Asynchrony between in vivo and in vitro rabbit embryos

Background: Comparative features of embryos developed under in vitro and in vivo conditions are particularly important in designing embryo transfer procedures that fulfil embryo-recipient synchronization requirements. Objective: To determine the degree of asynchrony in rabbit embryo development between cultured and in vivo embryos. Methods: A total of 55 non- lactating multiparous female rabbits were used. Embryos were classified as 16-cells or early morulae at 48 hours post-coitum (hpc). Embryos were cultured during 30 or 32 h and embryo development was compared with in vivo embryos of 72 hpc. In vitro and in vivo embryos at 72 hpc were classified as early or compacted morulae. Bayesian statistics was used. Difference between in vivo and in vitro embryos and the actual probability of the difference between the in vivo and in vitro embryo higher than zero (P) was estimated. Results: The percentage of compacted morulae was higher in in vivo embryos than in in vitro embryos with +6 h of asynchrony (73.5 and 32.8%, P=1.00). But the percentage of compacted morulae was similar with +8 h asynchrony. Conclusions: In vitro embryos delay their development by + 8 hours compared to in vivo embryos.

Antecedentes: El desarrollo comparativo de embriones producidos in vitro e in vivo es particularmente importante para el diseño de procedimientos de transferencia de embriones cuando se requiere sincronización entre el embrión y la hembra receptora. Objetivo: Determinar el grado de asincronía en el desarrollo embrionario entre embriones in vivo y cultivados. Métodos: Un total de 55 conejas multiparas no lactantes fueron utilizadas. Los embriones se clasificaron en 16 células o mórulas tempranas a las 48 horas después del coito (hpc). Los embriones se cultivaron durante 30 ó 32 horas y el desarrollo embrionario se comparó con embriones de 72 hpc obtenidos in vivo. Los embriones in vitro e in vivo a 72 hpc se clasificaron como mórulas tempranas o compactas. Se utilizó estadística bayesiana. Se estimó la diferencia entre embriones in vivo e in vitro y la probabilidad de que la diferencia sea superior a cero (P). Resultados: El porcentaje de mórulas compactas fue mayor en embriones in vivo que en embriones in vitro con +6 horas de asincronía (73,5 y 32,8%, P=1,00), pero el porcentaje de mórulas compactas fue similar con asincronía de +8 horas. Conclusión: Los embriones cultivados retrasan +8 horas su desarrollo en comparación con los embriones in vivo.

Antecedentes: A aquisição do desenvolvimento de embriões produzidos in vitro e in vivo é particularmente importante na concepção de procedimentos de transferência de embriões em que a sincronização entre o embrião e a fêmea receptora é necessária. Objetivo: Determinar o grau de assincronia no desenvolvimento embrionário entre embriões cultivados e in vivo. Métodos: Um total de 55 coelhos multíparos não lactantes foram usados. Os embriões foram classificados em 16 células ou mórulas iniciais 48 horas de gestação (hpc). Os embriões foram cultivados por 30 ou 32 horas e o desenvolvimento embrionário foi comparado com embriões de 72 hpc obtidos in vivo. Embriões in vitro e in vivo a 72 hpc foram classificados como mórulas precoces ou compactadas. Estatísticas bayesianas foram usadas. A diferença entre embriões in vivo e in vitro e a probabilidade de que a diferença seja maior que zero (P) foi estimada. Resultados: A porcentagem de mórulas compactadas foi maior em embriões in vivo do que em embriões in vitro com +6 horas de assincronia (73,5 e 32,8%, P=1,00). Mas a porcentagem de mórulas compactadas foi semelhante com assincronia de +8 horas. Conclusão: Embriões cultivados atrasam seu desenvolvimento em +8 horas em comparação com embriões in vivo.

Well-of-the-well (WOW) versus polyester mesh (PM): a comparison of single-embryo culture systems in bovines

Background: Mexico is innovating in the livestock industry through in vitro generation of bovine embryos with technologies such as well-of-the-well (WOW) and polyester mesh (PM) single-embryo culture systems. These techniques allow to maintain embryos in separate areas of a shared culture medium. Objective: To compare the quantity and quality of bovine embryos produced in WOW and PM culture systems versus the conventional (CG) culture system. Methods: In total, 345 embryos fertilized in vitro were evaluated for blastocyst yield in the three culture systems. To count blastocyst cell numbers, 69 embryos in each system were differentially stained for trophectoderm (TE), inner cell mass (ICM), and apoptotic cells. A qPCR gene expression analysis was performed for embryos in all three systems. Results: The WOW, PM and CG systems developed similar amount of blastocysts (41, 35 and 36%, respectively; p>0.05). Blastocysts in all three systems showed adequate amounts of ICM and apoptotic cells. Blastocysts in the PM system showed a greater number of TE cells [63.7 versus 58.6% in the CG system (p0.05). The ATP5B expression was higher in WOW than in PM (p0.05). The TJP3 expression was higher in PM than in WOW and CG (p<0.05). Expression of ID2 and CLDN4 was higher in WOW than in PM and CG (p<0.05). The biplot graphic from Principal Component Analysis (PCA) revealed that CG was located near degenerated embryos, whereas PM was located near arrested embryos, larger ICM and TE, and TJP3 expression. The WOW was located toward blastocysts, morulae, and expression of CLDN4, ID2 and GNAS. Conclusion: Compared with CG, both the PM and WOW systems are good options for culturing single embryos in the bovine model. Moreover, the PCA results suggest that embryos developed in the WOW system have greater capacity for generating blastocysts with increased ability to form TE and ICM layers, which might improve implantation.

