempo de exposição a luz em relação a compatibilidade de tecidos em ratos isogênicos

Objective: The aim of this study was to evaluate the subcutaneous tissue response after different protocols to photodynamic therapy (PDT). In Phase 1, were tested the diode laser (used for 1min) associated to the photosensitizer phenothiazine chloride solution (PCS) in different concentrations. In Phase 2 ­ the diode laser and LED were tested associated to two different photosensitizers, PCS and Curcumin, in different exposure times of light application. Material and Methods: After 7, 21 and 63-days the animals were euthanized and the subcutaneous tissue processed to histological analysis. Qualitative and semi-quantitative descriptions of the inflammatory process and immunohistochemical technique were performed. The obtained data were analyzed by Kruskal-Wallis and Dunn's post-test (α= 0.5). Results: On Phase 1, the tissue response was very similar among the groups. For the inflammatory infiltrate, PCS with concentration of 10mg/mL exhibited the most intense reaction (p > 0.05). On Phase 2, at 7-days period, the analyzed parameters presented small magnitude and after 21 and 63-days, all the parameters demonstrated tissue compatibility. Conclusion: Both photosensitizers presented proper tissue compatibility regardless the different concentrations used on Phase 1 and different durations of light exposure on Phase 2 (AU)

Objetivo: Este estudo avaliou a resposta do tecido subcutâneo após terapia fotodinâmica, utilizando na Fase 1 - laser diodo por 1min e solução fotossensibilizadora de cloreto de fenotiazina (CF) em diferentes concentrações e Fase 2 - laser diodo e LED e dois fotossensibilizadores, CF e Curcumina, em diferentes tempos de exposição da aplicação de luz. Material e Métodos: Após 7, 21 e 63 dias, foram realizadas descrições qualitativas e semiquantitativas do processo inflamatório e técnica de imunoistoquímica. Os dados foram analisados pelo pós-teste de Kruskal-Wallis e Dunn (α = 0,5). Resultados: Na Fase 1, a resposta do tecido foi muito semelhante. O infiltrado inflamatório, na concentração de 10 mg / mL, exibiu reação mais intensa (p > 0,05). Na Fase 2, aos 7 dias, os parâmetros analisados apresentaram pequena magnitude. Aos 21 e 63 dias, todos os parâmetros demonstraram compatibilidade com o tecido. Conclusão: Ambos os fotossensibilizadores apresentaram compatibilidade de tecido adequada, independentemente das diferentes concentrações utilizadas na Fase 1 e diferentes durações de exposição à luz na Fase 2 (AU)

Controle reprodutivo em biotérios de criação de animais de laboratório com ênfase em roedores / Reproductive control in Rodents animals facilities

A pesquisa experimental utiliza em sua grande maioria ratos e camundongos. Os animais de laboratório sãocaracterizados pela sua genética (isogênicos ou heterogênicos) definida através de práticas reprodutivas sistemáticas(acasalamentos irmão x irmão ou randômicos). O conhecimento da biologia e genética destes é fundamental paraque se estabeleçam controles reprodutivos capazes de evitar desperdícios espaciais, financeiros e sobretudo odescarte excessivo de excedentes. O uso de animais isogênicos elimina a variabilidade genética em experimentos,uma vez que possuem ao menos 98,2% de homozigose em seus alelos e formam uma linhagem onde ascaracterísticas genéticas e fenotípicas são únicas e exclusivas. O uso de linhagens permite a reprodutibilidade deexperimentos ao longo do tempo e em diferentes laboratórios. Ao contrário, animais heterogênicos, chamados deestoque ou colônias que objetivam mimetizar a variabilidade genética de uma população, são mantidos emacasalamentos randômicos, não possuem uma genética definida e suas características fenotípicas podem variar entrelaboratórios. Tanto um quanto o outro exigem esquemas reprodutivos rígidos para garantir a qualidade efidedignidade dos experimentos.(AU)

The great majority of animals used in research are rats and mice. Laboratory animals are characterized by theirgenetic patterns (isogenic or heterogenic) defined through systematic breeding practices (brother vs. brother orrandom mating). It is fundamental to know their biology and genetics to establish reproductive controls in order toavoid spatial and financial waste and, more important, to avoid the excessive discarding of surpluses. The use ofisogenic animals eliminates genetic variability in experiments, since they have at least 98.2% homozygoze in theiralleles and form a lineage where the genetic and phenotypic characteristics are unique and exclusive. The use oflineages allows the reproducibility of experiments in different laboratories and along the time. On the other hand,heterogenic animals, called stock or colonies, that aim to mimic the genetic variability of a population, are kept inrandom mating, they do not have a defined genetic profile and their phenotypic characteristics can vary amonglaboratories. Both ways of breeding (isogenic or heterogenic) demand rigid reproductive schemes to ensure thequality and reliability of the experiments.(AU)

