Efficiency of rLb6H recombinant protein from Leishma-nia (Viannia) braziliensis for the detection of canine visceral leishmaniasis / Eficiência da proteína recombinante rLb6H de Leishmania (Viannia) brazi-liensis na detecção da leishmaniose visceral canina

Introduction: Visceral leishmaniasis (VL) is a serious endemic disease in many tropical and subtropical countries, with a strong incidence in Brazil. The disease is transmitted by the bite of infected female phlebotomine sandflies, with dogs being the main urban reservoirs of the parasite. The diverse clinical profile and the long incubation period are challenges for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL). Recombinant proteins from Leishmania spp. have been studied as antigens that can increase the accuracy of serological tests. Objective: To evaluate the diagnostic performance of the recombinant protein rLb6H, from Leishmania braziliensis, in comparison to the reference antigens rK39 and rK28, from L. donovani, prioritizing the identification of subclinical infected dogs. Material and Methods: Serum IgG reactivity to rLb6H, rK28, and rK39 recombinant proteins was assessed in dogs with previously parasitological confirmation of CVL, subdivided according to their clinical status, using immunoenzymatic assay (ELISA). Diagnostic accuracy of each ELISA was evaluated by receiver operating characteristic (ROC) curve analysis. Results: While all antigens showed a better performance in detecting CVL in symptomatic dogs (SD), detection of CVL in the oligosymptomatic (OD) and asymptomatic (AD) groups was lower, but rLb6H achieved high sensitivity for asymptomatic CVL. Interestingly, the most reactive CVL samples to rK28 were barely detected by rLb6H, while the less reactive to rK28, mostly from the AD group, presented higher reactivity to rLb6H. Conclusion: The recombinant protein rLb6H showed utility in the detection of asymptomatic CVL, displaying a complementary reactivity to rK39 and rK28. Thus, these results suggest that rLb6H could be incorporated into multi-antigen strategies, to increase diagnostic accuracy of CVL.

Introdução: A leishmaniose visceral (LV) é uma doença endêmica grave em muitos países tropicais e subtropicais, tendo forte incidência no Brasil. A doença é transmitida pela picada de flebotomíneos fêmeas infectadas, sendo os cães os principais reservatórios urbanos do parasito. O perfil clínico diversificado e o longo período de incubação são desafios para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC). Proteínas recombinantes de Leishmania spp. têm sido estudadas como antígenos que podem aumentar a precisão de testes sorológicos. Objetivo: Avaliar o desempenho diagnóstico da proteína recombinante rLb6H, de Leishmania braziliensis, em comparação com os antígenos de referência rK39 e rK28, de L. donovani, priorizando a identificação de cães com infecção subclínica. Material e Métodos: A reatividade de anticorpos IgG séricos às proteínas recombinantes rLb6H, rK28 e rK39 foi avaliada em cães com confirmação parasitológica prévia de LVC, subdivididos de acordo com seu quadro clínico, utilizando ensaio imunoenzimático (ELISA). A precisão diagnóstica de cada ELISA foi avaliada pela análise da curva ROC (receiver operating characteristic curve). Resultados: Enquanto todos os antígenos mostraram um melhor desempenho na detecção de CVL em cães sintomáticos (SD), a detecção de CVL nos grupos oligossintomáticos (OD) e assintomáticos (AD) foi menor, mas rLb6H alcançou alta sensibilidade para CVL assintomática. Curiosamente, as amostras de CVL mais reativas a rK28 foram pouco detectadas por rLb6H, enquanto as menos reativas a rK28, principalmente do grupo AD, apresentaram maior reatividade a rLb6H. Conclusão: A proteína recombinante rLb6H mostrou utilidade na detecção de CVL assintomática, apresentando uma reatividade complementar a rK39 e rK28. Assim, estes resultados sugerem que o rLb6H pode ser incorporado em estratégias multi-antígeno para aumentar a acurácia diagnóstica da leishmaniose visceral.

Evaluation of the performance of three serological tests for diagnosis of Leishmania infantum infection in dogs using latent class analysis / Avaliação da realização de três testes sorológicos para diagnóstico de infecção por Leishmania infantum em cães utilizando análise de classe latente

Canine leishmaniasis (CanL) is a disease caused by Leishmania infantum. Serological methods are the most common diagnostic techniques used for the diagnosis of the CanL. The objective of our study was to estimate the sensitivity and specificity of one in-house ELISA kit (ELISA UNIZAR) and three commercially available serological tests (MEGACOR Diagnostik GmbH) including an immunochromatographic rapid test (FASTest LEISH®), an immunofluorescent antibody test (MegaFLUO LEISH®) and an enzyme-linked immunosorbent assay (MegaELISA LEISH®), using latent class models in a Bayesian analysis. Two hundred fifteen serum samples were included. The highest sensitivity was achieved for FASTest LEISH® (99.38%), ELISA UNIZAR (99.37%), MegaFLUO LEISH® (99.36%) followed by MegaELISA LEISH® (98.49%). The best specificity was obtained by FASTest LEISH® (98.43%), followed by ELISA UNIZAR (97.50%), whilst MegaFLUO LEISH® and MegaELISA LEISH® obtained the lower specificity (91.94% and 91.93%, respectively). The results of present study indicate that the immunochromatographic rapid test evaluated FASTest LEISH® show similar levels of sensitivity and specificity to the quantitative commercial tests. Among quantitative serological tests, sensitivity and specificity were similar considering ELISA or IFAT techniques.(AU)

