Ação antifúngica e potencial antibiofilme de diferentes terapias alternativas frente a leveduras do gênero candida / Antifungal action and antibiofilm potential of different alternative therapies against yeasts of the genus candida

As candidoses usualmente são tratadas com antifúngicos. No entanto, o efeito desses fármacos é usualmente comprometido pela resistência microbiana e pelos efeitos adversos ocasionados. Nesse sentido, o aumento da prevalência e a complexidade de microrganismos multirresistentes a antimicrobianos têm incitado a busca por terapias complementares e alternativas capazes de atuar efetivamente frente à resistência emergente aos medicamentos. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi avaliar comparativamente a ação antimicrobiana e o potencial antibiofilme, in vitro, entre a terapia fotodinâmica antimirobiana (TFDA) com azul de metileno, a fitoterapia, utilizando o extrato hidroetanólico de Spondias mombin L (EHSM), e o probiótico Lactobacillus rhamnosus (PLR) no controle de leveduras do gênero Candida, sendo elas: Candida albicans, Candida tropicalis e Candida parapsilosis. Trata-se de um estudo experimental, in vitro, analítico e quantitativo, em que foram investigadas, em triplicata, a atividade inibidora do crescimento microbiano e a atividade antibiofilme das seguintes terapias alternativas: TFDA, EHSM e PLR, utilizando como controle positivo a Nistatina 100.000UI/mL. Quanto à análise estatística, além da interpretação descritiva, foi aplicado o teste Two-Way ANOVA e o Teste de Tukey. Dessa forma, observou-se que todas as terapias testadas exibiram atividades antifúngica e antibiofilme. Todavia, quando comparadas tais atividades entre elas e ainda com a Nistatina, verificou-se que: a TFDA apresentou a maior atividade inibitória de crescimento microbiano (p<0,05), semelhante a Nistatina, seguida pelo EHSM, exibindo o PLR a menor atividade antifúngica e a TFDA juntamente com o EHSM representaram as terapias com maior atividade antibiofilme (p<0,0001), atuando ambas de forma semelhante a Nistatina. Nesse sentido, foi possível concluir que todas as terapias estudadas possuem atividades antifúngica e antibiofilme frente às cepas do gênero Candida testadas, com destaque para a atividade inibidora de crescimento microbiano da TFDA e a atividade antibiofilme da TFDA e do EHSM, sendo tais atividades semelhantes às atividades da Nistatina (AU).

Candidoses are usually treated with antifungals. However, the effect of these drugs is usually compromised by microbial resistance and adverse effects. In this sense, the increase in the prevalence and complexity of multidrug-resistant microorganisms to antimicrobials have incited the search for complementary and alternative therapies capable of acting effectively against the emerging resistance to medicines. Therefore, the objective of this study was to comparatively evaluate the antimicrobial action and antibiofilm potential, in vitro, between antimyrobial photodynamic therapy (PDT) with methylene blue, phytotherapy, using hydroethanolic extract of Spondias mombin L (EHSM)and the probiotic Lactobacillus rhamnosus (PLR) in the control of yeasts of the genus Candida: Candida albicans, Candida tropicalis and Candida parapsilosis. This is an experimental, in vitro, analytical and quantitative study in which the inhibitory activity of microbial growth and antibiofilm activity of the following alternative therapies were investigated in triplicate: TFDA, EHSM and PLR, using 100.000UI/mL as positive control. Regarding the statistical analysis, in addition to the descriptive interpretation, the Two-Way ANOVA test and the Tukey test were applied. Thus, it was observed that all therapies tested exhibited antifungal and antibiofilm activities. However, when comparing these activities between them and still with Nystatin, it was found that: TFDA showed the highest inhibitory activity of microbial growth (p <0.05), similar to Nystatin, followed by the EHSM, exhibiting the PLR the lowest antifungal activity and the TFDA together with the EHSM represented the therapies with higher antibiofilm activity (p <0.0001), acting both similarly to Nystatin. In this sense, it was possible to conclude that all the therapies studied have antifungal and antibiofilm activities against the strains of the genus Candida tested, especially the inhibitory activity of microbial growth of TFDA and the antibiofilm activity of TFDA and EHSM, similar to the activities of Nistatina (AU).

