Bacterial communities in artisanal raw bovine milk cheeses from the southern region of Brazil / Comunidades bacterianas em queijos artesanais de leite bovino cru da região sul do Brasil

The production of artisanal cheeses made with raw bovine milk has grown in the southern region of Brazil. It is important to obtain information about the risks of this practice, especially concerning food safety. In this study, next-generation sequencing was used to identify and characterize the bacterial communities of artisanal raw milk cheeses. We analyzed one pool of five raw milk samples (control group M1) from different dairy farms and nine pools (M2-M10) of 45 artisanal raw milk cheeses.The characterization of the bacterial communities included 199 species distributed across 59 different genera dispersed among the samples. Among the genera observed, 11 were classified as beneficial to the aroma, flavour, colour, and texture of the cheese. Thirty-one genera were classified as harmful to these characteristics. Another 17 were classified as potential pathogens for animals and humans, including Aeromonas, Bacillus, Cronobacter, Salmonella, Staphylococcus, and bacteria of the coliform group, including E. coli and Klebsiella. There was a significant difference (P < 0.05) in the number of bacterial communities identified between the control group (M1) and the two pools of artisanal raw milk cheeses (M2 and M8). This study demonstrated that next-generation sequencing provides in-depth information on the composition of the microbiota in artisanal raw milk cheeses, characterizing bacterial communities, identifying the wide microbial diversity, and identifying microbial benefits and risks.

Devido ao aumento da produção de queijos artesanais com leite bovino cru na região sul do Brasil, é importante obter informações sobre os riscos desta prática, principalmente no que se refere à segurança do alimento. Neste estudo foi utilizada a técnica de Next Generation Sequencing (NGS) para identificar e caracterizar comunidades bacterianas de queijos artesanais de leite cru. Foram analisados um pool de cinco amostras de leite cru como grupo controle (M1) de diferentes propriedades leiteiras localizadas na região norte do estado do Rio Grande do Sul, e nove pools (M2-M10) de 45 queijos artesanais de leite cru. A caracterização das comunidades bacterianas incluiu 199 espécies distribuídas em 59 gêneros diferentes dispersos entre as amostras. Dentre os gêneros observados, 11 foram classificados como benéficos ao aroma, sabor, cor e textura do queijo, enquanto 31 gêneros foram classificados como prejudiciais a essas características. Outros 17 foram classificados como potenciais patogênicos para animais e humanos, incluindo Aeromonas, Bacillus, Cronobacter, Salmonella, Staphylococcus, bactérias do grupo coliforme como Escherichia coli e Klebsiella. Houve diferença significativa (P < 0,05) entre o número de comunidades bacterianas identificadas no grupo controle (M1) e dois pools de queijos artesanais de leite cru (M2 e M8). Este estudo demonstra que o NGS fornece informações detalhadas sobre a composição da microbiota em queijos artesanais de leite cru, caracterizando comunidades bacterianas, identificando a ampla diversidade microbiana, os benefícios e riscos microbianos.

Microbial diversity in artisanal cheese produced and commercialized in Vale do Taquari in southern Brazil / Diversidade microbiana encontrada em queijos artesanais produzidos e comercializados no Vale do Taquari no sul do Brasil

Researchers have been utilizing matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) to identify bacteria and fungi directly from isolates obtained on culture plates; the resulting mass spectrum is then compared with spectra stored in the instrument software. Hence, a fast analytical response is obtained, and the more spectra are known to compare, the safer and more reliable the interpretation of the method will be. Thus, this study sought to identify the diversity of strains found in 10 samples of artisan cheese produced and commercialized in Vale do Taquari (Rio Grande do Sul State, Brazil) using MALDI-TOF MS. From the analyzed cheese, 22 strains were identified at the species level; one sample presented the pathogen Staphylococcus aureus, two showed the presence of lactic acid bacteria (Lactococcus lactis), and the vast majority (68.18%) of strains were composed of species of the Enterobacteriaceae family, with the prevalence of the genera Escherichia, Enterobacter, and Klebsiella. Escherichia coli was present in 50% of the samples analyzed. This demonstrates the need for greater control during all stages of artisanal cheese production and evaluation of the raw material, including safe practices during milking, so that the product meets the identity and quality parameters suitable for human consumption.

MALDI-TOF MS vendo sendo utilizado em laboratórios para identificar bactérias e fungos diretamente de isolados obtidos em placas de cultura. O espectro de massa resultante é então comparado com espectros armazenados no software do equipamento. Assim, obtém-se uma resposta analítica rápida, sendo que, quanto mais espectros forem conhecidos para comparar, mais seguro e confiável será a interpretação do método. Desta maneira, o presente trabalho teve por objetivo, identificar por MALDI-TOF MS, a diversidade de cepas encontrados em 10 amostras de queijos artesanais produzidos e comercializados no Vale do Taquari, Rio Grande do Sul, Brasil. Dos queijos analisados, 22 cepas foram identificadas a nível de espécie, sendo uma (1) amostra apresentou o patógeno Staphylococcus aureus, duas a presença da bactéria ácido láctica (Lactococcus lactis) e a grande maioria (68,18%) das cepas era composta por espécies da família Enterobacteriaceae, com prevalência dos gêneros Escherichia, Enterobacter e Klebsiella. E. coli estava presente em 50% das amostras analisadas. Isso demonstra a necessidade de um maior controle durante todas as etapas de produção do queijo artesanal, bem como a avaliação da matéria-prima, incluindo práticas seguras durante a ordenha para que o produto atenda aos parâmetros de identidade e qualidade, sendo apto ao consumo humano.

Antagonistic activity of lactic acid bacteria isolated from Minas artisanal cheeses against Brucella abortus / Atividade antagonista de bactérias lácticas isoladas de queijos Minas artesanais contra Brucella abortus

This study aimed to evaluate methods for studying the in vitro antimicrobial activity of lactic acid bacteria (LAB) against Brucella abortus and to evaluate the antagonistic effect of LAB on the viability of this pathogen. A total of 18 LAB strains (Lactobacillus plantarum, n = 11; Pediococcus acidilactici, n = 1; Lactobacillus rhamnosus, n = 4; and Lactobacillus brevis,n = 2), isolated from Minas artisanal cheeses produced in three regions (Canastra, Campos das Vertentes, and Araxá) of Minas Gerais State, Brazil, were tested for their antimicrobial activity against B. abortus using three methods: spot-on-lawn, agar well diffusion assay, and antagonistic activity of the culture supernatants. None of the tested LAB strains could inhibit B. abortus in the spot-on-lawn and agar-well diffusion assays. The supernatants produced by LAB had an acidic pH, with intensity depending on bacterial growth and strain, and could inhibit the growth of B. abortus. In contrast, pH-neutralized (pH 7.0) LAB supernatants did not suppress the growth of B. abortus. The results showed that the best technique to study the in vitro antagonism of LAB against B. abortus was the antagonistic activity of culture supernatants. The growth of B. abortus may have been inhibited by acid production.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar métodos de estudo in vitro da atividade antimicrobiana de bactérias lácticas contra Brucella abortus e avaliar o efeito antagônico das mesmas sobre a viabilidade deste patógeno. Um total de 18 amostras de bactérias lácteas (Lactobacillus plantarum, n = 11; Pediococcus acidilactici, n = 1; Lactobacillus rhamnosus, n = 4; e Lactobacillus brevis, n = 2), isoladas de exemplares de Queijo Minas Artesanal produzidos em três regiões (Canastra, Campos das Vertentes e Araxá) do estado de Minas Gerais, Brasil, foram testados quanto à sua atividade antimicrobiana contra B. abortus usando três métodos: spot-on-lawn, ensaio de difusão em poço e atividade antagonista de sobrenadante de cultura. Nenhuma das cepas testadas foi capaz de inibir B. abortus nos ensaios spot-on-lawm e de difusão em poço. Os sobrenadantes produzidos pelas bactérias lácteas apresentaram pH ácido, com intensidade dependente do crescimento bacteriano e da amostra, podendo inibir o crescimento de B. abortus. Em contraste, os sobrenadantes com pH neutralizado (pH 7,0) não inibiram o crescimento de B. abortus. Os resultados mostraram que a melhor técnica para estudar o antagonismo in vitro de bactérias lácteas contra B. abortus foi a atividade antagonista de sobrenadante de cultura. O crescimento de B. abortus pode ter sido inibido pela produção de ácido.(AU)

Interference of natural extract from Jatobá (Hymenaea martiana Hayne) with the physico-chemical characteristics and yield of goat milk and cheese / [Interferência do extrato natural de jatobá (Hymenaea martiana Hayne) sobre as características físico-químicas e o rendimento do leite e queijo coalho de cabra]

Several studies have assessed the therapeutic potential of natural products against mastitis, but only a few have evaluated the impacts of this alternative therapy on the main properties of milk and dairy products. In this study, we observed how the treatment of mastitis with ethanolic extract of Jatobá (Hymenaea martiana Hayne) influenced the physicochemical and sensory characteristics of coalho cheese. An ointment containing the ethanolic extract was prepared for intramammary use in six dairy goats. The experiment was conducted in three experimental moments. Milking was performed, manually, and both milk and cheese were subjected to physicochemical and sensory tests. No difference was observed (p>0.05) in the physicochemical aspects of milk between the studied groups. The solids-non-fat showed a statistical difference between experimental moments M1 and M2. The protein means varied from 3.33 to 3.62, and there was a statistical difference between the two moments, while the lactose means varied from 4.79 to 5.38%. The physicochemical aspects of cheese remained similar with both treatments. Except for appearance, the sensory characteristics showed no statistical difference. In conclusion, the use of Jatobá extract ointment did not influence the physicochemical and sensory characteristics of goat milk or cheese.