Antecedentes: México está innovando en la industria ganadera a través de la generación in vitro de embriones bovinos con tecnologías de cultivo individual como lo son Pozo dentro de Pozo (WOW) y Malla de Poliéster (PM). Estos mantienen los embriones en áreas separadas mientras comparten un mismo medio de cultivo celular. Objetivo: Comparar la cantidad y calidad de embriones bovinos producidos en los sistemas WOW y PM contra el sistema de cultivo convencional en grupo (CG). Métodos: En total se evaluaron 345 embriones fertilizados in vitro para determinar la producción de blastocistos generados en los tres sistemas. Para contar el número de células por blastocisto, 69 embriones en cada sistema se tiñeron diferencialmente para trofectodermo (TE), masa celular interna (ICM) y células apoptóticas. Se realizó un análisis de expresión génica por qPCR de los embriones obtenidos en los tres sistemas. Resultados: Los sistemas WOW, PM y CG desarrollaron similares cantidades de blastocistos (41, 35 y 36%, respectivamente; p>0,05). Los blastocistos en los tres sistemas mostraron cantidades adecuadas de ICM y células apoptóticas. Los blastocistos en el sistema PM mostraron un mayor número de células TE [63,7% versus 58,6% en el sistema CG (p0,05). La expresión de ATP5B fue mayor en WOW que en PM (p<0,05), pero similar a CG (p<0,05). La expresión de TJP3 fue mayor en PM que en WOW y CG (p<0,05). La expresión de ID2 y CLDN4 fue mayor en WOW que en PM y CG (p<0,05). El gráfico de biplot del análisis de componentes principales reveló que CG se encontró cerca de embriones degenerados, mientras que PM se encontró cerca de embriones en arresto, ICM, TE, y TJP3. El WOW se localizó hacia blastocistos, mórulas y la expresión de CLDN4, ID2 y GNAS. Conclusión: En el modelo bovino los sistemas PM y WOW son buenas opciones para cultivar embriones individuales, ya que se obtienen resultados muy similares a los obtenidos con el sistema CG. Además, los resultados de PCA sugieren que los embriones individuales desarrollados en el sistema WOW generan blastocistos con mayor capacidad de formar TE e ICM, lo que podría mejorar su éxito de implantación.

Antecedentes: O México está inovando na indústria pecuária por meio da geração in vitro de embriões bovinos com tecnologias de cultura de embriões individuais, bem como em poço (WOW) e malha de poliéster (PM). Estes mantêm os embriões em áreas separadas, enquanto compartilham o mesmo meio de cultura de células. Objetivo: Comparar a quantidade e a qualidade de embriões bovinos produzidos nos sistemas de cultura WOW e PM com o sistema convencional de cultura em grupo (CG). Métodos: No total, 345 embriões fertilizados in vitro foram avaliados para determinar a produção de blastocistos gerados nos três sistemas. O número de células por blatocisto foi contado, 69 embriões em cada sistema foram diferencialmente corados para trofectoderme (TE), massa celular interna (ICM) e células apoptóticas. Uma análise de expressão gênica qPCR foi realizada para os embriões obtidos nos três sistemas. Resultados: Os sistemas WOW, PM e CG desenvolveram quantidades semelhantes de blastocistos (41, 35 e 36%, respectivamente; p>0,05). Os blastocistos nos três sistemas mostraram quantidades adequadas de ICM e células apoptóticas. Os blastocistos no sistema PM mostraram um número maior de células TE [63,7 versus 58,6% no sistema CG (p0,05). A expressão de ATP5B foi maior no WOW do que no PM (p<0,05), mas semelhante ao GC (p<0,05). A expressão de TJP3 foi maior no PM do que no WOW e CG (p<0,05). A expressão de ID2 e CLDN4 foi maior no WOW do que no PM e CG (p<0,05). O gráfico biplot da análise de componentes principais revelou que CG foi encontrado próximo a embriões degenerados, enquanto PM foi encontrado próximo a embriões presos, ICM, TE e TJP3. WOW foi encontrado para ter blastocistos, mórulas e a expressão de CLDN4, ID2 e GNAS. Conclusão: Em comparação com o CG, os sistemas PM e WOW são boas opções para a cultura de embriões individuais no modelo bovino. Além disso, os resultados da PCA sugerem que embriões individuais desenvolvidos no sistema WOW têm maior capacidade de desenvolver blastocistos com maior capacidade de formar as camadas TE e ICM, o que poderia melhorar seu sucesso de implantação.

Increased antral follicle population and in vitro embryo production in pregnant Holstein / Aumento da população folicular antral e produção in vitro de embriões em fêmeas gestantes da raça Holandesa

This study used Holstein cattle to evaluate the following: I) the productive and reproductive characteristics of cows with low, intermediate and high antral follicle counts (AFCs) that were subjected to artificialin semination (AI) and comparison of AFC variability at the time of AI (nonpregnant) and at two time points during pregnancy (30 and 60 days), and II) whether the pregnancy status and different pregnancy periods in heifers improves the efficiency at in vitro embryo production (IVEP). In study I, 75 high-milk production cows with body condition scores (BCSs) of 2.75 to 4.75 and ages of 23 to 99 months were selected. Onthe day of estrus, AFCs (follicles ≥ 3 mm), BCS, body weight, and diameters of the dominant follicle, ovaries and the corpus luteum were evaluated. Posteriorly, AFC was monitored in pregnant cows at 30 days (n =35) and at 60 days for comparison of AFC before pregnancy versus different periods. In study II, heifers (n = 9) with BCS of 2.5 to 3.5 and ages of 10 to 16 months were selected for ovum pick-up and an IVEP program before AI (nonpregnant) as well as at 0 to 30, 31 to 60, and > 60 days of pregnancy. Statistical analysis was performed using PROC GLM and binary logistic regression model (P ≤ 0.05). In study I, AFC was not associated with variations in productive and reproductive parameters. However, AFCs in the low group increased following pregnancy (AI: 14.82 ± 1.36, 30 days: 23.45 ± 2.31 and 60 days: 35.18 ± 3.17 follicles). AFCs increased from AI to 60 days in the intermediate group but did not vary among time points in the high group. AFCs varied among AFC groups in AI and at 30 days of pregnancy but not at 60 days. In study II, the mean of total oocytes (17.43 ± 4.52 vs. 41.67 ± 3.79) and viable oocytes (13.77 ± 3.63 vs. 30.56± 3.45) increased from AI (nonpregnant) to the first 30 days of pregnancy. [...](AU)

