Phlebotomine (Diptera: Psychodidae) species and their blood meal sources in a new leishmaniasis focus in Los Montes de María, Bolívar, in northern Colombia / Especies de flebotomíneos y sus fuentes de ingesta sanguínea en un nuevo foco de leishmaniasis en Los Montes de María (Bolívar) al norte de Colombia

Abstract Introduction. El Alférez, a village in Los Montes de María (Bolívar, Colombia) and a macro-focus of leishmaniasis, recorded its first case in 2018, evidencing changes in the distribution and eco-epidemiology of the disease, although interactions between vectors and local fauna remain unknown. Objective. To evaluate the diversity of sandflies and their blood meal sources in the community of El Alférez in the municipality of El Carmen de Bolívar (Bolívar, Colombia). Materials and methods. In 2018, sandflies were collected using LED-based light traps in domestic, peridomestic, and sylvatic ecotopes and identified at the species level. Multiplex polymerase chain reaction targeting the mitochondrial cytochrome B gene was used to analyze blood from the digestive tract. Results. Lutzomyia evansi was the most abundant species (71.85%; n = 485/675), followed by Lu. panamensis, Lu. gomezi, Lu. trinidadensis, Lu. dubitans, Lu. abonnenci, and Lu.aclydifera. Twenty-five percent of the species had blood meals from Canis familiaris (36.00%; n = 9/25), Ovis aries (36.00%; n=9:/25), Bos taurus (24.00%; n = 6/25), Sus scrofa (20.00%; n = 5/25), and Homo sapiens (8.00%; n = 2/25). Lutzomyia evansi registered the highest feeding frequency (68.00%; n = 17/25), predominantly on a single (44.00%; n = 11/25) or multiple species (24.00%; n = 6/25). Conclusion. Results indicate a eclectic feeding behavior in Lu. evansi, implying potential reservoir hosts for Leishmania spp. and increasing transmission risk. This study is a first step towards understanding the diversity of mammalian blood sources used by sandflies, that may be crucial for vector identification and formulation of effective control measures.

Resumen Introducción. En 2018, en la vereda El Alférez de Los Montes de María (Bolívar, Colombia), un macrofoco de leishmaniasis, se reportó el primer caso y se evidenciaron cambios en la distribución y ecoepidemiología de la enfermedad. No obstante, las interacciones entre vectores y fauna local aún son desconocidas. Objetivo. Evaluar la diversidad de flebotomíneos y sus fuentes de alimentación sanguínea en la comunidad de El Alférez del municipio de El Carmen de Bolívar (Bolívar, Colombia). Materiales y métodos. En el 2018, se recolectaron flebotomíneos mediante trampas de luz led ubicadas en el domicilio, el peridomicilio y en el área silvestre, y se identificaron a nivel de especie. Se utilizó la reacción en cadena de la polimerasa múltiple dirigida al gen mitocondrial citocromo B para analizar la sangre del aparato digestivo. Resultados. Lutzomyia evansi fue la especie más abundante (71,85 %; n = 485/675), seguida por Lu. panamensis, Lu. gomezi, Lu. trinidadensis, Lu. dubitans, Lu. abonnenci y Lu. aclydifera. El 25 % (n = 25/100) de las especies analizadas tuvieron como fuentes de ingesta sanguínea a Canis familiaris (36 %; n = 9/25), Ovis aries (36 %; n = 9/25), Bos taurus (24 %; n = 6/25), Sus scrofa (20 %; n = 5/25) y Homo sapiens (8 %; n = 2/25). Lutzomyia evansi fue la especie con la mayor frecuencia de alimentación (68 %; n = 17/25), predominantemente de una sola especie (44 %; n = 11/25) o de varias (24 %; n = 6/25). Conclusiones. Los hallazgos indican un comportamiento alimenticio ecléctico en Lu. evansi que implica potenciales reservorios para Leishmania spp. y eleva el riesgo de transmisión. Este estudio es un primer paso para comprender la diversidad de fuentes sanguíneas de mamíferos, utilizadas por los flebotomíneos, y que pueden ser cruciales para identificación de vectores y la formulación de medidas de control eficaces.

Development and implementation of a multiplex PCR for the detection of 4 species of Vibrio / Desarrollo e implementación de una PCR múltiple para la detección de 4 especies de Vibrio

Abstract Aim: Different species of the genus Vibrio are pathogenic for humans, the aim of this study was to standardize a multiplex PCR to identify four Vibrio species. Methods. 126 isolates environmental and 66 from the surveillance program INS were analyzed by PCR species-specific genes. Results. Of the total isolates, 124 were PCR positive for one of the species-specific genes. The PCR achieved the identification of the four target species (V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus and V. fluvialis), showing specificity and sensitivity between 1-2 ng/ul. Discussion. A multiplex PCR was developed that could provide reliable identification of four Vibrio species.