A mastite representa uma das principais enfermidades nos rebanhos de caprinos leiteiros, com implicações na produção de leite e na qualidade final dos derivados. Objetivou-se observar a influência do tratamento da mastite com o extrato etanólico da Hymenaea martiana Hayne sobre as características físico-químicas e sensoriais do queijo tipo coalho. Uma pomada contendo extrato foi elaborada para uso intramamário em seis fêmeas caprinas especializadas na produção de leite. As metades esquerdas dos tetos das cabras receberam essa infusão, enquanto a metade direita era controle. O experimento foi conduzido em três momentos experimentais. Realizou-se ordenha manual e análise físico-química do leite. Para o queijo, foram realizados testes físico-químicos e teste sensorial. Quantos aos aspectos físico-químicos do leite, é possível afirmar que não houve diferença (P>0,05) entre os grupos. Houve diferença estatística para sólidos não gordurosos nos momentos experimentais M1 e M2. As médias de proteína variaram entre 3,33 e 3,62, e houve diferença estatística em dois momentos. As médias de lactose variaram entre 4,79% e 5,38%. Os aspectos físico-químicos do queijo mantiveram resultados similares entre os dois tratamentos. Os parâmetros sensoriais para o queijo coalho de cabra não tiveram diferença estatística entre os tratamentos, contudo a aparência se destacou em relação aos demais parâmetros sensoriais. O uso da pomada elaborada com extrato de jatobá não interferiu sobre as características físico-químicas do leite de cabra e sobre as características físico-químicas e sensoriais do queijo tipo coalho de cabra.

Consumer willingness to pay for cheese with a social sustainability attribute / Disposição do consumidor de pagar pelo queijo com um atributo de sustentabilidade social

The social dimension of sustainability is becoming very relevant on the consumer purchasing decision, especially in the food sector. This research analyzed the willingness to pay (WTP) of Chilean consumers for cheese with a social sustainability attribute using a double-bounded dichotomous choice format. Results showed that the WTP for a price premium depends on three variables: age, income and previous knowledge regarding social sustainability. The mean WTP is 7.5% over the average price of cheese; although, combining relevant variables and changing values over their range shows that firms can obtain up to a 12.9% price premium if they focus on younger and high income consumers that have a previous good knowledge about social sustainability practices. Additionally, this study presented a novel market oriented methodological approach for identifying and quantifying specific niche markets based on the WTP.

RESUMO: A dimensão social da sustentabilidade está se tornando muito relevante na decisão de compra do consumidor, principalmente no setor alimentício. Esta pesquisa analisa a disposição a pagar (DAP) dos consumidores chilenos por queijo com um atributo de sustentabilidade social usando um formato de escolha dicotômica de duplo limite. Os resultados mostram que a DDP por um prêmio de preço depende de três variáveis: idade, renda e conhecimento prévio sobre sustentabilidade social. A DDP média é de 7,5% sobre o preço médio do queijo, embora a combinação de variáveis relevantes, e valores variáveis em sua faixa, mostre que as empresas podem obter um prêmio de preço de até 12,9% se se concentrarem em consumidores mais jovens e de alta renda que tenham um bom conhecimento prévio sobre práticas de sustentabilidade social. Além disso, este estudo apresenta uma nova abordagem metodológica orientada para o mercado a fim de identificar e quantificar nichos de mercado específicos com base na WTP.

Caracterização molecular de Staphylococcus aureus isolados de queijos artesanais da Serra da Canastra / Molecular characterization of Staphylococcus aureus isolated from artisanal cheeses from Serra da Canastra

O queijo Minas Artesanal da Canastra é produzido na Serra da Canastra (MG), utilizando leite cru, coalho e pingo, que é uma cultura endógena natural de cada queijaria. Devido ao uso de leite cru, o produto pode veicular microrganismos causadores de doenças veiculadas por alimentos, como Staphylococcus aureus. A caracterização molecular é uma ferramenta importante para avaliar a população microbiana do alimento e direcionar a aplicação de medidas de controle na produção. Este estudo caracterizou a diversidade genética, o potencial de virulência e determinou o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de S. aureus isolados de queijos produzidos na Serra da Canastra. Para o estudo transversal foram analisados 248 isolados de queijos que tinham um tempo de maturação de 22 dias, provenientes de 83 propriedades. Por outro lado, no estudo longitudinal foram analisados outros 197 isolados coletados ao longo do processo de maturação, provenientes de três propriedades. Os isolados foram submetidos a testes bioquímicos para confirmação do gênero e para a confirmação da espécie de S. aureus, foi identificado o gene nuc por meio da técnica de PCR. Além disso, foi pesquisado o gene mecA para a detecção de S. aureus Resistente a Meticilina (MRSA). Após os testes de confirmação, 144 isolados do estudo transversal e 159 do estudo longitudinal foram positivos para o gene nuc, específico para S. aureus. Posteriormente, o perfil clonal foi determinado por Eletroforese de Campo Pulsado (PFGE) utilizando a enzima SmaI e tipagem do locus agr por PCR multiplex. A análise por PFGE foi realizada no programa BioNumerics. A técnica PCR foi realizada para identificar a presença de genes que codificam a produção de hemolisinas, toxina TSST-1, enterotoxinas SEs (SEA, SEB, SEC, SED, SEE, SEG, SEH, SEI, SEJ, SEO, SEM), formação de biofilme e Componentes Microbianos de Superfície que Reconhecem a Matriz de Moléculas Adesivas (MSCRAMMs). Os isolados foram submetidos ao teste de susceptibilidade a antimicrobianos por disco de difusão. Por último, a formação de biofilme em microplaca de 96 poços, em caldo TSB a 37°C, foi verificada pela metodologia de Cristal Violeta. O gene mecA foi detectado em 1,9% dos 445 isolados. A tipagem agrrevelou que 83 (27,4%) dos isolados são do tipo agr-I, 95 (31,4%) agr-II e 43 (14,2%) agr-III, sendo que não foram detectados isolados classificados como agr-IV. A tipagem por PFGE revelou um total de 54 perfis. Assim, um isolado representativo de cada perfil foi utilizado nos demais testes que mostraram a presença dos genótipos spa mais frequentes t127 e t605 (20,58%); t002 (14,70%), seguidos pelos tipos t267 (8,82%); t1234 e t693 (5,8%) e t021, t177, t306, t321, t359, t442, t521, t693 e t5493 (2,9%). Além disso, encontramos a presença dos genes do grupo SEs, sea 1 (1,8%), seh 11 (20,3%), sei 10 (18,5%), sej 7 (12,9%), seg e seo 14 (25,9%), sem 8 (14,8%), e os genes seb, sec, sed, see e tst não foram detectados. Para os genes das hemolisinas, hla foi positivo em todos os isolados e hlb foi positivo em 53 (98,1%) isolados. Os genes positivos para MSCRAMMS foram fnbA, fnbB 18 (33,3%), clfA, clfB e eno 53 (98,1%), fib 44 (81,4%), bbp 4 (7,4%), cna 17 (31,4%) e ebps 10 (18,5%). Por último, os genes de formação de biofilme icaA e icaD estiveram presentes em 38 (70,3%) e 25 (46,2%) dos isolados, respectivamente. Na avaliação de susceptibilidade a antibióticos dos 54 isolados escolhidos, 25 (46,3%) apresentaram maior resistência a penicilina e 13 (24,0%) a tetraciclina. Em menor porcentagem (1,8%), 1 isolado cada foi resistente a eritromicina, cefoxitina, clindamicina, gentamicina, cotrimazol, azitromicina e trimetropim. Além disso, 8 isolados (14,8%) apresentaram resistência intermediaria a tetraciclina, 3 (5,5%) a gentamicina e 1 (1,8%) a tobramicina. No teste para a determinação da formação de biofilme por cristal violeta, 13,7%, foram classificados em isolados não formadores, 60,8% em fracamente formadores, 25,5% moderadamente formadores e nenhum como fortemente formador. A alta diversidade de cepas de S. aureus observada neste estudo mostrou que existem vários tipos de linhagens circulando na região da Canastra. A caracterização revelou uma elevada frequência de genes de virulência e que mais estudos são necessários para avaliar o potencial de produção de enterotoxinas nos queijos artesanais. A melhora dos procedimentos de higienização durante todas as etapas de produção pode ser uma solução para a redução dos níveis de contaminação por S. aureus