Este estudo utilizou fêmeas da raça Holandesa para avaliar: i) variação da contagem de folículos antrais na gestação; ii) resultado da produção in vitro de embriões em doadoras antes e depois da gestação. No estudo I, 75 vacas de alta produção de leite com escores de condição corporal (ECC) de 2,75 a 4,75 e idades de 23 a 99 meses foram selecionadas. No dia do estro a CFA foi avaliada (folículos ≥ 3 mm) além do escore corporal, peso corporal e diâmetros do folículo dominante, ovários e corpo lúteo. Posteriormente, a CFA foi monitorada nas vacas gestantes (n = 35) aos 30 e 60 dias. No estudo II, novilhas (n = 9) com ECC de 2,5 a 3,5 e idades de 10 a 16 meses foram selecionadas para obtenção de oócitos antes e depois da gestação, no primeiro, segundo e acima dos dois meses de gestação. A análise estatística foi realizada usando PROC GLM e modelo de regressão logística binária (P ≤ 0,05). No estudo I, a CFA não foi associada a variações nos parâmetros produtivos e reprodutivos. No entanto, as vacas de baixa CFA apresentaram aumento no número de folículos após início da gestação (IA: 14,82 ± 1,36, 30 dias: 23,45 ± 2,31 e 60 dias:35,18 ± 3,17 folículos). A CFA aumentou da IA para 60 dias no grupo de CFA intermediária, mas não variou ao longo do tempo no grupo de alta CFA. A CFA variou entre os grupos comparando-se o momento da IA e 30 dias de gestação. No estudo II, entre a IA e o primeiro mês de gestação, houve aumento do total de oócitos (17,43 ± 4,52 vs. 41,67 ± 3,79), bem como de oócitos viáveis (13,77 ± 3,63 vs. 30,56 ± 3,45). O número médio de embriões produzidos aumentou durante a gestação, [...](AU)

Increased antral follicle population and in vitro embryo production in pregnant Holstein / Aumento da população folicular antral e produção in vitro de embriões em fêmeas gestantes da raça Holandesa

This study used Holstein cattle to evaluate the following: I) the productive and reproductive characteristics of cows with low, intermediate and high antral follicle counts (AFCs) that were subjected to artificialin semination (AI) and comparison of AFC variability at the time of AI (nonpregnant) and at two time points during pregnancy (30 and 60 days), and II) whether the pregnancy status and different pregnancy periods in heifers improves the efficiency at in vitro embryo production (IVEP). In study I, 75 high-milk production cows with body condition scores (BCSs) of 2.75 to 4.75 and ages of 23 to 99 months were selected. Onthe day of estrus, AFCs (follicles ≥ 3 mm), BCS, body weight, and diameters of the dominant follicle, ovaries and the corpus luteum were evaluated. Posteriorly, AFC was monitored in pregnant cows at 30 days (n =35) and at 60 days for comparison of AFC before pregnancy versus different periods. In study II, heifers (n = 9) with BCS of 2.5 to 3.5 and ages of 10 to 16 months were selected for ovum pick-up and an IVEP program before AI (nonpregnant) as well as at 0 to 30, 31 to 60, and > 60 days of pregnancy. Statistical analysis was performed using PROC GLM and binary logistic regression model (P ≤ 0.05). In study I, AFC was not associated with variations in productive and reproductive parameters. However, AFCs in the low group increased following pregnancy (AI: 14.82 ± 1.36, 30 days: 23.45 ± 2.31 and 60 days: 35.18 ± 3.17 follicles). AFCs increased from AI to 60 days in the intermediate group but did not vary among time points in the high group. AFCs varied among AFC groups in AI and at 30 days of pregnancy but not at 60 days. In study II, the mean of total oocytes (17.43 ± 4.52 vs. 41.67 ± 3.79) and viable oocytes (13.77 ± 3.63 vs. 30.56± 3.45) increased from AI (nonpregnant) to the first 30 days of pregnancy. [...]

Este estudo utilizou fêmeas da raça Holandesa para avaliar: i) variação da contagem de folículos antrais na gestação; ii) resultado da produção in vitro de embriões em doadoras antes e depois da gestação. No estudo I, 75 vacas de alta produção de leite com escores de condição corporal (ECC) de 2,75 a 4,75 e idades de 23 a 99 meses foram selecionadas. No dia do estro a CFA foi avaliada (folículos ≥ 3 mm) além do escore corporal, peso corporal e diâmetros do folículo dominante, ovários e corpo lúteo. Posteriormente, a CFA foi monitorada nas vacas gestantes (n = 35) aos 30 e 60 dias. No estudo II, novilhas (n = 9) com ECC de 2,5 a 3,5 e idades de 10 a 16 meses foram selecionadas para obtenção de oócitos antes e depois da gestação, no primeiro, segundo e acima dos dois meses de gestação. A análise estatística foi realizada usando PROC GLM e modelo de regressão logística binária (P ≤ 0,05). No estudo I, a CFA não foi associada a variações nos parâmetros produtivos e reprodutivos. No entanto, as vacas de baixa CFA apresentaram aumento no número de folículos após início da gestação (IA: 14,82 ± 1,36, 30 dias: 23,45 ± 2,31 e 60 dias:35,18 ± 3,17 folículos). A CFA aumentou da IA para 60 dias no grupo de CFA intermediária, mas não variou ao longo do tempo no grupo de alta CFA. A CFA variou entre os grupos comparando-se o momento da IA e 30 dias de gestação. No estudo II, entre a IA e o primeiro mês de gestação, houve aumento do total de oócitos (17,43 ± 4,52 vs. 41,67 ± 3,79), bem como de oócitos viáveis (13,77 ± 3,63 vs. 30,56 ± 3,45). O número médio de embriões produzidos aumentou durante a gestação, [...]

