RESUMO
OBJECTIVE: The Neubauer hemocytometer, as well as the Makler chamber, are devices commonly used in andrology laboratories. The present study aimed to verify if both methods yield comparable results, and whether they can be used interchangeably to determine sperm concentration. METHODS: Sperm and latex beads concentration measurements were performed with the Neubauer hemocytometer and the Makler chamber. Fixed and proportional biases were estimated, and the method agreement was determined by assessing sperm concentration results with the Bland and Altman plot. The Coefficient of Variation (CV) and relative bias were calculated as an index of precision and accuracy, respectively, by measuring latex beads target concentrations in both chambers. RESULTS: The Makler chamber systematically overestimated the Neubauer hemocytometer concentration measurements by a mean of -7.99%, with limits of agreement (LOA) between -41% to 25.61% (p<0.001). The fixed bias was found for concentration values inferior to 40 x 106/ml range (p<0.001), but not higher concentration results (p>0.05). Measurements with the Neubauer hemocytometer showed the greatest consistency in the study with the CV ranging from 3.01% to 6.67%; while the CV with the Makler chamber ranged from 8.46% to 25.64%. The relative bias for the Neubauer hemocytometer determinations varied from 0.12% to 8.40%, while for the Makler chamber varied from 7.6% to an overestimation of 38.0%. CONCLUSIONS: Measurements made with the Makler chamber demonstrated more variability and a higher degree of overestimation. The Makler chamber is a poor substitute to the Neubauer hemocytometer for evaluation of oligozoospermic samples, although both chambers render similar results for highly concentrated samples.
Assuntos
Análise do Sêmen , Contagem de Espermatozoides , Humanos , Masculino , Contagem de Espermatozoides/instrumentação , Contagem de Espermatozoides/normas , Contagem de Espermatozoides/métodos , Análise do Sêmen/métodos , Análise do Sêmen/normas , Análise do Sêmen/instrumentação , Espermatozoides/citologia , Reprodutibilidade dos TestesRESUMO
Determination of sperm concentration using the Neubauer chamber (hemocytometric method) is a direct method for counting cells and also the most reliable. However, the process is time-consuming rendering it the least practical method when large numbers of ejaculates need to be processed. The spectrophotometer measures sperm concentrations as optical density and its main advantages are practicality and speed. This paper aimed to compare the results between evaluators using the hemocytometric method and the spectrophotometer for measuring sperm concentrations in young Nelore bulls. In total, 73 ejaculations from 20 young Nelore bulls were collected by electroejaculation. After soundness examination, 10 μL of the semen was diluted in 2 mL saline formaldehyde for measuring the sperm concentration per mL by the hemocytometric method (measured by three different evaluators) and the spectrophotometer method at 550 nm wavelength. No differences were detected in the results of sperm concentration measurements per mL among the evaluators using the hemocytometric method and the spectrophotometer (P > 0.05). The intraclass correlation was high (0.9), showing high replicability among the evaluator measurements. These results demonstrate that measurements performed using the spectrophotometer are reliable and can substitute the hemocytometric method in future for performing sperm concentration measurements in young Nelore bulls, thus improving and standardizing the techniques used in andrology laboratories.(AU0
A determinação da concentração espermática pela câmara de Neubauer (método hematocitométrico) é um método direto para contar células, e também é o mais confiável. Entretanto, o processo é demorado, o que o torna um método menos prático quando a quantidade de ejaculados a ser processado é muito grande. O espectrofotômetro é um dispositivo que mede a concentração de espermatozoides através da densidade óptica, e as suas principais vantagens são a sua praticidade e sua velocidade. O objetivo deste trabalho foi comparar os resultados entre os avaliadores no método hematocitométrico e o espectrofotômetro para medir a concentração de espermatozoides no ejaculado de touros jovens da raça Nelore. Um total de 73 ejaculações de 20 touros jovens da raça Nelore foram coletados por