Potencial antioxidante del extracto de hojas de Spondias mombin L. en etanol al 70 % / Antioxidant potential of Spondias mombin L. leaf extract in 70% ethanol / Potencial antioxidante do extrato da folha de Spondias mombin L. em etanol 70%

RESUMEN Introducción: La especie Spondias mombin L. es una planta que crece en Cuba y a la que se le reporta un número considerables de aplicaciones etnofarmacológicas y elevado poder antioxidante. Sin embargo, la mayor parte de estos reportes está orientada al fruto, el cual resalta por su valor nutricional. Objetivo: Evaluar la actividad antioxidante de un extracto de hojas de Spondias mombin L. en etanol al 70 %. Método: La actividad antioxidante fue evaluada por seis métodos diferentes: determinación del índice de oxidación, poder reductor, inhibición de los radicales DPPH y ABTS, capacidad reductora del peróxido de hidrógeno y capacidad de neutralización del radical oxígeno. Se evaluaron concentraciones desde los 1 000 hasta los 62,5 µg/mL preparadas a partir del valor de sólidos totales determinados. Resultados: Para el índice de oxidación, concentraciones de 250 µg/mL resultaron suficientes para decolorar la solución de permanganato en igual período de tiempo que el patrón de quercetina. Sin embargo, los IC50 calculados para el poder reductor, la inhibición del radical DPPH y del ABTS resultaron mayores que el estándar de ácido ascórbico con valores de 362,33; 190,34 y 241,88 µg/mL, respectivamente. Conclusiones: El extracto de hojas de Spondias mombin L. en etanol al 70 % presenta una elevada acción antioxidante en los seis modelos experimentales ensayados, aun cuando en la mayor parte de casos, con valores inferiores al de la sustancia de referencia empleada. Estos resultados conjuntamente con la diversidad estructural de metabolitos presentes en el mismo resaltan su valor como potencial antioxidante natural.

ABSTRACT Introduction: The species Spondias mombin L. is a plant that grows in Cuba, and to which a considerable number of ethnopharmacological applications and high antioxidant power are reported. However, most of these reports are oriented to the fruit, which stands out for its nutritional value. Objective: To evaluate the antioxidant activity of an extract of Spondias mombin L. leaves in 70% ethanol. Method: The antioxidant activity was evaluated by six different methods: determination of the oxidation index, reducing power, inhibition of DPPH and ABTS radicals, hydrogen peroxide reducing capacity and oxygen radical neutralization capacity. Concentrations from 1000 to 62.5 µg/mL were evaluated, prepared from the value of total solids determined. Results: For the oxidation index, concentrations of 250 µg/mL were sufficient to decolorize the permanganate solution in the same period of time as the quercetin standard. However, the IC50 calculated for the reducing power, the inhibition of the DPPH radical and ABTS were higher than the ascorbic acid standard with values of 362.33; 190.34 and 241.88 µg/mL, respectively. Conclusions: The extract of leaves of Spondias mombin L. in 70% ethanol presents a high antioxidant action in the six experimental models tested, even though in most cases, with lower values than the reference substance used. These results, together with the structural diversity of metabolites present in it, highlight its value as a potential natural antioxidant.

RESUMO Introdução: A espécie Spondias mombin L. é uma planta que cresce em Cuba e à qual são relatados um número considerável de aplicações etnofarmacológicas e alto poder antioxidante. No entanto, a maioria desses relatos é voltada para o fruto, que se destaca pelo seu valor nutricional. Objetivo: Avaliar a atividade antioxidante de um extrato de folhas de Spondias mombin L. em etanol 70%. Método: A atividade antioxidante foi avaliada por seis diferentes métodos: determinação do índice de oxidação, poder redutor, inibição dos radicais DPPH e ABTS, capacidade redutora do peróxido de hidrogênio e capacidade de neutralização do radical oxigênio. Foram avaliadas concentrações de 1000 a 62,5 µg/mL, preparadas a partir do valor de sólidos totais determinado. Resultados: Para o índice de oxidação, concentrações de 250 µg/mL foram suficientes para descolorir a solução de permanganato no mesmo período de tempo do padrão de quercetina. No entanto, o IC50 calculado para o poder redutor, a inibição do radical DPPH e ABTS foram superiores ao padrão de ácido ascórbico com valores de 362,33; 190,34 e 241,88 µg/mL, respectivamente. Conclusões: O extrato de folhas de Spondias mombin L. em etanol 70% apresenta alta ação antioxidante nos seis modelos experimentais testados, embora na maioria dos casos com valores inferiores à substância de referência utilizada. Esses resultados, juntamente com a diversidade estrutural de metabólitos presentes nele, destacam seu valor como potencial antioxidante natural.

