Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) na diferenciação entre a dermatite de contato alérgica e de contato irritante: um estudo da expressão de marcadores de superfície de linfócitos T / Local Lymph node assay in the differentiation between an allergic contact dermatitis and irritation: study of the expression of T lymphocyte surface markers

Introdução: O ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. O teste é utilizado com o objetivo de identificar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares. Embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas, o LLNA ainda necessita de aprimoramento. Objetivo: O objetivo do trabalho foi estudar possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e dermosensibilizantes. Método: Os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD), os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por três dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e possíveis alterações histopatológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Resultados: Foram observadas diferenças nas células CD4+CD25+ e CD4+CD69+, assim como na proliferação dessas subpopulações. Nenhuma diferença foi vista nos estudos histopatológicos das orelhas dos animais quando tratados com dermosensibilizantes ou irritantes. Conclusões: A fenotipagem de linfócitos T pode ser considerada útil no desenvolvimento de possíveis protocolos de ensaios que visem a diferenciação entre substâncias dermosensibilizantes e irritantes. Além disso, os resultados obtidos podem vir a contribuir com o aumento do conhecimento nesta área e auxiliar na busca por um ensaio in vitro correlato.

Introduction: The Local Lymph Node Assay (LLNA) was developed as an alternative to Buhler and Maximization assays. It is applied to discriminate substances that are able to induce contact dermatitis and the endpoint is cell quantification in mice auricular lymph nodes. Although recommended by international agencies involved in the development of alternative methodologies, LLNA still needs to be improved. Objective: In this context, the goal of this study was to investigate possible differences in lymphocyte subpopulation patterns among mice treated with irritants and dermosensitizers. Method: Animals were treated with sensitizers dinitrochlorobenzene (DNCB) and paraphenylenediamine (PPD) and irritants sodium lauryl sulfate (SLS) and tritonX-100 (TX-100) for 3 days, using dorsum area of both ears. The percentage of different lymphocyte subpopulations were analyzed by flow cytometry. Ears of animals were also evaluated for possible pathological alterations. Results: Differences were observed in CD4+ CD25+ and CD4+ CD69+ cells, as well as in the proliferation of these subpopulations. The histopathological analysis of the ears showed no difference between the treatment with either dermosensitizers or irritants. Conclusions: T lymphocyte phenotyping might still be a useful tool in the development of an assay to differentiate between dermosensitizers and irritants. Moreover, these results may contribute to improving knowledge on this field and helping in the search of a correlate in vitro assay.

Somatic cell count obtained by Ekomilk Scan® and correlations with other methods of analysis / Contagem de células somáticas obtidas pelo equipamento Ekomilk Scan ® e suas correlações com outros métodos de análise

ABSTRACT: The study aimed to evaluate the equipment Ekomilk Scan® as an alternative to somatic cell count (SCC) in milk. For this individual cow milk samples of various ages and different stages of lactation in northeastern state of São Paulo region were collected. The analyzes performed were divided into variables related to the equipment: repeatability and reproducibility, and variables that could influencing the results as: use of preservatives, temperature, time between collection and analysis, breed and milk composition, besides analysis to relate the Ekomilk Scan® with the standard method-direct microscopy and reference-flow cytometry. As the result, for samples analysis, it shouldn't be added preservative and these should be conducted on the same day of collection; however, temperature sample did not significantly influence results. Furthermore, Ekomilk Scan® did not show good correlation of results with the method of direct microscopy; however, it was necessary to generate equations for a positive correlation between flow cytometry and Ekomilk Scan®. Therefore, it is concluded that the equipment tested is not accurate but it can be an alternative for SCC monitoring in productive units since it uses calibration equations of results.

RESUMO: O estudo objetivou avaliar o equipamento Ekomilk Scan® como uma alternativa para a contagem de células somáticas (CCS) no leite. Para isso, foram colhidas amostras individuais de leite de vaca de várias idades em diferentes estágios de lactação na região nordeste do estado de São Paulo. Foram realizadas análises referentes ao equipamento como repetibilidade e reprodutibilidade, e de variavéis que poderiam influenciar no resultado. Dentre elas: uso de conservante, temperatura, tempo entre a colheita e análise, raça e composição do leite, além de análises visando correlacionar o Ekomilk Scan® com o método padrão-microscopia direta e de referência-citometria de fluxo. Como resultado, foi observado que para as análises das amostras não se deve acrescentar conservante e estas devem ser realizadas no mesmo dia da colheita, porém a temperatura da amostra não possui influencia significativa nos resultados. O Ekomilk Scan® não demonstrou boa correlação dos resultados com o método de microscopia direta e citometria de fluxo, sendo necessário gerar equações para uma correlação positiva entre os métodos. Assim, conclui-se que o equipamento testado não apresenta resultados precisos, contudo pode ser uma alternativa para o monitoramento da CCS em unidades produtivas desde que utilize equações de calibração dos resultados.