A leishmaniose canina (Lcan) é uma causada pela Leishmania infantum. Os métodos sorológicos são as técnicas diagnósticas mais utilizadas para o diagnóstico da leishmaniose canina. O objetivo do nosso estudo foi estimar a sensibilidade e a especificidade de um kit ELISA interno (ELISA UNIZAR) e de três testes sorológicos disponíveis comercialmente, feitos pelo mesmo fabricante (MEGACOR Diagnostik GmbH), incluindo um teste rápido imunocromatográfico (FASTest LEISH®), um teste de anticorpos imunofluorescentes (Megafluo LEISH®) e um ensaio de imunoabsorção enzimática (Megaelisa LEISH®), utilizando-se modelos de classe latentes numa análise bayesiana. Foram incluídas duzentas e quinze amostras de soro. A maior sensibilidade foi alcançada para Fastest LEISH® (99,38%), ELISA UNIZAR (99,37%), Megafluo LEISH® (99,36%) seguida por Megaelisa LEISH® (98,49%). A melhor especificidade foi obtida por FASTest LEISH® (98,43%), seguida por ELISA UNIZAR (97,50%), enquanto Megafluo LEISH® e Megaelisa LEISH® obtiveram a menor especificidade (91,94% e 91,93%, respectivamente). Os resultados do presente estudo indicam que o teste rápido imunocromatográfico, avaliado por FASTest LEISH® mostra níveis similares de sensibilidade e especificidade aos testes comerciais quantitativos incluídos. Entre os testes sorológicos quantitativos, a sensibilidade e a especificidade foram semelhantes, considerando-se as técnicas de ELISA ou IFI.(AU)

Evaluation of the performance of three serological tests for diagnosis of Leishmania infantum infection in dogs using latent class analysis / Avaliação da realização de três testes sorológicos para diagnóstico de infecção por Leishmania infantum em cães utilizando análise de classe latente

Abstract Canine leishmaniasis (CanL) is a disease caused by Leishmania infantum. Serological methods are the most common diagnostic techniques used for the diagnosis of the CanL. The objective of our study was to estimate the sensitivity and specificity of one in-house ELISA kit (ELISA UNIZAR) and three commercially available serological tests (MEGACOR Diagnostik GmbH) including an immunochromatographic rapid test (FASTest LEISH®), an immunofluorescent antibody test (MegaFLUO LEISH®) and an enzyme-linked immunosorbent assay (MegaELISA LEISH®), using latent class models in a Bayesian analysis. Two hundred fifteen serum samples were included. The highest sensitivity was achieved for FASTest LEISH® (99.38%), ELISA UNIZAR (99.37%), MegaFLUO LEISH® (99.36%) followed by MegaELISA LEISH® (98.49%). The best specificity was obtained by FASTest LEISH® (98.43%), followed by ELISA UNIZAR (97.50%), whilst MegaFLUO LEISH® and MegaELISA LEISH® obtained the lower specificity (91.94% and 91.93%, respectively). The results of present study indicate that the immunochromatographic rapid test evaluated FASTest LEISH® show similar levels of sensitivity and specificity to the quantitative commercial tests. Among quantitative serological tests, sensitivity and specificity were similar considering ELISA or IFAT techniques.

Resumo A leishmaniose canina (Lcan) é uma causada pela Leishmania infantum. Os métodos sorológicos são as técnicas diagnósticas mais utilizadas para o diagnóstico da leishmaniose canina. O objetivo do nosso estudo foi estimar a sensibilidade e a especificidade de um kit ELISA interno (ELISA UNIZAR) e de três testes sorológicos disponíveis comercialmente, feitos pelo mesmo fabricante (MEGACOR Diagnostik GmbH), incluindo um teste rápido imunocromatográfico (FASTest LEISH®), um teste de anticorpos imunofluorescentes (Megafluo LEISH®) e um ensaio de imunoabsorção enzimática (Megaelisa LEISH®), utilizando-se modelos de classe latentes numa análise bayesiana. Foram incluídas duzentas e quinze amostras de soro. A maior sensibilidade foi alcançada para Fastest LEISH® (99,38%), ELISA UNIZAR (99,37%), Megafluo LEISH® (99,36%) seguida por Megaelisa LEISH® (98,49%). A melhor especificidade foi obtida por FASTest LEISH® (98,43%), seguida por ELISA UNIZAR (97,50%), enquanto Megafluo LEISH® e Megaelisa LEISH® obtiveram a menor especificidade (91,94% e 91,93%, respectivamente). Os resultados do presente estudo indicam que o teste rápido imunocromatográfico, avaliado por FASTest LEISH® mostra níveis similares de sensibilidade e especificidade aos testes comerciais quantitativos incluídos. Entre os testes sorológicos quantitativos, a sensibilidade e a especificidade foram semelhantes, considerando-se as técnicas de ELISA ou IFI.