Contagem de folículos antrais: relação com a eficiência das biotécnicas e fertilidade / Antral follicle count: relationship with the efficiency of biotechniques and fertility

A implementação das biotécnicas reprodutivas juntamente com os programas de melhoramento genético tem contribuído expressivamente para uma rápida disseminação de indivíduos melhoradores, tanto pelo uso da inseminação artificial, quanto pela produção in vivo e in vitro de embriões. No entanto, a eficiência destes programas está condicionada a uma série de fatores que podem afetar de maneira significativa a performance reprodutiva tanto em bovinos de corte, como de leite. Neste contexto, a contagem de folículos antrais (CFA) se destaca como um dos fatores de maior influência e ainda pouco compreendido. Empregando a ultrassonografia, fêmeas podem ser classificada em baixa, intermediária ou alta CFA, devido à alta variabilidade desta contagem no rebanho. Além disso, a alta repetibilidade desta característica possibilita realizar esta classificação em diferentes momentos da vida reprodutiva da fêmea. De maneira geral, doadoras de alta CFA tem proporcionado maiores rendimentos embrionários tanto na técnica in vivo quanto in vitro. Entretanto, fêmeas de baixa CFA têm apresentado maiores diâmetros foliculares e maior taxa de prenhez quando submetidas à IATF. Embora a CFA atue como um fator de grande influência, sua herdabilidade é baixa e não há relação com características zootécnicas de programas de melhoramento. Finalmente, a CFA tem se destacado como uma importante ferramenta de seleção de matrizes e que tem contribuído significativamente para um maior sucesso nos programas reprodutivos.

The implementation of reproductive biotechniques and genetic improvement programs has significantly contributed to a fast dissemination of animals with high genetic, both by artificial insemination and in vivo and in vitro embryo production. However, the efficiency of these programs is conditioned to several factors that can considerably affect the reproductive performance in both beef and dairy cattle. In this context, the antral follicle count (AFC) stands out as one of the most influential and still poorly understood factors. Females can be classified as low, intermediate, or high AFC by ultrasonography due to the high variability of this count in the herd. In addition, the high repeatability of this characteristic allows high confidence in carrying out this classification at different times of the reproductive life. In general, high AFC donors have provided higher embryo yields both in vivo and in vitro. However, females with low AFC have shown larger follicular diameters and higher pregnancy rate when submitted to TAI. Although AFC is a factor of great influence, its heritability is low and there is no relationship with zootechnical characteristics of breeding programs. Finally, AFC has emerged as an important tool to female’s selection and has significantly contributed to greater success in breeding programs.

Effect of the antral follicle count of Bos taurus × Bos indicus dairy cows on in vitro embryo production / Efeito da contagem de folículos antrais de vacas Bos taurus x Bos indicus com aptidão leiteira na produção in vitro de embriões

This study aimed to evaluate the potential of Girolando (Bos taurus × Bos indicus) cows with high and low antral follicle counts (AFC) for the in vitro production of bovine embryos (IVEP), as well as the pregnancy rates of the recipients of these embryos. Girolando cows (Bos taurus × Bos indicus) were classified as high and low AFC when they had 35-52 (n = 13) and 11-17 follicles (n = 15), respectively. All animals were subjected to repeated follicular aspiration [Ovum pick-up (OPU)] and subsequent IVEP sessions. The synchronization protocol of the recipients was performed on a random day of the estrous cycle (Day 0) with the implantation of progesterone, estradiol benzoate, and prostaglandin. The high AFC group had higher aspirated oocyte/OPU (42.6 ± 5.2 vs. 14.6 ± 1.9; p < 0.01) and cultured oocyte/OPU (38.1 ± 6.6 vs. 12.3 ± 2.8; p < 0.01) averages as well as a higher blastocyst percentage on D7 (23.0 ± 1.0% vs. 18.4 ± 1.5%; p < 0.05) and higher pregnancy rate (42.7 ± 2.7% vs. 39.7 ± 4.6%; p< 0.05) than the low AFC group. Thus, we can conclude that animals with high AFC had better IVEP success rates than animals with low AFC.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial de produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos de vacas da raça Girolando (Bos taurus x Bos indicus) com alta e baixa contagem de folículos antrais (CFA), bem como a taxa de prenhez nas receptoras destes embriões. As vacas da raça Girolando (Bos taurus x Bos indicus) foram classificadas como de alta CFA quando apresentavam de 35 a 52 folículos(n = 13) e baixa CFA, quando apresentavam de 11 a 17 folículos (n = 15). Todos os animais foram submetidos a repetidas sessões de aspiração folicular (OPU) e subsequente PIVE. O protocolo de sincronização das receptoras foi realizado em um dia aleatório do ciclo estral (Dia 0) com implante de progesterona, benzoato de estradiol e prostaglandina. O grupo de alta CFA obteve uma maior média de oócitos aspirados / OPU (42,6 ± 5,2 vs. 14,6 ± 1,9; p < 0,01); oócitos cultivados / OPU (38,1 ± 6,6 vs.12,3 ± 2,8; p < 0,01); porcentagem de blastocistos em D7 (23,0 ± 1,0% vs. 18,4 ± 1,5%; p < 0,05) e taxa de prenhez (42,7 ± 2,7% vs. 39,7 ± 4,6%; p < 0,05) maiores quando comparado ao grupo de baixa CFA. Desta maneira, podemos concluir que os animais de alta CFA apresentaram melhores taxas de PIVE que os animais de baixa CFA.