Controle reprodutivo em biotérios de criação de animais de laboratório com ênfase em roedores / Reproductive control in Rodents animals facilities

A pesquisa experimental utiliza em sua grande maioria ratos e camundongos. Os animais de laboratório sãocaracterizados pela sua genética (isogênicos ou heterogênicos) definida através de práticas reprodutivas sistemáticas(acasalamentos irmão x irmão ou randômicos). O conhecimento da biologia e genética destes é fundamental paraque se estabeleçam controles reprodutivos capazes de evitar desperdícios espaciais, financeiros e sobretudo odescarte excessivo de excedentes. O uso de animais isogênicos elimina a variabilidade genética em experimentos,uma vez que possuem ao menos 98,2% de homozigose em seus alelos e formam uma linhagem onde ascaracterísticas genéticas e fenotípicas são únicas e exclusivas. O uso de linhagens permite a reprodutibilidade deexperimentos ao longo do tempo e em diferentes laboratórios. Ao contrário, animais heterogênicos, chamados deestoque ou colônias que objetivam mimetizar a variabilidade genética de uma população, são mantidos emacasalamentos randômicos, não possuem uma genética definida e suas características fenotípicas podem variar entrelaboratórios. Tanto um quanto o outro exigem esquemas reprodutivos rígidos para garantir a qualidade efidedignidade dos experimentos.

The great majority of animals used in research are rats and mice. Laboratory animals are characterized by theirgenetic patterns (isogenic or heterogenic) defined through systematic breeding practices (brother vs. brother orrandom mating). It is fundamental to know their biology and genetics to establish reproductive controls in order toavoid spatial and financial waste and, more important, to avoid the excessive discarding of surpluses. The use ofisogenic animals eliminates genetic variability in experiments, since they have at least 98.2% homozygoze in theiralleles and form a lineage where the genetic and phenotypic characteristics are unique and exclusive. The use oflineages allows the reproducibility of experiments in different laboratories and along the time. On the other hand,heterogenic animals, called stock or colonies, that aim to mimic the genetic variability of a population, are kept inrandom mating, they do not have a defined genetic profile and their phenotypic characteristics can vary amonglaboratories. Both ways of breeding (isogenic or heterogenic) demand rigid reproductive schemes to ensure thequality and reliability of the experiments.

Nutritional characteristics of bmr mutant and normal sorghum genotypes used for cutting and grazing / Características nutricionais de genótipos de sorgo mutantes BMR e normais utilizados para corte e pastejo

This study evaluated the nutritional characteristics of BMR mutant and normal sorghum genotypes, eleven BMR mutants and nine normal. Seeds were sown in a randomized block design with three blocks, in which each genotype was a treatment. The nutritional characteristics were analyzed at 42 days of regrowth after the first cut, determined for DM, EE, ash, CP, NDIN, NIDA, NDF, ADF, NFC, CT, HCEL, CEL and NGLs. Regarding DM, EE, ash, NDIN, NIDA, NDF, FDA and HCEL, there were no differences between genotypes. As for CP, there were differences, with mean levels ranging from 9.77% for BR001AXTX2785bmr to 16.45% for BR001AxTX2784. Considering CT and NFC, there were differences in the mean levels that ranged from 75.21 to 83.28% for BR007AxTX2785bmr and BR001AXTX2785bmr, and from 17.46 to 25.51% for CMSXS156AxTX2785bmr and IS10428xTX2784, respectively. In relation to CEL and LGN significant difference were detected, the mean levels varied between 22.30 and 27.94% for the IS10428xTX2784 and TX635AxTX2785bmr, and from 3.08 to 7.31% for BR007AxTX2785bmr and BR001AxTX2784, respectively. The genotypes IS10428xTX2784 and BR007AxTX2784 are the most suitable for use in ruminant feed.

Objetivou-se avaliar as características nutricionais de genótipos de sorgo mutantes BMR e normais, sendo onze mutantes BMR e nove normais. A semeadura foi realizada em blocos casualizados, com três blocos onde cada genótipo foi um tratamento. As características nutricionais foram analisadas aos 42 dias de rebrotação após o primeiro corte, sendo determinados os teores de MS, EE, cinzas, PB, NIDN, NIDA, FDN, FDA, CNF, CT, HCEL, CEL e LGN. Em relação à MS, ao EE, às cinzas, ao NIDN, ao NIDA, à FDN, à FDA e à HCEL, não houve diferença entre os genótipos. Quanto à PB, houve diferença, cujos teores médios oscilaram de 9,77% para o BR001AXTX2785bmr a 16,45% para o BR001AxTX2784. Em relação aos CT e CNF, houve diferença, os teores médios variaram de 75,21% para o BR007AxTX2785bmr a 83,28% para o BR001AXTX2785bmr e de 17,46 a 25,51% para o CMSXS156AxTX2785bmr e IS10428xTX2784, respectivamente. Quanto à CEL e LGN houve diferença, os teores médios variaram de 22,30% para o IS10428xTX2784 a 27,94% para o TX635AxTX2785bmr e de 3,08% para o BR007AxTX2785bmr a 7,31% para o BR001AxTX2784, respectivamente. Os genótipos IS10428xTX2784 e o BR007AxTX2784 são os mais indicados para se utilizar na alimentação de ruminantes.