Genetic variability of Leishmania infantum in naturally infected dogs in the state of Bahia, Brazil / Variabilidade genética de Leishmania infantum em cães naturalmente infectados no estado da Bahia, Brasil

Abstract In Brazil, Leishmania infantum mainly affects humans and dogs. The state of Bahia presents many dogs that are positive for this parasite. Despite the importance of epidemiology in this region, there are still very few studies that have assessed the genetic characteristics of L. infantum. The aim of this study is to investigate the genetic variability of L. infantum isolated identified in naturally infected dogs, in order to verify occurrence of subpopulation of this parasite in the different biomes existing in the state of Bahia. Thirty-two samples of L. infantum were analyzed, which were obtained isolated in dogs from the Mata Atlântica (rainforest), Caatinga (semi-arid scrub forest), and Cerrado (a vast tropical savannah eco-region) Bahia municipalities' biomes. All animals presented with clinical changes suggestive of Leishmania spp. and they exhibited positive reactions to serological tests. kDNA analysis with RFLP markers revealed the presence of genetic variability and gene flow in subpopulations of L. infantum; samples from the Mata Atlântica areas were genetically more similar to those from the areas of Caatinga and they were less likely to resemble those of the Cerrado. This data may be used to investigate the dissemination of parasite in the canine population of state of Bahia.

Resumo No Brasil a Leishmania infantum afeta principalmente o homem e os cães. O estado da Bahia apresenta elevado número de cães positivos por este parasito. Apesar da importância epidemiologia para a região, ainda há poucos estudos que avaliam as características genéticas de L. infantum. Objetivou-se com este estudo investigar a variabilidade genética de cepas de L. infantum identificadas em cães naturalmente infectados, a fim de verificar a ocorrência de sobpopulações do parasito nos diferentes biomas existentes no estado da Bahia. Foram analisadas 32 amostras de L. infantum isoladas em cães de municípios baianos distribuídos nos biomas Mata Atlântica, Caatinga e Cerrado. Todos os animais apresentavam alterações clínicas sugestivas de Leishmania spp. e reação positiva em exames sorológicos. A análise do kDNA com marcadores RFLP revelaram a presença de variabilidade genética e fluxo gênico nas subpopulações de L. infantum sendo que as amostras das áreas de Mata Atlântica foram geneticamente mais semelhantes as das áreas de Caatinga e foram mais distantes daquelas oriundas do Cerrado. Estas informações podem auxiliar em investigações de dispersão do parasito na população canino do Estado da Bahia.

Neutrofilia e hipoalbuminemia em sangue periférico de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum / Neutrophilia and hypoalbuminemia in peripheral blood of dogs naturally infected by Leishmania infantum

O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil leucocitário e proteico de cães, naturalmente infectados por Leishmania infantum. Para tanto, foram realizados exame parasitológico de punção de medula e PCR em amostras de pele para identificação de Leishmania spp. e avaliação de sinais clínicos e dermatológicos, para categorizar e distribuir cães em três grupos: grupo controle (GC); Grupo positivo assintomático (GA) e grupo positivo sintomático (GS). Amostras De sangue foram coletadas para avaliação dos parâmetros hematológicos e bioquímicos. As principais manifestações clínicas observadas no GS foram alopecia, onicogrifose, ceratoconjuntivite e dermatites eritematosas, esfoliativas e ulcerativas. Os animais com a forma visceral (LVC) apresentaram alterações hematológicas significativas, compatíveis com descrições da literatura, com leucocitose significativa (p<0,05) do GS e do GA quando comparados ao GC, além de anemia no GS e GA, em relação ao GC. Também foram observadas hiperproteinemia, hipergamablobulinemia e hipoalbuminemia significativas em GS, quando comparadas aos demais grupos (p<0,05). A contagem diferencial leucocitária apontou para uma neutrofilia e linfopenia significativas do GS, quando comparadas aos demais grupos (p<0,05), Estando este resultado confirmado pela razão neutrófilo: linfócito aumentada (p<0,05). Ressalta-se um aumento de neutrófilos segmentados maduros no Leucograma, mas sem alterações significativas nos neutrófilos imaturos. Animais naturalmente infectados por L. infantum apresentaram leucocitose com neutrofilia e hipoalbuminemia características de alterações sistêmicas associadas a um processo inflamatório. Contudo, faz-se necessária uma investigação mais aprofundada, com um maior número de animais e com acompanhamento da LVC para avaliar a participação dos neutrófilos imaturos neste processo.(AU)