meio de eletroejaculação. Após exame andrológico, 10μL do sémen foram diluídos em 2 mL de solução salina de formaldeído para medir a concentração de espermatozoides por mL, utilizando o método hematocitométrico (medido por três diferentes avaliadores) e utilizando o método do espectrofotómetro com comprimento de onda de 550 nm. Não foram detectadas diferenças nos resultados de medição de concentração de espermatozoides por mL entre os avaliadores medidos pelo método hematocitométrico e espectrofotômetro (P > 0,05). A correlação intraclasse foi alta (0,9), mostrando uma alta replicabilidade entre as medidas das avaliações. Com os resultados do presente experimento, pode-se afirmar que a mensuração realizada pelo espectrofotômetro é confiável, e pode, no futuro, substituir o método hematocitométrico para realizar as mensurações de concentração de espermatozoides no ejaculado de touros jovens da raça Nelore, melhorando e padronizando as técnicas usadas em laboratórios andrologia.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Bovinos/sangue , Bovinos/fisiologia , Espectrofotômetros/análise , Capacitação EspermáticaRESUMO
Determination of sperm concentration using the Neubauer chamber (hemocytometric method) is a direct method for counting cells and also the most reliable. However, the process is time-consuming rendering it the least practical method when large numbers of ejaculates need to be processed. The spectrophotometer measures sperm concentrations as optical density and its main advantages are practicality and speed. This paper aimed to compare the results between evaluators using the hemocytometric method and the spectrophotometer for measuring sperm concentrations in young Nelore bulls. In total, 73 ejaculations from 20 young Nelore bulls were collected by electroejaculation. After soundness examination, 10 μL of the semen was diluted in 2 mL saline formaldehyde for measuring the sperm concentration per mL by the hemocytometric method (measured by three different evaluators) and the spectrophotometer method at 550 nm wavelength. No differences were detected in the results of sperm concentration measurements per mL among the evaluators using the hemocytometric method and the spectrophotometer (P > 0.05). The intraclass correlation was high (0.9), showing high replicability among the evaluator measurements. These results demonstrate that measurements performed using the spectrophotometer are reliable and can substitute the hemocytometric method in future for performing sperm concentration measurements in young Nelore bulls, thus improving and standardizing the techniques used in andrology laboratories.
A determinação da concentração espermática pela câmara de Neubauer (método hematocitométrico) é um método direto para contar células, e também é o mais confiável. Entretanto, o processo é demorado, o que o torna um método menos prático quando a quantidade de ejaculados a ser processado é muito grande. O espectrofotômetro é um dispositivo que mede a concentração de espermatozoides através da densidade óptica, e as suas principais vantagens são a sua praticidade e sua velocidade. O objetivo deste trabalho foi comparar os resultados entre os avaliadores no método hematocitométrico e o espectrofotômetro para medir a concentração de espermatozoides no ejaculado de touros jovens da raça Nelore. Um total de 73 ejaculações de 20 touros jovens da raça Nelore foram coletados por meio de eletroejaculação. Após exame andrológico, 10μL do sémen foram diluídos em 2 mL de solução salina de formaldeído para medir a concentração de espermatozoides por mL, utilizando o método hematocitométrico (medido por três diferentes avaliadores) e utilizando o método do espectrofotómetro com comprimento de onda de 550 nm. Não foram detectadas diferenças nos resultados de medição de concentração de espermatozoides por mL entre os avaliadores medidos pelo método hematocitométrico e espectrofotômetro (P > 0,05). A correlação intraclasse foi alta (0,9), mostrando uma alta replicabilidade entre as medidas das avaliações. Com os resultados do presente experimento, pode-se afirmar que a mensuração realizada pelo espectrofotômetro é confiável, e pode, no futuro, substituir o método hematocitométrico para realizar as mensurações de concentração de espermatozoides no ejaculado de touros jovens da raça Nelore, melhorando e padronizando as técnicas usadas em laboratórios andrologia.