Potencial antimicrobiano e antibiofilme do extrato hidroetanólico da folha de Spondias mombin L e de suas frações frente a microrganismos superinfectantes do meio ambiente bucal / Antimicrobial and antibiofilm potential of the hydroethanolic extract of Spondias mombin L leaf and its fractions against superinfecting microorganisms in the oral environment

O controle químico do biofilme bucal atua como método auxiliar do controle mecânico para fins de manutenção e/ou restabelecimento da saúde bucal, agindo também nos demais microrganismos que não são residentes locais da microbiota bucal. Nesse contexto, a literatura já relata que muitos microrganismos superinfectantes podem estar presentes no biofilme bucal e assim, contribuir para a ocorrência de infecções sistêmicas mais graves. Assim sendo, os fitoterápicos têm demonstrado uma ampla variedade de atividades biológicas, em especial a atividade antimicrobiana. Diante disso, o presente estudo buscou avaliar a ação antimicrobiana e antibiofilme do extrato hidroetanólico da folha de Spondias mombin L. (cajá) e de suas frações de flavonóides, taninos e ácidos fenólicos, frente aos microrganismos superinfectantes (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e Enterococcus faecalis) do ambiente bucal. Para isso, foram investigadas a Concentração Inibitória Mínima (CIM) pela Técnica de Disco-Difusão e pela Técnica da Microdiluição em Caldo, a Concentração Inibitória Mínima de Aderência (CIMA), a Cinética Bactericida e a Atividade Antibiofilme do extrato hidroetanólico da folha Spondias mombin L. e de suas frações sobre a formação de biofilme e em biofilmes pré-formados, utilizando como controle o digluconato de clorexidina a 0,12%, em triplicata. Além da interpretação descritiva, foram aplicados no presente estudo as análises estatísticas do Teste de Tukey e Two-Way ANOVA. Os resultados demonstraram que: para a CIM pela Técnica de Disco-Difusão, o extrato hidroetanólico da folha Spondias mombin L. foi estatisticamente superior ao digluconato de clorexidina 0,12% (p<0,05) para as concentrações de 500µg/mL e250µg/mLe foi estatisticamente superior também às frações estudadas (p<0,05); para a CIM pela Técnica da Microdiluição em Caldo, foi observado que o extrato hidroetanólico da folha Spondias mombin L. foi superior às frações estudadas e semelhante ao grupo controle; para a CIMA, tanto o extrato hidroetanólico da folha de Spondias mombin L., quanto as frações estudadas e o grupo controle exibiram atividade antiaderente; para a Cinética Bactericida, foi verificado que o extrato hidroetanólico, as frações estudadas e o grupo controle possuem atividade bactericida iniciando nas primeiras duas horas de contato com o microrganismo e para a Atividade Antibiofilme, foi observado que, sobre a formação de biofilme e em biofilmes pré-formados, em diferentes concentrações, o extrato hidroetanólico da folha Spondias mombin L. foi estatisticamente superior ao grupo controle (p<0,05), sendo também estatisticamente superior às frações estudadas (p<0,05). Dessa forma, pode-se concluir que o extrato hidroetanólico da folha Spondias mombin L., em diferentes concentrações, se apresentou estatisticamente superior que o digluconato de clorexidina 0,12%, exibindo assim, ação antimicrobiana e atividade antibiofilme. As frações do extrato, porém, exibiram ação antimicrobiana e atividade antibiofilme inferiores ao extrato hidroetanólico e ao digluconato de clorexidina 0,12% (AU).