The Objective of this study was to evaluate the leukocyte and protein profile of dogs naturally infected by Leishmania Infantum. For that, a bone marrow parasitological test and PCR were performed to identify Leishmania spp. Evaluation of clinical and dermatological signs was used to categorize and distribute dogs in three groups: control group (CG); asymptomatic group (AG) and symptomatic group (SG). Blood samples were collected for evaluation of hematological and biochemical parameters.The Main clinical manifestations observed in SG were alopecia, onychogryphosis, keratoconjunctivitis and dermatitis. Leukocytosis and anemia were observed in SG and AG (p<0.05) when compared to CG. In SG were detected hyperproteinemia with hyperglobulinemia and hypoalbuminemia when compared to the other groups (p<0.05). The differential leukocytes count indicated neutrophilia and lymphopenia in SG when compared to AG and CG (p<0.05), and this result was confirmed bya neutrophil:lymphocyte ratio which was increased (p<0.05). We Highlight an increase of mature segmented neutrophils in GS, but there is no change in immature neutrophils. Thus, animals naturally infected by L. infantum presented leukocytosis with neutrophilia and hypoalbuminemia characteristic of systemic changes associated to inflammatory process. However, a more in-depth investigation with a larger number of animals and earlier follow-Up of CanL Animals is necessary to evaluate the participation of immature neutrophils in this process.(AU)

Genetic variability of Leishmania infantum in naturally infected dogs in the state of Bahia, Brazil / Variabilidade genética de Leishmania infantum em cães naturalmente infectados no estado da Bahia, Brasil

In Brazil, Leishmania infantum mainly affects humans and dogs. The state of Bahia presents many dogs that are positive for this parasite. Despite the importance of epidemiology in this region, there are still very few studies that have assessed the genetic characteristics of L. infantum. The aim of this study is to investigate the genetic variability of L. infantum isolated identified in naturally infected dogs, in order to verify occurrence of subpopulation of this parasite in the different biomes existing in the state of Bahia. Thirty-two samples of L. infantum were analyzed, which were obtained isolated in dogs from the Mata Atlântica (rainforest), Caatinga (semi-arid scrub forest), and Cerrado (a vast tropical savannah eco-region) Bahia municipalities biomes. All animals presented with clinical changes suggestive of Leishmania spp. and they exhibited positive reactions to serological tests. kDNA analysis with RFLP markers revealed the presence of genetic variability and gene flow in subpopulations of L. infantum; samples from the Mata Atlântica areas were genetically more similar to those from the areas of Caatinga and they were less likely to resemble those of the Cerrado. This data may be used to investigate the dissemination of parasite in the canine population of state of Bahia.(AU)

No Brasil a Leishmania infantum afeta principalmente o homem e os cães. O estado da Bahia apresenta elevado número de cães positivos por este parasito. Apesar da importância epidemiologia para a região, ainda há poucos estudos que avaliam as características genéticas de L. infantum. Objetivou-se com este estudo investigar a variabilidade genética de cepas de L. infantum identificadas em cães naturalmente infectados, a fim de verificar a ocorrência de sobpopulações do parasito nos diferentes biomas existentes no estado da Bahia. Foram analisadas 32 amostras de L. infantum isoladas em cães de municípios baianos distribuídos nos biomas Mata Atlântica, Caatinga e Cerrado. Todos os animais apresentavam alterações clínicas sugestivas de Leishmania spp. e reação positiva em exames sorológicos. A análise do kDNA com marcadores RFLP revelaram a presença de variabilidade genética e fluxo gênico nas subpopulações de L. infantum sendo que as amostras das áreas de Mata Atlântica foram geneticamente mais semelhantes as das áreas de Caatinga e foram mais distantes daquelas oriundas do Cerrado. Estas informações podem auxiliar em investigações de dispersão do parasito na população canino do Estado da Bahia.(AU)

Neutrofilia e hipoalbuminemia em sangue periférico de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum / Neutrophilia and hypoalbuminemia in peripheral blood of dogs naturally infected by Leishmania infantum