ELISA and modified toxin-binding inhibition test for quality control of the clostridial vaccine processes / ELISA direto e ToBI-test modificado para o controle de qualidade de processos de vacinas clostridiais

This study aimed to assess and standardize the ELISA and modified ToBI test in vitro methods in order to verify the potency of epsilon toxicoid in comparison with the in vivo TCP method. The following epsilon toxoids were used: NIBSC standard from batches 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 and 378/07. These were evaluated using a TCP test, ELISA and ToBI tests. The results indicate that the correlation ratio between the dilutions of standard NIBSC toxicoid and absorbance values of 89.44% obtained with the ELISA method support the use of the curve to evaluate epsilon toxoids. However, it was observed that the absorbance values were similar for all toxoids, thus presenting no significant difference between higher and lower concentration toxoids. For the ToBI test, the correlation ratio of 96.76, obtained in the curve pattern, demonstrates the effectiveness of the curve to be used in the epsilon toxoid evaluation. The correlation ratio between the titration degrees of toxoids obtained through TCP and ToBI tests was higher than 90%. It is concluded that the type of ELISA test used does present discriminative power for toxoids with different concentrations, which does not support the use of this technique for such a purpose. The ToBI test can be used as a screening method for it is sensitive and effective to detect epsilon toxicoid produced by C. perfringens type D...

Teve-se por objetivo avaliar e padronizar as metodologias in vitro, ELISA e ToBI-test modificado, para a análise de toxoide épsilon, em comparação com a metodologia in vivo TCP. Foram utilizados os seguintes toxoides épsilon: padrão NIBSC e os lotes 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 e 378/07, os quais foram avaliados por métodos in vivo, TCP, e in vitro, ELISA e ToBI-test. A análise do título de toxoide épsilon por meio dos métodos in vitro foi realizada a partir de uma curva-padrão, estabelecida previamente. Os principais resultados mostram que os valores de absorbância foram semelhantes para todos os toxoides, não apresentando diferença significativa entre os toxoides mais concentrados e menos concentrados. No ToBI-test, o coeficiente de correlação de 96,76%, obtido na curva-padrão, demonstra a eficiência da curva para avaliação do toxoide épsilon. O coeficiente de correlação entre os títulos de toxoide obtidos pelo TCP e ToBI-test foi superior a 90%. Conclui-se que o tipo de ELISA utilizado não apresenta poder discriminativo para toxoides com diferentes concentrações, inviabilizando a técnica para esse fim. O ToBI-test pode ser utilizado como um método de triagem sensível e eficaz para a detecção de toxoide épsilon de C. perfringens tipo D...

Determinación cuantitativa de enterococos en aguas utilizando un método cromogénico alternativo / Quantitative determination of enterococci in water using an alternative chromogenic method

Introducción: el control de la calidad de las aguas es vital para la protección de la salud humana y la biodiversidad en el ambiente acuático. Varios microorganismos son utilizados como indicadores de contaminación fecal para este propósito, dentro de ellos los enterococos son considerados buenos indicadores, porque sobreviven más tiempo ante condiciones adversas en la naturaleza. Objetivos: evaluar la capacidad de un nuevo método cromogénico alternativo para la detección y enumeración de enterococos en aguas por la técnica de filtración por membrana, en comparación con el método estándar ISO 7899:2. Métodos: se recolectaron muestras de aguas de tres orígenes diferentes para determinar su calidad. Las muestras se ensayaron en paralelo por las dos metodologías (alternativa y referencia), empleando la técnica de filtración por membrana. Para evaluar el desempeño de los métodos se determinaron varios parámetros: sensibilidad, especificidad, exactitud, porcentaje de falsos positivos, porcentaje de falsos negativos, índice kappa. Los tres primeros parámetros se calcularon para ambos métodos antes y después de la confirmación por pruebas bioquímicas. Los resultados se analizaron desde el punto de vista estadístico, teniendo en cuenta los principales criterios definidos en las normas ISO 16140 e ISO 177994. Resultados: con el método alternativo los resultados se obtuvieron a las 24 h, estos mostraron valores de sensibilidad (99 por ciento) y exactitud (98 por ciento) más elevados que con el de referencia (97 por ciento y 97 por ciento, respectivamente), el cual demoró más de 48 h. La eficiencia y exactitud de ambos métodos fue similar y se obtuvo una concordancia entre ellos casi perfecta (kappa = 0,96) con el total de las muestras de aguas ensayadas...

