Comparación de la calidad embrionaria entre fertilización in vitro (FIV) y cultivo intravaginal de ovocitos (INVO) en el Centro Colombiano de Fertilidad y Esterilidad - CECOLFES, Bogotá, Colombia / Comparing embryo quality between in vitro fertilization (IVF) and intravaginal ovocyte culture (INVO) in the Colombian Centre for Fertility and sterility - CECOLFES, Bogotá, Colombia

Objetivo: comparar la calidad embrionaria y describir las tasas de implantación, embarazo y aborto en las técnicas de fertilización in vitro (FIV) y el cultivo intravaginal de ovocitos. Materiales y métodos: cohortes históricas de pacientes con tratamiento de fertilización in vitro y el cultivo intravaginal de ovocitos en el Centro Colombiano de Fertilidad y Esterilidad (Cecolfes) durante el año 2010. Se incluyeron 137 pacientes aspiradas dentro de los cuatro grupos de estudio: Grupo 1, FIV/Incubadora; Grupo 2, FIV/INVO; Grupo 3, ICSI/INVO, y Grupo 4, ICSI/Incubadora. Se midió el peso de la paciente, el número de ovocitos recuperados y óvulos maduros (MII), la tasa de implantación y la tasa de embarazo y aborto en cada uno de los grupos. Se realizó análisis mediante la prueba de Kruskal-Wallis; la calidad embrionaria fue evaluada con un análisis de covarianza multivariado (MANOVA). Resultados: se observó diferencia significativa en la calidad embrionaria entre las dos técnicas FIV e INVO (p = 0,0388). En la técnica INVO se presentaron mayores tasas de división embrionaria (μ = 7,35/INVO frente a 6,64/Incubadora) y menor fragmentación (μ = 4,67/INVO frente a 4,59/ Incubadora). En cuanto a la tasa de implantación, embarazo y aborto se obtuvieron más altos porcentajes en los grupos INVO. Conclusión: la técnica INVO se asoció a mejor calidad embrionaria. Las tasas de implantación, embarazo y bajas tasas de aborto son semejantes a las descritas en la técnica FIV.

Objective: Comparing embryo quality and describing implantation, pregnancy and abortion rates regarding in vitro fertilization (IVF) and intravaginal oocyte culture (INVO) techniques. Materials and methods: The study involved historical cohorts of patients undergoing IVF and INVO treatment in the Colombian Fertility and Sterility Centre (Centro Colombiano de Fertilidad y Esterilidad – Cecolfes) during 2010. It involved 137 aspirated patients, covering four study groups: Group 1 IVF/incubator, Group 2 IVF/INVO, Group 3 ICSI/INVO and Group 4 ICSI/incubator. The patients’ weight, the number of ovocytes retrieved, mature ovules (M2), implantation rate, pregnancy and abortion rates were measured in each group. The Kruskal-Wallis test was used for statistical analysis; embryo quality was evaluated by multivariate covariance analysis (MANOVA). Results: A significant difference was observed regarding embryo quality between IVF and INVO (p = 0.0388), the INVO technique having higher embryo cleavage rates (μ = 7.35/INVO cf 6.64/ incubator) and lower embryo fragmentation (μ = 4.67/INVO cf 4.59/incubator). INVO groups also had higher percentages concerning their implantation, pregnancy and abortion rates. Conclusion: The INVO technique led to obtaining better quality embryos; implantation, pregnancy and abortion rates were similar to those described for the IVF technique.

Efeito do soro de cadela em estro na maturação in vitro de ovócitos caninos / Effect of estrus bitch serum on in vitro maturation of canine oocyte