Canastra Minas Artesanal cheese is produced in Serra da Canastra (MG), using raw milk, rennet and a natural endogenous culture called pingo. Due to the use of raw milk, the product can carry microorganisms that cause foodborne diseases, such as Staphylococcus aureus. Molecular characterization is an important tool to assess the microbial population of food and guide the application of control measures in production. This study characterized the genetic diversity, virulence potential and determined the antimicrobial susceptibility profile of S. aureus isolated from cheeses produced in Serra da Canastra. A total of 248 isolates from 22 days ripened cheeses were obtained from 83 properties (cross sectional study). Another 197 isolates were collected during maturation (longitudinal study), in three properties. The isolates were submitted to biochemical tests to confirm the genus and to confirm the S. aureus species, the nuc gene was identified by PCR. In addition, the detection of mecA gene was performed for the detection of Methicillin Resistant S. aureus (MRSA). After confirmation tests, 144 isolates from the cross-sectional study and 159 from the longitudinal study were positive for the nuc gene, specific for S. aureus. Subsequently, the clonal profile of the isolates was determined by Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) using the SmaI enzyme and typing of the agr locus by multiplex PCR. PFGE analysis was performed using the BioNumerics program. PCR was performed to identify the presence of genes encoding the production of hemolysins, TSST-1 toxin, enterotoxins SEs (SEA, SEB, SEC, SED, SEE, SEG, SEH, SEI, SEJ, SEO, SEM), biofilm formation and microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules (MSCRAMMs). The isolates were submitted to the antimicrobial susceptibility test by disc diffusion. Finally, biofilm formation in a 96-well microplate in TSB broth at 37°C was verified by the Cristal Violeta method. The mecA gene was detected in 1.9% of the 445 isolates. Agr typing revealed that 83 (27.4%) of the isolates are agr-I, 95 (31.4%) agr-II and 43 (14.2%) agr-III, and no isolate was classified as agr-IV. PFGE typing revealed a total of 54 profiles. Thus, a representative isolate of each profile was used in the other tests that showed the presence of the most frequent spagenotypes t127, t605 (20.58%); t002 (14.70%), followed by types t267 (8.82%); t1234, t693 (5.8%) e t021, t177, t306, t321, t359, t442, t521, t693 and t5493 (2.9%). In addition, we found the presence of the genes of the SEs group: sea 1 (1.8%), seh 11 (20.3%), sei 10 (18.5%), sej 7 (12.9%), seg and seo 14 (25.9%), sem 8 (14.8%), while seb, sec, sed, see and tst genes were not detected. For hemolysin genes, hla was positive in all isolates and hlb was positive in 53 (98.1%) isolates. The positive genes for MSCRAMMS were: fnbA, fnbB 18 (33.3%), clfA, clfB e eno 53 (98.1%), fib 44 (81.4%), bbp 4 (7.4%), cna 17 (31.4%) and ebps 10 (18.5%). Finally, the biofilm formation genes icaA and icaD were present in 38 (70.3%) and 25 (46.2%) of the isolates, respectively. In the evaluation of antibiotic susceptibility of the 54 isolates, 25 (46.3%) showed greater resistance to penicillin and 13 (24.0%) to tetracycline. In a lower percentage (1.8%), 1 isolate each was resistant to erythromycin, cefoxitin, clindamycin, gentamicin, contrimazole, azithromycin and trimethoprim. In addition, 8 isolates (14.8%) showed intermediate resistance to tetracycline, 3 (5.5%) to gentamicin and 1 (1.8%) to tobramycin. In the test for the determination of biofilm formation by crystal violet, 13.7% were classified as non-forming isolates, 60.8% as weakly forming, 25.5% moderately forming and none as strongly forming. The high diversity of S. aureus strains observed in this study showed that there are several types of strains circulating in the Canastra region. The characterization revealed a high frequency of virulence genes and that further studies are needed to assess the potential for enterotoxin production in artisanal cheeses. The improvement of hygiene procedures during all stages of production can be a solution for reducing the levels of contamination by S. aureus

Caracterização da microbiota de queijos artesanais provenientes da Serra da Canastra - MG e da cultura iniciadora natural utilizada em sua produção / Microbiota characterization of artisanal cheeses from Serra da Canastra - MG and their endogenous starter culture

O queijo Canastra possui grande importância na cultura e economia local, é parte do Patrimônio Imaterial do Brasil (IPHAN, 2014) e recebeu o selo de produto com designação de origem em 2012 (INPI, 2016). Sua produção utiliza leite, sal, coalho e uma cultura iniciadora natural, chamada popularmente de pingo. Esse estudo visou a caracterização da microbiota presente no queijo maturado da Serra da Canastra e no pingo utilizado em sua produção utilizando técnicas avançadas de sequenciamento em larga escala para identificação das bactérias e fungos ali presentes. Nossos dados da microbiota bacteriana foram comparados com dados da microbiota de outros queijos brasileiros e do mundo disponíveis na literatura. As principais bactérias encontradas em amostras de pingo pertencem aos gêneros Lactococcus (45.6%), Streptococcus (30.3%), Staphylococcus (5.1%), e em amostras de queijo aos gêneros Lactococcus (22.5%), Streptococcus (27.2%), Corynebacterium (18.8%), Staphylococcus (13.6%), Leuconostoc (6.3%) e Weissella (6%). Os principais gêneros de fungos encontrados nos queijos foram Debaryomycesa (78.6%), Trichosporona (7.8%). Nosso estudo foi capaz de separar a microbiota dos queijos produzidos na Serra da Canastra de outros queijos na Europa e América do Norte, sendo o pH um possível fator de segregação. Também foi observada uma diferença entre a microbiota do queijo Canastra com outros queijos Brasileiros. Além disso, visualizamos que a distância geográfica entre produtores e a sazonalidade possuem um efeito sobre a microbiota dos pingos e queijos. A partir da análise de todos os microrganismos encontrados na microbiota bacteriana, foram detectados táxons que discriminam produtores por suas aplicações de boas práticas de fabricação e por sua infraestrutura. Observamos proporções menores de um táxon de Kocuria Kristinae nos pingos e um de Streptococcus nos queijos e proporções maiores de um táxon de Staphylococcus nos queijos. Também pudemos observar uma diminuição nas proporções de táxons de Debaryomycesa e aumento na proporção de táxons de Trichosporona na composição fúngica dos queijos, possivelmente devido a transição sazonal do período seco para o chuvoso. Usando técnicas moleculares de sequenciamento em larga escala, demonstramos que há uma diferença na microbiota presente em diferentes áreas da Serra da Canastra, um possível efeito da sazonalidade na composição fúngica e bacteriana. E evidenciamos que táxons de Streptococcus, Staphylococcus e Kocuria estão correlacionados às boas práticas de produção e elucidamos a conexão existente entre a microbiota do pingo e a do queijo. Estes resultados podem influenciar o desenvolvimento de métodos de rastreamento de sub-regiões específicas da Canastra e auxiliar os produtores na produção de queijos de boa qualidade, mantendo as características específicas de sua região