Introduction: water quality control is essential for the protection of human health and biodiversity in the aquatic environment. For this purpose, several microorganisms are used as indicators of fecal contamination. Among them are enterococci, which are considered to be good indicators, since they survive for a longer time in adverse natural conditions. Objectives: evaluate the suitability of a new alternative chromogenic method for the detection and enumeration of enterococci in water by membrane filtration technique, in comparison with the ISO 7899:2 standard method. Methods: water samples were collected from three different sources to determine their quality. The samples were assayed in parallel with the two methodologies (alternative and reference) using the membrane filtration technique. The following parameters were determined to evaluate the performance of the methods: sensitivity, specificity, accuracy, percentage of false positives, percentage of false negatives, kappa index. The first three parameters were estimated for both methods before and after confirmation by biochemical testing. Results were analyzed statistically based on the main criteria defined by ISO standards 16140 and 177994. Results: with the alternative method, results were obtained at 24 h, whereas the reference method required more than 48 h. Sensitivity and accuracy were higher with the alternative method (99 percent and 98 percent, respectively) than with the reference method (97 percent and 97 percent, respectively). Both methods had similar efficiency and accuracy, with almost perfect concordance between them (kappa = 0.96) in all the water samples tested...

Determinación cuantitativa de enterococos en aguas utilizando un método cromogénico alternativo / Quantitative determination of enterococci in water using an alternative chromogenic method

INTRODUCCIÓN: el control de la calidad de las aguas es vital para la protección de la salud humana y la biodiversidad en el ambiente acuático. Varios microorganismos son utilizados como indicadores de contaminación fecal para este propósito, dentro de ellos los enterococos son considerados buenos indicadores, porque sobreviven más tiempo ante condiciones adversas en la naturaleza. OBJETIVOS: evaluar la capacidad de un nuevo método cromogénico alternativo para la detección y enumeración de enterococos en aguas por la técnica de filtración por membrana, en comparación con el método estándar ISO 7899:2. MÉTODOS: se recolectaron muestras de aguas de tres orígenes diferentes para determinar su calidad. Las muestras se ensayaron en paralelo por las dos metodologías (alternativa y referencia), empleando la técnica de filtración por membrana. Para evaluar el desempeño de los métodos se determinaron varios parámetros: sensibilidad, especificidad, exactitud, porcentaje de falsos positivos, porcentaje de falsos negativos, índice kappa. Los tres primeros parámetros se calcularon para ambos métodos antes y después de la confirmación por pruebas bioquímicas. Los resultados se analizaron desde el punto de vista estadístico, teniendo en cuenta los principales criterios definidos en las normas ISO 16140 e ISO 177994. RESULTADOS: con el método alternativo los resultados se obtuvieron a las 24 h, estos mostraron valores de sensibilidad (99 %) y exactitud (98 %) más elevados que con el de referencia (97 % y 97 %, respectivamente), el cual demoró más de 48 h. La eficiencia y exactitud de ambos métodos fue similar y se obtuvo una concordancia entre ellos casi perfecta (kappa = 0,96) con el total de las muestras de aguas ensayadas. CONCLUSIONES: los resultados alcanzados indican que el método alternativo es eficiente para el recuento de enterococos provenientes de diferentes tipos de muestras de agua. Resulta además un método simple, más rápido y económicamente factible.