Assuntos
Animais , Bovinos , Bovinos/fisiologia , Bovinos/sangue , Capacitação Espermática , Espectrofotômetros/análiseRESUMO
Sperm concentration is traditionally evaluated by counting cells in a hemocytometric Neubauer chamber, often a highly subjective, time-consuming, and laborious technique prevalent in andrology laboratories around the world. However, the Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) represents a more consistent method of evaluating sperm concentration that may provide enhancing efficiencies of sperm count. The purpose of this study is to compare the results of these two methods in the analysis of post-thaw concentration of bovine semen. Four hundred and twenty five batches of semen from different bulls were selected, thawed at 37°C for 30 seconds and then homogenized. Aliquots of 40 µL of semen were diluted in 960 µL of distilled water, fixing the rate at 1:25 dilution for analysis in a Neubauer chamber. Conversely, aliquots of 5 µL for each semen dose were submitted to CASA, considered a minimum of five random fields and 2000 sperm count per analysis. The average concentration of sperm cells was 38.96a ± 1.28 in the Neubauer analysis and 35.14b ± 0.82 for the CASA, with the correlation coefficient of 0.87 (P < 0.0001) and reliability of 0.78 (scale ranging from 0 to 1) between the two methods. In conclusion, the results of two techniques for assessing sperm concentration have similar results. However the CASA methodology would yield greater benefit due to precision, consistency, and reduced disposal issues, particularly for large processing laboratories.(AU)
Tradicionalmente, a concentração espermática é avaliada por meio da contagem de células em câmara hemocitométrica de Neubauer, técnica laboriosa adotada na rotina dos laboratórios de andrologia. Uma alternativa para essa contagem é a técnica computadorizada de avaliação espermática (CASA), método que pode aumentar a eficiência e acurácia na determinação da concentração de espermatozoides em uma amostra de sêmen. O presente trabalho relata a avaliação da sensibilidade da técnica CASA para o acesso da concentração de espermatozoides bovinos em pósdescongelação. Foram selecionadas 425 doses de sêmen de reprodutores de diferentes raças, descongeladas a 37°C por 30 segundos e homogeneizadas. Alíquotas de 40 µL de sêmen foram transferidas para tubos cônicos de 1,5 mL previamente preenchidos com 960 µL de água destilada, fixando a taxa de diluição em 1:25 para contagem em câmara de Neubauer. Em contrapartida, alíquotas de 5 µL de cada dose de sêmen foram avaliadas com o emprego do sistema CASA considerando o número mínimo de cinco campos aleatórios e 2 mil espermatozoides por análise. A concentração média de células espermáticas foi de 38,96a ± 1,28 e 35,14b ± 0,82,respectivamente para amostras avaliadas em câmara de Neubauer ou sistema computadorizado, apresentando o coeficiente de correlação de 0,87 (P < 0.0001) e concordância de 0,78 (escala de 0 a 1). Conclui-se que as duas técnicas de avaliação da concentração espermática possuem eficiência similar. No entanto, em virtude da precisão, rapidez e por dispensar a diluição prévia das amostras para a contagem, a CASA é uma alternativa para a contagem de células espermáticas em câmara de Neubauer, sobretudo para grandes centrais de produção de sêmen bovino congelado.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Contagem de Espermatozoides/veterinária , Contagem de Espermatozoides/métodos , Preservação do Sêmen/veterináriaRESUMO
Sperm concentration is traditionally evaluated by counting cells in a hemocytometric Neubauer chamber, often a highly subjective, time-consuming, and laborious technique prevalent in andrology laboratories around the world. However, the Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) represents a more consistent method of evaluating sperm concentration that may provide enhancing efficiencies of sperm count. The purpose of this study is to compare the results of these two methods in the analysis of post-thaw concentration of bovine semen. Four hundred and twenty five batches of semen from different bulls were selected, thawed at 37°C for 30 seconds and then homogenized. Aliquots of 40 µL of semen were diluted in 960 µL of distilled water, fixing the rate at 1:25 dilution for analysis in a Neubauer chamber. Conversely, aliquots of 5 µL for each semen dose were submitted to CASA, considered a minimum of five random fields and 2000 sperm count per analysis. The average concentration of sperm cells was 38.96a ± 1.28 in the Neubauer analysis and 35.14b ± 0.82 for the CASA, with the correlation coefficient of 0.87 (P < 0.0001) and reliability of 0.78 (scale ranging from 0 to 1) between the two methods. In conclusion, the results of two techniques for assessing sperm concentration have similar results. However the CASA methodology would yield greater benefit due to precision, consistency, and reduced disposal issues, particularly for large processing laboratories.(AU)