O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil leucocitário e proteico de cães, naturalmente infectados por Leishmania infantum. Para tanto, foram realizados exame parasitológico de punção de medula e PCR em amostras de pele para identificação de Leishmania spp. e avaliação de sinais clínicos e dermatológicos, para categorizar e distribuir cães em três grupos: grupo controle (GC); Grupo positivo assintomático (GA) e grupo positivo sintomático (GS). Amostras De sangue foram coletadas para avaliação dos parâmetros hematológicos e bioquímicos. As principais manifestações clínicas observadas no GS foram alopecia, onicogrifose, ceratoconjuntivite e dermatites eritematosas, esfoliativas e ulcerativas. Os animais com a forma visceral (LVC) apresentaram alterações hematológicas significativas, compatíveis com descrições da literatura, com leucocitose significativa (p<0,05) do GS e do GA quando comparados ao GC, além de anemia no GS e GA, em relação ao GC. Também foram observadas hiperproteinemia, hipergamablobulinemia e hipoalbuminemia significativas em GS, quando comparadas aos demais grupos (p<0,05). A contagem diferencial leucocitária apontou para uma neutrofilia e linfopenia significativas do GS, quando comparadas aos demais grupos (p<0,05), Estando este resultado confirmado pela razão neutrófilo: linfócito aumentada (p<0,05). Ressalta-se um aumento de neutrófilos segmentados maduros no Leucograma, mas sem alterações significativas nos neutrófilos imaturos. Animais naturalmente infectados por L. infantum apresentaram leucocitose com neutrofilia e hipoalbuminemia características de alterações sistêmicas associadas a um processo inflamatório. Contudo, faz-se necessária uma investigação mais aprofundada, com um maior número de animais e com acompanhamento da LVC para avaliar a participação dos neutrófilos imaturos neste processo.

The Objective of this study was to evaluate the leukocyte and protein profile of dogs naturally infected by Leishmania Infantum. For that, a bone marrow parasitological test and PCR were performed to identify Leishmania spp. Evaluation of clinical and dermatological signs was used to categorize and distribute dogs in three groups: control group (CG); asymptomatic group (AG) and symptomatic group (SG). Blood samples were collected for evaluation of hematological and biochemical parameters.The Main clinical manifestations observed in SG were alopecia, onychogryphosis, keratoconjunctivitis and dermatitis. Leukocytosis and anemia were observed in SG and AG (p<0.05) when compared to CG. In SG were detected hyperproteinemia with hyperglobulinemia and hypoalbuminemia when compared to the other groups (p<0.05). The differential leukocytes count indicated neutrophilia and lymphopenia in SG when compared to AG and CG (p<0.05), and this result was confirmed bya neutrophil:lymphocyte ratio which was increased (p<0.05). We Highlight an increase of mature segmented neutrophils in GS, but there is no change in immature neutrophils. Thus, animals naturally infected by L. infantum presented leukocytosis with neutrophilia and hypoalbuminemia characteristic of systemic changes associated to inflammatory process. However, a more in-depth investigation with a larger number of animals and earlier follow-Up of CanL Animals is necessary to evaluate the participation of immature neutrophils in this process.

Pathology of dogs in Campo Grande, MS, Brazil naturally co-infected with Leishmania infantum and Ehrlichia canis / Patologia de cães naturalmente coinfectados por Leishmania infantum e Ehrlichia canis em Campo Grande, MS, Brasil

Different parasites that commonly occur concomitantly can influence one another, sometimes with unpredictable effects. We evaluated pathological aspects of dogs naturally co-infected with Leishmania infantum and Ehrlichia canis. The health status of the dogs was investigated based on histopathological, hematological and biochemical analyses of 21 animals infected solely with L. infantum and 22 dogs co- infected with L. infantum and E. canis. The skin of both groups showed chronic, predominantly lymphohistioplasmacytic inflammatory reaction. The plasmacytosis in the lymphoid tissues was likely related with the hypergammaglobulinemia detected in all the dogs. The disorganization of extracellular matrix found in the reticular dermis of the inguinal region and ear, characterized by the substitution of thick collagen fibers for thin fibers, was attributed to the degree of inflammatory reaction, irrespective of the presence of parasites. In addition, the histopathological analysis revealed that twice as many dogs in the co-infected group presented Leishmania amastigotes in the ear skin than those infected solely with Leishmania, increasing the possibility of becoming infected through sand fly vectors. Our findings highlight the fact that the health of dogs infected concomitantly with L. infantum and E. canis is severely compromised due to their high levels of total plasma protein, globulins, alkaline phosphatase and creatine kinase, and severe anemia.

A infecção simultânea por parasitas de diferentes espécies pode resultar em alterações imprevisíveis. O presente estudo avaliou a patologia de cães naturalmente coinfectados por Leishmania infantum e Ehrlichia canis. A saúde dos cães foi investigada pelas análises histopatológicas, hematológicas e bioquímicas de 21 cães infectados somente por L. infantum e 22 cães coinfectados por L. infantum e E. canis. Observou-se uma reação inflamatória crônica, predominantemente linfohistioplasmocítica, na pele dos dois grupos. A plasmocitose, encontrada nos tecidos linfóides, provavelmente estava relacionada com a hipergamaglobulinemia observada em todos os cães amostrados. A desorganização da matriz extracelular da derme da região inguinal e da orelha, demonstrada pela substituição das fibras de colágeno espessas por fibras finas, foi relacionada com o grau de reação inflamatória, independente da presença de parasitas. Ainda, observamos duas vezes mais animais do grupo coinfectado apresentando formas amastigotas na pele de orelha pela histopatologia comparado ao número de cães infectados apenas por Leishmania, tornando-os desta forma mais infectivos aos vetores. Nossos resultados ressaltam que a saúde de cães coinfectados estava severamente comprometida devido aos altos níveis de proteína plasmática total, globulinas, fosfatase alcalina, creatina quinase e anemia acentuada.