INTRODUCTION: water quality control is essential for the protection of human health and biodiversity in the aquatic environment. For this purpose, several microorganisms are used as indicators of fecal contamination. Among them are enterococci, which are considered to be good indicators, since they survive for a longer time in adverse natural conditions. OBJECTIVES: evaluate the suitability of a new alternative chromogenic method for the detection and enumeration of enterococci in water by membrane filtration technique, in comparison with the ISO 7899:2 standard method. METHODS: water samples were collected from three different sources to determine their quality. The samples were assayed in parallel with the two methodologies (alternative and reference) using the membrane filtration technique. The following parameters were determined to evaluate the performance of the methods: sensitivity, specificity, accuracy, percentage of false positives, percentage of false negatives, kappa index. The first three parameters were estimated for both methods before and after confirmation by biochemical testing. Results were analyzed statistically based on the main criteria defined by ISO standards 16140 and 177994. RESULTS: with the alternative method, results were obtained at 24 h, whereas the reference method required more than 48 h. Sensitivity and accuracy were higher with the alternative method (99 % and 98 %, respectively) than with the reference method (97% and 97%, respectively). Both methods had similar efficiency and accuracy, with almost perfect concordance between them (kappa = 0.96) in all the water samples tested. CONCLUSIONS: results show that the alternative method is efficient for the enumeration of enterococci from different types of water samples. It is also a simple, faster and economically feasible method.

Controle alternativo de helmintos de Astyanax cf. zonatus utilizando fitoterapia com sementes de abóbora (Cucurbita maxima) e mamão (Carica papaya) / Alternative control of helminthes, parasites of Astyanax cf. zonatus, using phytotherapy with seeds of Cucurbita maxima and Carica papaya

O objetivo do trabalho foi avaliar a eficácia de sementes de abóbora e mamão desidratadas e moídas, no controle de helmintos parasitos de Astyanax cf. zonatus. Sessenta peixes foram distribuídos em doze recipientes, um peixe/litro. O experimento constituiu de quatro tratamentos e três repetições: TJ = peixes deixados em jejum; TRC = peixes alimentados com ração comercial; TSA = peixes alimentados ad libitum com abóbora, e TSM = peixes alimentados ad libitum com mamão. Após sete dias de alimentação, todos os peixes foram pesados, e o sangue foi retirado para extensão sanguínea. A eficácia foi determinada, verificando a presença de parasitos nas brânquias, no estômago e no intestino. Os peixes do TJ e TSM apresentaram perda de peso (39 por cento e 25 por cento, respectivamente). O TSA apresentou melhor eficácia no controle de nematóides do intestino e do estômago (95,26 por cento e 92,48 por cento). No controle de monogenéticos TSM promoveu 72 por cento de eficácia. Na hematologia observou-se aumento de monócitos nos peixes do TSM e os valores de eosinofilos diminuíram nos tratamentos TSA, TSM e TRC. Assim pode-se concluir que a alimentação com abóbora pode ser utilizado como um controle alternativo eficaz de nematóides intestinais do lambari.

The objective of this study was to evaluate the effectiveness of an alternative method with pumpkin and papaya seeds, dried and ground, for control of helminth parasites of Astyanax cf. zonatus. Sixty fish were distributed into twelve containers, with one fish/liter. The experiment consisted of four treatments and three replications: TJ = fish in fasting; TRC = fish fed with commercial diet; TSA = fish fed ad libitum with pumpkin seed, and TSM = fish fed ad libitum with papaya seeds. After seven days of feeding, all fish were weighed and blood was taken for blood smears. Efficacy was determined by checking the presence of parasites in the gills, stomach and intestine, in 40 percent of fishes per treatment (n=6). TJ and TSM showed 39 percent and 25 percent of weight loss respectively. The TSA showed better efficacy against the nematode in intestine and stomach (95.26 percent and 92.48 percent). The TSM promoted 72 percent of efficiency on monogeneans control. Hematology revealed an increase of monocyte values to treatment TSM. A decrease of eosinophil values was observed in treatments TSA, TSM and TRC. Thus, feeding fishes with pumpkin is a effective alternative method of low cost for control of nematodes in Astianax cf. zonatus.

Alternative method for quantification of alfa-amylase activity / Alternativa para quantificação de alfa-amilase

A modification of the sensitive agar diffusion method was developed for macro-scale determination of alfa-amylase. The proposed modifications lower costs with the utilisation of starch as substrate and agar as supporting medium. Thus, a standard curve was built using alfa-amylase solution from Aspergillus oryzae, with concentrations ranging from 2.4 to 7,500 U.mL-1. Clear radial diffusion zones were measured after 4 hours of incubation at 20 °C. A linear relationship between the logarithm of enzyme activities and the area of clear zones was obtained. The method was validated by testing α-amylase from barley at the concentrations of 2.4; 60; 300 and 1,500 U.mL-1. The proposed method turned out to be simpler, faster, less expensive and able to determine on a macro-scale α-amylase over a wide range (2.4 to 7,500 U.mL-1) in scientific investigation as well as in teaching laboratory activities.

