La técnica de polarización fluorescente para el diagnóstico de Brucella en Chaetophractus villosus / Technique of fluorescence polarization for the diagnosis of Brucella in Chaetophractus villosus / A técnica de polarização fluorescente para o diagnóstico de Brucella em Chaetophractus villosus

La brucelosis es una enfermedad muy extendida por todo el mundo. El diagnóstico se realiza mediante el uso de diferentes técnicas, entre ellas el aislamiento del agente etiológico o por serología detectando anticuerpos específicos. Todos estos métodos están estandarizados y validados en general para las distintas especies animales de interés zootécnico. En animales silvestres pueden utilizarse los mismos procedimientos serológicos, pero cada uno debe ser validado para la especie animal estudiada. El objetivo de este trabajo fue comprobar si la técnica de Polarización Fluorescente (FPA) utilizada para la determinación de anticuerpos contra Brucella en bovinos puede ser usada para el diagnóstico de Brucella en el armadillo (Chaetophractus villosus). Para ello se tomaron 150 muestras de sangre de Chaetophractus villosus. Veinticuatro muestras fueron positivas por medio de las técnicas de antígeno bufferado en placa, seroaglutinación lenta en tubo, 2-mercaptoetanol y fijación del complemento. Las mismas muestras resultaron positivas a la técnica de Polarización Fluorescente, estableciéndose un límite de corte de 82 mP. El índice Kappa registrado fue de 1 para todos los tests de diagnóstico comparados con FPA (IC: 0,84-1).

Brucellosis is a disease widespread throughout the world. The diagnosis is made through the use of different techniques including the isolation of the etiological agent or by serology detecting specific antibodies. All these methods are standardized and validated in general for animal species of zoo-technical interest. In wild animals, serological procedures may be used, but each should be validated for the particular animal species studied. The objective of this work was to verify if the technique of Fluorescent Polarization used for the determination of antibodies against Brucella in ruminants can be used for the diagnosis of Brucella in Chaetophractus villosus. To this aim, s 150 blood samples of Chaetophractus villosus were taken. Twenty-four samples were positive by the techniques of Antigen Buffered in Plate, serum agglutination test (SAT), 2-mercaptoethanol (2-ME) agglutination test and complement fixation test (CFT). The same samples were also positive by Fluorescent Polarization, and a cut-off limit of 82 mP was established. The KAPPA index was 1 for all diagnostic tests compared to FPA (CI: 0.84-1).

A brucelose é uma doença muito espalhada pelo mundo. O diagnóstico é feito por meio de diferentes técnicas, incluindo o isolamento do agente etiológico ou por sorologia detectando anticorpos específicos. Todos esses métodos são padronizados e validados em geral para diferentes espécies animais de interesse zootécnico. Em animais silvestres podem ser utilizados os mesmos métodos serológicos, mas cada um tem de ser validado para a espécie de animal estudada. O objectivo deste estudo foi testar se a técnica de Polarização Fluorescente utilizada para a determinação de anticorpos contra Brucella em bovinos pode ser utilizada para o diagnóstico de Brucella em tatu (Chaetophractus villosus). Para isso, 150 amostras de sangue de Chaetophractus villosus foram coletadas. Vinte e quatro amostras foram positivas por técnicas de antígeno bufferado em placa, soroaglutinação lenta em tubo, 2-mercaptoetanol e fixação do complemento. As mesmas amostras foram positivas para a técnica de Polarização Fluorescente, estabelecendo um limite de corte de 82 mP. O índice Kappa registrado foi de 1 para todos os testes de diagnóstico em comparação com FPA (CI: 0,84-1).

Brucella spp. in equines slaughtered in the south region of Brazil / Anticorpos contra Brucella spp. em equídeos da região Sul do Brasil abatidos em matadouro-frigorífico

Bacteria of the genus Brucella are widespread in many countries. These microorganisms can infect humans and many wild and domestic animal species. These bacteria have zoonotic potential, and can cause economic and public health problems since they can be transmitted by direct contact with sick animals, through consumption of contaminated milk, raw meat and its derivatives (Soares et al., 2015). Brucellosis is considered a chronic evolving disease, unusual in horses, predominantly caused by Brucella abortus. However, it is not characterized by reproductive disorders in horses, but primarily by abscess in the cervical region, bursa, tendons, and joints. Transmission is likely to occur via ingestion of contaminated water and pastures, especially in areas endemic for bovine brucellosis (Ribeiro et al., 2008). The slaughterhouse is a strategic point for obtaining information about the animal and animal products, edible or not. This study investigated the presence of anti-Brucella spp. immunoglobulins in the serum samples from horses slaughtered in a slaughterhouse in southern Brazil, to estimate the frequency of Brucella spp. antibodies and determine the spatial distribution of the cases.(AU)