The chemical control of oral biofilm acts as an auxiliary method of mechanical control for the maintenance and/or restoration of oral health, also acting on other microorganisms that are not local residents of the oral microbiota. In this context, the literature already reports that many superinfecting microorganisms can be present in the oral biofilm and thus contribute to the occurrence of more serious systemic infections. Therefore, herbal medicines have demonstrated a wide variety of biological activities, especially antimicrobial activity. Therefore, this study aimed to evaluate the antimicrobial and antibiofilm action of the hydroethanolic extract of the leaf of Spondias mombin L. (cajá) and its fractions of flavonoids, tannins and phenolic acids, against superinfecting microorganisms (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli and Enterococcus faecalis) from the oral environment. For this purpose, the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) by the Disc-Diffusion Technique and the Broth Microdilution Technique, the Minimum Inhibitory Concentration of Adhesion (MICA), the Bactericidal Kinetics and the Antibiofilm Activity of the hydroethanolic extract of the Spondias mombin L. leaf were investigated and its fractions on biofilm formation and in preformed biofilms, using 0.12% chlorhexidine gluconate as a control, in triplicate. In addition to descriptive interpretation, statistical analyzes of the Tukey Test and Two-Way ANOVA were applied in this study. The results showed that: for MIC by the Disc-Diffusion Technique, the hydroethanolic extract of the Spondias mombin L. leaf was statistically superior to 0.12% chlorhexidine gluconate (p<0.05) for the concentrations of 500µg/mL and 250µg/mL and it was also statistically superior to the studied fractions (p<0.05); for the MIC by the Broth Microdilution Technique, it was observed that the hydroethanolic extract of the Spondias mombin L. leaf was superior to the studied fractions and similar to the control group; for MICA, both the hydroethanolic extract of the leaf of Spondias mombin L., the studied fractions and the control group exhibited antiadherent activity; for Bactericidal Kinetics, it was verified that the hydroethanolic extract, the studied fractions and the control group have bactericidal activity starting in the first two hours of contact with the microorganism and for the Antibiofilm Activity, it was observed that, on the formation of biofilm and in biofilms preformed, at different concentrations, the hydroethanolic extract of the Spondias mombin L. leaf was statistically superior to the control group (p<0.05), being also statistically superior to the studied fractions (p<0.05). Thus, it can be concluded that the hydroethanolic extract of the Spondias mombin L. leaf, at different concentrations, was statistically superior to 0.12% chlorhexidine gluconate, thus exhibiting antimicrobial action and antibiofilm activity. The extract fractions, however, exhibited lower antimicrobial and antibiofilm activity than hydroethanolic extract and 0.12% chlorhexidine gluconate (AU).

Yellow mombin and jackfruit seeds residues applied in the production of reducing sugars by a crude multi-enzymatic extract produced by Penicillium roqueforti ATCC 101110.

BACKGROUND: As an alternative to the use of widely investigated agro-industrial residues, the present study aimed to promote the valorization of two selected residues, yellow mombin seed (YS) and jackfruit seed (JS), as a result of their enhanced performance. RESULTS: YS was applied as a solid state substrate for Penicillium roqueforti ATCC 101110 cultivation (25 °C, Aw = 0.963, 107 spores g-1 and 142 h) to produce a crude multi-enzymatic extract (CE-YS) containing activities of CMCase = 31.95 U g-1 , xylanase = 56.85 U g-1 , exoglucanase = 5.55 U g-1 and FPase = 24.60 U g-1 . CE-YS was then applied to six different residues saccharification and the best performance was obtained with jackfruit seed residue (JS), which was selected for enzymatic saccharification. The highest productivity of reducing sugars expressed as glucose (6.26 mg g-1 h-1 ) was obtained under the conditions: 40.7 g L-1 JS, 5 mmol L-1 MgCl2 , 65 °C, 120 rpm, pH 3.0 (citrate buffer 50 mmol L-1 ) and 18 h. CONCLUSION: The residues, YS and JS, can be used satisfactorily for the production of bioproducts of great industrial applicability, such as crude extracts (containing cellulolytic enzymes) and RS (which can be converted, for example, into bioethanol). © 2020 Society of Chemical Industry.

Hepatoprotective and antioxidant activities of Spondias mombin leaf and stem extracts against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity.

OBJECTIVE: Spondias mombin L. is a tree used in folk medicine in Nigeria for the treatment of hepatitis. This study was carried out to comparatively evaluate the hepatoprotective and antioxidant effects of S. mombin leaf and stem (SML and SMS) methanolic extracts in a rat model of carbon tetrachloride (CCl4)-induced hepatotoxicity. METHODS: Forty-two rats were distributed into seven groups. Groups A and B received water; groups C and D received 500 and 1000 mg/kg SML extract, respectively; groups E and F received 500 and 1000 mg/kg SMS extract, respectively; and group G received 100 mg/kg silymarin. Water, the two extracts, and silymarin were administered daily by oral gavage for 7 days. Hepatotoxicity was induced in groups B to G by the administration of CCl4 once on the seventh day. After 48 h, rats were sacrificed, and tissues and serum samples were examined for histological and biochemical indices of hepatotoxicity. RESULTS: Administration of CCl4 resulted in liver injury with significant elevation in the hepatocellular injury markers alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), total bilirubin (TBIL), and conjugated bilirubin (CBIL), associated with a significant reduction in total circulatory protein. Pretreatment with SML and SMS extracts at both doses significantly ameliorated liver injury; lowered ALT, AST, ALP, TBIL, and CBIL levels; elevated cellular glutathione levels as well as catalase and superoxide dismutase activities; and decreased the levels of thiobarbituric acid reactive substances. CONCLUSION: This study provides preliminary evidence supporting the potential therapeutic benefit of S. mombin in xenobiotic-induced hepatotoxicity.