Effect of the antral follicle count of Bos taurus × Bos indicus dairy cows on in vitro embryo production / Efeito da contagem de folículos antrais de vacas Bos taurus x Bos indicus com aptidão leiteira na produção in vitro de embriões

This study aimed to evaluate the potential of Girolando (Bos taurus × Bos indicus) cows with high and low antral follicle counts (AFC) for the in vitro production of bovine embryos (IVEP), as well as the pregnancy rates of the recipients of these embryos. Girolando cows (Bos taurus × Bos indicus) were classified as high and low AFC when they had 35-52 (n = 13) and 11-17 follicles (n = 15), respectively. All animals were subjected to repeated follicular aspiration [Ovum pick-up (OPU)] and subsequent IVEP sessions. The synchronization protocol of the recipients was performed on a random day of the estrous cycle (Day 0) with the implantation of progesterone, estradiol benzoate, and prostaglandin. The high AFC group had higher aspirated oocyte/OPU (42.6 ± 5.2 vs. 14.6 ± 1.9; p < 0.01) and cultured oocyte/OPU (38.1 ± 6.6 vs. 12.3 ± 2.8; p < 0.01) averages as well as a higher blastocyst percentage on D7 (23.0 ± 1.0% vs. 18.4 ± 1.5%; p < 0.05) and higher pregnancy rate (42.7 ± 2.7% vs. 39.7 ± 4.6%; p< 0.05) than the low AFC group. Thus, we can conclude that animals with high AFC had better IVEP success rates than animals with low AFC.

Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial de produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos de vacas da raça Girolando (Bos taurus x Bos indicus) com alta e baixa contagem de folículos antrais (CFA), bem como a taxa de prenhez nas receptoras destes embriões. As vacas da raça Girolando (Bos taurus x Bos indicus) foram classificadas como de alta CFA quando apresentavam de 35 a 52 folículos(n = 13) e baixa CFA, quando apresentavam de 11 a 17 folículos (n = 15). Todos os animais foram submetidos a repetidas sessões de aspiração folicular (OPU) e subsequente PIVE. O protocolo de sincronização das receptoras foi realizado em um dia aleatório do ciclo estral (Dia 0) com implante de progesterona, benzoato de estradiol e prostaglandina. O grupo de alta CFA obteve uma maior média de oócitos aspirados / OPU (42,6 ± 5,2 vs. 14,6 ± 1,9; p < 0,01); oócitos cultivados / OPU (38,1 ± 6,6 vs.12,3 ± 2,8; p < 0,01); porcentagem de blastocistos em D7 (23,0 ± 1,0% vs. 18,4 ± 1,5%; p < 0,05) e taxa de prenhez (42,7 ± 2,7% vs. 39,7 ± 4,6%; p < 0,05) maiores quando comparado ao grupo de baixa CFA. Desta maneira, podemos concluir que os animais de alta CFA apresentaram melhores taxas de PIVE que os animais de baixa CFA.

Antioxidant activity of oily extract obtained from Lippia origanoides improves the quality of bovine embryos produced in vitro / Atividade antioxidante de óleo essencial obtido de Lippia origanoides melhora a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro

The aim of this study was to evaluate the supplementation of embryo culture medium with antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides on in vitro blastocyst development and quality. Oocytes collected from slaughterhouse ovaries were matured and fertilized in vitro following standard laboratory procedures. Zygotes were cultured in SOF medium supplemented according to the following treatments: T1 embryo culture medium without antioxidant supplementation; T2)50µM/mL Cysteamine; T3)2.5µg/mL; T4)5.0µg/mL and T5)10.0µg/mL of antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides. On the seventh day of culture, the blastocysts were fixed and evaluated for apoptosis rates, number of total cell and inner cell mass cells by means of the TUNEL Test. The use of antioxidants during cultivation did not increase (P> 0.05) the final blastocyst production rate. The treatments T2, T3, T4 and T5 had the lowest (P< 0.05) apoptotic indexes (4.5±1.1%, 8.4±2.5%, 3.4±1.1% and 5.5±0.9%, respectively) when compared to T1 treatment (10.0±1.4%). The number of inner cell mass did not differ (P> 0.05) among embryos from different treatments. The addition of antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides reduces the apoptosis rate and improves the quality without increasing the total in vitro production of bovine embryos.(AU)

O objetivo desse estudo foi avaliar a suplementação de meio de cultura de embriões com antioxidante obtido do extrato oleoso da Lippia origanoides no desenvolvimento e na qualidade de blastocistos produzidos in vitro. Oócitos coletados de ovários de matadouros foram maturados e fertilizados in vitro segundo procedimento laboratorial padrão. Zigotos foram cultivados em meio SOF suplementado de acordo com os seguintes tratamentos: T1) meio de cultivo embrionário sem suplementação antioxidantes; T2) 50µM/mL Cisteamina; T3) 2,5µg/mL; T4) 5,0µg/mL e T5) 10,0µg/mL do antioxidante obtido do extrato oleoso de Lippia origanoides. No sétimo dia de cultivo, os blastocistos foram fixados e avaliados para taxa de apoptose, número total de células e massa celular interna através do teste TUNEL. O uso de antioxidantes durante cultivo não aumentou (P>0,05) a taxa de produção final de blastócitos. Os tratamentos T2, T3, T4 e T5 tiverem menor índice apoptótico (p>0,05 - 4,5±1,1%, 8,4±2,5%, 3,4±1,1% e 5,5±0,9%, respectivamente) quando comparados a T2 (10,0±1,4%). O valor de massa celular interna não diferenciou (p>0,05) entre embriões de diferentes tratamentos. A adição de antioxidante obtido do extrato oleoso de Lippia origanoides reduziu a taxa de apoptose e melhorou a qualidade sem aumentar a produção in vitro de embriões bovinos.(AU)