The Canastra cheese has great importance for the local culture and economy, being part of the Intangible Heritage of Brazil (IPHAN, 2014). It has received the protected designation of origin certification in 2012 (INPI, 2016). It's made using milk, salt, rennet and a endogenous starter culture, popularly called as "pingo". This study aimed to characterize the microbiota present in the Serra da Canastra's cheese and the pingo used in its production. In order to conduct this research we used next generation sequencing to identify the bacteria and fungi present there. Our bacterial microbiota dataset was compared with microbiota datasets from other Brazilian and world cheeses available in the literature. The main bacteria found were Lactococcus (45.6%), Streptococcus (30.3%) and Staphylococcus (5.1%) in the endogenous starter samples and Lactococcus (22.5%), Streptococcus (27.2%), Corynebacterium (18.8 %), Staphylococcus (13.6%), Leuconostoc (6.3%) and Weissella (6%) in cheese samples. The main fungi found in the cheeses were Debaryomycesa (78.6%) and Trichosporona (7.8%). We were able to separate the microbiota from Serra da Canastra cheeses and other cheeses in Europe and North America, being the pH a possible segregation factor. Furthermore, a difference was also observed between the microbiota of Canastra and other Brazilian cheeses. In addition, we observed that the geographical distance between producers and the seasonality could be affecting the pingos and cheeses microbiota. We found bacterial taxa that could discriminate producers by their good manufacturing practices and their local infrastructure. Low levels of good manufacturing practices (GMPs) were assigned to bigger proportions of a Kocuria Kristinae taxon in the pingos and a Staphylococcus taxon in the cheeses. Also, higher levels of GMPs were assigned to smaller proportions of Streptococcus taxons in the cheeses. Furthermore We could observe a decrease of Debaryomycesa and an increase of Trichosporona proportions in the fungal composition of cheeses. This could be due to a climate transition: from the dry season to the rainy season. Using large-scale sampling coupled with molecular sequencing techniques, we observe a connection between pingo and cheeses microbiota. We show that the microbiota of different areas in Serra da Canastra is different, also, there is a possible effect of seasonality on fungal and bacterial composition. Furthermore, we could see that Streptococcus, Staphylococcus and Kocuria taxons are correlated with good practices. These results may influence the development of tracking methods for specific Canastra subregions and assist producers to manufacture good quality cheeses while maintaining the specific characteristics of their region

Interações populacionais mediadas por quorum sensing na microbiota do soro-fermento utilizado na produção do queijo Canastra / Population interactions mediated by quorum sensing in the microbiota of the endogenous culture used in the production of canasta cheese

Bactérias regulam a expressão de diversos fenótipos de acordo com a sua densidade populacional, em um comportamento conhecido como quorum sensing. Em micro-organismos de origem alimentar, o quorum sensing pode influenciar na formação de biofilmes, produção de toxinas e de enzimas hidrolíticas. Em bactérias Gram-negativas a sinalização é normalmente mediada por moléculas de N-acilhomoserina lactona (AHLs), conhecidas por autoindutor 1 (AI-1). Estudos revelam a inibição do quorum sensing nestas bactérias por enzimas que degradam as AHLS, em um processo denominado quorum quenching. Tipicamente brasileiro, o queijo Canastra é um produto artesanal maturado, produzido a partir de leite cru e do pingo, um tipo de soro-fermento coletado e utilizado diariamente na produção. A composição microbiana do pingo é diversificada e característica da região produtora. Essa combinação de bactérias, única em cada queijaria, resulta em aroma e textura típicos. Enquanto a microbiota Gram-positiva contribui para o desenvolvimento de sabor, textura e aroma no produto, bactérias Gram-negativas nesses queijos são geralmente associadas à formação de olhaduras, aromas desagradáveis, má coagulação da massa e até à patogenicidade. Este trabalho visou analisar a interação entre a microbiota Gram-positiva e Gram-negativa presente no pingo pela detecção dos sistemas de quorum sensing e quorum quenching nas amostras. A presença de AHLs foi avaliada em 45 amostras de pingo, a partir da extração em acetato de etila acidificado e da avaliação dos extratos por meio de bioensaios com Agrobacterium tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372) e KYC55(pJZ410)(pJZ372)(pJZ384), resultando em apenas uma amostra positiva. Em seguida, 350 isolados foram obtidos a partir de 11 amostras de pingo, sendo 200 isolados classificados como Gram-positivos e 150 Gram-negativos. Os Gramnegativos foram avaliados quanto à produção de AHLs in vitro através de ensaio em placa utilizando as estirpes biossensoras A. tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372), Chromobacterium violaceum CV026 e Escherichia coli pSB403, resultando em 39 isolados produtores de AHLs, provenientes de 10 pingos diferentes. Já os isolados Gram-positivos foram analisados quanto à capacidade de inibição do QS utilizando as estirpes biossensoras C. violaceum CV026 e A. tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372), em meio suplementado com C6-HSL ou 3-oxo-C12-HSL. Foi detectada a inibição total da resposta ao quórum por 78 isolados testados, enquanto a inibição parcial foi provocada por outros 63. A inibição do crescimento das estirpes biossensoras também foi observada para 24 isolados. Os isolados promotores de inibição parcial foram recultivados em meio mínimo com C6-HSL ou 3-oxo-C12-HSL como únicas fontes de carbono. Foram recuperados 28 isolados, e a ação desses sobre diferentes substratos foi avaliada, resultando em 22 isolados produtores de lactonases e 6 produtores de acilase. Os 39 isolados Gram-negativos e os 28 isolados Gram-positivos finais foram identificados por MALDI-TOF MS, resultando, segundo o conhecimento do autor, no primeiro relato de produção de AHLs por Pseudomonas fulva, Enterobacter xiangfangensis e Lelliottia amnigena, bem como a produção de lactonases por Staphylococcus xylosus e a produção de acilase por S. aureus, Microbacterium maritypicum e Rothia kristinae. Este trabalho mostrou que interações populacionais mediadas por quorum sensing dependente de AHLs na microbiota do soro-fermento são possíveis. Porém, essas interações estão propensas a serem inibidas por meio de lactonases e acilases produzidas por parte das bactérias Gram-positivas

Bacteria regulate the expression of different phenotypes according to their population density, in a behavior known as quorum sensing. In food-borne microorganisms, quorum sensing can influence the formation of biofilms, production of toxins and hydrolytic enzymes. In Gram-negative bacteria, signaling is normally mediated by Nacyl homoserine lactone molecules (AHLs), known as autoinducer 1 (AI-1). Studies reveal the inhibition of quorum sensing in these bacteria by enzymes that degrade AHLS, in a process called quorum quenching. Typically Brazilian, Canastra cheese is a matured artisanal product, produced from raw milk and pingo, a type of endogenous culture collected and used daily in production. The microbial composition of pingo is diverse and characteristic of the producing region. This combination of bacteria, unique in each cheese factory, results in a typical aroma and texture. While the Gram-positive microbiota contributes to the development of flavor, texture and aroma in the product, Gram-negative bacteria in these cheeses are generally associated with the formation of eyes, off-flavors, poor curd coagulation and even pathogenicity. Thus, this work aimed to analyze the interaction between the Gram-positive and Gram-negative microbiota present in this culture by detecting quorum sensing and quorum quenching systems in the samples. The presence of AHLs was evaluated in 45 samples of pingo, with extraction with acidified ethyl acetate and the evaluation of the extracts through bioassays with Agrobacterium tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372) and KYC55(pJZ410)(pJZ372)(pJZ384 ), resulting in only one positive sample. Then, 350 isolates were obtained from 11 endogenous culture samples, with 200 being classified as Gram-positive and 150 Gram-negative. Gram-negatives were evaluated for the production of AHLs in vitro by plaque assay using the biosensor strains A. tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372), Chromobacterium violaceum CV026 and Escherichia coli pSB403, resulting in 39 AHL-producing isolates from 10 different samples. Gram-positive isolates were analyzed for their ability to inhibit quorum sensing using biosensor strains C. violaceum CV026 and A. tumefaciens WCF47(pCF218)(pCF372), in medium supplemented with N-hexanoyl-L-homoserine lactone or 3-oxo-dodecanoyl-Lhomoserine lactone. Total inhibition of the quorum response was detected by 78 tested isolates, while partial inhibition was caused by 63. Growth inhibition of biosensor strains was also observed for 24 isolates. Partial inhibition promoter isolates were recultured on minimal medium with C6-HSL or 3-oxo-C12-HSL as sole carbon sources. Twenty-eight isolates were recovered, and the action of these isolates on different substrates was evaluated, resulting in 22 lactonase producers and 6 acylase producers. The 39 Gram-negative isolates and the final 28 Grampositive isolates were identified by MALDI-TOF MS, resulting, to the best of the author's knowledge, in the first report of AHL production by Pseudomonas fulva, Enterobacter xiangfangensis and Lelliottia amnigena, as well as the lactonase production by Staphylococcus xylosus and acylase production by S. aureus, Microbacterium maritypicum and Rothia kristinae. This work demonstrated that population interactions mediated by AHLs-dependent quorum sensing in Canastra cheese endogenous culture microbiota are possible. However, these interactions are prone to inhibition by lactonases and acylases produced by Gram-positive bacteria

Investigação metagenômica em queijos tipo coloniais, produzidos com leite pasteurizado e comercializados no estado do Rio Grande do Sul, Brasil / Metagenomic investigation in colonial cheese produced with pasteurized milk and sold in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Investigación metagenómica en quesos de tipo colonial, producidos con leche pasteurizada y comercialziados en el estado de Río Grande do Sul, Brasil