Resumen Objetivo: diferentes especies del género Vibrio son patógenas para los humanos, el objetivo de este estudio fue estandarizar una PCR múltiple para identificar cuatro especies de Vibrio. Metodología: 126 aislamientos ambientales y 66 aislamientos recuperados del programa de vigilancia fueron analizados mediante amplificación por PCR de genes especie específicos. Resultados: del total de aislamientos, 124 fueron positivos por PCR para uno de los genes especie-específicos. La PCR logró la identificación de las cuatro especies blanco (V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus y V. fluvialis), mostrando especificidad y sensibilidad entre 1-2 ng/ul. Discusión: se desarrolló una PCR múltiple que provee una identificación confiable de las cuatro especies de Vibrio.

Introducción de nuevos ensayos de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para el diagnóstico y vigilancia de virus respiratorios / Introduction of new assays of real time polymerase's chain reaction for the diagnosis and surveillance of respiratory viruses

Las infecciones respiratorias agudas constituyen la causa fundamental de mortalidad y morbilidad en el ámbito mundial. Los principales agentes causales de estas infecciones son los virus. La detección rápida y eficaz de estos patógenos es determinante en el tratamiento y la prevención de las enfermedades que estos agentes virales pueden ocasionar. En la actualidad, los métodos moleculares para el diagnóstico virológico son muy útiles por su elevada sensibilidad, especificidad y rapidez en la obtención de los resultados. El objetivo es introducir cuatro ensayos múltiples de transcripción reversa de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para el diagnóstico y vigilancia de 15 virus respiratorios. Se procesaron 2 441 muestras clínicas respiratorias recibidas en el Laboratorio Nacional de Referencia de Virus Influenza y otros Virus Respiratorios en el período comprendido entre septiembre de 2013 y abril de 2014. Se analizaron 2 352 exudados nasofaríngeos, 77 aspirados bronquiales y 12 muestras de necropsia. A estas se les realizó el diagnóstico molecular por los sistemas múltiples de transcripción reversa de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real mediante el empleo de cebadores y sondas TaqMan. De las 2 441 muestras clínicas estudiadas, 1 290 fueron positivas para alguno de los virus respiratorios (52,85 por ciento). El virus sincitial respiratorio humano se detectó con mayor frecuencia (47,83 por ciento), seguido de los virus influenza (19 por ciento) y los rinovirus humanos (14,73 por ciento). Se concluye que la introducción de los cuatro ensayos de transcripción reversa de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real posibilita la actualización del algoritmo diagnóstico en el Laboratorio Nacional de Referencia de Virus Influenza y otros Virus Respiratorios para la vigilancia de estos agentes en Cuba, lo que contribuye al mejoramiento del Programa Nacional de Prevención y Control de las Infecciones Respiratorias Agudas(AU)

Acute respiratory infections are the major cause of mortality and morbidity worldwide. Respiratory viruses are the main causative agents of acute respiratory infections. Rapid and accurate detection of these pathogens is critical for the treatment and prevention of the diseases these viral agents can cause. Currently, molecular diagnostic methods are useful tools for the virological detection of respiratory viruses due to its high sensitivity, specificity and their speed in obtaining results. The objective of this study was to introduce four multiplex real-time TR-RCP assays for the diagnosis and surveillance of fifteen virus causing acute respiratory infections. 2 441 clinical respiratory samples were processed in the period between September 2013 and April 2014 in the National Laboratory of Reference for Influenza Virus and other Respiratory Viruses. There were analyzed 2 352 nasopharyngeal exudates, 77 bronchial aspirations and 12 necropsy samples. Multiplex real-time TR-RCP was performed using TaqMan primers and probes previously published. From the 2 441 clinical samples studied, 1 290 were positive for some of the respiratory viruses, which represent 52.85 percent Syncytial respiratory virus was the most frequently detected virus (47.83 percent), then influenza viruses (19 percent) and human rhinovirus (14.73 percent). The introduction at the National Reference Laboratory of the four multiplex real-time TR-RCP assays allows updating the algorithm for the diagnosis and surveillance of respiratory viruses in Cuba, as a contribution to the National Program for the Prevention and Control of Acute Respiratory Infection(AU)

[Identification of mycobacteria to the species level by molecular methods in the Public Health Laboratory of Bogotá, Colombia]. / Identificación de Mycobacterium spp a través de métodos moleculares en el Laboratorio de Salud Pública de Bogotá, Colombia.