Pathology of dogs in Campo Grande, MS, Brazil naturally co-infected with Leishmania infantum and Ehrlichia canis / Patologia de cães naturalmente coinfectados por Leishmania infantum e Ehrlichia canis em Campo Grande, MS, Brasil

Different parasites that commonly occur concomitantly can influence one another, sometimes with unpredictable effects. We evaluated pathological aspects of dogs naturally co-infected with Leishmania infantum and Ehrlichia canis. The health status of the dogs was investigated based on histopathological, hematological and biochemical analyses of 21 animals infected solely with L. infantum and 22 dogs co- infected with L. infantum and E. canis. The skin of both groups showed chronic, predominantly lymphohistioplasmacytic inflammatory reaction. The plasmacytosis in the lymphoid tissues was likely related with the hypergammaglobulinemia detected in all the dogs. The disorganization of extracellular matrix found in the reticular dermis of the inguinal region and ear, characterized by the substitution of thick collagen fibers for thin fibers, was attributed to the degree of inflammatory reaction, irrespective of the presence of parasites. In addition, the histopathological analysis revealed that twice as many dogs in the co-infected group presented Leishmania amastigotes in the ear skin than those infected solely with Leishmania, increasing the possibility of becoming infected through sand fly vectors. Our findings highlight the fact that the health of dogs infected concomitantly with L. infantum and E. canis is severely compromised due to their high levels of total plasma protein, globulins, alkaline phosphatase and creatine kinase, and severe anemia.

A infecção simultânea por parasitas de diferentes espécies pode resultar em alterações imprevisíveis. O presente estudo avaliou a patologia de cães naturalmente coinfectados por Leishmania infantum e Ehrlichia canis. A saúde dos cães foi investigada pelas análises histopatológicas, hematológicas e bioquímicas de 21 cães infectados somente por L. infantum e 22 cães coinfectados por L. infantum e E. canis. Observou-se uma reação inflamatória crônica, predominantemente linfohistioplasmocítica, na pele dos dois grupos. A plasmocitose, encontrada nos tecidos linfóides, provavelmente estava relacionada com a hipergamaglobulinemia observada em todos os cães amostrados. A desorganização da matriz extracelular da derme da região inguinal e da orelha, demonstrada pela substituição das fibras de colágeno espessas por fibras finas, foi relacionada com o grau de reação inflamatória, independente da presença de parasitas. Ainda, observamos duas vezes mais animais do grupo coinfectado apresentando formas amastigotas na pele de orelha pela histopatologia comparado ao número de cães infectados apenas por Leishmania, tornando-os desta forma mais infectivos aos vetores. Nossos resultados ressaltam que a saúde de cães coinfectados estava severamente comprometida devido aos altos níveis de proteína plasmática total, globulinas, fosfatase alcalina, creatina quinase e anemia acentuada.

Complement activation-related pseudoallergy in dogs following intravenous administration of a liposomal formulation of meglumine antimoniate / Pseudoalergia relacionada à ativação do complemento em cães após administração intravenosa de uma formulação lipossomal de antimoniato de meglumina

The increasing use of nanotechnologies in advanced therapies has allowed the observation of specific adverse reactions related to nanostructures. The toxicity of a novel liposome formulation of meglumine antimoniate in dogs with visceral leishmaniasis after single dose has been investigated. Groups of 12 animals received by the intravenous route a single dose of liposomal meglumine antimoniate (group I [GI], 6.5 mg Sb/kg), empty liposomes (GII) or isotonic saline (GIII). Evaluation of hematological and biochemical parameters showed no significant changes 4 days after administration. No undesired effects were registered in the GIII. However, adverse reactions were observed in 67.7% of dogs from both groups that received liposomal formulations. The side effects began moments after bolus administration and disappeared during the first 15 minutes after treatment. Prostation, sialorrhea and defecation were the most frequent clinical signs, registered in 33.3% and 41.6 % of animals from the groups GI and GII, respectively. Tachypnea, mydriasis, miosis, vomiting and cyanosis were also registered in both groups. The adverse reactions observed in this study were attributed to the activation of the complement system by lipid vesicles in a phenomenon known as Complement Activation-Related Pseudoallergy (CARPA). The influence of the physical-chemical characteristics of liposomal formulation in the triggering of CARPA is discussed.(AU)