Leite e derivados são alimentos muito susceptíveis a ataques de micro-organismos. Sua fiscalização no Brasil está a cargo das Inspeções Municipais, Estaduais ou Federais, sendo a verificação da qualidade higiênico-sanitária dos alimentos uma atividade de extrema importância. Este estudo utilizou a análise metagenômica para investigar sequencias genéticas microbianas em 12 marcas de queijo tipo colonial produzidos sob diferentes regimes de fiscalização pública, e comercializados no estado do Rio Grande do Sul em dois municípios distintos. Foi identificado DNA de micro-organismos pertencentes a quatro filos microbianos: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes e Proteobacteria. Dentre os resultados mais relevantes, sequências genéticas de micro-organismos patogênicos ou prejudiciais à tecnologia do leite foram evidenciados, com os gêneros Acinetobacter, Bacillus e Pseudomonas ocorrrendo em 100% das amostras avaliadas. Outras bactérias de importância em saúde pública, como as pertencentes à Família Enterobacteriaceae e o gênero Staphylococcus foram detectados e são discutidos. À comparação das medianas de detecção nos 3 níveis de fiscalização, quando da avaliação por pares, evidenciou-se diferença estatística entre as esferas municipal e federal (PT= 0,03), com maior mediana registrada em nível municipal. À avaliação entre os municípios, não foi evidenciada diferença significativa (PMW= 0,81). Sugere-se melhor qualidade microbiológica do queijo, e/ou leite utilizado como matéria-prima, pertencentes à produção submetida à Inspeção Federal em relação à Municipal.(AU)

Milk and dairy products are very susceptible foods to microorganism attacks. Its control in Brazil is submitted to Municipal, State or Federal Inspections, and verification of the hygienic-sanitary quality of food is an extremely important activity. This study used metagenomic analysis to investigate microbial genetic sequences in 12 brands of colonial cheese produced under different Public Inspection regimes and selled in two different municipalities in the state of Rio Grande do Sul. DNA from microorganisms belonging to four microbial Phyla have been identified: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes and Proteobacteria. Among the most relevant results, genetic sequences of pathogenic microorganisms or harmful to milk technology were evidenced, with Acinetobacter, Bacillus and Pseudomona sbacterias occurring in 100% of the evaluated samples. Other public health important bacterias, such as those belonging to the Enterobacteriaceae and Staphylococcus spp. were detected and discussed. Comparing the detection medians in the 3 levels of inspection by peer evaluation, a statistical difference was highlighted between the Municipal and Federal levels (PT= 0,03), with the highest median recorded at Municipal level. It is suggested better microbiological quality of cheese, and / or milk used as raw material, when they belong to the production submitted to the Federal Inspection in relation to Municipal one.(AU)

La leche y los derivados son alimentos muy susceptibles a los ataques de microorganismos. Su fiscalización en Brasil es responsabilidad de las inspecciones municipales, estatales o federales, y la verificación de la calidad higiénico-sanitaria de los alimentos es una actividad extremadamente importante. Este estudio utilizó el análisis metagenómico para investigar secuencias genéticas microbianas en 12 marcas de queso colonial com produción sometida a diferentes regímenes de inspección pública, y comercializadas en el estado de Rio Grande do Sul en dos municipios diferentes. Se han identificado ADN de microorganismos pertenecientes a cuatro filamentos microbianos: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes y Proteobacteria. Entre los resultados más relevantes, se evidenciaron secuencias genéticas de microorganismos patógenos o nocivos para la tecnología de la leche,com detección de los géneros Acinetobacter, Bacillus y Pseudomonas en el 100% de las muestras evaluadas. Se detectaron y discutieron otras bacterias de importancia para la salud pública, como las que pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y el género Staphylococcus. La comparación de las medianas de detección en los 3 niveles de inspección, cuando la evaluación por pares, mostró una diferencia estadística entre los niveles municipales y federales (PT= 0,03), con la mediana más alta registrada a nivel municipal. En la evaluación entre los municipios, no se evidenciaron diferencias significativas (PMW= 0.81). Se sugiere una mejor calidad microbiológica del queso, y / o leche utilizada como materia prima, perteneciente a la producción sometida a la Inspección Federal en relación con el Municipal.(AU)

Investigação metagenômica em queijos tipo coloniais, produzidos com leite pasteurizado e comercializados no estado do Rio Grande do Sul, Brasil / Metagenomic investigation in colonial cheese produced with pasteurized milk and sold in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Investigación metagenómica en quesos de tipo colonial, producidos con leche pasteurizada y comercialziados en el estado de Río Grande do Sul, Brasil

Leite e derivados são alimentos muito susceptíveis a ataques de micro-organismos. Sua fiscalização no Brasil está a cargo das Inspeções Municipais, Estaduais ou Federais, sendo a verificação da qualidade higiênico-sanitária dos alimentos uma atividade de extrema importância. Este estudo utilizou a análise metagenômica para investigar sequencias genéticas microbianas em 12 marcas de queijo tipo colonial produzidos sob diferentes regimes de fiscalização pública, e comercializados no estado do Rio Grande do Sul em dois municípios distintos. Foi identificado DNA de micro-organismos pertencentes a quatro filos microbianos: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes e Proteobacteria. Dentre os resultados mais relevantes, sequências genéticas de micro-organismos patogênicos ou prejudiciais à tecnologia do leite foram evidenciados, com os gêneros Acinetobacter, Bacillus e Pseudomonas ocorrrendo em 100% das amostras avaliadas. Outras bactérias de importância em saúde pública, como as pertencentes à Família Enterobacteriaceae e o gênero Staphylococcus foram detectados e são discutidos. À comparação das medianas de detecção nos 3 níveis de fiscalização, quando da avaliação por pares, evidenciou-se diferença estatística entre as esferas municipal e federal (PT= 0,03), com maior mediana registrada em nível municipal. À avaliação entre os municípios, não foi evidenciada diferença significativa (PMW= 0,81). Sugere-se melhor qualidade microbiológica do queijo, e/ou leite utilizado como matéria-prima, pertencentes à produção submetida à Inspeção Federal em relação à Municipal.

Milk and dairy products are very susceptible foods to microorganism attacks. Its control in Brazil is submitted to Municipal, State or Federal Inspections, and verification of the hygienic-sanitary quality of food is an extremely important activity. This study used metagenomic analysis to investigate microbial genetic sequences in 12 brands of colonial cheese produced under different Public Inspection regimes and selled in two different municipalities in the state of Rio Grande do Sul. DNA from microorganisms belonging to four microbial Phyla have been identified: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes and Proteobacteria. Among the most relevant results, genetic sequences of pathogenic microorganisms or harmful to milk technology were evidenced, with Acinetobacter, Bacillus and Pseudomona sbacterias occurring in 100% of the evaluated samples. Other public health important bacterias, such as those belonging to the Enterobacteriaceae and Staphylococcus spp. were detected and discussed. Comparing the detection medians in the 3 levels of inspection by peer evaluation, a statistical difference was highlighted between the Municipal and Federal levels (PT= 0,03), with the highest median recorded at Municipal level. It is suggested better microbiological quality of cheese, and / or milk used as raw material, when they belong to the production submitted to the Federal Inspection in relation to Municipal one.

La leche y los derivados son alimentos muy susceptibles a los ataques de microorganismos. Su fiscalización en Brasil es responsabilidad de las inspecciones municipales, estatales o federales, y la verificación de la calidad higiénico-sanitaria de los alimentos es una actividad extremadamente importante. Este estudio utilizó el análisis metagenómico para investigar secuencias genéticas microbianas en 12 marcas de queso colonial com produción sometida a diferentes regímenes de inspección pública, y comercializadas en el estado de Rio Grande do Sul en dos municipios diferentes. Se han identificado ADN de microorganismos pertenecientes a cuatro filamentos microbianos: Acinetobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes y Proteobacteria. Entre los resultados más relevantes, se evidenciaron secuencias genéticas de microorganismos patógenos o nocivos para la tecnología de la leche,com detección de los géneros Acinetobacter, Bacillus y Pseudomonas en el 100% de las muestras evaluadas. Se detectaron y discutieron otras bacterias de importancia para la salud pública, como las que pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y el género Staphylococcus. La comparación de las medianas de detección en los 3 niveles de inspección, cuando la evaluación por pares, mostró una diferencia estadística entre los niveles municipales y federales (PT= 0,03), con la mediana más alta registrada a nivel municipal. En la evaluación entre los municipios, no se evidenciaron diferencias significativas (PMW= 0.81). Se sugiere una mejor calidad microbiológica del queso, y / o leche utilizada como materia prima, perteneciente a la producción sometida a la Inspección Federal en relación con el Municipal.