Avaliou-se o efeito do soro de cadela em estro na maturação in vitro de ovócitos caninos, utilizando-se 92 ovócitos de cadelas, submetidas à cirurgia eletiva de ovarioisterectomia. Os ovócitos foram selecionados e distribuídos em dois tratamentos: T1 (n = 48), ovócitos cultivados in vitro durante 96 horas utilizando meio base - TCM199 + 5µg/mL de LH + 20µg/mL de FSH - mais 10 por cento de soro inativado de vaca em estro e T2 (n = 44), ovócitos cultivados em meio base mais 10 por cento de soro inativado de cadela em estro. O percentual de ovócitos observados em metáfase I não indicou diferenças (P>0,05) entre T1 (2,1 por cento) e T2 (0,0 por cento), porém a taxa de ovócitos maduros (metáfase II) foi diferente (P<0,05), sendo 27,1 por cento em T1 e 47,7 por cento em T2. O mesmo fato ocorreu com a taxa de cromatina condensada (P<0,01), com 14,6 e 0,0 por cento, respectivamente. Nos ovócitos sem configuração cromossômica, não foram observadas diferenças (P>0,05), sendo 56,3 por cento em T1 e 52,3 por cento em T2. Estes resultados indicam que a adição de soro de cadela em estro no meio de cultivo oferece melhores condições para o desenvolvimento in vitro, quando comparado à de soro de vaca em estro.

This study aimed to evaluate the effect of estrus on in vitro canine oocyte. A total of 92 oocyte from bitches under ovary-hysterectomy surgery was used. The oocytes were selected and randomly assigned to two different treatments, being T1 (n = 48) in vitro cultured for 96h using basic medium (TCM199 + 5µg/mL of LH + 20µg/mL of FSH), plus 10 percent of cow inactive serum in estrus and T2 (n = 44) basic medium plus 10 percent of bitch inactive serum in estrus. The percentage of oocyte observed on metaphase I do not indicate a difference (P>0.05) between T1 (2.1 percent) and T2 (0.0 percent). However, the rate of mature oocyte (metaphase II) was different (P<0.05), being 27.1 percent for T1 and 47.7 percent for T2. There was difference (P<0.05) in the condensed chromatin rate for T1 (14.6 percent) and T2 (0.0 percent), respectively. There was no difference (P>0.05) between T1 (56.3 percent) and T2 (52.3 percent) in oocyte with no chromosome configuration. These results indicate that supplementation with estrus bitch serum on culture media offer better conditions to in vitro development, when compared to estrus cow serum.

Efecto del inhibidor de fosfodiesterasa tipo 4 —rolipram, sobre la maduración in vitro de oocitos bovinos / Efeito do inibidor de fosfodiesterasa tipo 4 —rolipram, sobre a maturação in vitro de oocitos bovinos / Effect of phosphodiesterase type 4-inhibitor rolipram on in vitro maturatrion of bovine oocytes

Durante el proceso de maduración in vitro de oocitos, las gonadotropinas FSH y LH inducen la producción de AMPc. El AMPc tiene efecto dual, donde los altos niveles de AMPc intraoocitario mantienen su bloqueo meiótico, mientras que en las células de la granulosa inducen la maduración del oocito. Los niveles de AMPc son regulados por hidrólisis mediada por fosfodiesterasas (PDE), las cuales presentan expresión específica en el folículo, el oocito expresa la PDE 3, mientras que las células de la granulosa PDE 4. Con el objetivo de evaluar el efecto del rolipram, un inhibidor específico de PDE 4, sobre el porcentaje de maduración nuclear in vitro (MNIV) de oocitos bovinos, 629 complejos cúmulo oocito (CCO) fueron cultivados a 38.5 ºC/5% CO2/24 h, en medio TCM-199 con la adición de pFSH y hrLH, o rolipram. Los grupos experimentales fueron: adición de gonadotropinas, rolipram (25, 50 ó 75 M), rolipram 50 M + gonadotropinas, o control sin estímulo. Los oocitos fueron teñidos con DAPI y evaluados bajo fluorescencia para determinar el porcentaje de maduración nuclear por la expulsión del primer cuerpo polar. El rolipram 50M estimuló la maduración nuclear de oocitos bovinos de una manera similar a la obtenida con las gonadotropinas (76.83 vs 79.46%, p>0.05), pero en mayor medida que la observada con rolipram 25 y 75 M (31.25, y 28.61%, respectivamente). Los CCOs cultivados en presencia de rolipram 50 M+Gonadotropinas maduraron en menor proporción (63.74%) comparada con gonadotropinas (p<0.01) o rolipram 50 M (p<0.05). Los resultados permiten concluir que el porcentaje de maduración nuclear in vitro de oocitos bovinos depende de la dosis de rolipram utilizada, donde la concentración de rolipram 50 M presentó un comportamiento similar a las gonadotropinas en la maduración del oocito...