INTRODUCTION: Global epidemiology of non-tuberculous mycobacteria (NTM) is unknown due to the fact that notification is not required in many countries, however the number of infection reports and outbreaks caused by NTM suggest a significant increase in the last years. Traditionally, mycobacteria identification is made through biochemical profiles which allow to differentiate M. tuberculosis from NTM, and in some cases the mycobacteria species. Nevertheless, these methods are technically cumbersome and time consuming. On the other hand, the introduction of methods based on molecular biology has improved the laboratory diagnosis of NTM. OBJECTIVE: To establish the NTM frequency in positive cultures for acid-fast bacilli (AAFB) which were sent to Laboratorio de Salud Pública de Bogotá over a 12 month period. MATERIALS AND METHODS: A total of 100 positive cultures for acid-fast bacilli from public and private hospitals from Bogotá were identified by both biochemical methods and the molecular methods PRA (PCR-restriction enzyme analysis) and multiplex-PCR. Furthermore, low prevalence mycobacteria species and non-interpretable results were confirmed by 16SrDNA sequentiation analysis. RESULTS: Identification using the PRA method showed NMT occurrence in 11% of cultures. In addition, this molecular methodology allowed to detect the occurrence of more than one mycobacteria in 4% of the cultures. Interestingly, a new M. kubicae pattern of PCR-restriction analysis is reported in our study. CONCLUSION: Using a mycobacteria identification algorithm, which includes the molecular method PRA, improves the diagnostic power of conventional methods and could help to advance both NTM epidemiology knowledge and mycobacteriosis control.

Detección directa de genes toxigénicos de Bacillus cereus en fécula de maíz y harina de trigo mediante reacción en cadena de la polimerasa múltiple (mPCR) / Direct detection of toxigenic genes of Bacillus cereus in corn starch and wheat flour using multiplex polymerase chain reaction (mPCR)

Introducción: Bacillus cereus es una bacteria contaminante de alimentos y patógena en humanos, cuya toxina emética o cereúlida (Ces) causa el síndrome emético y las enterotoxinas hemolítica o hemolisina BL (Hbl), no hemolítica (Nhe) y citotoxina K (CytK), el síndrome diarreico. Objetivo: Determinar la presencia de genes toxigénicos de Bacillus cereus en muestras de ADN obtenido directamente de fécula de maíz y de harina de trigo, mediante reacción en cadena de la polimerasa múltiple. Materiales y métodos: Se determinaron los genes toxigénicos de Bacillus cereus en muestras de ADN extraído directamente de fécula de maíz y harina de trigo, utilizando una reacción en cadena de la polimerasa múltiple específica para los genes cesB, hblC, nheA y cytK. Resultados: De 76 muestras de fécula de maíz, el 60,5% presentó los genes toxigénicos de Bacillus cereus, que fueron agrupados en seis consorcios: I: hblC, cytK (30,4%), II: nheA, hblC, cytK (21,7%), III: hblC (19,6%), IV: nheA (15,2%), V: nheA, hblC (10,9%), VI: nheA, hblC, cytK, cesB (2,2%). De 79 muestras de harina de trigo, el 65,8% presentó los genes toxigénicos de Bacillus cereus, que se agruparon en cuatro consorcios: I: nheA, hblC, cytK (80,8%), II: hblC, cytK (11,5%), III: hblC (5,8%), IV: nheA, hblC (1,9%)...

Introduction: Bacillus cereus is a human pathogen that causes two kinds of foodborne diseases, the emetic syndrome caused by emetic toxin or cereulide (Ces), and the diarrheal syndrome caused by three different enterotoxins, the hemolytic enterotoxin or hemolysin BL (Hbl), the nonhemolytic enterotoxin (Nhe) and the cytotoxin K (CytK). Objective: To determine the presence of toxigenic genes of Bacillus cereus in DNA samples directly obtained from corn starch and wheat flour using multiplex polymerase chain reaction. Material and methods: The presence of toxigenic genes of Bacillus cereus were determinedin DNA samples directly extracted from corn starch and wheat flour, using a multiplex polymerase chain reaction technique specific for cesB, hblC, nheA and cytK genes. Results: From a total of 76 corn starch samples, 60.5% had toxigenic genes of Bacillus cereus and were grouped in six consortia: I: hblC, cytK (30.4%), II: nheA, hblC, cytK (21.7%), III: hblC (19.6%), IV: nheA (15.2%), V: nheA, hblC (10.9%) and VI: nheA, hblC, cytK, cesB (2.2%). From 79 wheat flour samples tested, 65.8% had toxigenic genes of Bacillus cereus and were grouped into four consortia: I: nheA, hblC, cytK (80.8%), II: hblC, cytK (11.5%), III: hblC (5.8%) and IV: nheA, hblC (1.9%)...