Antioxidant activity of oily extract obtained from Lippia origanoides improves the quality of bovine embryos produced in vitro / Atividade antioxidante de óleo essencial obtido de Lippia origanoides melhora a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro

The aim of this study was to evaluate the supplementation of embryo culture medium with antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides on in vitro blastocyst development and quality. Oocytes collected from slaughterhouse ovaries were matured and fertilized in vitro following standard laboratory procedures. Zygotes were cultured in SOF medium supplemented according to the following treatments: T1 embryo culture medium without antioxidant supplementation; T2)50µM/mL Cysteamine; T3)2.5µg/mL; T4)5.0µg/mL and T5)10.0µg/mL of antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides. On the seventh day of culture, the blastocysts were fixed and evaluated for apoptosis rates, number of total cell and inner cell mass cells by means of the TUNEL Test. The use of antioxidants during cultivation did not increase (P> 0.05) the final blastocyst production rate. The treatments T2, T3, T4 and T5 had the lowest (P< 0.05) apoptotic indexes (4.5±1.1%, 8.4±2.5%, 3.4±1.1% and 5.5±0.9%, respectively) when compared to T1 treatment (10.0±1.4%). The number of inner cell mass did not differ (P> 0.05) among embryos from different treatments. The addition of antioxidant obtained from oily extract of Lippia origanoides reduces the apoptosis rate and improves the quality without increasing the total in vitro production of bovine embryos.(AU)

O objetivo desse estudo foi avaliar a suplementação de meio de cultura de embriões com antioxidante obtido do extrato oleoso da Lippia origanoides no desenvolvimento e na qualidade de blastocistos produzidos in vitro. Oócitos coletados de ovários de matadouros foram maturados e fertilizados in vitro segundo procedimento laboratorial padrão. Zigotos foram cultivados em meio SOF suplementado de acordo com os seguintes tratamentos: T1) meio de cultivo embrionário sem suplementação antioxidantes; T2) 50µM/mL Cisteamina; T3) 2,5µg/mL; T4) 5,0µg/mL e T5) 10,0µg/mL do antioxidante obtido do extrato oleoso de Lippia origanoides. No sétimo dia de cultivo, os blastocistos foram fixados e avaliados para taxa de apoptose, número total de células e massa celular interna através do teste TUNEL. O uso de antioxidantes durante cultivo não aumentou (P>0,05) a taxa de produção final de blastócitos. Os tratamentos T2, T3, T4 e T5 tiverem menor índice apoptótico (p>0,05 - 4,5±1,1%, 8,4±2,5%, 3,4±1,1% e 5,5±0,9%, respectivamente) quando comparados a T2 (10,0±1,4%). O valor de massa celular interna não diferenciou (p>0,05) entre embriões de diferentes tratamentos. A adição de antioxidante obtido do extrato oleoso de Lippia origanoides reduziu a taxa de apoptose e melhorou a qualidade sem aumentar a produção in vitro de embriões bovinos.(AU)

Evolução da utilização de espermatozoides sexados / Evolution of sexed spermatozoa utilization

A sexagem de espermatozoides tem relevante aplicação na produção animal. Várias publicações demonstram a eficiência do processo de sexagem por citometria de fluxo que separa os espermatozoides X e Y em função da mensuração do conteúdo de DNA. Importantes modificações no processo de sexagem por citometria de fluxo, tais como pressão, intensidade do laser, diluidores tem levado à diminuição dos danos nos espermatozoides e aumentado a viabilidade dos mesmos.(AU)

Spermatozoa sexing has an important application for livestock production. Results have been published worldwide that demonstrate effectiveness of the flow cytometer sexing process based on sorting sperm with differential DNA content as the X and Y sperm marker. Major improvements in the sexing sorting process as pressure, laser power, extenders had led to the decrease of sperm damage and increase of sperm viability(AU)

Evolução da utilização de espermatozoides sexados / Evolution of sexed spermatozoa utilization

A sexagem de espermatozoides tem relevante aplicação na produção animal. Várias publicações demonstram a eficiência do processo de sexagem por citometria de fluxo que separa os espermatozoides X e Y em função da mensuração do conteúdo de DNA. Importantes modificações no processo de sexagem por citometria de fluxo, tais como pressão, intensidade do laser, diluidores tem levado à diminuição dos danos nos espermatozoides e aumentado a viabilidade dos mesmos.

Spermatozoa sexing has an important application for livestock production. Results have been published worldwide that demonstrate effectiveness of the flow cytometer sexing process based on sorting sperm with differential DNA content as the X and Y sperm marker. Major improvements in the sexing sorting process as pressure, laser power, extenders had led to the decrease of sperm damage and increase of sperm viability

Passive transfer of immunity and serum proteinogram during the first 35 days of age in Nelore calves conceived naturally or through in vitro fertilization / Transferência de imunidade passiva e proteinograma sérico até os 35 dias de vida em bezerros da raça Nelore concebidos naturalmente ou produtos da fecundação in vitro

Background: Some reports indicate that calves produced by in vitro fertilization (IVF) may have excessive birth weights, increasing the rates of dystocia. Prolonged labor can cause the birth of lethargic calves that slowly ingest colostrum; this may compromise the intestinal absorption of immunoglobulins. Although the number of beef calves produced by IVF is high in Brazil, there have been few physiological studies examining the neonatal period in such cases. The aim of this study was to evaluate the passive transfer of immunity, and characterize the variation in serum protein concentrations, in Nelore calves up to 35 days of age, comparing naturally conceived calves with those conceived by IVF. Materials, Methods & Results: Forty healthy newborn Nelore calves were randomly selected and allocated into two groups (n = 20) according to their method of conception (natural versus IVF), and each group was composed of ten males and ten females. All calves were born and raised on the same farm, and kept with their mothers on extensive management condition. Blood samples were collected between 24 and 36 h after birth, and at 7, 14, 21, 28, and 35 days of age. Total protein (TP) concentration in serum was measured by the biuret method, and gamma-glutamyl transferase (GGT) serum activity was measured by the kinetic method. Concentrations of serum albumin, as well as alpha 1-, alpha 2 [...]