Gonadotropic follicle stimulating hormone (FSH) and lutenizing hormone (LH) induce intracellular cyclic AMP (cAMP) production during the in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes. Cyclic AMP exerts a dual effect, where high intraoocyte cAMP levels are responsible for oocyte meiotic blockage, while high cAMP levels into the granulose cells induce oocyte maturation. Intracellular cAMP levels are regulated by phosphodiesterases (PDE)-mediated hydrolysis, enzymes having a specific follicle expression pattern. Oocyte expresses typo 3 PDE (PDE 3), while granulose cells expresses type 4 PDE (PDE 4). With the aim to test the effect of the specific PDE 4 inhibitor rolliprom on percentage in vitro nuclear maturation (IVNM) of bovine oocytes, 629 cumulus-oocyte complexes (COC) were cultured at 38.5 ºC/CO2 5%/24 h on TCM-199 medium with pFSH and hrLH with or without rolipram. Experimental groups were: gonadotrophins alone, gonadotropins + rolipram (25, 50, or 75 M), rolipram 50 M + gonadotrophins, and control (media without stimulus). In order to determinate the nuclear maturation percentage by the first polar body expulsion, oocytes were dyed with DAPI and evaluated by fluorescence. Rolipram 50 M stimulated bovine oocyte nuclear maturation in a similar way to gonadotrophins stimulus (76.83 vs. 79.46%, p>0.05) did, but in a higher way than rolipram 25 M (31.25%) or 75 M (28.61%). The COC cultured with rolipram 50 M+gonadotrophins maturated in a lower proportion (63.74%) than did with gonadotropins (p<0.01) or rolipram 50 M (p<0.05). A dose-dependent response of percentage of IVNM of bovine oocytes was detected. Thus rolipram 50 M, exerts a similar effect of gonadotropins on oocyte maturation...

Durante o processo de maturação in vitro de oocitos, as gonadotrofinas FSH e LH induzem a produção de AMPc. O AMPc tem duplo efeito, pois os altos níveis de AMPc intraoocitario mantém o bloqueio meiótico, enquanto que nas células da granulosa induzem a maturação do oocito. Os níveis de AMPc são regulados pela hidrólise mediada das fosfodiesterasas (PDE), as quais apresentam expressão específica no folículo, o oocito expressa a PDE 3, enquanto que as células da granulosa PDE 4. Com o objetivo de avaliar o efeito do rolipram, um inibidor específico de PDE 4, sobre a percentagem de maturação nuclear in vitro (MNIV) de oocitos bovinos, 629 complexos cúmulo oocito (CCO) foram cultivados a 38.5 ºC/5% CO2/24 h, em meio TCM-199 com a adição de pFSH e hrLH, o rolipram. Os grupos experimentais foram: adição de gonadotrofinas, rolipram (25, 50 ó 75 M), rolipram 50 M + gonadotrofinas, ou controle sem estímulo. Os oocitos foram tingidos com DAPI e avaliados sob fluorescência para determinar a percentagem de maturação nuclear pela expulsão do primeiro corpo polar. O rolipram 50M estimulou a maturação nuclear de oocitos bovinos de maneira similar a obtida com as gonadotrofinas (76.83 vs 79.46%, p>0.05), porém em maior medida que a observada com rolipram 25 y 75 M (31.25, y 28.61%, respectivamente). Os CCOs cultivados na presença de rolipram 50 M+Gonadotrofinas maturaram em menor proporção (63.74%) quando comparado com gonadotrofinas (p<0.01) ou rolipram 50 M (p<0.05). Os resultados permitem concluir que a percentagem de maturação nuclear in vitro de oocitos bovinos depende da doses de rolipram utilizada, sendo que a concentração de rolipram 50 M apresentou um comportamento similar às gonadotrofinas na maturação do oocito...