Detection of mycobacteria in coalho cheese sold in Northeastern Brazil / Detecção de micobactérias em queijo de coalho comercializado no Nordeste do Brasil

The aim of the present study was to detect and identify Mycobaterium spp. in 50 samples of coalho cheese sold in the Northeast region of Brazil. Of the 50 analyzed samples, 35 were produced by the artisanal process, using raw milk, and 15 originated from industrialized establishments that pasteurize milk. Conventional and real-time nested PCR for the rv2807 gene of the M. tuberculosis complex was performed directly from the 50 analyzed samples. Samples of coalho cheese were grown simultaneously in Stonebrink medium, and conventional PCR was performed from the bacterial isolates with primers that flank differentiation region 4 (DR4), specific to M. bovis, mb400F. Bacterial isolates negative by PCR for RD4 were subjected to PCR for hsp65 of Mycobacterium spp., with subsequent DNA sequencing. The cultures were negative for the M. tuberculosis complex, but two samples (4%) from the artisanal process (with raw milk) exhibited identity with hsp65 of Mycobacterium lehmanii (Sequence ID: KY933786.1, identities: 312/363 [86%]); and Mycobacterium rutilum (sequence ID: LT629971.1, identities: 331/371 [89%]), showing to be indicative environmental contamination. Non-tuberculous mycobacteria are emergent and ubiquitous microorganisms; therefore, they deserve greater attention in the cheese production chain, both in terms of Good Agricultural Practices (GAP)

O presente estudo teve como objetivo detectar e identificar Mycobaterium spp. em 50 amostras de queijo de coalho comercializados na região Nordeste do Brasil. Das 50 amostras analisadas, 35 foram produzidas pelo processo artesanal, com leite cru e 15 provenientes de estabelecimentos industrializados que realizam a pasteurização do leite. Nested-PCR convencional e em tempo real para o gene rv2807 do Complexo M. tuberculosis foi realizada diretamente das cinquenta amostras analisadas. Paralelamente, as amostras de queijo de coalho foram cultivadas em meio de Stonebrink e dos isolados bacterianos foi realizada PCR convencional com iniciadores que flanqueiam a região de diferenciação 4 (RD4), específica de M. bovis, mb400F. Os isolados bacterianos negativos na PCR para RD4 foram submetidos à PCR para hsp65 de Mycobacterium spp., com posterior sequenciamento do DNA. As culturas mostraram-se negativas para o Complexo M. tuberculosis, porém duas amostras oriundas do processo artesanal (com leite cru) (4%) apresentaram identidade com hsp65 de Mycobacterium lehmanii (ID da sequência: KY933786.1, identidades: 312/363 [86%]); e Mycobacterium rutilum (ID da sequência: LT629971.1, identidades: 331/371 [89%]), apontando-se como indicativos de contaminação ambiental. As micobactérias-não-tuberculosas (MNT) são microrganismos emergentes e de natureza ubíqua. Devido a essas características merecem maior atenção na cadeia produtiva de queijos, tanto nas boas práticas agropecuárias (BPAs) quanto nas boas práticas de fabricação de alimentos (BPFs).

Distribuição, origem e preço de queijos de ovelha em estabelecimentos comerciais da região de Curitiba/PR / Distribution, origin and prices of sheep's cheese in commercial establishments in the region of Curitiba/PR

A produção de leite e derivados lácteos de ovelhas no Brasil é recente e está em crescimento, mas o consumo ainda é considerado baixo. Portanto, o objetivo deste trabalho foi realizar um levantamento da comercialização dos queijos de ovelha em estabelecimentos comerciais da região de Curitiba/PR. Os dados foram coletados em 14 supermercados de diferentes bairros da cidade e também no Mercado Municipal, onde 11 lojas foram visitadas. A pesquisa iniciou-se no setor de laticínios dos estabelecimentos, buscando diretamente a presença do queijo ovino, em seguida, foram catalogados todos os queijos de ovelha encontrados. Também foram coletados dados de três tipos de queijo mussarela nacional e três tipos de queijo parmesão importado (ambos de vaca), para que fosse realizada a comparação com a média de preços do queijo de ovelha. Dentre os 25 estabelecimentos visitados, 68% comercializavam queijo de ovelha. Destes queijos, 43,24% eram nacionais, com uma média de preço por kg de R$ 185,58 e, para os importados, a média de preço por kg foi de R$ 269,71, sendo Espanha, França, Itália e Portugal os principais países de origem. Na comparação do preço dos queijos de ovelha com os de vaca, pode-se verificar que os queijos de ovelha têm um valor 4,7 vezes mais alto para o consumidor, para os queijos nacionais, e 2,2 vezes, para os importados. Há um potencial de crescimento para o mercado consumidor de queijos de ovelha em Curitiba, mas é necessário que haja maior concorrência com a oferta de produtos nacionais com valores mais competitivos.

The production of sheep's milk and dairy products in Brazil is recent and growing, but consumption is still considered low. Therefore, the objective from this work was to conduct a survey on the commercialization of sheep's cheese in commercial establishments in the Curitiba-PR region. The data was collected in 14 supermarkets in different neighborhoods of the city and also in the Municipal Market, where 11 stores were visited. The survey started in the dairy sector of the establishments, directly aiming at the presence of sheep cheese; then, all sheep cheeses found were catalogued. Data were also collected from three types of national mozzarella cheese and three types of imported parmesan cheese (both cow), in order to make the comparison with the average price of sheep's cheese. Among the 25 establishments visited, 68% marketed sheep's cheese. Of these cheeses, 43.24% were domestic, with an average price per kg of R$ 185.58 and, for those imported, the average price per kg was R$ 269.71, being Spain, France, Italy and Portugal the main countries of origin. When comparing the price of sheep's cheese with cow's cheese, it can be seen that sheep's cheese has a value 4.7 times higher for the consumer, for domestic cheese and 2.2 times higher for imported cheese. There is a potential for growth in the consumer market of sheep's cheese in Curitiba, but there needs to be more competition with the supply of domestic products with more competitive values.

Detection of mycobacteria in coalho cheese sold in Northeastern Brazil / Detecção de micobactérias em queijo de coalho comercializado no Nordeste do Brasil

The aim of the present study was to detect and identify Mycobaterium spp. in 50 samples of coalho cheese sold in the Northeast region of Brazil. Of the 50 analyzed samples, 35 were produced by the artisanal process, using raw milk, and 15 originated from industrialized establishments that pasteurize milk. Conventional and real-time nested PCR for the rv2807 gene of the M. tuberculosis complex was performed directly from the 50 analyzed samples. Samples of coalho cheese were grown simultaneously in Stonebrink medium, and conventional PCR was performed from the bacterial isolates with primers that flank differentiation region 4 (DR4), specific to M. bovis, mb400F. Bacterial isolates negative by PCR for RD4 were subjected to PCR for hsp65 of Mycobacterium spp., with subsequent DNA sequencing. The cultures were negative for the M. tuberculosis complex, but two samples (4%) from the artisanal process (with raw milk) exhibited identity with hsp65 of Mycobacterium lehmanii (Sequence ID: KY933786.1, identities: 312/363 [86%]); and Mycobacterium rutilum (sequence ID: LT629971.1, identities: 331/371 [89%]), showing to be indicative environmental contamination. Non-tuberculous mycobacteria are emergent and ubiquitous microorganisms; therefore, they deserve greater attention in the cheese production chain, both in terms of Good Agricultural Practices (GAP)(AU)

O presente estudo teve como objetivo detectar e identificar Mycobaterium spp. em 50 amostras de queijo de coalho comercializados na região Nordeste do Brasil. Das 50 amostras analisadas, 35 foram produzidas pelo processo artesanal, com leite cru e 15 provenientes de estabelecimentos industrializados que realizam a pasteurização do leite. Nested-PCR convencional e em tempo real para o gene rv2807 do Complexo M. tuberculosis foi realizada diretamente das cinquenta amostras analisadas. Paralelamente, as amostras de queijo de coalho foram cultivadas em meio de Stonebrink e dos isolados bacterianos foi realizada PCR convencional com iniciadores que flanqueiam a região de diferenciação 4 (RD4), específica de M. bovis, mb400F. Os isolados bacterianos negativos na PCR para RD4 foram submetidos à PCR para hsp65 de Mycobacterium spp., com posterior sequenciamento do DNA. As culturas mostraram-se negativas para o Complexo M. tuberculosis, porém duas amostras oriundas do processo artesanal (com leite cru) (4%) apresentaram identidade com hsp65 de Mycobacterium lehmanii (ID da sequência: KY933786.1, identidades: 312/363 [86%]); e Mycobacterium rutilum (ID da sequência: LT629971.1, identidades: 331/371 [89%]), apontando-se como indicativos de contaminação ambiental. As micobactérias-não-tuberculosas (MNT) são microrganismos emergentes e de natureza ubíqua. Devido a essas características merecem maior atenção na cadeia produtiva de queijos, tanto nas boas práticas agropecuárias (BPAs) quanto nas boas práticas de fabricação de alimentos (BPFs).(AU)