O crescente uso das nanotecnologias nas terapias avançadas tem permitido a observação de reações adversas específicas relacionadas às nanoestruturas. A toxicidade de uma nova formulação lipossomal de antimoniato de meglumina após dose única foi avaliada em cães com leishmaniose visceral. Grupos de 12 animais receberam por via intravenosa uma dose única de antimoniato de meglumina lipossomal (grupo I [GI], 6,5 mg Sb/kg), lipossomas vazios (GII) ou solução salina isotônica (GIII). A avaliação de parâmetros hematológicos e bioquímicos não revelou alterações significativas quatro dias após a administração. Nenhum efeito indesejável foi registrado no GIII. No entanto, reações adversas foram observadas em 67,7% dos cães de ambos os grupos que receberam formulações lipossomais. Os efeitos colaterais iniciaram momentos após a administração em "bolus" e desapareceram no decurso dos primeiros 15 minutos após o tratamento. Prostração, sialorréia e defecação foram os sinais clínicos mais frequentes, registrados em 33,3% e 41,6% dos animais dos grupos GI e GII, respectivamente. Taquipnéia, midríase, miose, vômitos e cianose também foram registrados em ambos os grupos. As reações adversas observadas neste trabalho foram atribuídas à ativação do sistema complemento pelas vesículas lipídicas em fenômeno conhecido como Pseudoalergia Relacionada à Ativação do Complemento (PARAC). A influência das características físico-químicas da formulação lipossomal no desencadeamento de PARAC é abordada.(AU)

Complement activation-related pseudoallergy in dogs following intravenous administration of a liposomal formulation of meglumine antimoniate / Pseudoalergia relacionada à ativação do complemento em cães após administração intravenosa de uma formulação lipossomal de antimoniato de meglumina

The increasing use of nanotechnologies in advanced therapies has allowed the observation of specific adverse reactions related to nanostructures. The toxicity of a novel liposome formulation of meglumine antimoniate in dogs with visceral leishmaniasis after single dose has been investigated. Groups of 12 animals received by the intravenous route a single dose of liposomal meglumine antimoniate (group I [GI], 6.5 mg Sb/kg), empty liposomes (GII) or isotonic saline (GIII). Evaluation of hematological and biochemical parameters showed no significant changes 4 days after administration. No undesired effects were registered in the GIII. However, adverse reactions were observed in 67.7% of dogs from both groups that received liposomal formulations. The side effects began moments after bolus administration and disappeared during the first 15 minutes after treatment. Prostation, sialorrhea and defecation were the most frequent clinical signs, registered in 33.3% and 41.6 % of animals from the groups GI and GII, respectively. Tachypnea, mydriasis, miosis, vomiting and cyanosis were also registered in both groups. The adverse reactions observed in this study were attributed to the activation of the complement system by lipid vesicles in a phenomenon known as Complement Activation-Related Pseudoallergy (CARPA). The influence of the physical-chemical characteristics of liposomal formulation in the triggering of CARPA is discussed.

O crescente uso das nanotecnologias nas terapias avançadas tem permitido a observação de reações adversas específicas relacionadas às nanoestruturas. A toxicidade de uma nova formulação lipossomal de antimoniato de meglumina após dose única foi avaliada em cães com leishmaniose visceral. Grupos de 12 animais receberam por via intravenosa uma dose única de antimoniato de meglumina lipossomal (grupo I [GI], 6,5 mg Sb/kg), lipossomas vazios (GII) ou solução salina isotônica (GIII). A avaliação de parâmetros hematológicos e bioquímicos não revelou alterações significativas quatro dias após a administração. Nenhum efeito indesejável foi registrado no GIII. No entanto, reações adversas foram observadas em 67,7% dos cães de ambos os grupos que receberam formulações lipossomais. Os efeitos colaterais iniciaram momentos após a administração em "bolus" e desapareceram no decurso dos primeiros 15 minutos após o tratamento. Prostração, sialorréia e defecação foram os sinais clínicos mais frequentes, registrados em 33,3% e 41,6% dos animais dos grupos GI e GII, respectivamente. Taquipnéia, midríase, miose, vômitos e cianose também foram registrados em ambos os grupos. As reações adversas observadas neste trabalho foram atribuídas à ativação do sistema complemento pelas vesículas lipídicas em fenômeno conhecido como Pseudoalergia Relacionada à Ativação do Complemento (PARAC). A influência das características físico-químicas da formulação lipossomal no desencadeamento de PARAC é abordada.

Perfil sócio-econômico e conhecimento sobre Leishmaniose de proprietários de cães da cidade de Fortaleza, Ceará, Brasil / Socio-economic profile and knowledge about leishmaniasis of dog owners in the city of Fortaleza, Ceara, Brazil