Passive transfer of immunity and serum proteinogram during the first 35 days of age in Nelore calves conceived naturally or through in vitro fertilization / Transferência de imunidade passiva e proteinograma sérico até os 35 dias de vida em bezerros da raça Nelore concebidos naturalmente ou produtos da fecundação in vitro

Background: Some reports indicate that calves produced by in vitro fertilization (IVF) may have excessive birth weights, increasing the rates of dystocia. Prolonged labor can cause the birth of lethargic calves that slowly ingest colostrum; this may compromise the intestinal absorption of immunoglobulins. Although the number of beef calves produced by IVF is high in Brazil, there have been few physiological studies examining the neonatal period in such cases. The aim of this study was to evaluate the passive transfer of immunity, and characterize the variation in serum protein concentrations, in Nelore calves up to 35 days of age, comparing naturally conceived calves with those conceived by IVF. Materials, Methods & Results: Forty healthy newborn Nelore calves were randomly selected and allocated into two groups (n = 20) according to their method of conception (natural versus IVF), and each group was composed of ten males and ten females. All calves were born and raised on the same farm, and kept with their mothers on extensive management condition. Blood samples were collected between 24 and 36 h after birth, and at 7, 14, 21, 28, and 35 days of age. Total protein (TP) concentration in serum was measured by the biuret method, and gamma-glutamyl transferase (GGT) serum activity was measured by the kinetic method. Concentrations of serum albumin, as well as alpha 1-, alpha 2 [...](AU)

USO DE VARIÁVEIS RELACIONADAS COM A PRODUÇÃO EMBRIONÁRIA, EM CAMUNDONGOS, COMO FATORES PREDITIVOS

A superestimulação visando a produção embrionária, em camundongos, é um procedimento multifatorial. Para minimizar o número de animais sacrificados e maximizar o resultado do tratamento superestimulatório, é necessário que haja uma predição do risco de não obter embriões de determinado animal. Este trabalho objetivou avaliar se as variáveis - concentração e horário da administração hormonal, presença de plug copulatório e macho utilizado seriam fatores preditivos na produção embrionária. Camundongas foram distribuídas em quatro grupos (fatorial 2x2), com o tratamento superovulatório iniciado às 13h ou às 17h e os hormônios (eCG e hCG) administrados com 5 ou 10UI. Após o hCG, os animais foram colocados com machos para a cópula. Na manhã seguinte foi verificada a presença de plug (D0,5). A recuperação dos embriões foi realizada entre D2,5 e D4,5, mediante lavagem dos ovidutos e cornos uterinos. As estruturas recuperadas (ETO) e os embriões viáveis (EVI) foram morfologicamente classificados. A porcentagem de EVI, em relação às ETO, foi considerada taxa de viabilidade embrionária (TVE). Os grupos foram comparados com a significância sendo considerada quando p

Uso de variáveis relacionadas com a produção embrionária, em camundongos, como fatores preditivos

A superestimulação visando a produção embrionária, em camundongos, é um procedimento multifatorial. Para minimizar o número de animais sacrificados e maximizar o resultado do tratamento superestimulatório, é necessário que haja uma predição do risco de não obter embriões de determinado animal. Este trabalho objetivou avaliar se as variáveis - concentração e horário da administração hormonal, presença de plug copulatório e macho utilizado seriam fatores preditivos na produção embrionária. Camundongas foram distribuídas em quatro grupos (fatorial 2x2), com o tratamento superovulatório iniciado às 13h ou às 17h e os hormônios (eCG e hCG) administrados com 5 ou 10UI. Após o hCG, os animais foram colocados com machos para a cópula. Na manhã seguinte foi verificada a presença de plug (D0,5). A recuperação dos embriões foi realizada entre D2,5 e D4,5, mediante lavagem dos ovidutos e cornos uterinos. As estruturas recuperadas (ETO) e os embriões viáveis (EVI) foram morfologicamente classificados. A porcentagem de EVI, em relação às ETO, foi considerada taxa de viabilidade embrionária (TVE). Os grupos foram comparados com a significância sendo considerada quando p

Efeito da estrutura ovárica e da idade de bovinos da raça Holstein Friesian na quantidade e qualidade de ovócitos e de embriões produzidos in vitro / Effect of ovarian structure and bovines age on amount and quality of oocytes and in vitro embryo production