Development of stuffed coalho cheese in the traditional, lactose-free and probiotic-added formulations / Desenvolvimento de queijo de coalho trufado nas versões tradicional, delactosado e com adição de probiótico

The probiotic products from the dairy market have been extensively exploited as well as lactose-free derivatives, suitable for lactose intolerant individuals. This research aimed to manufacture stuffed cheese with Brazilian cream cheese and spices in three versions (traditional, lactose-free, and probiotic cheese) and evaluate their quality by physico-chemical and microbiological analyses, Lactic Acid Bacteria (LAB) viability, and acceptance and preference assays. Physico-chemical properties of the formulations were all in accordance with the standards for the fat content of the Ordinance No. 146 for the traditional (54.06%) and probiotic (45.45%) full-fat samples and free-lactose (39.28%) medium-fat sample. Regarding the microbiological safety, all the samples presented to be ready for consumption, and the LAB count were still viable after 42 days of storage in the probiotic formulation at the order of 108 log CFU/mL. The lactose-free formulation achieved the highest acceptance rates among the public regarding sensorial qualities with an average grade of 7.27 out of 9. In the end, the three types of stuffed coalho cheese were successful in total quality control and also the probiotic formulation with the desired viable count after storage and lactose-free formulation with the best acceptance rates by the public.(AU)

A crescente consciência dos consumidores sobre a relação existente entre saúde e dieta, tem despertado o interesse por alimentos que promovem efeitos benéficos ao ser humano. Desta maneira, o mercado de produtos lácteos com alegações probióticas passou a ser bastante explorado, assim como os delactosados, adequados ao público intolerante a lactose. O objetivo deste estudo foi produzir queijo de coalho trufado com requeijão e especiarias nas versões tradicional, delactosado e com adição de probiótico, sendo realizadas análises físico-química, microbiológicas, viabilidade das bactérias ácido láticas, teste de aceitação e preferência. As características físico-químicas dos queijos produzidos permaneceram dentro dos padrões da legislação brasileira. Os queijos desenvolvidos apresentaram segurança microbiológica para consumo e as bactérias ácido láticas revelaram-se viáveis no produto por um período de 42 dias. Considerado mais uma alternativa para o público com intolerância a lactose, o queijo coalho trufado delactosado demonstrou melhor aceitação sensorial em relação as demais versões.(AU)

Methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis in handler of cheese made with goat's milk in Brazil / Staphylococcus epidermidis resistente à meticilina em manipulador de queijo elaborado com leite de cabra no Brasil

In the Northeastern Brazil, artisanal cheese production is an important local economic activity for small producers. Methicillin resistant Staphylococcus is responsible for causing infection in animals and humans. This study described the first detection of methicillin resistant S. epidermidis isolated in the nasal cavity of a handler of coalho cheese made with goats milk in Northeastern Brazil. This brief communication highlighted the importance of adopting biosafety measures by cheese handlers, in order to reduce possible contamination and the spread of pathogens in the production chain of this type of artisanal cheese in Brazil.(AU)

Na região Nordeste do Brasil, a cadeia de produção de queijo artesanal é uma atividade local importante para pequenos produtores. Staphylococcus resistentes à meticilina são responsáveis por causar infecções em animais e seres humanos. Neste estudo descreve se a primeira detecção de S. epidermidis resistente à meticilina isolado da cavidade nasal de um manipulador de queijo coalho elaborado com leite de cabra no Nordeste do Brasil. Este relato destaca a importância da adoção de medidas de biossegurança por manipuladores de queijo, a fim de reduzir possíveis contaminações e a disseminação de patógenos na cadeia produtiva deste tipo de queijo artesanal no Brasil.(AU)

Assessment of the microbiological quality of pattern minas cheese commercialized in Uberlândia and Patos de Minas, Minas Gerais / Avaliação microbiológica de queijo minas padrão comercializado em Uberlândia e Patos de Minas, Minas Gerais

Pattern minas cheese is a product developed with pasteurized milk, fermented with mesophilic cultures, and with the final addition of rennet. This cheese undergoes an artisanal maturation process and possesses a firm shell of yellowish color and striking and acidic flavor. Our study objective was to evaluate the microbiological quality of pattern minas cheese. We collected 40 samples from two micro regions (Uberlândia and Patos de Minas) of the Triângulo Mineiro and Alto Paranaíba mesor regions of the State of Minas Gerais, Brazil. The microbiological test results were recorded as counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, coagulase-positive Staphylococcus and Salmonella spp. In the Patos de Minas micro region, the results were 45%, 35%, 20%, and 20% higher than 103 CFU/g for the counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, and Staphylococcus coagulase-positive, respectively. Five percent of the analyzed samples were positive for Salmonella spp. in the Uberlândia micro region. Based on the findings of the microbiota in the cheese analyzed from the micro regions (Uberlândia and Patos de Minas), we concluded that the hygiene conditions in the manufacturing, handling, transport, and storage stages were precarious, requiring the implementation of Good Manufacturing Practices (GMP) systems, including Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP).(AU)

O queijo minas padrão é um produto elaborado com leite pasteurizado, fermentado com culturas mesófilas e adição de coalho. Esse queijo passa por um processo de maturação artesanal, possui uma casca firme de cor amarelada e sabor ácido. O presente trabalho avaliou a qualidade microbiológica de queijo minas padrão comercializado em duas microrregiões (Uberlândia e Patos de Minas) da mesorregião do Triângulo Mineiro e Alto Paranaíba do estado de Minas Gerais, Brasil. Foram examinadas 40 amostras de queijo. Os ensaios microbiológicos foram contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35 oC, Staphylococcus coagulase positiva e pesquisa de Salmonella spp. Na microrregião de Patos de Minas, os resultados foram de 45%, 35%, 20% e 20% superiores a 103 CFU/g para as contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35oC e Staphylococcus coagulase positiva, respectivamente. Cinco por cento das amostras analisadas foram positivas à pesquisa de Salmonella spp. Considerando a microrregião analisada (Uberlândia e Patos de Minas), a conclusão obtida foi que na região estudada, as condições de higiene nas etapas de fabricação, manuseio, transporte e armazenamento do queijo minas padrão são precárias, sendo necessária a implementação de sistemas de Boas Práticas de Fabricação (GMP), incluindo Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (HACCP).(AU)

Caracterização microbiológica do queijo minas artesanal comercializado em São Paulo: segurança, higiene e diversidade microbiana / Microbiological characterization of artisanal minas cheese marketed in São Paulo: safety, hygiene and microbial diversity

Existe no Brasil uma grande variedade de queijos que se enquadram no conceito de "queijo minas artesanal". Produtores consideram que a legislação que regula o setor, em níveis municipal, estadual e federal, é confusa e excessivamente rigorosa, dificulta a padronização dos produtos, interfere no crescimento do setor e facilita a comercialização de queijos em desacordo com os padrões de higiene e segurança estabelecidos. Este trabalho de pesquisa de mestrado pretendeu gerar dados sobre as condições higiênico-sanitárias e segurança microbiológica de queijos minas artesanal, produzidos em Minas Gerais e coletados no comércio da cidade de São Paulo, bem como contribuir com informações a respeito da diversidade bacteriana nos queijos estudados. Foram estudadas 100 amostras de queijo minas artesanal coletadas no comercio de São Paulo, que foram submetidas à enumeração de microrganismos indicadores de higiene (coliformes, Escherichia coli e estafilococos), Salmonella e Listeria monocytogenes, empregando técnicas convencionais de cultivo e também moleculares. Os estafilococos coagulase positivos foram estudados quanto à tolerância à biocidas de interesse para alimentos, determinando-se também a diversidade microbiana, utilizando-se Next Generation Sequencing em Illumina MiSeq. Os resultados indicaram baixa ocorrência dos patógenos estudados, e que 10% e 32% das amostras excederam os limites para Escherichia coli e estafilococos coagulase positiva estabelecidos pelas legislações vigentes, respectivamente. Entre os estafilococos coagulase positiva, 37,7% foram tolerantes a algum dos biocidas testados, com maior prevalencia dos tolerantes ao cloreto de benzalcônio (75%). Quanto à diversidade bacteriana, os gêneros predominantes foram Streptococcus (32,7%), Lactococcus (30,6%) e Corynebacterium (15,6%). A microbiota bacteriana detectada nos queijos Canastra estudados não apresentou dissimilaridade quando comparada à microbiota bacteriana de outros queijos Canastra coletados nos locais de produção em outro estudo. Observou-se que as regiões de coleta dos queijos na cidade de São Paulo e os pontos de comercialização em São Paulo apresentam maior influência sobre a microbiota detectada para o queijo minas artesanal do que as regiões de produção (p<0,05), sugerindo a interferência das práticas de manipulação após a produção na diversidade bacteriana detectada nos queijos