Objetivou-se investigar a presença de imunoglobulinas anti-Brucella spp. em amostras de soros sanguíneos de equídeos abatidos em matadouro-frigorífico, sob Serviço de Inspeção Federal, localizado na região Sul do Brasil. Utilizaram-se 767 amostras de sangue de equídeos adultos abatidos no período de abril a maio de 2013. Os animais foram provenientes de 45 municípios dos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina e Paraná. Para diagnóstico, foram utilizados os testes do antígeno acidificado tamponado (AAT), sendo os resultados positivos confirmados pelos testes de polarização fluorescente (TPF), reação de fixação de complemento (RFC) e 2-mercaptoetanol (2-ME). Foram sororreagentes no AAT 65 (8,47%) animais. Destes, apenas dois (3,07%) foram positivos também na RFC e três (4,62%) animais foram positivos no TPF. Apesar da baixa frequência de animais positivos para Brucella spp., pode-se afirmar que a infecção em equinos está presente na área estudada, o que é demonstrado pela presença de animais sororreatores. No âmbito da saúde animal, pública e ocupacional, sugere-se a atenção a essa doença, visando diminuir o risco de infecção.(AU)

Validação interlaboratorial do teste de polarização fluorescente para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina / Interlaboratorial validation of the fluorescence polarization assay for the serodiagnosis of bovine brucellosis

Esta investigação teve por objetivo validar o teste de polarização fluorescente (TPF) para o diagnóstico sorológico da brucelose bovina, determinando a sensibilidade (SE) e a especificidade relativas (SP) e verificando a reprodutibilidade do teste em quatro laboratórios no Brasil. Foram selecionadas 1.389 amostras de soro sanguíneo, as quais foram inicialmente submetidas aos testes do antígeno acidificado tamponado (AAT) e mercaptoetanol (2-ME). As mesmas amostras foram submetidas à reação de fixação de complemento (RFC) e ao TPF. Para a avaliação do TPF, foi adotada a combinação dos resultados do AAT, da RFC e do 2-ME, utilizados como população de referência (padrão-ouro). Para a determinação do ponto de corte do TPF que proporciona a melhor combinação de sensibilidade e especificidade, foi usada a análise TG-ROC. A concordância entre os resultados dos quatro laboratórios foi determinada com base no indicador kappa e no coeficiente de correlação de Pearson. Os pontos de corte do TPF situaram-se entre 85,2 e 93,6 mP, conforme o laboratório. A sensibilidade variou de 91,7 a 97,3 por cento, e a especificidade situou-se na faixa de 82,6 a 98,3 por cento. Na comparação entre os resultados do TPF dos quatro laboratórios, o indicador kappa ficou entre 0,69 e 0,95, o que indica, na maioria das situações, reprodutibilidade excelente, e o coeficiente de correlação variou entre 0,76 e 0,99. Os resultados indicaram que o TPF apresentou bom desempenho, na maioria das situações, com sensibilidade e especificidade elevadas. Em comparação com os testes convencionais, o TPF apresenta as vantagens de ser de execução mais rápida e mais fácil e não estar sujeito à ocorrência de prozona, como a RFC e o 2-ME, nem de atividade anticomplementar, como a RFC.

The purpose of this research was the interlaboratorial validation of the polarization fluorescence assay (PFA) for the serodiagnosis of bovine brucellosis, verifying the relative sensitivity, the relative specificity and the reproducibility of the test in four Brazilian laboratories. Serum samples from 1,389 bovines were selected and submitted to the rose Bengal (RBT) and 2-mercaptoethanol tests in one of the laboratories. The same samples were tested by the complement fixation (CFT) test and by the PFA in the four laboratories participating of the research. The reference population (golden standard) used to evaluate the PFA was the combination of the results of RBT, CFT and 2-ME. TG-ROC analysis was used to obtain the cut-off that provided the best combination of sensitivity and specificity. The agreement between laboratories was obtained by the kappa statistic and Pearson correlation coefficient (r). The PFA cut-off values were from 85.2 to 93.6. The sensitivity of the PFA assay varied from 91.7 percent to 97.3 percent, and the specificity values varied from 82.6 percent to 98.3 percent. When comparing PFA results from the four laboratories, the kappa values was between 0.69 and 0.95, which indicates, in most situations, excellent reproducibility, and the correlation coefficient varied from 0.76 to 0.99. The results showed that the PFA had a good performance, with high sensitivity and specificity. Compared to the conventional tests, the PFA has the advantages of being easy and quick to perform, and it is not prone to the occurrence of prozone, as the CFT or the 2-ME, nor to the occurrence of anti-complementary effect, as the CFT.