Nutritional characteristics of bmr mutant and normal sorghum genotypes used for cutting and grazing / Características nutricionais de genótipos de sorgo mutantes BMR e normais utilizados para corte e pastejo

This study evaluated the nutritional characteristics of BMR mutant and normal sorghum genotypes, eleven BMR mutants and nine normal. Seeds were sown in a randomized block design with three blocks, in which each genotype was a treatment. The nutritional characteristics were analyzed at 42 days of regrowth after the first cut, determined for DM, EE, ash, CP, NDIN, NIDA, NDF, ADF, NFC, CT, HCEL, CEL and NGLs. Regarding DM, EE, ash, NDIN, NIDA, NDF, FDA and HCEL, there were no differences between genotypes. As for CP, there were differences, with mean levels ranging from 9.77% for BR001AXTX2785bmr to 16.45% for BR001AxTX2784. Considering CT and NFC, there were differences in the mean levels that ranged from 75.21 to 83.28% for BR007AxTX2785bmr and BR001AXTX2785bmr, and from 17.46 to 25.51% for CMSXS156AxTX2785bmr and IS10428xTX2784, respectively. In relation to CEL and LGN significant difference were detected, the mean levels varied between 22.30 and 27.94% for the IS10428xTX2784 and TX635AxTX2785bmr, and from 3.08 to 7.31% for BR007AxTX2785bmr and BR001AxTX2784, respectively. The genotypes IS10428xTX2784 and BR007AxTX2784 are the most suitable for use in ruminant feed.(AU)

Objetivou-se avaliar as características nutricionais de genótipos de sorgo mutantes BMR e normais, sendo onze mutantes BMR e nove normais. A semeadura foi realizada em blocos casualizados, com três blocos onde cada genótipo foi um tratamento. As características nutricionais foram analisadas aos 42 dias de rebrotação após o primeiro corte, sendo determinados os teores de MS, EE, cinzas, PB, NIDN, NIDA, FDN, FDA, CNF, CT, HCEL, CEL e LGN. Em relação à MS, ao EE, às cinzas, ao NIDN, ao NIDA, à FDN, à FDA e à HCEL, não houve diferença entre os genótipos. Quanto à PB, houve diferença, cujos teores médios oscilaram de 9,77% para o BR001AXTX2785bmr a 16,45% para o BR001AxTX2784. Em relação aos CT e CNF, houve diferença, os teores médios variaram de 75,21% para o BR007AxTX2785bmr a 83,28% para o BR001AXTX2785bmr e de 17,46 a 25,51% para o CMSXS156AxTX2785bmr e IS10428xTX2784, respectivamente. Quanto à CEL e LGN houve diferença, os teores médios variaram de 22,30% para o IS10428xTX2784 a 27,94% para o TX635AxTX2785bmr e de 3,08% para o BR007AxTX2785bmr a 7,31% para o BR001AxTX2784, respectivamente. Os genótipos IS10428xTX2784 e o BR007AxTX2784 são os mais indicados para se utilizar na alimentação de ruminantes.(AU)

Avaliação das consequências da ingestão de semente de amendoim durante o período de desmame em camundongos isogênicos / Assessment of the consequences of the ingestion of peanut seed during the weaning isogenic

A penetração do antígeno pela mucosa intestinal pode resultar em duas situações distintas: a tolerância oral, onde se verifica uma redução na resposta imunológica sistêmica, e a alergia alimentar que é caracterizada pelo desenvolvimento de uma resposta imuno sistêmica para o antígeno em questão. As manifestações clínicas alérgicas de ambos os fenômenos são semelhantes e podem culminar na doença inflamatória intestinal em jovens e adultos. Baseado nestes achados, o objetivo principal foi avaliar se camundongos das linhagens Balb/c e C57BL/6 se tornariam sensíveis (alérgicos) para os antígenos do amendoim através da exposição oral...Os animais que receberam por via oral a semente de amendoim no período de perisdesmame não se sensibilizaram a esta proteína quando ofertada in natura no período de desafio oral na vida adulta.