There is a wide variety of cheeses in Brazil that fit the concept of "artisanal minas cheese". Producers consider that the legislation that regulates the sector, at municipal, state and federal levels, is confusing and excessively strict, hinders the standardization of products, interferes with the growth of the sector and facilitates the marketing of cheeses in disagreement with the hygiene and safety standards. This master's research work aimed to generate data on the hygienic-sanitary conditions and microbiological safety of artisanal Minas cheeses, produced in Minas Gerais and collected in São Paulo's commerce, as well as to contribute with information about the bacterial diversity in the studied cheeses. One hundred samples of artisanal Minas cheese collected in the São Paulo market were subjected to the enumeration of hygiene indicator microorganisms (coliforms, Escherichia coli and staphylococci), Salmonella and Listeria monocytogenes, using conventional cultivation and also molecular techniques. Coagulase positive staphylococci were studied for tolerance to biocides of interest to food, and microbial diversity was also determined using Next Generation Sequencing in Illumina MiSeq. The results indicated a low occurrence of the studied pathogens, and that 10% and 32% of the samples exceeded the limits for Escherichia coli and coagulase positive staphylococci established by the current legislation, respectively. Among the coagulase positive staphylococci, 37.7% were tolerant to at least one of the tested biocides, with a greater prevalence of those tolerant to benzalkonium chloride (75%). As for microbial diversity, the predominant genera were Streptococcus (32.7%), Lactococcus (30.6%) and Corynebacterium (15.6%). The bacterial microbiota detected in the studied Canastra cheeses showed no dissimilarity when compared to the bacterial microbiota of other Canastra cheeses collected at the production sites in another study. It was observed that the cheese collection regions in the city of São Paulo and the marketing points in São Paulo had a greater influence on the detected bacterial microbiota than the production regions (p<0.05), suggesting the interference of the practices of manipulation after production in the bacterial diversity detected in the cheeses

Assessment of the microbiological quality of pattern minas cheese commercialized in Uberlândia and Patos de Minas, Minas Gerais / Avaliação microbiológica de queijo minas padrão comercializado em Uberlândia e Patos de Minas, Minas Gerais

Pattern minas cheese is a product developed with pasteurized milk, fermented with mesophilic cultures, and with the final addition of rennet. This cheese undergoes an artisanal maturation process and possesses a firm shell of yellowish color and striking and acidic flavor. Our study objective was to evaluate the microbiological quality of pattern minas cheese. We collected 40 samples from two micro regions (Uberlândia and Patos de Minas) of the Triângulo Mineiro and Alto Paranaíba mesor regions of the State of Minas Gerais, Brazil. The microbiological test results were recorded as counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, coagulase-positive Staphylococcus and Salmonella spp. In the Patos de Minas micro region, the results were 45%, 35%, 20%, and 20% higher than 103 CFU/g for the counts of enterobacteria, Escherichia coli, coliforms at 35°C, and Staphylococcus coagulase-positive, respectively. Five percent of the analyzed samples were positive for Salmonella spp. in the Uberlândia micro region. Based on the findings of the microbiota in the cheese analyzed from the micro regions (Uberlândia and Patos de Minas), we concluded that the hygiene conditions in the manufacturing, handling, transport, and storage stages were precarious, requiring the implementation of Good Manufacturing Practices (GMP) systems, including Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP).(AU)

O queijo minas padrão é um produto elaborado com leite pasteurizado, fermentado com culturas mesófilas e adição de coalho. Esse queijo passa por um processo de maturação artesanal, possui uma casca firme de cor amarelada e sabor ácido. O presente trabalho avaliou a qualidade microbiológica de queijo minas padrão comercializado em duas microrregiões (Uberlândia e Patos de Minas) da mesorregião do Triângulo Mineiro e Alto Paranaíba do estado de Minas Gerais, Brasil. Foram examinadas 40 amostras de queijo. Os ensaios microbiológicos foram contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35 oC, Staphylococcus coagulase positiva e pesquisa de Salmonella spp. Na microrregião de Patos de Minas, os resultados foram de 45%, 35%, 20% e 20% superiores a 103 CFU/g para as contagens de enterobactérias, Escherichia coli, coliformes a 35oC e Staphylococcus coagulase positiva, respectivamente. Cinco por cento das amostras analisadas foram positivas à pesquisa de Salmonella spp. Considerando a microrregião analisada (Uberlândia e Patos de Minas), a conclusão obtida foi que na região estudada, as condições de higiene nas etapas de fabricação, manuseio, transporte e armazenamento do queijo minas padrão são precárias, sendo necessária a implementação de sistemas de Boas Práticas de Fabricação (GMP), incluindo Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (HACCP).(AU)

Methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis in handler of cheese made with goat's milk in Brazil / Staphylococcus epidermidis resistente à meticilina em manipulador de queijo elaborado com leite de cabra no Brasil

ABSTRACT: In the Northeastern Brazil, artisanal cheese production is an important local economic activity for small producers. Methicillin-resistant Staphylococcus is responsible for causing infection in animals and humans. This study described the first detection of methicillin-resistant S. epidermidis isolated in the nasal cavity of a handler of coalho cheese made with goat's milk in Northeastern Brazil. This brief communication highlighted the importance of adopting biosafety measures by cheese handlers, in order to reduce possible contamination and the spread of pathogens in the production chain of this type of artisanal cheese in Brazil.

RESUMO: Na região Nordeste do Brasil, a cadeia de produção de queijo artesanal é uma atividade local importante para pequenos produtores. Staphylococcus resistentes à meticilina são responsáveis por causar infecções em animais e seres humanos. Neste estudo descreve-se a primeira detecção de S. epidermidis resistente à meticilina isolado da cavidade nasal de um manipulador de queijo coalho elaborado com leite de cabra no Nordeste do Brasil. Este relato destaca a importância da adoção de medidas de biossegurança por manipuladores de queijo, a fim de reduzir possíveis contaminações e a disseminação de patógenos na cadeia produtiva deste tipo de queijo artesanal no Brasil.

Development of stuffed coalho cheese in the traditional, lactose-free and probiotic-added formulations / Desenvolvimento de queijo de coalho trufado nas versões tradicional, delactosado e com adição de probiótico

ABSTRACT: The probiotic products from the dairy market have been extensively exploited as well as lactose-free derivatives, suitable for lactose intolerant individuals. This research aimed to manufacture stuffed cheese with Brazilian cream cheese and spices in three versions (traditional, lactose-free, and probiotic cheese) and evaluate their quality by physico-chemical and microbiological analyses, Lactic Acid Bacteria (LAB) viability, and acceptance and preference assays. Physico-chemical properties of the formulations were all in accordance with the standards for the fat content of the Ordinance No. 146 for the traditional (54.06%) and probiotic (45.45%) full-fat samples and free-lactose (39.28%) medium-fat sample. Regarding the microbiological safety, all the samples presented to be ready for consumption, and the LAB count were still viable after 42 days of storage in the probiotic formulation at the order of 108 log CFU/mL. The lactose-free formulation achieved the highest acceptance rates among the public regarding sensorial qualities with an average grade of 7.27 out of 9. In the end, the three types of stuffed coalho cheese were successful in total quality control and also the probiotic formulation with the desired viable count after storage and lactose-free formulation with the best acceptance rates by the public.

RESUMO: A crescente consciência dos consumidores sobre a relação existente entre saúde e dieta, tem despertado o interesse por alimentos que promovem efeitos benéficos ao ser humano. Desta maneira, o mercado de produtos lácteos com alegações probióticas passou a ser bastante explorado, assim como os delactosados, adequados ao público intolerante a lactose. O objetivo deste estudo foi produzir queijo de coalho trufado com requeijão e especiarias nas versões tradicional, delactosado e com adição de probiótico, sendo realizadas análises físico-química, microbiológicas, viabilidade das bactérias ácido láticas, teste de aceitação e preferência. As características físico-químicas dos queijos produzidos permaneceram dentro dos padrões da legislação brasileira. Os queijos desenvolvidos apresentaram segurança microbiológica para consumo e as bactérias ácido láticas revelaram-se viáveis no produto por um período de 42 dias. Considerado mais uma alternativa para o público com intolerância a lactose, o queijo coalho trufado delactosado demonstrou melhor aceitação sensorial em relação as demais versões.