O objetivo do presente trabalho, foi o estudo dos efeitos da idade e da fase do ciclo estral dos bovinos na quantidade e qualidade de ovócitos e de embriões produzidos in vitro. Para isso, foram utilizados ovócitos de 63 vacas da raça Holstein-Friesian abatidas em matadouro, com idades compreendidas entre 1 e 15 anos, as quais foram divididas em 5 lotes de acordo com a idade. Cada lote foi subdividido de acordo com a fase do ciclo estral em que o animal se encontrava no dia do abate, pela presença ou não de corpo lúteo funcional na superfície do ovário. Os lotes referentes à idade foram: <2; [2,4]; [5,6]; [7, 8] e >8 anos. Após punção dos folículos, os ovócitos foram divididos nas classes A, B, C e D, tendo em conta o seu aspecto morfológico, em que apenas os de classe A e B foram usados para a FIV. Observou-se que o número de ovócitos produzidos foi diretamente proporcional à idade das vacas (R=0,99 - P<0,001). Quanto à fase do ciclo estral, as vacas em fase luteínica, produziram maior número de ovócitos que as vacas em fase folicular (P<0,001), respetivamente 7,05 ± 0,11 e 10,87 ± 1,01. Relativamente à qualidade dos ovócitos em função da idade das vacas, observou-se uma correlação positiva (R = 0,94 p<0,01) até aos [7, 8] anos, começando a baixar a partir desta idade. As vacas em fase luteínica produziram ovócitos de melhor qualidade relativamente às vacas em fase folicular (6,77 ± 0,64 e 3,84± 0,64; respetivamente). Quanto à quantidade de zigotos que clivaram, esta foi superior para os lotes de vacas em fase luteínica em comparação com os de vacas em fase folicular (59,03% e 45,52%; respetivamente), observando-se ainda que as vacas em fase luteínica produziram igualmente, em geral, maior número de embriões aos 7 dias após FIV que as vacas em fase folicular(44,23% e 31,48%; respetivamente).(AU)

The aim of the present study was the evaluation of whether the age or the estrous cycle phase would influence the quantity and/or quality of oocytes and in vitro embryo production. Oocytes from ovaries of 63 Holstein- Friesian slaughtered cows, aging between 1 and 15 years old, were divided into 5 groups considering their age and then subdivided according to their phase of estrous cycle. The groups were: <2; [2, 4]; [5, 6]; [7, 8] and >8 years old. The estrous cycle phase (lutheal or follicular) was evaluated by the presence or absence of a functional corpus luteum. The cumulus-oocyte-complex (COCs) was divided in classes A, B, C and D according to their morphological aspect. The COCs classed as C and D were excluded, being the COCs classed as A and B matured in vitro and fertilized. As result of the study, it was observed that the number of total produced COCs was directly proportional to the age of the cow (R=0,99 - P<0,001). It has also noticed that cows in the lutheal phase produced more COCs than cows in the follicular phase (P<0,001), respectively 7,05 ± 0,11 and 10,87 ± 1,01. The COCs quality augmented from the group of cows aging less than 2 years to cows aging between [7, 8] years old, with a positive correlation (R = 0.94 p<0.01) starting then to decrease. It was also realized that cows in the lutheal phase produced better COCs quality than cows in the follicular phase (6,77 ± 0,64 e 3,84± 0,64; respectively). In what cleavage rate is concerned, better results were achieve with cows in lutheal phase (59,03%) then in follicular phase (45,52%). It was also possible to notice a better embryo production in cows in the lutheal phase (44,23%) then cows in the follicular phase. The results of the present study allow to conclude that there is a relation between the age and the estrous cycle stage in the quality and quantity of COCs and in vitro produced bovine embryos.(AU)

Desenvolvimento pós-fecundação de oócitos bovinos pré-maturados em fluido folicular / Post-fertilization development of bovine oocytes pre-matured in follicular fluid

Estudou-se o efeito da pré-maturação em fluido folicular bovino (FFb) sobre o potencial de desenvolvimento de ovócitos bovinos imaturos. Complexo cumulus- ovócitos (CCO) e FFb foram obtidos de ovários coletados em matadouro. O FFb foi inativado e os CCOs imaturos distribuídos em quatro tratamentos: (T1) 70 por cento de FFb em Talp Hepes, (T2) 100 por cento de FFb, (T3) 100 por cento de Talp Hepes, e (T4) controle. Em T1, T2 e T3 os CCOs foram pré - maturados por cinco horas a 37ºC em ar e posteriormente maturados in vitro. Em T4 a maturação ocorreu logo após a aspiração. Depois de fecundados in vitro, os ovócitos foram co-cultivados com células do cumulus por 10 dias. Avaliaram-se as taxas de clivagem, de produção de blastocistos no sétimo e oitavo dias pós- fecundação (PF), de produção total e de blastocistos eclodidos no oitavo e nono dias PF. Calcularam-se as taxas de blastocistos no sétimo e oitavo dia e de blastocistos eclodidos em função do total de blastocistos produzidos. As taxas de clivagem, de produção total e de blastocistos eclodidos não diferiram entre os tratamentos (P>0,05), entretanto a produção de blastocistos no sétimo dia foi menor nos tratamentos com FFb e Talp Hepes (P<0,05). Concluiu-se que FFb e Talp Hepes na pré-maturação por cinco horas atrasam o desenvolvimento embrionário sem comprometer a taxa de produção total de embriões ou sua viabilidade.(AU)

The effect of the pre-maturation with bovine follicular fluid (bFF) on developmental competence of immature bovine oocytes was studied. Cumulus-oocytes complexes (COC) and bFF were obtained from ovaries collected at slaughterhouse. bFF was inactivated prior to use and COCs were distributed in four treatments: (T1) 70% of bFF in Talp hepes, (T2) 100% of bFF, (T3) 100% of Talp Hepes medium, and (T4) control group. In T1, T2, and T3, COCs were incubated during 5h at 37ºC before proceeding with in vitro maturation. In T4, maturation was performed soon after follicular aspiration. After in vitro fertilization, the presumptive zygotes were co-cultured with cumulus cells during 10 days. It was evaluated cleavage, blastocyst on seventh and eighth days post-fertilization (PF), overall blastocyst and hatched blastocyst on eighth and ninth days PF. It was also calculated the ratio of blastocyst on seventh and eighth days, and hatched blastocyst in function of overall blastocyst production. Cleavage, overall blastocyst and hatched blastocyst rates were similar (P>0.05) among treatments. However, blastocyst production on seventh day was lower (P<0.05) for bFF and Talp Hepes. These results indicate that bFF and Talp Hepes in pre-maturation for five hours caused a delay on embryonic development, although the overall blastocyst production and viability were not affected.(AU)