Modificações foram propostas ao método sensível de difusão em ágar para a macrodeterminação de alfa-amilase. As modificações propostas diminuem os custos, com a utilização de amido como substrato e ágar como meio solidificante. Assim, foi construída uma curva padrão utilizando uma solução de alfa-amilase de Aspergillus oryzae com concentrações variando de 2,4 a 7.500 U.mL-1. Em seguida, as zonas claras de difusão radial foram mensuradas depois de 4 horas de incubação a 20 °C. Foi obtida uma relação linear entre o logaritmo da atividade enzimática e os diâmetros das zonas claras. O método foi validado utilizando-se soluções de alfa-amilase de cevada nas concentrações de 2,4; 60; 300 e 1.500 U.mL-1. O método tornou-se mais simples, rápido, com baixo custo e passível de ser utilizado para macrodeterminação de alfa-amilase em ampla faixa (2,4 a 7.500 U.mL-1) na investigação científica e para fins didáticos em aulas práticas.

El uso de rayos láser como método alternativo en odontología / The use of lasers as an alternative method in dentistry

La odontología con el correr de los años ha evolucionado a grandes pasos, podemos ver como ejemplo de la evolución de la odontología, de cómo esta ha pasado desde la confección de las coronas talladas por nuestros antepasados, siguiendo con las coronas coladas en metal, hasta llegar a las que posiblemente son lo ultimo hoy en día como son los ceromeros. Así también podemos citar otro ejemplo de avances en la odontología, desde que se crearon los primeros taladros que trabajaban a base de cuerdas y los taladros neumáticos que alcanzan a trabajar hasta 300,000 rpm. Posiblemente la pieza de mano tendrá que ceder espacio en el consultorio; sin ser sustituida hasta este momento, en determinados procedimientos, por lo nuevo de la tecnología como lo es el rayo láser. Posiblemente el rayo láser no realice todo lo que el profesional en odontología quisiera que realizara, pero este conlleva un gran avance en la ciencia, podemos decir también que el láser no solo reemplazara; en determinados procedimientos a la pieza de mano en el consultorio, sino que también ha llegado para sustituir elementos tan importantes como el bisturí quirúrgico y la lámpara de fotocurado; también observamos cómo este empieza a ganar terreno en el consultorio dental, dando una mayor cantidad de opciones de tratamientos al odontólogo, debiendo este reconocer sus bondades; pero también debemos de ser capaces de reconocer sus alcances y sus limitaciones Por el momento basta con resumir que el presente trabajo fue realizado para despejar las dudas en cuanto al alcance que podría tener el rayo láser para la preparación de cavidades para ser obturadas con diversos materiales y el alcance que este podría tener en las preparaciones de prótesis parcial fija, dadas las exigencias de los pacientes y las normas de trabajo rigurosas que se presentan en el consultorio dental, actualmente se presenta el siguiente trabajo con el afán de incitar al lector a documentarse mas sobre la tecnología láser y el campo que esta pueda abarcar dentro del consultorio dental.

Dentistry over the years has evolved by leaps and bounds, we can see as an example of the evolution of dentistry, how it has passed from the making of crowns carved by our ancestors, continuing with crowns cast in metal, to reach those that are possibly the latest today, such as ceromers. Thus we can also cite another example of advances in dentistry, since the first drills that worked with ropes and pneumatic drills that work up to 300,000 rpm were created. The handpiece may have to give up office space; without being replaced until now, in certain procedures, by the new technology such as the laser beam. Possibly the laser beam does not do everything that the dental professional would like it to do, but this entails a great advance in science, we can also say that the laser will not only replace; in certain procedures to the handpiece in the office, but it has also come to replace such important elements as the surgical scalpel and the light-curing lamp; We also observe how it begins to gain ground in the dental office, giving a greater number of treatment options to the dentist, who must recognize its benefits; but we must also be able to recognize its scope and its limitations. For the moment, it is enough to summarize that this work was carried out to clear up any doubts regarding the scope that the laser beam could have for the preparation of cavities to be filled with various materials. and the scope that this could have in fixed partial denture preparations, given the demands of patients and the rigorous work standards that are presented in the dental office, currently the following work is presented with the aim of encouraging the reader to document more about laser technology and the field that it can cover within the dental office.