Mixture Design and Doehlert Matrix for the Optimization of the Extraction of Phenolic Compounds from Spondias mombin L Apple Bagasse Agroindustrial Residues.

In this study, we have determined, using RSM (mixture design and Doehlert matrix), the optimum values of the independent variables to achieve the maximum response for the extraction of total phenolic compounds from Spondias mombin L bagasse agroindustrial residues in order to preserve their antioxidant activity. The extraction of phenolic compounds, as well as their antioxidant capacity and the capacity to scavenge ABTS, was determined by the modified DPPH method at different periods of time, temperature, velocity of rotation and solvents concentration. We observed that the optimum condition for the highest antioxidant yield was obtained using water (60.84%), acetone (30.31%), and ethanol (8.85%) at 30°C during 20 min at 50 rpm. We have also found that the maximum yield of total phenolics was 355.63 ± 9.77 (mg GAE/100 g), showing an EC50 of 3,962.24 ± 41.20 (g fruit/g of DPPH) and 8.36 ± 0.30 (µM trolox/g fruit), which were measured using DPPH and ABTS assays. These results suggest that RSM was successfully applied for optimizing the extraction of phenolics compounds thus preserving their antioxidant activity.

Efeito modulador do extrato de plantas medicinais do gênero Spondias sobre a resistência de cepas de Staphylococcus aureus à Eritromicina / Modulatory effect of the extract of medicinal plants of Spondias genus on resistance of Staphylococcus aureus to Erythromycin

A acentuada resistência bacteriana gera uma necessidade de desenvolver novos fármacos e a pesquisa com plantas medicinais, como fontes de substâncias bioativas vêm sendo um indicativo para descoberta de eficientes agentes terapêuticos. Microrganismos do gênero Staphylococcus são cocos Gram positivos, que podem causar supurações, abscessos e diversas infecções piogênicas em humanos e animais. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar a atividade moduladora de extratos de plantas medicinais do gênero Spondias frente à Staphylococcus aureus resistentes a eritromicina. A concentração inibitória mínima e a capacidade de modular a resistência das cepas de S. aureus à Eritromicina foram avaliadas pelo método de microduluição. Os resultados mostraram que a associação de eritromicina com Spondias purpurea apresentou efeito sinérgico sobre as cepas SA04 e SA05. Enquanto que a Spondias mombin apresentou sinergismos sobre a ATCC, SA01, SA03 e SA05. O bioensaio com A. salina demonstrou que S. purpurea e S. mombin, apresentaram em CL 50 1000 e 482,5 ?g/ mL, respectivamente. Os resultados são promissores e sugerem que os extratos de espécies do gênero Spondias possuem potencial como agentes moduladores de resistência bacteriana.(AU)

The marked bacterial resistance generates a need to develop new drugs and research on medicinal plants as sources of bioactive substances has been an indication for efficient discovery of therapeutic agents. Microorganisms of the genus Staphylococcus are Gram positive coccus, which can cause suppuration, abscesses and various pyogenic infections in humans and animals. Thus, the objective of this study was to evaluate the modulatory activity of extracts of medicinal plants of genus Spondias against Staphylococcus aureus resistant to erythromycin. The minimum inhibitory concentration and modulating activity of the plant extracts studied and erythromycin were evaluated by the microdilution method. The results showed that the association of erythromycin with Spondias purpurea showed synergistic effect on the strains SA04 and SA05. While Spondias mombin showed synergism on the ATCC, SA01, SA03 and SA05 strain. The bioassay with A. saline showed that S. purpurea and S. mombin presented a LC50 1000 and 482.5 mg/ mL, respectively. The results are promising and suggest that that the extracts species of the genus Spondias agents have potential as modulator agents of bacterial resistance.(AU)