Tradicionalmente, a concentração espermática é avaliada por meio da contagem de células em câmara hemocitométrica de Neubauer, técnica laboriosa adotada na rotina dos laboratórios de andrologia. Uma alternativa para essa contagem é a técnica computadorizada de avaliação espermática (CASA), método que pode aumentar a eficiência e acurácia na determinação da concentração de espermatozoides em uma amostra de sêmen. O presente trabalho relata a avaliação da sensibilidade da técnica CASA para o acesso da concentração de espermatozoides bovinos em pósdescongelação. Foram selecionadas 425 doses de sêmen de reprodutores de diferentes raças, descongeladas a 37°C por 30 segundos e homogeneizadas. Alíquotas de 40 µL de sêmen foram transferidas para tubos cônicos de 1,5 mL previamente preenchidos com 960 µL de água destilada, fixando a taxa de diluição em 1:25 para contagem em câmara de Neubauer. Em contrapartida, alíquotas de 5 µL de cada dose de sêmen foram avaliadas com o emprego do sistema CASA considerando o número mínimo de cinco campos aleatórios e 2 mil espermatozoides por análise. A concentração média de células espermáticas foi de 38,96a ± 1,28 e 35,14b ± 0,82,respectivamente para amostras avaliadas em câmara de Neubauer ou sistema computadorizado, apresentando o coeficiente de correlação de 0,87 (P < 0.0001) e concordância de 0,78 (escala de 0 a 1). Conclui-se que as duas técnicas de avaliação da concentração espermática possuem eficiência similar. No entanto, em virtude da precisão, rapidez e por dispensar a diluição prévia das amostras para a contagem, a CASA é uma alternativa para a contagem de células espermáticas em câmara de Neubauer, sobretudo para grandes centrais de produção de sêmen bovino congelado.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Preservação do Sêmen/veterinária , Contagem de Espermatozoides/métodos , Contagem de Espermatozoides/veterináriaRESUMO
Se comparó la metodología rutinaria de observación del sedimento urinario entre porta y cubreobjetos con el recuento en cámara de Neubauer, tomado como método de referencia y se verificó su capacidad de predicción de bacteriuria significativa. En un período de dos meses se realizaron 2.287 urocultivos. Sólo 1.153 resultaron evaluables según los criterios de exclusión y en 982 se pudo correlacionar ambos métodos microscópicos con el resultado de los cultivos. La correlación entre los recuentos en cámara y las observaciones del sedimento urinario fue del 96,4%. Las sensibilidades respectivas de la observación del sedimento y del recuento en cámara respecto del urocultivo fueron de 53,5% y 55,5%. Las especificidades respectivas fueron del 90,7% y 91,4%. A partir de los resultados obtenidos se infiere que la observación de leucocituria significativa es predictiva de la bacteriuria significativa. Por el contrario, su ausencia no puede ser un motivo para descartarla. La observación del sedimento entre porta y cubreobjetos resultó prácticamente equivalente al método más tedioso de recuento en cámara de Neubauer.
The current method of centrifuged urine smear was compared to the Neubauer chamber method, using this technique as the gold standard. Their predictive ability for detecting significant bacteriuria was determined. During two months, 2.287 urine cultures were studied. Only 1.153 were evaluable. In 982 samples a comparison between the two microscopic methods could be established. The correlation between them was 96,4%. The sensitivity of the centrifuged urine smear and the Neubauer chamber method was 53.5% and 55.5% respectively. Specificities were 90.7% and 91.4%. Those results pointed out that seeing a significant number of polymorphonuclear neutrophils (PMNs) both in the centrifuged urine smear and in the Neubauer chamber was predictive of significant bacteriuria. On the other hand, absence of PMNs is not an argument for not considering this possibility. Centrifuged urine was equivalent to the Neubauer chamber method in this comparative study.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Recém-Nascido , Lactente , Pré-Escolar , Criança , Adolescente , Infecções Urinárias/urina , Leucócitos/microbiologia , Infecções Urinárias/microbiologia , Urologia , Sedimentos/métodos , Técnicas de Diagnóstico UrológicoRESUMO
A concentração espermática do sêmen do peixe anostomídeo Leporinus elongatus (Valenciennes, 1849) foi estimada nas câmaras de Makler e de Neubauer, tendo-se obtido, respectivamente, 10,9 ± 2,8 ´ 109 e 11,9 ± 3,7 ´ 109 espermatozóides/ml de sêmen sem que ocorresse diferença significativa entre essas médias (P > 0,05). A estimativa da concentração espermática do sêmen na câmara de Makler apresentou vantagens em relação à da câmara de Neubauer. A contagem na câmara de Makler pôde ser feita sem a necessidade de se esperar pela deposição dos espermatozóides no seu fundo. A baixa diluição do sêmen (1:1.000) necessária para se estimar a concentração espermática pode ser considerada também como vantagem pois altas diluições (como na câmara de Neubauer) são fontes consideráveis de erro. Dessa forma, a câmara de Makler pode ser utilizada na determinação da concentração espermática do sêmen de peixes e, possivelmente, de outros vertebrados, incluindo a de animais domésticos.(AU)