Este trabalho tem como objetivo avaliar o perfil sócio-econômico e o conhecimento de proprietários de cães no município de Fortaleza, Ceará, sobre leishmaniose visceral, nas regionais com maior (SER V) e menor prevalência (SER III) de leishmaniose canina. Para tanto, um questionário foi empregado a 200 proprietários de cães, residentes nas SER III (n=100) e V (n=100). O questionário constou de nove perguntas sobre os cães domiciliados e cinco sobre os dados sócio-econômicos dos proprietários, feito em teste-reteste com avaliação de concordância entre os resultados, além de cinco que envolviam o conhecimento sobre leishmanioses pelo entrevistado. Os moradores da SER III informaram que a maioria dos domicílios possui apenas um cão de companhia com raça definida, vivendo no domicílio, diferente do relatado pelos moradores da SER V. Os entrevistados da SER III informaram que o tipo de residência é predominantemente apartamento, sem crianças, possuem nível superior e renda familiar superior a três salários mínimos, enquanto na SER V predominam casas com crianças, nível Fundamental/Médio e renda igual ou menor que três salários mínimos. Os resultados demonstram que o índice de concordância das respostas para as variáveis em estudo foi considerado excelente, além de explicar a maior prevalência da leishmaniose canina na SER V, relatada em estudo anterior. Conclui-se que a população tem conhecimento sobre leishmanioses, com destaque para SER III e que os dados do perfil sócio-econômico e do conhecimento da população podem auxiliar em políticas de saúde pública para a prevenção e controle de doenças, como as leishmanioses(AU)

This study aims to evaluate the socio-economic profile and knowledge of the population of Fortaleza, about leishmaniasis, in regional with the biggest (SER V) and the lowest prevalence (SER III) of canine leishmaniasis. Thus, a questionnaire was used to 200 dog owners living in SER III (n = 100) and SER V (n = 100). The questionnaire consisted of nine questions about housed dogs and five about the socio-economic data of the owners, made in the test-retest with assessment of agreement between the results, and five that involved the knowledge about leishmaniasis by the interviewee. In SER III, the most of interviewee have only one companion dog with defined breed, living at home. Occurs at different in SER V. In addition, the respondents reported that in SER III, the type of residence is predominantly flat, with no children, have higher education and family income above three minimum wages, and while in SER V predominate homes with children, at elementary /middle education and income equal to or less than three minimum wages. The results show that the rate of agreement between responses to the variables under study was considered excellent, and explain the higher prevalence of canine leishmaniasis in SER V, reported in the previous study. It follows that the population has knowledge of leishmaniasis, especially SER III and the data of socio-economic profile of the population and knowledge can assist in public health policies for prevention and control of diseases such as leishmaniasis.(AU)

Perfil sócio-econômico e conhecimento sobre Leishmaniose de proprietários de cães da cidade de Fortaleza, Ceará, Brasil / Socio-economic profile and knowledge about leishmaniasis of dog owners in the city of Fortaleza, Ceara, Brazil

Este trabalho tem como objetivo avaliar o perfil sócio-econômico e o conhecimento de proprietários de cães no município de Fortaleza, Ceará, sobre leishmaniose visceral, nas regionais com maior (SER V) e menor prevalência (SER III) de leishmaniose canina. Para tanto, um questionário foi empregado a 200 proprietários de cães, residentes nas SER III (n=100) e V (n=100). O questionário constou de nove perguntas sobre os cães domiciliados e cinco sobre os dados sócio-econômicos dos proprietários, feito em teste-reteste com avaliação de concordância entre os resultados, além de cinco que envolviam o conhecimento sobre leishmanioses pelo entrevistado. Os moradores da SER III informaram que a maioria dos domicílios possui apenas um cão de companhia com raça definida, vivendo no domicílio, diferente do relatado pelos moradores da SER V. Os entrevistados da SER III informaram que o tipo de residência é predominantemente apartamento, sem crianças, possuem nível superior e renda familiar superior a três salários mínimos, enquanto na SER V predominam casas com crianças, nível Fundamental/Médio e renda igual ou menor que três salários mínimos. Os resultados demonstram que o índice de concordância das respostas para as variáveis em estudo foi considerado excelente, além de explicar a maior prevalência da leishmaniose canina na SER V, relatada em estudo anterior. Conclui-se que a população tem conhecimento sobre leishmanioses, com destaque para SER III e que os dados do perfil sócio-econômico e do conhecimento da população podem auxiliar em políticas de saúde pública para a prevenção e controle de doenças, como as leishmanioses

This study aims to evaluate the socio-economic profile and knowledge of the population of Fortaleza, about leishmaniasis, in regional with the biggest (SER V) and the lowest prevalence (SER III) of canine leishmaniasis. Thus, a questionnaire was used to 200 dog owners living in SER III (n = 100) and SER V (n = 100). The questionnaire consisted of nine questions about housed dogs and five about the socio-economic data of the owners, made in the test-retest with assessment of agreement between the results, and five that involved the knowledge about leishmaniasis by the interviewee. In SER III, the most of interviewee have only one companion dog with defined breed, living at home. Occurs at different in SER V. In addition, the respondents reported that in SER III, the type of residence is predominantly flat, with no children, have higher education and family income above three minimum wages, and while in SER V predominate homes with children, at elementary /middle education and income equal to or less than three minimum wages. The results show that the rate of agreement between responses to the variables under study was considered excellent, and explain the higher prevalence of canine leishmaniasis in SER V, reported in the previous study. It follows that the population has knowledge of leishmaniasis, especially SER III and the data of socio-economic profile of the population and knowledge can assist in public health policies for prevention and control of diseases such as leishmaniasis.